Summary
الخلايا الجذعية الورم الدبقي (GSCs) هي جزء صغير من الخلايا السرطانية التي تلعب أدوارا أساسية في بدء الورم، وتولد الأوعية، ومقاومة الأدوية في الورم الأرومي الدبقي (GBM)، ورم الدماغ الأولي الأكثر انتشارا وتدميرا. وجود GSCs يجعل GBM الحرارية جدا لمعظم العوامل الفردية المستهدفة، لذلك هناك حاجة إلى طرق فحص عالية الإنتاجية لتحديد العلاجات مزيج فعالة محتملة. يصف البروتوكول سير عمل بسيط لتمكين الفحص السريع للعلاج المركب المحتمل مع التفاعل التآزري. الخطوات العامة لسير العمل هذا تتكون من إنشاء GSCs لوسيفيراز الموسومة، وإعداد لوحات المغلفة matrigel، الجمع بين فحص المخدرات، وتحليل، والتحقق من صحة النتائج.
Abstract
الخلايا الجذعية الورم الدبقي (GSCs) هي جزء صغير من الخلايا السرطانية التي تلعب أدوارا أساسية في بدء الورم، وتولد الأوعية، ومقاومة الأدوية في الورم الأرومي الدبقي (GBM)، ورم الدماغ الأولي الأكثر انتشارا وتدميرا. وجود GSCs يجعل GBM الحرارية جدا لمعظم العوامل الفردية المستهدفة، لذلك هناك حاجة إلى طرق فحص عالية الإنتاجية لتحديد العلاجات مزيج فعالة محتملة. يصف البروتوكول سير عمل بسيط لتمكين الفحص السريع للعلاج المركب المحتمل مع التفاعل التآزري. الخطوات العامة لسير العمل هذا تتكون من إنشاء GSCs لوسيفيراز الموسومة، وإعداد لوحات المغلفة matrigel، الجمع بين فحص المخدرات، وتحليل، والتحقق من صحة النتائج.
Introduction
الورم الأرومي الدبقي (GBM) هو النوع الأكثر شيوعا وعدوانية من ورم الدماغ الأساسي. وفي الوقت الحالي، لا يزال البقاء العام لمرضى GBM الذين تلقوا أقصى قدر من العلاج (مزيج من الجراحة والعلاج الكيميائي والعلاج الإشعاعي) أقصر من 15 شهرا؛ لذلك هناك حاجة ماسة إلى علاجات جديدة وفعالة لGBM.
وجود الخلايا الجذعية الورم الدبقي (GSCs) في GBM يشكل تحديا كبيرا للعلاج التقليدي لأن هذه الخلايا الجذعية مثل تلعب أدوارا محورية في الحفاظ على البيئة الدقيقة الورم, مقاومة الأدوية, وتكرار الورم1. ولذلك، فإن استهداف المركبات العالمية استراتيجية واعدة لعلاج GBM2. ومع ذلك ، فإن العيب الرئيسي لفعالية الدواء في GBM هو طبيعته غير المتجانسة ، بما في ذلك على سبيل المثال لا الحصر الفرق في الطفرات الجينية ، والأنواع الفرعية المختلطة ، والتنظيم اللاجيني ، والبيئة الدقيقة للورم مما يجعلها انكسارية للغاية للعلاج. بعد فشل العديد من التجارب السريرية، أدرك العلماء والباحثون السريريون أن العلاج المستهدف بعامل واحد ربما يكون غير قادر على التحكم الكامل في تطور السرطانات غير المتجانسة للغاية مثل GBM. وحيث أنه تمت الموافقة على تركيبات أدوية مختارة بعناية لفاعلية هذه العقاقير من خلال تعزيز تأثير بعضها البعض بشكل تآزري، مما يوفر حلا واعدا لعلاج GBM.
على الرغم من أن هناك العديد من الطرق لتقييم التفاعلات بين المخدرات والمخدرات من مزيج المخدرات, مثل CI (مؤشر الجمع), HSA (أعلى عامل واحد), وقيم بليس, الخ3,4, وعادة ما تستند هذه الأساليب الحسابية على تركيبات تركيز متعددة. والواقع أن هذه الأساليب يمكن أن توفر تقييما إيجابيا للتفاعل بين المخدرات والمخدرات، ولكنها يمكن أن تكون شاقة للغاية إذا طبقت في الفحص عالي الإنتاجية. لتبسيط العملية ، تم تطوير سير عمل فحص للتعرف بسرعة على مجموعات الأدوية المحتملة التي تمنع نمو GSCs من الخزعات الجراحية للمريض GBM. تم إدخال مؤشر الحساسية (SI) الذي يعكس الفرق بين التأثير المشترك المتوقع والتأثير المشترك الملاحظ في هذه الطريقة لتحديد تأثير التآزر لكل دواء ، بحيث يمكن تحديد المرشحين المحتملين بسهولة من خلال تصنيف SI. وفي الوقت نفسه، يوضح هذا البروتوكول شاشة مثال لتحديد المرشحين المحتملين (المرشحين) الذين يمكنهم تآزر تأثير مضاد للورم الدبقي مع تيموزولوميد، وهو العلاج الكيميائي من الخط الأول لعلاج GBM، من بين 20 مثبطا جزيئيا صغيرا.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تم الحصول على عينة GBM من مريض خلال عملية روتينية بعد الحصول على موافقة مستنيرة تماما من قبل لجنة أخلاقيات البحوث البشرية في المستشفى التابع الأول لجامعة نانجينغ الطبية.
1. عزل وثقافة ال GSCs المشتقة من المريض
- ضع أنسجة الورم الأرومي الدبقي الطازجة التي تم استئصالها جراحيا في أنبوب طرد مركزي سعة 15 مل مليء ب PBS معقم وتخزين الأنسجة على الجليد حتى إجراء المزيد من العمليات.
- فرم الأنسجة GBM إلى ما يقرب من 0.5 إلى 1 مم قطع القطر باستخدام مقص تشريح وغسل عينات الأنسجة مع المتوسط القاعدي العصبية لإزالة الحطام الخلوي في خزانة السلامة البيولوجية.
- هضم شظايا الأنسجة مع 1 ملغ / مل كولاجيناز A في 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة والطرد المركزي في 400 × ز لمدة 5 دقائق في 4 درجة مئوية.
- إزالة supernatant وتعليق بيليه مع المتوسط القاعدية العصبية فارغة وتفكيك بيليه ميكانيكيا عن طريق الأنابيب المتكررة على الجليد.
- ثقافة الخليط في مرفق منخفض جدا 6-جيدا لوحات الثقافة مليئة GSC الثقافة المتوسطة (انظر الجدول 1 لوصفة) في حاضنة الخلايا العقيمة مع 5٪ CO2 و 90٪ الرطوبة في 37 درجة مئوية حتى تشكيل الغلاف العصبي.
- على تشكيل العصبية كافية، وجمعها باستخدام ماصة في 1.5 مل ميكروبتو
- Resuspend بيليه وتقسيمها إلى عدة قوارير مليئة المتوسطة الثقافة المذكورة أعلاه للحفاظ على GSCs الأولية.
ملاحظة: استمدت مركبات الكربون الهيدروفلورية المشتقة من المريض والمستمدة في المثال من خزعات جراحية لمريض ذكر يبلغ من العمر 34 عاما مصاب بغضاء غيان باريه المتكرر من الدرجة الرابعة من منظمة الصحة العالمية. وقد سميت هذه المراكز باسم XG387 للتجارب المستقبلية. وأجريت اختبارات الميكوبلازما القائمة على PCR لمركبات الكربون الهيدروفلورية المذكورة أعلاه للتأكد من عدم وجود تلوث بالميكوبلازما. وقد أجريت جميع التجارب التي شملت مركبات الكربون الهيدروفلورية المستخدمة في هذا البروتوكول <15 مقطعا.
2. إعداد لوسيفيراز الموسومة GSCs
- جمع GSCs من الثقافة المتوسطة والطرد المركزي لهم في 70 × ز لمدة 3 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
- إزالة supernatant، هضم الخلايا مع accutase لمدة 4 دقائق في 37 درجة مئوية. استخدام طرف 200 ميكرولتر وماصة مرارا وتكرارا ينفصم وإعادة إنفاق بيليه الخلية.
- تمييع الخلايا إلى 2 × 105 خلايا لكل بئر في لوحة ثقافة 12 بئرا وثقافة الخلايا بين عشية وضحاها.
- إضافة 30 ميكرولتر لوسيفيراز-EGFP الفيروس الفائق (تيتر >108 TU / مل) في كل بئر في لوحة ومن ثم الطرد المركزي الخلايا في 1000 × ز لمدة 2 ساعة في 25 درجة مئوية. ثقافة الخلايا بين عشية وضحاها.
- تحديث المتوسطة في اليوم التالي والثقافة الخلايا لمدة 48 ساعة أخرى.
- مراقبة الخلايا تحت المجهر الفلوري لتأكيد ظهور الخلايا الإيجابية GFP.
- استخدم مفرز خلايا التدفق لفرز وتحديد GSCs مع مضان GFP عالي لمزيد من الثقافة للخلايا.
3. قياس الاشتعال الحيوي القائم على صلاحية الخلية
- لوحات الطلاء مع خليط مصفوفة خارج الخلية (ECM) (على سبيل المثال، Matrigel): إضافة 40 ميكرولتر من 0.15 ملغم / مل خليط ECM إلى كل بئر واحتضان لوحة لمدة 1 ساعة في 37 درجة مئوية. إزالة خليط ECM الزائد وشطف بلطف مرة واحدة مع برنامج تلفزيوني.
- إضافة 100 ميكرولتر ثقافة المتوسطة التي تحتوي على 15000 ، 10,000, 8,000, 6,000, 4,000, 2,000, 1,000, و 500 XG387-Luc الخلايا جنبا إلى جنب مع 100 μL وسيطة فارغة والسيطرة في كل بئر لمدة 6 يكرر في لوحة أسفل بصرية 96 جيدا والثقافة الخلايا بين عشية وضحاها في 37 °C.
- إزالة supernatant، إضافة 50 μL ثقافة المتوسطة التي تحتوي على 150 نانوغرام / μL D-لوسيفيرين في كل بئر واحتضان الخلايا لمدة 5 دقائق في 37 درجة مئوية.
- التقاط صور للتألق الحيوي الخلوي في اللوحة باستخدام نظام التصوير الطيفي IVIS. استخدم البرنامج المدمج لإنشاء مناطق دائرية متعددة من منطقة الاهتمام (ROI) وتحديد الإضاءة الحيوية الخلوية.
4. علاج تيموزولوميد والفحص المركب
- Precoat أربعة لوحات 96 بئر كما هو موضح أعلاه، قبل العلاج.
- البذور XG387-لوك الخلايا في كثافة 1000 خلية في 100 ميكرولتر ثقافة المتوسطة في كل بئر من لوحة أسفل البصرية 96 جيدا والثقافة الخلايا بين عشية وضحاها.
- إعداد temozolomide والوكلاء المستهدفين من حل الأسهم مقدما. إعداد سلسلة تركيز تتألف من 800 ميكرومتر، 600 ميكرومتر، 400 ميكرومتر، 300 ميكرومتر، 200 ميكرومتر، 100 ميكرومتر، و50 ميكرومتر تيموزولوميد في الوسط الثقافي لعلاج العامل الواحد. تمييع تيموزولوميد والعوامل المستهدفة في محلول المخزون في الوسط الثقافي، على التوالي، للحصول على تركيزات نهائية من 200 ميكرومتر و 2 ميكرومتر لفحص المخدرات المركبة (الجدول 2).
- إزالة وسيط الثقافة عندما تلتزم معظم GSCs بأسفل اللوحات؛ إضافة المتوسطة المعدة أعلاه التي تحتوي على تيموزولوميد في كل بئر لثلاث نسخ متماثلة تقنية لكل علاج.
- لعلاج تيموزولوميد وفحص تركيبات المخدرات إزالة المتوسطة فارغة وإضافة المتوسطة المعدة أعلاه تحتوي إما 200 ميكرومتر تيموزولوميد، أو 2 ميكرومتر وكيل المستهدفة، أو مزيج من كل من في كل بئر لثلاثة تكرارات التقنية لكل علاج.
- احتضان جميع الأطباق عند 37 درجة مئوية، 5٪ CO2 لمدة 3 أيام.
- إزالة المتوسطة المحتوية على المخدرات، إضافة 50 ميكرولتر المتوسطة فارغة تحتوي على 150 نانوغرام / μL D-لوسيفيرين في كل بئر واحتضان الخلايا لمدة 5 دقائق في 37 درجة مئوية.
- التقاط صور للتألق الحيوي الخلوي في اللوحة باستخدام نظام التصوير الطيفي IVIS. استخدم البرنامج المدمج لإنشاء عدة مؤشرات استثمار دائرية وتحديد الإضاءة الحيوية الخلوية.
5. الجمع بين العلاج من temozolomide وUMI-77 في XG387 لوك وXG328 لوك خطوط الخلية
- Precoat ثلاثة لوحات 96 جيدا كما هو موضح أعلاه، قبل العلاج.
- البذور XG387 لوك وXG328 لوك الخلايا في كثافة 1000 خلية على التوالي في 100 ميكرولتر من الثقافة المتوسطة في كل بئر من لوحة أسفل البصرية 96 جيدا والثقافة الخلايا بين عشية وضحاها.
- إعداد سلسلة تركيز تتألف من 600 ميكرومتر، 400 ميكرومتر، 300 ميكرومتر، 200 ميكرومتر، 100 ميكرومتر، 50 ميكرومتر، و0 ميكرومتر تيموزولوميد وسلسلة تركيز تتكون من 6 ميكرومتر، 4 ميكرومتر، 3 ميكرومتر، 2 ميكرومتر، 1 ميكرومتر، 0.5 ميكرومتر، و0 ميكرومتر أومي-77 في الوسط الثقافي لعلاجات مصفوفة المعايرة ستة في ست جرعات.
- إزالة المتوسطة فارغة عندما تلتزم معظم GSCs إلى الجزء السفلي من لوحة; إضافة المتوسطة المعدة أعلاه في كل بئر لثلاث نسخ متماثلة تقنية لكل علاج.
- احتضان هذه اللوحات لمدة 3 أيام عند 37 درجة مئوية، 5٪ CO2.
- إزالة المتوسطة التي تحتوي على المخدرات; إضافة 50 ميكرولتر من المتوسطة الفارغة التي تحتوي على 150 نانوغرام / μL D-لوسيفيرين في كل بئر واحتضان الخلايا لمدة 5 دقائق في 37 درجة مئوية لقياس الإضاءة الحيوية.
6. تحليل البيانات
- حساب مؤشر الحساسية (SI) درجة temozolomide والعامل المستهدف وفقا للصيغة في الشكل 2A.
ملاحظة: درجة SI هو تحديد تأثير إضافة دواء آخر. وتراوحت بين -1 إلى +1، مع قيم إيجابية تشير إلى آثار تآزر تيموزولوميد. - حساب قيم مؤشر التركيبة (CI) بين تيموزولوميد وUMI-77 باستخدام برنامج CompuSyn لتحليل تفاعلاتهما المشتركة. تشير قيمة CI <1 إلى التآزر؛ تشير قيمة CI >1 إلى العداء.
- حساب القيم عامل واحد عالية (HSA) بين تيموزولوميد وUMI-77 باستخدام برنامج Combenefit. تشير قيمة HSA إلى التأثير المثبط المشترك. تشير قيمة HSA >0 إلى التآزر وتشير قيمة HSA <0 إلى العداء.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
شكلت خلايا XG387 الخلايا العصبية في وسط الثقافة الموصوفة في الجدول 1 في مرفق منخفض جدا 6-جيدا لوحة الثقافة أو لوحة غير المغلفة5 (الشكل 1A). أولا، تم إجراء اختبار للتحقق مما إذا كانت كثافة التلألؤ الحيوي من خلايا XG387-Luc متناسبة مع رقم الخلية. وكما هو مبين في الشكل 1B،زادت كثافة التلألؤ الأحيائي بالتناسب مع كثافة الخلية وأسفرت عن تصحيح خطي بينهما (Pearson r = 0.9872؛ p < 0.0001؛ الشكل 1C). وبما أن التلألؤ الأحيائي للخلايا الموسومة باللوسيفيراز سهل وسريع القياس، فإن هذا يوفر طريقة بسيطة لقياس كثافة المركبات الحية غير المفلورة القابلة للحياة. بعد ذلك ، تم تقييم النشاط المضاد للتكاثر من التيموزولومايد. كما هو مبين في الشكل 1D، تسبب 400 ميكرومتر تيموزولوميد في تثبيط انتشار خلايا XG387-Luc بنسبة 20٪ تقريبا ، مما يشير إلى أنه مفيد ولكن يمكن تحسين تأثيره المضاد GBM. تم اختيار تركيز 200 ميكرومتر للفحص المركب.
على سبيل المثال، تم استخدام 20 مثبطات جزيء صغير انتقائية الهدف لفحص تركيبة الدواء لتحديد المرشح المحتمل (المرشحين) الذي يعزز تأثير مكافحة GBM من تيموزولوميد. ونتيجة لذلك، كانت قيم المؤشر الحساس (SI) ل 13 وكيلا مستهدفا أعلى من 0، وكانت 5 منها أعلى من 0.1(الشكل 2B،C). خاصة، كان SI من أفضل اثنين من الأدوية المرشحة UMI-77 و A 83-01 أعلى من 0.25، مما يشير إلى إمكاناتها للتآزر مع تيموزولوميد.
للتحقق من صحة النتيجة المذكورة أعلاه ، تم تطبيق نماذج التآزر الكلاسيكية من HSA و Bliss3و4و6 لتحديد التأثير المشترك ل temozolomide و UMI-77 في GSCs. وبالإضافة إلى ذلك، تم استخدام XG328-آخر نموذج GSC المشتقة من المريض التي أنشئت في وقت مبكر لإجراء نفس التقييم. تم إجراء المقايسة المضادة للتكاثر للعلاج المشترك للتيموسولوميد وUMI-77 في مصفوفة المعايرة جرعة ستة في ستة. تم تحليل النتائج للحصول على قيم HSA و Bliss التي هي قراءات لتثبيط التآزر وتصور الفرق بين التثبيط المتوقع والتثبيط الملاحظ. وكما هو مبين في الشكل 3B-D،فإن قيم المؤشر المركب (CI) <1 وقيم العامل الواحد العالي (HSA) >0 لمعظم تركيبات التيموزولوميد وUMI-77 بتركيزات مختلفة، تشير إلى تفاعل تآزري شامل بين تيموزولوميد وUMI-77 في كل من XG387 وXG328 GSCs.
الشكل 1: GBM المشتقة من المريض GSCs XG387. (أ) تشكيل الغلاف العصبي. (ب)كان توليد التلألؤ الحيوي من لوسيفيراز الموسومة GSCs. (C) التلألؤ الحيوي الناتج عن خلايا XG387-Luc متناسبا مع كثافة الخلية. (د) Temozolomide علاج XG387. تم إجراء كل علاج في ثلاث نسخ مع تجربتين مستقلتين. يتم التعبير عن البيانات على أنها متوسط ± SD. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: فحص تركيبة المخدرات باستخدام GSCs. (أ) صيغة لحساب SI (مؤشر الحساسية) من 20 وكلاء المستهدفة مع temozolomide (TMZ) في الشاشة الجمع. (ب)توزيع قيم SI ل 20 وكيلا مستهدفا. النقاط الحمراء: أفضل خمسة أدوية مرشحة. (ج) معلومات عن أفضل خمسة وكلاء مستهدفين من المرشحين. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: العلاج المركب لخطوط الخلايا تيموزولوميد (TMZ) وUMI-77 في XG387-Luc وخطوط خلايا XG328-Luc. (A)المعايرة المفردة والجمعية ل temozolomide وUMI-77 في فحص الانتشار في خطوط خلايا XG387-Luc وXG328-Luc. (ب) Isobologram وتحليل مؤشر الجمع بين تثبيط الانتشار في XG387 لوك و XG328 لوك الخلايا تعامل مع temozolomide وUMI-77. تشير CI <1 إلى تأثير تآزري. (C, D) مؤامرات التآزر التي ولدتها Combenefit تبين التفاعل بين تيموزولوميد وUMI-77. وأسفر تحليل التفاعل عن قيم HSA (عامل واحد عالي) وقيم Bliss، مما يشير إلى فعالية التآزر كما تم حسابها من المتوقع. HSA و Bliss القيم >0 تشير إلى آثار التآزر. تم إجراء كل علاج في ثلاث نسخ مع تجربتين مستقلتين. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
في هذه الدراسة، تم وصف بروتوكول يمكن تطبيقه لتحديد العلاج المركب المحتمل ل GBM باستخدام GSCs المشتقة من المريض. وخلافا لنموذج القياس القياسي التآزر / الإضافة مثل Loewe، BLISS، أو HSA الأساليب، تم استخدام سير عمل بسيط وسريع لا يتطلب زوج المخدرات ليتم دمجها بتركيزات متعددة بطريقة عاملية كاملة كأساليب التقليدية. في هذا سير العمل، SI (مؤشر الحساسية) التي نشأت من دراسة لتقييم تأثير التوعية من siRNAs بالاشتراك مع مثبط الجزيئية الصغيرة أدخلت لتحديد تأثير المخدرات التآزر من اثنين من مثبطات الجزيئية الصغيرة7. نطاق قيم SI هو من -1 إلى 1، وقيمة SI إيجابية يشير إلى تأثير التوعية بين كل من الأدوية. وكلما ارتفعت قيمة SI المحققة، كان التآزر أقوى. على الرغم من أن قيمة SI وحدها غير قادرة على تقديم إجابة إيجابية حول نوع (التآزر أو المضافة أو العداء) للتفاعل بين الدواء والمخدرات ، فإن هؤلاء المرشحين الأعلى مرتبة لديهم احتمال كبير للتآزر مع الدواء المثير للاهتمام وبالتالي يستحقون المزيد من التحقق من الصحة. وبالمقارنة، فإن معظم منهجيات فحص تركيبة الأدوية عالية الإنتاجية الحالية لا تزال شاقة وتنطوي على خوارزميات صعبة8و9.
لتجسيد جدوى هذا الأسلوب، تم إجراء شاشة اختبار صغيرة الحجم. ونتيجة لذلك، كان من الممكن تحديد UMI-77، وهو مثبط MCL1 انتقائي، كأفضل مرشح من بين 20 وكيلا مستهدفا للتآزر مع تيموزولوميد في قمع نمو GSCs. في الواقع، في دراسة سابقة، تم العثور على UMI-77 أيضا لتعزيز نشاط مضاد للورم الدبقي من temozolomide في خلايا GBMالمنشأة 10. وفي الدراسة الحالية، تمت الموافقة مرة أخرى على التفاعل التآزري بين UMI-77 و temozolomide في مراكز الخدمات العالمية باستخدام مؤشر Chou-Talalay الكلاسيكي للتركيبة أو BLISS أو HSA. ميزة أخرى لهذا البروتوكول هو استخدام GSCs لوسيفيراز الموسومة لقياس نسبة قابلة للحياة من الخلايا. يمكن قياس نشاط لوسيفيراز للخلايا بسهولة عن طريق إضافة لوسيفيرين ، ركيزة لوسيفراز ، والتقاط التلألؤ بأي أداة مع وظيفة القياس الإنارة. لأن رد فعل لوسيفيراز لوسيفيرين سريع، وهنا يوفر حلا رخيصا وسريعا بالمقارنة مع MTT التقليدية (3-(4،5-Dimethylthiazol-2-yl)-2،5-ديفينيلتيترازوليوم بروميد)، MTS(3-(4 ،5-ثنائي ميثيل هذهازول-2-yl)-5-(3-كاربوكسي ميثوكسيفينيل)-2-(4-سلفوفينيل)-2H tetrazolium)، أو CCK-8 (عدة العد الخلوي-8) المقايسات، كل ذلك يتطلب أوقات حضانة طويلة. ويقدم البروتوكول معا فحصا عالي الإنتاجية لتركيبة الأدوية المحتملة ل GBM. يوفر البروتوكول أيضا حل اختياري سريع وبسيط لشاشة تركيبة الدواء بالإضافة إلى طرق تقييم التآزر القياسية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ولا يعلن صاحبا البلاغ عن أي تضارب في الكشف عن المعلومات.
Acknowledgments
نشكر المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81672962)، ومؤسسة برنامج فريق الابتكار في مقاطعة جيانغسو، ومؤسسة المشروع الرئيسي المشترك لجامعة جنوب شرق وجامعة نانجينغ الطبية على دعمهم.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| B-27 | Gibco | 17504-044 | 50X |
| EGF | Gibco | PHG0313 | 20 ng/ml |
| FGF | Gibco | PHG0263 | 20 ng/ml |
| Gluta Max | Gibco | 35050061 | 100X |
| Neurobasal | Gibco | 21103049 | 1X |
| Penicillin-Streptomycin | HyClone | SV30010 | P: 10,000 units/ml S: 10,000 ug/ml |
| Sodium Pyruvate | Gibco | 2088876 | 100 mM |
| Table 1. The formulation of GSC complete culture medium. | |||
| ABT-737 | MCE | Selective and BH3 mimetic Bcl-2, Bcl-xL and Bcl-w inhibitor | |
| Adavosertib (MK-1775) | MCE | Wee1 inhibitor | |
| Axitinib | MCE | Multi-targeted tyrosine kinase inhibitor | |
| AZD5991 | MCE | Mcl-1 inhibitor | |
| A 83-01 | MCE | Potent inhibitor of TGF-β type I receptor ALK5 kinase | |
| CGP57380 | Selleck | Potent MNK1 inhibitor | |
| Dactolisib (BEZ235) | Selleck | Dual ATP-competitive PI3K and mTOR inhibitor | |
| Dasatinib | MCE | Dual Bcr-Abl and Src family tyrosine kinase inhibitor | |
| Erlotinib | MCE | EGFR tyrosine kinase inhibitor | |
| Gefitinib | MCE | EGFR tyrosine kinase inhibitor | |
| Linifanib | MCE | Multi-target inhibitor of VEGFR and PDGFR family | |
| Masitinib | MCE | Inhibitor of c-Kit | |
| ML141 | Selleck | Non-competitive inhibitor of Cdc42 GTPase | |
| OSI-930 | MCE | Multi-target inhibitor of Kit, KDR and CSF-1R | |
| Palbociclib | MCE | Selective CDK4 and CDK6 inhibitor | |
| SB 202190 | MCE | Selective p38 MAP kinase inhibitor | |
| Sepantronium bromide (YM-155) | MCE | Survivin inhibitor | |
| TCS 359 | Selleck | Potent FLT3 inhibitor | |
| UMI-77 | MCE | Selective Mcl-1 inhibitor | |
| 4-Hydroxytamoxifen(Afimoxifene) | Selleck | Selective estrogen receptor (ER) modulator | |
| Table 2. The information of 20 targeted agents used in the test screen. All of these are target selective small molecular inhibitors. The provider, name, and targets were given in the table. |
References
- Lathia, J. D., Mack, S. C., Mulkearns-Hubert, E. E., Valentim, C. L., Rich, J. N.
- Binello, E., Germano, I. M. Targeting glioma stem cells: a novel framework for brain tumors. Cancer Science. 102 (11), 1958-1966 (2011).
- Mathews Griner, L. A., et al. High-throughput combinatorial screening identifies drugs that cooperate with ibrutinib to kill activated B-cell-like diffuse large B-cell lymphoma cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (6), 2349-2354 (2014).
- Di Veroli, G. Y., et al. Combenefit: an interactive platform for the analysis and visualization of drug combinations. Bioinformatics. 32 (18), 2866-2868 (2016).
- Shi, Y., et al. Ibrutinib inactivates BMX-STAT3 in glioma stem cells to impair malignant growth and radioresistance. Science Translational Medicine. 10 (443), 1-13 (2018).
- Tan, X., et al. Systematic identification of synergistic drug pairs targeting HIV. Nature Biotechnology. 30 (11), 1125-1130 (2012).
- Jansen, V. M., et al. Kinome-wide RNA interference screen reveals a role for PDK1 in acquired resistance to CDK4/6 inhibition in ER-positive breast cancer. Cancer Research. 77 (9), 2488-2499 (2017).
- Malyutina, A., et al. Drug combination sensitivity scoring facilitates the discovery of synergistic and efficacious drug combinations in cancer. PLoS Computational Biology. 15 (5), 1006752 (2019).
- He, L., et al. Methods for High-throughput drug combination screening and synergy scoring. Cancer Systems Biology. 1711, 351-398 (2018).
- Chen, C., et al. Targeting the synthetic vulnerability of PTEN-deficient glioblastoma cells with MCL1 inhibitors. Molecular Cancer Therapeutics. 19 (10), 2001-2011 (2020).
