Summary
원고 및 관련 비디오는 배꼽 주변 영역에서 피하 지방 조직 샘플을 얻는 경피적 생검 기술을 보여줍니다. 이 방법은 지방 조직 내에서 다양한 매개 변수 (예 : 유전자 또는 단백질 발현, 효소 활성, 지질 함량)를 조사하는 저위험하고 효율적인 방법입니다.
Abstract
지방 조직에 대한 연구는 대사 및 기타 상태를 이해하는 데 유용합니다. 인간의 피하 지방 조직에 접근 할 수 있습니다. 적절한 훈련과 무균 기술에 대한 엄격한 준수를 통해 피하 지방 샘플을 연구자가 비임상 환경에서 안전하고 효율적으로 얻을 수 있습니다. 배꼽에 국소 마취제를 투여 한 후, 5 또는 10 mL 주사기에 부착 된 14G 바늘을 피부를 통해 피하 조직으로 삽입합니다. 흡입 상태에서 주사기는 왕복 운동으로 이동하여 지방 조직 조각을 분리합니다. 플런저를 빼면 지방 조직 조각이 바늘을 통해 주사기로 흡인됩니다. 단일 생검은 약 200mg의 조직을 수집 할 수 있습니다. 이 생검 기술은 참가자와 연구 직원 모두에게 매우 안전합니다. 생검 후 참가자는 과도한 출혈을 피하기 위해 48시간 동안 수영과 지나치게 격렬한 활동을 피해야 하지만 대부분의 일상 활동을 재개할 수 있습니다. 참가자는 하루 안에 2번의 생검을 안전하게 받을 수 있으며, 이는 이 기술을 급성 중재 전후 연구에 적용할 수 있음을 의미합니다.
Introduction
지방 조직은 인간의 대사 기능에 대한 유용한 정보를 제공 할 수 있습니다. 인간의 피하 지방 조직은 쉽게 접근 할 수 있습니다. 피하 지방 조직 추출 기술은 80 년대 중반에 처음 설명되었습니다1; 그 이후로 수율을 높이고 연구 참가자의 내약성을 개선하기 위해 초기 프로토콜이 개선되었습니다. 피하 지방 조직은 수많은 부위로부터 얻을 수 있으며, 가장 일반적으로 둔부1 및 복부2에서 얻을 수 있습니다. 후자의 샘플은 대사 질환 관련 맥락에서 더 가치있는 정보를 제공하기 때문에 더 바람직 할 수 있습니다3.
미니 지방 흡입 방법을 이용한 피하 지방 조직 생검은 비 임상 환경에서 안전하고 효율적으로 수행 할 수 있습니다. 보드 인증 의사의 적절한 교육을 받고 엄격한 무균 기술을 사용하여 연구원은 참가자와 조사자 모두에게 최소한의 위험으로 이러한 생검을 일상적으로 수행 할 수 있습니다. 생검 팀은 생검을 수행 할 사람과 조수, 즉 최소 2 명으로 구성되어야합니다.
생검을 담당하는 사람은 참가자의 신원을 확인하고, 참가자가 안전하게 절차를 수행할 수 있는지 확인하고(아래 프로토콜 단계 2.1-2.4 참조), 참가자가 절차 전반에 걸쳐 편안한지 확인하고, 절차 전반에 걸쳐 멸균 기술이 유지되도록 하고, 절차를 수행하고, 참가자에게 구두 및 서면 사후 관리 절차를 제공합니다. 보조자의 역할은 나중에 분석 및/또는 저장을 위해 얻은 지방 조직을 처리하고 신속하게 처리하는 것입니다. 조수는 또한 "비 멸균 손"이되어 참가자가 절차 전반에 걸쳐 편안하게 지낼 수 있도록함으로써 도움을줍니다. 이 비디오와 논문의 목적은 복부에서 피하 지방 조직을 안전하게 얻기위한 단계별 생검 절차를 설명하는 것입니다.
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Protocol
참고 : University of Stirling NHS, 침습적 또는 임상 연구위원회는 아래에 설명 된 생검 절차를 승인했습니다. 이 절차를 사용하는 모든 연구는 적절한 독립 윤리위원회의 승인을 받아야합니다. 생검 응시자는 기관의 요구 사항에 따라 설명된 기술에 대한 공식 교육을 이수해야 합니다. 일반적으로 여기에는 보드 인증 의사가 설명한 지방 조직 생검 기술의 시연을 관찰 한 다음 감독 된 실습을 관찰하는 것이 포함됩니다. 연수생이 감독하에 자원 봉사자를 대상으로 10 번의 지방 조직 생검을 수행하면 절차에 대한 좋은 지식과 실습을 보장하기 위해 보드 인증 의사가 검사합니다. 그런 다음 보드 인증 의사는 개인에게 서명 된 검사 양식을 제공합니다.
1. 실험실 방 준비
- 실험실에 깨끗하고 닦을 수 있는 비다공성 표면과 참가자가 누울 수 있는 깨끗하고 편안한(바람직하게는 비다공성) 침대가 있는 적절한 개인실이 있는지 확인하십시오. 70 % 에탄올 스프레이와 깨끗한 종이 타월을 사용하여 생검 절차에 필요한 모든 표면을 청소하십시오. 필요한 경우 참가자를 지원할 깨끗한 베개 또는 쿠션을 제공하십시오.
- 적절한 날카로운 물건 쓰레기통과 생물학적 위험 폐기물 봉투를 생검이 수행되는 지역에서 쉽게 접근 할 수 있고 생검을받는 사람이 쉽게 접근 할 수있는 곳에 보관하십시오.
- 절차에 필요한 장비를 준비하고 참가자가 실험실에 도착하기 전에 새로 청소 한 일반 의료 트롤리에 설치하십시오 (그림 1). 필요한 소모품의 전체 목록은 재료 표를 참조하십시오.
2. 참가자 준비
- 모든 참가자가 기관의 독립적인 윤리 위원회에서 요구하는 프로토콜에 따라 절차를 수행하기 전에 서면 사전 동의를 제공하도록 합니다. 또한 참가자들에게 절차에 사용 된 물질 (즉, 니켈, 크롬, 국소 마취제, 요오드, 조개류 및 고약)에 알레르기가 없는지 확인하기 위해 서면 설문지를 작성하도록 요청하십시오.
- 참가자의 신원을 확인합니다. 참가자가 수행할 절차와 타박상, 통증 및 감염을 포함한 잠재적인 2차 영향을 이해하는지 확인합니다(표 1). 이전에 얻은 서면 동의와 함께 구두 동의를 수집합니다.
- 참가자에게 마취제 및 생검 자체의 투여가 어떻게 느끼는지에 중점을 두어 절차가 어떻게 수행 될지 설명하십시오. 참가자가 진행하는 데 익숙한지 확인합니다.
참고: 국소 피하 마취제는 짧은 기간의 벌침과 유사한 따끔거림을 생성합니다. 많은 참가자들이 마취 투여를이 기술의 가장 불편한 부분으로보고합니다. 마취제가 효과를 발휘하면 참가자는 생검 중에 약간의 잡아 당기는 느낌 이상을 느끼지 않아야합니다. - 참가자가 국소 마취제 (특히 리도카인 또는 이와 유사한 것을 사용하는 경우 아미노 아미드 유형), 특정 금속 (니켈 및 크롬) 및 조개류 (요오드 기반 용액을 사용하는 경우)에 알레르기가 없는지 확인하십시오. 또한 참가자가 어떤 형태의 항응고제도 복용하지 않는지 확인하십시오.
- 참가자에게 필요한 경우 방광을 비울 수있는 기회를 제공하여 4.1 단계에서 절차를 중단하거나 과도한 불편 함을 경험할 필요가 없도록하십시오.
3. 생검 절차 - 생검 응시자를위한 지침
- 참가자가 앙와위 자세로 누워 있으면 배꼽 옆으로 약 5-10cm 떨어진 생검 부위를 확인하십시오.
알림: 참가자가 같은 날 여러 번의 생검을 받아야 하는 경우 각 생검에 대해 배꼽의 반대쪽에 있는 생검 부위를 식별합니다. 이렇게하면 각 생검 부위 사이의 최대 거리가 확보됩니다. - 표준 의료 지침에 따라 비누와 따뜻한 물로 손을 씻으십시오4.
- 멸균 시트를 청소 된 트롤리 또는 작업 영역에 놓고 시트의 바깥 쪽 가장자리에만 닿도록주의하십시오.
- 적절한 무균 기술을 사용하여 멸균 수술 장갑을 착용하십시오. 보조원이 장비를 만지거나 오염시키지 않고 준비된 멸균 시트에 떨어지는 방식으로 나머지 장비를 열도록 합니다. 보조자가 멸균 포장에서 도구를 꺼낼 때 물건을 만지지 않도록 주의하십시오.
- 조수에게 작업 표면의 일부 멸균 거즈 (거즈를 과포화시키지 않고)에 소량의 요오드 기반 용액을 분배하도록 지시하십시오.
- 멸균 거즈와 요오드 기반 용액을 사용하여 선택한 생검 부위 주변에서 약 5-10cm2 씩 소독하십시오. 피부가 제안된 생검 부위에서 바깥쪽으로 이동하는 나선형 동작으로 청소되었는지 확인합니다. 피부 청소 절차를 두 번 반복하십시오. 여분의 액체(예: 멸균 영역에서 흘러내림)는 새 멸균 거즈로 닦아서 제거합니다.
- 조수와 함께 국소 마취 바이알 (이 프로토콜의 2 % 리도카인)의 내용물을 구두로 확인하고 만료일 내에 있음을 확인하십시오. 조수에게 열린 바이알을 거꾸로 잡고 21G 바늘을 사용하여 5mL의 국소 마취제를 주사기에 넣도록 지시하십시오. 바늘을 날카로운 물건 통에 버리고 주사기에 기포가 없는지 확인하십시오.
- 주사기에 26G 바늘을 바르고 기포를 배출하십시오. 복부 피부와 지방 조직을 부드럽게 꼬집어 복벽에서 멀리 옮깁니다. 그런 다음 바늘을 피부 표면에 대해 10° 이하의 각도로 피하 조직에 수평으로 삽입합니다.
- 주사기의 플런저를 추가로 0.5mL 빼냅니다(바늘이 혈관에 있지 않도록 하기 위해). 주사기에 혈액이 나타나면 바늘을 빼고 다른 각도로 다시 삽입하십시오.
- 삽입 부위를 마취하기 위해 직경 2-4mm의 블렙을 올립니다.
- 바늘을 피하 조직으로 전진시키고 부채꼴 패턴(그림 2)으로 ~1mL의 리도카인을 투여하고 마취제를 주입하기 전에 매번 플런저를 빼내도록 주의하십시오.
- 26G 바늘을 제거 및 폐기하고, 21G 바늘을 주사기에 적용하고, 기포를 배출하고, 나머지 ~4mL의 리도카인을 부채꼴 패턴(그림 2)으로 투여하고, 마취제를 주입하기 전에 매번 플런저를 빼내도록 주의하십시오.
- 국소 마취제가 효과를 발휘할 때까지 약 5분 정도 기다리십시오. 멸균 메스를 사용하여 생검 부위를 부드럽게 찌르면 i) 국소 마취제가 효과가 있는지 확인하고 ii) 마취 부위의 경계를 식별합니다. 필요한 경우 1-2 분 더 기다렸다가 다시 평가하십시오.
- 국소 마취제가 효과가 있다고 만족하면 피부와 지방 조직을 부드럽게 꼬집고 (3.8 단계에서와 같이) 멸균 메스를 사용하여 피부에 작은 1-2mm 구멍을 뚫습니다.
알림: 이것은 14G 바늘의 진입을 용이하게 할 만큼 충분히 커야 하며 바늘을 닫는 데 봉합사가 필요하지 않을 만큼 충분히 작아야 합니다. 이 시점부터 약간의 출혈이 발생하는 것이 일반적이며, 이는 멸균 거즈 조각으로 조절할 수 있습니다. - 먼저 14G 바늘을 5mL 또는 10mL 주사기에 바릅니다. 그런 다음 피부와 지방 조직을 부드럽게 꼬집으면서 천자를 통해 바늘을 마취 부위의 대략 중앙과 피부 표면에 대해 10 ° 이하의 각도로 지방 조직에 점차적으로 삽입합니다.
알림: 3.11단계에서 바늘이 전진하는 모든 경우에 대해 주사기 각도를 10° 이하로 유지해야 합니다.- 플런저를 약 2.5mL 표시까지 당겨 흡입을 적용합니다. 지방 조직의 조각을 자르기 위해 바늘을 앞뒤로 빠르게 움직여 생검을 받으십시오. 약 30초 후 바늘과 주사기를 90° 비틀고 이 절차를 반복하여 지방 조직 조각을 분해한 다음 흡입에 의해 주사기로 흡인합니다.
알림: 다른 주사기 크기를 사용할 수 있습니다. 연구원은 주사기를 잘 잡고 진공 상태를 유지하기 위해 플런저 수축을 편안하게 유지할 수 있는 주사기 크기를 선택하는 것이 중요합니다. 진공을 유지하는 잠금 주사기를 사용할 수 있어 바늘 제어를 개선하고 생검 응시자 5의 인지된 어려움을 줄일 수 있습니다. - 3.11.1 단계의 약 45-60 초 후에 바늘을 제거하고 주사기 내용물을 계량 보트를 덮는 거즈 층에 비우십시오. 잠재적인 혈액 튀김을 방지하기 위해 바늘의 내강이 아래를 향하고 있는지 확인하십시오.
- 3.11.1 및 3.11.2단계를 최대 3회 반복합니다. 참가자가 위의 절차를 반복하기 전에 진행하는 데 만족하는지 확인합니다.
- 3.11.1 및 3.11.2단계를 수행하는 동안 보조자에게 분석/보관을 위해 샘플을 처리하고 준비하도록 지시합니다(섹션 5 참조).
- 플런저를 약 2.5mL 표시까지 당겨 흡입을 적용합니다. 지방 조직의 조각을 자르기 위해 바늘을 앞뒤로 빠르게 움직여 생검을 받으십시오. 약 30초 후 바늘과 주사기를 90° 비틀고 이 절차를 반복하여 지방 조직 조각을 분해한 다음 흡입에 의해 주사기로 흡인합니다.
4. 생검 후 절차
- 지방 조직의 만족스러운 샘플 (즉, ~ 200mg)이 얻어지면 천자 상처 위에 멸균 거즈 1-2 층을 놓은 다음 얼음 팩을 그 위에 놓고 약 10 분 동안 단단한 압력을 가하여 지혈을 유도합니다.
- 지혈이 발생하면 멸균 거즈로 요오드 기반 용액/말린 혈액을 닦아내고 흡수 패드가 있는 접착성 상처 드레싱을 해당 부위에 바릅니다. 참가자가 기분이 좋은지 확인하고 생검 사이트 사후 관리에 대한 구두 및 서면 지침을 제공하십시오.
- 참가자들은 앞으로 며칠 동안 약간의 멍이 들 것이라고 강조한다. 4.1단계에서 얼음 팩에 의해 최소화되고 지속적인 효과 없이 해결되지만 이것이 상당할 수 있음을 알려주십시오.
- 마취제가 닳은 후 참가자가 불편함/통증을 느끼면 패킷의 지침에 따라 파라세타몰과 같은 진통제를 복용해야 하지만 항응고제 활성이 있는 진통제(예: 이부프로펜 또는 아스피린)는 복용하지 않도록 권장합니다.
- 생검 부위의 부기, 발적 또는 분비물은 감염의 징후라고 설명합니다. 드물게 이러한 징후나 증상이 발생하는 경우 참가자에게 의사 또는 지역 사고 및 응급실에서 긴급히 의학적 조언을 구하도록 지시하십시오. 참가자에게 의학적 조언을 구하는 경우 연구팀에도 알려야 함을 알립니다.
참고: 연구 직원으로서 생검 응시자나 조수는 의학적 조언이나 치료를 제공할 수 없습니다. 그러나 연구팀이 생검 절차로 인한 모든 합병증 사례를 알고 기록하는 것이 중요합니다. - 참가자는 절개 부위가 닫힐 때까지 48시간 동안 수영이나 지나치게 격렬한 활동을 피하도록 권장합니다.
- 사용한 날카로운 물건과 오염된 물질은 지정된 날카로운 물건 및/또는 임상 폐기물 용기에 버리십시오.
- 70 % 에탄올 스프레이와 깨끗한 종이 타월을 사용하여 생검 절차에 사용 된 모든 표면을 청소하십시오. 일회용 및 비 일회용 침구 품목은 각각 폐기 또는 청소를 위해 적절한 임상 백에 넣으십시오.
5. 샘플 처리-조수를위한 지침
- 멸균 핀셋과 0.9% 식염수를 사용하여 지방 조직 샘플을 헹구어 눈에 보이는 오염 물질(즉, 혈액, 혈관계)을 제거합니다. 그런 다음 디지털 저울을 사용하여 지방 조직 샘플을 칭량합니다. 다운스트림 분석을 위해 조직을 적절한 크기의 조각으로 나누고 멸균 핀셋을 사용하여 적절한 보관 튜브에 넣습니다. 지방 조직 생검을 포함하는 튜브를 -190°C에서 액체 질소에 담그고 샘플이 -80°C에서 보관될 때까지 급속 동결합니다.
알림: 어시스턴트는 잠재적인 샘플 분해를 최소화하기 위해 가능한 한 빨리, 일반적으로 샘플 흡인 후 3분 이내에 샘플 처리를 완료해야 합니다.
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Representative Results
설명 된 지방 조직 생검 절차는 연구자가 인간 자원 봉사자로부터 피하 지방 조직 샘플을 얻는 효율적이고 위험이 낮은 기술입니다. 우리는 11 명의 건강한 정상 체중 여성 (연령, 27.4 ± 3.3 세, 체질량 지수 (BMI), 22.6 ± 1.5 kg.m2)에서 설명 된 절차를 사용하여 39 개의 피하 지방 조직 생검을 수행했습니다. 모든 참가자는 07-00 시간의 금식 기간 후 10:00에서 8:12 사이에 실험실에 참석했습니다. 이 지방 조직 생검 절차를 사용한 샘플 수율은 192.0 ± 97.1 mg (범위 = 32.8-393.6 mg)이었다 (그림 4). 참가자의 BMI는 모두 건강한 체중 범위 (범위 = 21.1-25.4 kg / m2) 내에 있었지만 생검 수율과 참가자 BMI (p = 0.643) 사이에는 관계가 관찰되지 않았습니다. 적절한 샘플 중량은 전형적으로 조직 수집의 2-3 회 (즉, 단계 3.11.1 및 3.11.2의 반복 횟수) 후에 얻어졌다. 지방 조직 생검 후 모든 참가자는 타박상을 경험했지만 진통제로 완화되지 않는 과도한 통증을 경험한 참가자는 없었습니다. 다른 부작용도 없었다(표 1). 이것은 지방 조직 생검에 대해 이전에보고 된 합병증 비율 1,5와 일치합니다.
그림 1 : 절차에 필요한 재료. (A) 트롤리는 절차에 필요한 재료로 배치되었습니다. (B) 멸균 필드에 배치 된 재료. 1: 멸균 필드; 2: 멸균 장갑; 3: 메스; 4: 14 G 바늘; 5: 21 G 바늘; 6: 26 G 바늘; 7: 5mL 주사기; 8: 리도카인 2%; 9: 멸균 거즈; 10: 접착성 창상 드레싱; 11: 요오드계 용액. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2: 국소 마취제를 투여하기 위한 부채꼴 주사 부위의 개략도. 실선과 점선은 각각 26G 및 21G 바늘을 사용하여 마취제를 투여해야하는 위치를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3: 건강한 정상 체중 여성의 지방 조직 샘플 수율(n= 39). 오차 막대가 있는 막대 차트는 평균 ± 표준 편차를 나타냅니다. 원은 개별 데이터 요소를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 4: 조기 훈련 시도로 인한 타박상의 예. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
| 복잡 | 응답 | |
| 통증이 있습니다 | 참가자는 필요한 경우 패킷의 지침에 따라 진통제를 복용할 수 있습니다(예: 파라세타몰). 참가자는 항응고제 작용이있는 진통제 복용을 삼가해야합니다. | |
| 출혈 | 참가자는 약간의 출혈이 예상된다는 것을 알려야합니다. | |
| 타 박상 | 참가자는 타박상이 예상된다는 것을 알려야합니다. | |
| 흉터 조직 | 참가자는 생검 부위에서 일부 흉터 조직의 발달이 예상된다는 사실을 알려야합니다. | |
| 감염 | 참가자는 생검 전에 생검 부위에서 감염의 모든 증상을 알려야합니다. 참가자는 이러한 증상이 발생할 경우 의사 또는 지역 사고 및 응급실에서 의학적 조언을 구하고 연구팀에 소급하여 알리도록 지시받아야 합니다. | |
표 1 : 참가자가 경험할 수있는 합병증 목록.
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Discussion
설명 된 프로토콜 및 관련 비디오는 복부 영역에서 피하 지방 조직 샘플을 얻기위한 미니 지방 흡입 기술의 단계별 개요를 제공합니다. 이 연구 그룹은 참가자에게 부작용없이 124 개월 동안 총 19 건의 생검을 수행했습니다. 절차는 안전하고 설명 된 안전 조치를 따르는 경우 참가자 또는 생검 팀에 대한 위험을 최소화합니다. 무균 기술(멸균 장비를 오염시키지 않고 개봉 및 분배, 멸균 장갑을 적절하게 착용/제거, 일반적인 손 위생 포함)은 절차를 수행하는 연구원이 항상 유지해야 합니다(참가자의 감염 위험을 최소화하기 위해)6. 또한 사용한 날카로운 물건을 적절한 방식으로 폐기하면 바늘에 찔린 부상의 위험을 줄임으로써 연구원과 이 폐기물을 처리하는 다른 사람들의 안전을 보장할 수 있습니다7.
절차는 "저위험"으로 분류될 수 있지만 부작용을 최소화하기 위해 따라야 하는 무균 기술 및 적절한 폐기물 처리 외에도 몇 가지 중요한 단계가 있습니다. 주로 참가자는 아미노 아미드 계열의 국소 마취제(예: 리도카인) 또는 사용된 국소 마취제의 약물 계열, 바늘에 포함될 수 있는 특정 금속(크롬, 니켈 및 코발트) 및 요오드 기반 피부 소독액을 사용하는 경우 조개류/요오드(2.4단계)에 알레르기가 없음을 확인해야 합니다. 참가자는 마취제의 이름에 익숙하지 않을 수 있고 리도카인은 치과 시술에 일반적으로 사용되기 때문에 그러한 맥락에서 마취 투여에 대한 반응이 있었는지 물어 보는 것이 도움이 될 수 있습니다. 마찬가지로, 참가자는 크롬과 니켈이 아닌 보석 / 피어싱에 알레르기 반응이 있는지 여부를 물어볼 수 있습니다. 현재 항응고제를 복용 중인 개인은 과도한 출혈의 위험이 높으므로 시술을 받아서는 안 됩니다. 저용량 아스피린을 일상적으로 복용하는 참가자는 생검 프로토콜에 참여하는 것을 배제하지 않습니다. 그러나 참가자는 지혈률에 영향을 미칠 수 있으므로 생검 응시자에게 알려야 합니다.8. 오메가-3 지방산 보충제가 생검을 수행하는 것을 배제하지는 않지만 참가자는 혈액 점도에 영향을 미칠 수 있으므로 그러한 보충제(또는 지방이 풍부한 생선)가 일상적인 식단의 일부인지 확인해야합니다9. 절차를 시작하기 전에 참가자는 생검에 영향을 미칠 수있는 조건이 있는지 여부를 확인해야합니다. 예를 들어, 성형 수술 (즉, 지방 흡입술)은 조직 샘플의 양 / 품질에 영향을 미치며 이전의 흉터 / 문신 부위는 피해야합니다. 마지막으로, 생검 팀은 생검 부위를 더 잘 보이게 하기 위해 상당한 양의 체모가 있는 참가자를 면도하는 것을 고려할 수 있습니다.
생검 영역 (3.1 단계)을 선택할 때 연구원은 근위 영역이 매우 혈관이므로 해당 부위가 배꼽에서 충분히 멀리 떨어져 있는지 확인해야합니다 (약 5-10cm). 배꼽에 너무 가까운 생검 부위를 선택하면 불필요하게 광범위한 멍이 생길 수 있습니다 (예 : 그림 4). 과도한 멍은 적절한 생검 부위 선택과 시술 후 얼음찜질 적용으로 제한될 수 있지만 참가자는 어느 정도의 멍이 발생할 가능성이 있음을 알려야 합니다. 이 연구 그룹 내에서 우리는 그러한 타박상이 3-5 일 이내에 사라지는 것을 일화로 관찰했습니다. 또한 일부 참가자는 생검 부위에 약간의 흉터 조직이 생겨 만지기 어려운 조직 덩어리로 나타날 수 있습니다. 생검 절차를 받는 사람은 흉터 조직이 일시적이며 2-3주 이내에 저절로 해결된다는 사실을 알아야 합니다. 환자의 내약성을 극대화하기 위해 연구원은 국소 마취제의 영향을받는 부위를 식별해야합니다 (3.9 단계) : 메스를 사용하고 생검 부위를 부드럽게 찌르면 연구원은 참가자와 해당 부위가 성공적으로 마취되었음을 구두로 확인할 수 있습니다. 마취 부위의 한계는 해당 부위를 넘어 확인해야합니다. 참가자에게이 작업이 완료되고 매우 약간의 불편 함을 느낄 수 있음을 알립니다. 이것은 마취되지 않은 부위에 생검 바늘을 놓으면 참가자의 불편함을 유발할 수 있으므로 특히 중요한 단계입니다.
여기에 설명 된 미니 지방 흡입 생검 기술은 수술 절차에 대한 저렴한 대안이며 전문 도구가 필요하지 않습니다. 직설성으로 인해 이러한 생검은 거의 또는 전혀 문제 없이 일상적으로 수행할 수 있습니다. 지방 조직 샘플링을 수행 할 때 발생하는 가장 일반적인 문제는 14G 바늘의 샤프트가 막혀 지방 조직이 주사기로 흡입되지 않을 수 있다는 것입니다. 설명 된 생검 기술로 훈련 된 숙련 된 개인은 주사기 플런저의 반응성 변화를 통해 장애물을 알아 차릴 것입니다 (즉, 제자리에 "고정"). 바늘 막힘이 발생하면 연구원은 바늘 경사가 계량 보트 위에있는 동안 플런저를 세게 눌러 장애물을 제거하려고 시도하는 것이 좋습니다. 장애물이 단단히 박힌 경우 두 번째 옵션은 바늘과 주사기를 교체하는 것입니다. 시술 후 바늘에 박힌 조직은 멸균 식염수를 바늘을 통해 밀어 넣어 회수 할 수 있습니다. 샘플 분해를 방지하기 위해, 수득된 조직은 절차10 후에 가능한 한 빨리 세척, 처리 및 보관되어야 한다. RNA 분해를 최소화하기 위해, 안정화 용액은 샘플 처리 단계17 에서 활용될 수 있다(재료 표 참조).
이 기술의 주요 한계는 상대적으로 빠르고(훈련되고 숙련된 개인의 경우 ~15분) 비용 효율적이지만 중간 크기의 샘플(~200mg)만 생성된다는 것입니다. 이 샘플 크기는 일반적으로 다양한 대사 분석에 적합하지만 연구원은 예상 샘플 수율이 의도한 샘플 분석에 충분한지 확인하는 것이 좋습니다. 설명된 기술을 사용하여 수득된 샘플 수율은 전형적으로 수술 기법(11)의 것보다 낮다; 그러나 외과적 생검에 사용되는 더 큰 절개 부위는 참가자에게 더 많은 불편함을 유발하고 완전히 치유될 때까지 특정 일상 활동에 참여하지 못하게 할 수 있습니다11. 이러한 기술은 또한 참가자가 연구 연구에 등록하는 것을 방해하고 훈련된 임상의가 필요할 가능성이 더 큽니다. 이 비디오에 설명 된 미니 지방 흡입 생검의 주요 장점은 비 의료 연구자가 비 임상 환경에서 신속하게 수행 할 수 있다는 것입니다. 또한 같은 날 한 참가자에 대해 여러 생검을 완료 할 수 있으므로 연구원은 급성 전후 영양 / 운동 중재 연구를 수행 할 수 있습니다. 영국에서는 리도카인 투여에 처방전이 필요합니다. 우리 팀원은 비 의료 처방 자격이 있습니다. 국소 마취제를 투여하기 전에 현지 규정을 확인해야합니다.
많은 연구 그룹이 다양한 연구 질문에 미니 지방 흡입 기술을 적용했습니다. 여기에는 당뇨병 2 환자의 지방 조직 호르몬 프로파일 제공, 대사 기능 장애 환자에서 지방 조직 miRNA 발현의 변이 정량화 12, 과체중 인구에서 영양 및 운동 중재 평가13,14가 포함되지만 이에 국한되지는 않습니다. 또한 지방 조직 샘플의 즉각적인 처리가 허용됩니다. 세포 배양을위한 전 지방 세포의 분리15; 및 생체외 대사 파라미터, 예컨대 지방분해율(16), 호르몬 분비량(13) 및 미토콘드리아 호흡(14)의 분석을 포함한다. 기술된 기술을 통해 수득된 지방 조직 샘플은 절단 바늘 또는 메스(5)를 사용하는 수술 기술을 통해 수득된 샘플과 비교할 때 높은 수준의 단편화를 갖는다는 것을 주목해야 한다. 이것은 건축 및 형태 학적 매개 변수5의 평가를위한 분석 기술의 성공적인 사용을 배제한다. 연구자가 건축 및 형태학적 파라미터의 분석을 위해 지방 조직 샘플을 수득하고자 하는 경우, 대안적인 방법은 감소된 조직 단편화와 관련된다18. 그럼에도 불구하고 설명 된 기술을 통해 지방 조직 샘플을 얻는 것은 광범위한 주요 생리적 과정을 조사 할 수있게합니다.
요약하면, 본 비디오 및 논문은 피하 복부 지방 조직을 얻기 위한 비임상 미니 지방 흡입 생검 기술을 기술한다. 적절한 제어가 이루어지면 이 방법은 비교적 통증이 없고 안전하며 시간/비용 효율적입니다. 이 생검 방법은 전후 연구 설계를 구현하고 많은 양의 조직 샘플이 필요하지 않은 연구에 특히 적합합니다.
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Disclosures
저자는 선언 할 이해 상충이 없습니다.
Acknowledgments
저자는 선언 할 자금이 없습니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Item: 14 G needle 14 G x 3 1/8" 210 mm x 80 mm |
B Braun | 4665473 | Per biopsy: 1 |
| Item: 21 G needle 21 G x 1 1/2" 0.8 mm x 38 mm |
Terumo | AN*2138R1 | Per biopsy: 2 |
| Item: 26 G needle 26 G x 1/2" microlance needle 0.45 mm x 13 mm |
BD | 303800 | Per biopsy: 2 |
| Item: 5 mL syringe 5 mL luer |
DB plastipak | 302187 | Per biopsy: 2 |
| Item: Adhesive wound dressing Opsite Post-Op Dressing 9.5 x 8.5 |
Smith & Nephew | 6600709 | Per biopsy: 1 |
| Item: Disposable sterile scalpel Disposable Scalpel Sterile Blade no. 10 |
Swann Morton | /0501 | Per biopsy: 1 |
| Item: Icepack BlueDot Reusable Hot/Cold Pack 26.5 cm x 13.0 cm |
NuCare | F711 | Per biopsy: 1 |
| Item: Iodine based antiseptic Videne antiseptic solution |
Ecolab Videne | 3030440 | Per biopsy: q.s |
| Item: Lidocaine 2% w/o epinephrine Lidocaine 2% injection 5 mL |
B Braun | 3558553 | Per biopsy: 5 mL |
| Item: Non-sterile gloves Starguard sensitive powder free nitrile gloves |
Starguard | SG-N-S | Per biopsy: pair |
| Item: Sodium chloride 0.9% Sodium chlride 0.9% w/v intravenous infusion BP |
BBraun | S8004-5384 | Per biopsy: q.s. |
| Item: Stabilization solution* RNAlater Stabilization Solution |
ThermoFisher Scientific | AM7020 | Per biopsy: q.s |
| Item: Sterile forceps Sterile forceps |
Rocialle | RML109-006 | Per biopsy: 1 |
| Item: Sterile gauze swabs Non woven swabs sterile 7.5 x 7.5 cm |
Prestige | 1860 | Per biopsy: 5 |
| Item: Sterile gloves Prestige soft vinyl sterile powder free medical gloves |
Prestige | S: P4301 M:P3302 L:P3301 |
Per biopsy: pair |
| Item: Sterile Microcentrifuge tubes 1.5 mL Sterile Microcentrifuge Tubes |
StarLab | I1415-5510 | Per biopsy: q.s |
| Item: Sterile sheet Paper plain white 90 x 90 cm |
Rocialle | RML 126-216 | Per biopsy: 1 |
| Item: Weighing boat Diamond shape weigh boats |
Heathrow Scientific | HS1427C | Per biopsy: 1 |
| * denotes optional materials |
References
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