Summary

Optimisation des réactions radiochimiques à l’aide de réseaux de gouttelettes

Published: February 12, 2021
doi:

Summary

Cette méthode décrit l’utilisation d’une nouvelle méthodologie à haut débit, basée sur des réactions chimiques de gouttelettes, pour l’optimisation rapide et économique des produits radiopharmaceutiques à l’aide de quantités nanomoles de réactifs.

Abstract

Les radiosynthétiseurs automatisés actuels sont conçus pour produire de grands lots cliniques de produits radiopharmaceutiques. Ils ne sont pas bien adaptés à l’optimisation de la réaction ou au développement de nouveaux produits radiopharmaceutiques, car chaque point de données implique une consommation importante de réactifs et la contamination de l’appareil nécessite du temps pour la désintégration radioactive avant la prochaine utilisation. Pour remédier à ces limitations, une plate-forme permettant d’effectuer des réseaux de réactions miniatures à base de gouttelettes en parallèle, chacune confinée dans un piège de tension superficielle sur une « puce » de silicium recouverte de polytétrafluoroéthylène à motifs, a été développée. Ces puces permettent des études rapides et pratiques des paramètres de réaction, y compris les concentrations de réactifs, le solvant de réaction, la température et le temps de réaction. Cette plate-forme permet de compléter des centaines de réactions en quelques jours avec une consommation minimale de réactifs, au lieu de prendre des mois à l’aide d’un radiosynthétiseur conventionnel.

Introduction

Les produits radiopharmaceutiques de tomographie par émission de positons (TEP) sont largement utilisés comme outils de recherche pour surveiller des processus biochimiques in vivo spécifiques et étudier des maladies, ainsi que pour le développement de nouveaux médicaments et thérapies. De plus, la TEP est un outil essentiel pour diagnostiquer ou stadification de la maladie et surveiller la réponse d’un patient au traitement1,2,3. En raison de la courte demi-vie des radio-isotopes TEP (p. ex. 110 min pour les produits radiopharmaceutiques marqués au fluor 18) et des dangers liés aux rayonnements, ces composés sont préparés à l’aide de systèmes automatisés spécialisés fonctionnant derrière le blindage contre les rayonnements et doivent être préparés juste avant utilisation.

Les systèmes actuels utilisés pour synthétiser des produits radiopharmaceutiques sont conçus pour produire de grands lots qui sont divisés en plusieurs doses individuelles pour partager le coût de production. Bien que les systèmes actuels conviennent à la production de radiotraceurs largement utilisés comme[18F]FDG (parce que plusieurs balayages de patients et expériences de recherche peuvent être programmés en une seule journée), ces systèmes peuvent être gaspilleurs pour la production de nouveaux radiotraceurs au cours du développement précoce, ou de radiotraceurs moins couramment utilisés. Les volumes utilisés par les systèmes conventionnels se situent généralement entre 1 et 5 mL, et les réactions nécessitent des quantités de précurseurs de l’ordre de 1 à 10 mg. De plus, l’utilisation de radiosynthétiseurs conventionnels est généralement lourde lors des études d’optimisation puisque l’appareil est contaminé après utilisation et que l’utilisateur doit attendre que la radioactivité se désintègre avant d’effectuer l’expérience suivante. Outre le coût de l’équipement, le coût du radio-isotope et des réactifs peut donc devenir très important pour les études nécessitant la production de plusieurs lots. Cela peut se produire, par exemple, lors de l’optimisation des protocoles de synthèse pour les nouveaux radiotraceurs afin d’obtenir un rendement et une fiabilité suffisants pour les études d’imagerie in vivo initiales.

Les technologies microfluidiques ont été de plus en plus utilisées en radiochimie pour capitaliser sur plusieurs avantages par rapport aux systèmes conventionnels4,5,6. Les plates-formes microfluidiques, y compris celles basées sur des volumes de réaction de 1 à 10μL 7,8,9,ont montré une réduction significative des volumes de réactifs et de la consommation de précurseurs coûteux, ainsi que des temps de réaction courts. Ces réductions conduisent à des coûts plus faibles, à des étapes de chauffage et d’évaporation plus rapides, à une purification en aval plus courte et plus simple, à un processus chimique global « plus vert »10,et à une activité molaire plus élevée des radiotraceurs produits11. Ces améliorations rendent plus pratique la production d’études d’optimisation plus approfondies en réduisant le coût des réactifs de chaque synthèse. D’autres avantages peuvent être obtenus en effectuant plusieurs expériences à partir d’un seul lot de radio-isotopes en une seule journée. Par exemple, les radiosynthétiseurs de chimie d’écoulement microfluidique fonctionnant en « mode découverte » peuvent effectuer séquentiellement des dizaines de réactions, chacune utilisant seulement 10s de volume de réaction μL12.

Inspiré par ces avantages, une puce de réseau de gouttelettes multi-réactions dans laquelle les réactions de microvolume sont confinées à un réseau de pièges de tension superficielle sur une surface de silicium, créée à l’aide d’un revêtement en téflon à motifs, a été développée. Ces puces permettent d’effectuer simultanément plusieurs réactions à l’échelle de 1 à 20 μL, ouvrant la possibilité d’explorer 10s de différentes conditions de réaction par jour, chacune avec plusieurs répétitions. Dans cet article, l’utilité de cette nouvelle approche à haut débit pour effectuer des optimisations de radiochimie rapides et à faible coût est démontrée. L’utilisation de puces de gouttelettes multi-réactions permet une exploration pratique de l’impact des concentrations de réactifs et du solvant de réaction, et l’utilisation de plusieurs puces pourrait permettre l’étude de la température et du temps de réaction, tout en consommant de très faibles quantités de précurseurs.

Protocol

ATTENTION : Ce protocole implique la manipulation de matières radioactives. Les expériences ne devraient pas être entreprises sans la formation et l’équipement de protection individuelle nécessaires et sans l’approbation du bureau de radioprotection de votre organisation. Les expériences doivent être effectuées derrière un blindage contre les rayonnements, de préférence dans une cellule chaude ventilée 1. Fabrication de puces multi-réactions REMARQUE …

Representative Results

Une expérience représentative a été réalisée pour illustrer cette méthode. À l’aide de 16 réactions, des études d’optimisation du produit radiopharmaceutique[18F]fallypride ont été réalisées en faisant varier la concentration de précurseurs (77, 39, 19, 9,6, 4,8, 2,4, 1,2 et 0,6 mM) dans l’alcool thexylique : MeCN (1:1, v/v) comme solvant de réaction. Les réactions ont été réalisées à 110 °C pendant 7 min. L’efficacité de la collecte, la composit…

Discussion

En raison des limites des systèmes de radiochimie conventionnels qui ne permettent qu’une ou un petit nombre de réactions par jour et consomment une quantité importante de réactifs par point de données, seule une infime partie de l’espace global des paramètres de réaction peut être explorée dans la pratique, et de nombreuses fois les résultats sont rapportés sans répétition (n = 1). Par rapport aux systèmes conventionnels, cette plate-forme de radiosynthèse de gouttelettes à réactions multiples perme…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Nous remercions l’installation biomédicale de cyclotron de l’UCLA et les Drs Roger Slavik et Giuseppe Carlucci d’avoir généreusement fourni du fluorure[18F] pour ces études et le NanoLab de l’UCLA pour son soutien avec de l’équipement pour la fabrication de puces.

Materials

2,3-dimethyl-2-butanol (thexyl alcohol) Sigma-Aldrich 594-60-5 98%
Acetone KMG Chemicals Cleanroom LP grade
Ammonium formate (NH4HCO2) Sigma-Aldrich 540-69-2 97%
Anhydrous acetonitrile (MeCN) Sigma-Aldrich 75-05-8 99.80%
Ceramic heater Watlow Utramic CER-1-01-0093 25 mm x 25 mm
Cerenkov imaging chamber Custom built Other instruments can be used for TLC plate readout including: small animal in vivo optical imaging system, 2D radio-TLC scanner, 1D radio-TLC scanner
DI water Sigma-Aldrich 7732-18-5
Disposable transfer pipets, 3 mL Falcon 13-680-50
Dose calibrator Capintec, Inc. CRC-25 PET
Fallypride ABX Advanced Biochemical Compounds 1560.0010.000 Fallypride reference standard, >95%
[18F]fluoride in [18O]H2O UCLA Ahmanson Biomedical Cyclotron Facility Due to short half-life this must be obtained from local radiochemistry lab or commercial radiopharmacy
Glass cover plates (76.2 mm x 50.8 mm x 1 mm thick) C&A Scientific 6101
Headway spin coater Headway Research, Inc. PWM50-PS-R790 Sipinner system PWM50-control box, PS-motor, R790-bowl
High temperature oven Carbolite HTCR 6 28
Hot plate Thermo Scientific Super-Nuova HP133425
Isopropanol (IPA) KMG Chemicals Cleanroom LP grade
Mask aligner Karl Suss MA/BA6
Methanol (MeOH) Sigma-Aldrich 67-56-1 ≥99.9%
Microcentrifuge tube Eppendorf 0030 123.301 500 µL, colorless, polypropylene
Micropipette (0.5-10 µL) Labnet BioPette P3940-10
Micropipette (100-1000 µL) Labnet BioPette P3940-1000
Micropipette (10-100 µL) Labnet BioPette P3940-100
Micropipette tips (0.1-10 µL) USA Scientific Inc Tips 11113810
Micropipette tips (2-200 µL) BrandTech 13-889-143
Micropipette tips (50-1000 µL) BrandTech 13-889-145
Photoresist developer solution MicroChem MEGAPOSIT MF-26A
Positive photoresist MicroChem MEGAPOSIT 220-7.0
Reactive-ion etcher (RIE) Oxford Instruments Plasma Lab 80 Plus
Silicon wafer cutter Euro Tool CSCB-431.00
Silicon wafer; 4" diameter Silicon Valley Microelectronics Inc.  0017227-048 P type, boron doped, thickness 525 ± 25 µm
Teflon AF 2400 Chemours  D14896765 1% solids
Tetrabutylammonium bicarbonate (TBAHCO3) ABX Advanced Biochemical Compounds 808 Aqueous solution stabilized with ethanol, 0.075 M
Themal conducting paste OMEGA OT-201-2
TLC plates Merck KGaA 1.05554.0001 Silica gel 60 F254, 50 mm x 60 mm, aluminum back
Tosyl-fallypride ABX Advanced Biochemical Compounds 1550.004.000 Fallypride precursor, >90%
Trimethylamine (TEA) Sigma-Aldrich 75-50-3 ≥ 99%
Tweezers Cole-Parmer UX-07387-08 Stainless steel, fine tip

References

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Cite This Article
Rios, A., Holloway, T. S., Wang, J., van Dam, R. M. Optimization of Radiochemical Reactions using Droplet Arrays. J. Vis. Exp. (168), e62056, doi:10.3791/62056 (2021).

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