Summary
Makale ve ilgili video, umbilikusu çevreleyen bölgelerden deri altı yağ dokusu örnekleri elde etmek için perkütan bir biyopsi tekniğini göstermektedir. Bu yöntem, yağ dokusundaki bir dizi parametreyi (örneğin, gen veya protein ekspresyonu, enzim aktivitesi, lipit içeriği) araştırmak için düşük riskli ve etkili bir yoldur.
Abstract
Yağ dokusu üzerine yapılan çalışmalar metabolik ve diğer durumların anlaşılmasında yararlıdır. İnsan deri altı yağ dokusuna erişilebilir. Uygun eğitim ve aseptik tekniğe sıkı sıkıya bağlılık ile, deri altı yağ örnekleri araştırmacılar tarafından klinik olmayan bir ortamda güvenli ve verimli bir şekilde elde edilebilir. Lokal anestezik lateral göbek içine verildikten sonra, 5 veya 10 mL'lik bir şırıngaya tutturulmuş 14 G'lik bir iğne deriden deri altı dokusuna yerleştirilir. Emme altında, şırınga yağ dokusunun parçalarını izole etmek için pistonlu, dilimleme hareketinde hareket ettirilir. Pistonun geri çekilmesi, yağ dokusu parçalarının iğneden şırıngaya aspire edilmesini sağlamak için yeterlidir. Tek bir biyopsi yaklaşık 200 mg doku toplayabilir. Bu biyopsi tekniği hem katılımcılar hem de araştırma personeli için çok güvenlidir. Biyopsiyi takiben, katılımcılar çoğu günlük aktiviteye devam edebilirler, ancak aşırı kanamayı önlemek için 48 saat boyunca yüzmeden ve aşırı yorucu aktivitelerden kaçınmaları gerekir. Katılımcılar tek bir gün içinde güvenli bir şekilde 2 biyopsi alabilirler, bu da tekniğin akut müdahale öncesi ve sonrası çalışmalarda uygulanabileceği anlamına gelir.
Introduction
Yağ dokusu, insanların metabolik fonksiyonları hakkında yararlı bilgiler sağlayabilir. İnsan deri altı yağ dokusuna kolayca erişilebilir. Subkutan yağ dokusu ekstraksiyonu için bir teknik ilk olarak 80'li yılların ortalarında tanımlanmıştır1; O zamandan beri, verimi artırmak ve çalışma katılımcısının tolere edilebilirliğini artırmak için ilk protokol geliştirilmiştir. Subkutan yağ dokusu çok sayıda bölgeden, en sık glutei1 ve abdominal bölge2'den elde edilebilir. İkincisinden alınan örnekler, metabolik hastalıkla ilgili bağlamlarda daha değerli bilgiler sağladıkları için daha arzu edilebilir3.
Mini liposuction yöntemi kullanılarak deri altı yağ dokusu biyopsisi, klinik olmayan bir ortamda güvenli ve verimli bir şekilde gerçekleştirilebilir. Kurul sertifikalı bir doktor tarafından uygun eğitimi takiben ve sıkı aseptik teknik kullanarak, araştırmacılar bu biyopsileri hem katılımcı hem de araştırmacılar için minimum riskle rutin olarak gerçekleştirebilirler. Biyopsi ekibi en az 2 kişiden oluşmalıdır: biyopsiyi yapacak kişi ve bir asistan.
Biyopsiden sorumlu kişi, katılımcının kimliğini doğrulamak, katılımcının prosedürden güvenli bir şekilde geçebileceğini kontrol etmek (aşağıdaki protokol adımları 2.1-2.4'e bakınız), katılımcının prosedür boyunca rahat etmesini sağlamak, prosedür boyunca steril tekniğin korunmasını sağlamak, prosedürü uygulamak ve katılımcıya sözlü ve yazılı bakım sonrası prosedürler sağlamakla görevlidir. Asistanın rolü, daha sonra analiz ve / veya depolama için elde edilen yağ dokusunu işlemek ve hızlı bir şekilde işlemektir. Asistan ayrıca "steril olmayan eller" olarak ve katılımcının prosedür boyunca rahat etmesini sağlayarak yardımcı olur. Bu video ve makalenin amacı, karın bölgesinden deri altı yağ dokusunu güvenli bir şekilde elde etmek için adım adım biyopsi prosedürünü tanımlamaktır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
NOT: Stirling Üniversitesi NHS, İnvaziv veya Klinik Araştırma Komitesi, aşağıda açıklanan biyopsi prosedürünü onayladı. Bu prosedürü kullanan tüm araştırma çalışmaları uygun bağımsız etik kurul tarafından onaylanmalıdır. Biyopsi alıcısı, kurumunun gereksinimlerine uygun olarak tarif edilen teknikte resmi eğitimi tamamlamış olmalıdır. Tipik olarak, bu, tarif edilen yağ dokusu biyopsi tekniğinin kurul sertifikalı bir doktor tarafından gösterilmesini ve ardından denetimli uygulamayı gözlemlemeyi içerir. Stajyer, gözetim altında gönüllü denekler üzerinde 10 pratik yağ dokusu biyopsisi gerçekleştirdikten sonra, prosedürün iyi bilinmesini ve uygulanmasını sağlamak için kurul sertifikalı bir doktor tarafından incelenecektir. Kurul onaylı hekim daha sonra bireye imzalı bir muayene formu sağlar.
1. Laboratuvar odası hazırlığı
- Laboratuvarın temiz, silinebilir gözeneksiz yüzeylere ve katılımcının sırtüstü yatabileceği temiz, konforlu (tercihen gözeneksiz) bir yatağa sahip uygun şekilde özel bir odaya sahip olduğundan emin olun. Biyopsi prosedürü için gerekli tüm yüzeyleri% 70 etanol sprey ve temiz kağıt havlu kullanarak temizleyin. Gerekirse katılımcıyı desteklemek için temiz yastıklar veya minderler sağlayın.
- Uygun kesici uç imha kutularını ve biyolojik tehlike atık torbalarını, biyopsi yapılan alanın kolayca erişebileceği ve biyopsi alan kişinin kolayca erişebileceği bir yerde tutun.
- Prosedür için gerekli ekipmanı hazırlar ve katılımcı laboratuvara gelmeden önce yeni temizlenmiş genel tıbbi bir arabaya kurar (Şekil 1). Gerekli sarf malzemelerinin tam listesi için Malzeme Tablosu'na bakın.
2. Katılımcı hazırlığı
- Tüm katılımcıların, kurumun bağımsız etik komitesi tarafından istenen protokollere uygun olarak prosedürden geçmeden önce yazılı bilgilendirilmiş onam vermelerini sağlayın. Ek olarak, katılımcılardan prosedürde kullanılan herhangi bir malzemeye (yani nikel, krom, lokal anestezik, iyot, kabuklu deniz ürünleri ve sıvalar) alerjileri olmadığından emin olmak için yazılı bir anket doldurmalarını isteyin.
- Katılımcının kimliğini onaylayın. Katılımcının gerçekleştirilecek prosedürü ve morarma, ağrı ve enfeksiyon dahil olmak üzere potansiyel ikincil etkileri anladığından emin olun (Tablo 1). Daha önce alınmış yazılı bilgilendirilmiş onamlara ek olarak sözlü onay alın.
- Katılımcıya, anestezik ve biyopsi uygulamasının kendisinin nasıl hissedileceğine vurgu yaparak, prosedürün nasıl gerçekleştirileceğini açıklayın. Katılımcının devam etme konusunda rahat olduğundan emin olun.
NOT: Lokal subkutan anestezik, kısa süreli bir arı sokmasına benzer şekilde acı hissi yaratacaktır. Birçok katılımcı, anestezik uygulamayı tekniğin en rahatsız edici kısmı olarak bildirmektedir. Anestezi etkili olduktan sonra, katılımcı biyopsi sırasında hafif bir çekme hissinden daha fazlasını hissetmemelidir. - Katılımcının lokal anesteziye (özellikle lidokain veya benzeri kullanılıyorsa amino-amid türünden), bazı metallere (nikel ve krom) ve kabuklu deniz hayvanlarına (iyot bazlı çözeltiler kullanılıyorsa) alerjisi olmadığından emin olun. Ek olarak, katılımcıların herhangi bir antikoagülan ilaç almadığından emin olun.
- Katılımcıya, gerekirse mesanesini boşaltma ve boşaltma fırsatı verin, prosedürü kesmek zorunda kalmamalarını veya adım 4.1'de aşırı rahatsızlık yaşamamalarını sağlayın.
3. Biyopsi prosedürü - biyopsi alıcısı için talimatlar
- Katılımcı sırtüstü pozisyonda yattıktan sonra, biyopsi bölgesini göbek kemiğine yaklaşık 5-10 cm lateral olarak tanımlayın.
NOT: Katılımcı aynı gün içinde birden fazla biyopsi yapacaksa, her biyopsi için göbeğin zıt taraflarındaki biyopsi bölgelerini tanımlayın. Bu, her biyopsi bölgesi arasında maksimum mesafeyi sağlayacaktır. - Ellerinizi standart tıbbi kılavuzlara göre sabun ve ılık suyla yıkayın4.
- Steril tabakayı temizlenmiş arabaya veya çalışma alanına yerleştirin, sadece tabakanın dış kenarlarına dokunmaya özen gösterin.
- Uygun aseptik tekniği kullanarak steril cerrahi eldivenler giyin. Asistanın, ekipmanın geri kalanını, ekipmana dokunmadan/kirletmeden hazırlanan steril tabakanın üzerine düşecek şekilde açmasını sağlayın. Asistanın, aletleri steril ambalajlarından çıkarırken öğelere dokunmamaya özen gösterdiğinden emin olun.
- Asistana, çalışma yüzeyindeki bazı steril gazlı bezlere (gazlı bezi aşırı doyurmadan) az miktarda iyot bazlı çözelti dağıtmasını söyleyin.
- Steril gazlı bez ve iyot bazlı çözelti kullanarak seçilen biyopsi bölgesinin etrafında yaklaşık 5-10cm2 sterilize edin. Cildin, önerilen biyopsi bölgesinden dışarı doğru hareket eden spiral bir hareketle temizlendiğinden emin olun. Cilt temizleme prosedürünü iki kez tekrarlayın. Taze steril gazlı bezle silerek fazla sıvıyı (örneğin, steril alandan akarak) çıkarın.
- Asistanla birlikte, lokal anestezik şişenin içeriğini (bu protokolde% 2 lidokain) ve bunun son kullanma tarihi içinde olduğunu sözlü olarak onaylayın. Asistana açılan şişeyi baş aşağı tutmasını ve 21 G'lik bir iğne kullanarak 5 mL lokal anesteziyi bir şırıngaya çekmesini söyleyin. İğneyi keskin kutuya atın ve şırınganın hava kabarcıklarından arındırılmış olduğundan emin olun.
- Şırıngaya 26 G'lık bir iğne uygulayın ve hava kabarcıklarını dışarı atın. Karın derisini ve yağ dokusunu hafifçe sıkıştırarak karın duvarından uzaklaştırın. Daha sonra, iğneyi deri altı dokusuna yatay olarak, cildin yüzeyine göre 10 ° 'den daha büyük olmayan bir açıyla yerleştirin.
- Şırınganın pistonunu 0,5 mL daha geri çekin (iğnenin kan damarında olmadığından emin olmak için). Şırıngada kan görünüyorsa, iğneyi farklı bir açıyla çekin ve tekrar takın.
- Yerleştirme bölgesini uyuşturmak için 2-4 mm çapında bir bleb kaldırın.
- İğneyi deri altı dokusuna ilerletin ve fan şeklinde bir desende ~ 1 mL lidokain uygulayın (Şekil 2), anesteziyi enjekte etmeden önce her seferinde pistonu çekmeye özen gösterin.
- 26 G iğneyi çıkarın ve atın, şırıngaya 21 G'lik bir iğne uygulayın, herhangi bir hava kabarcığını dışarı atın ve kalan ~ 4 mL lidokaini fan şeklinde bir desende uygulayın (Şekil 2), anesteziyi enjekte etmeden önce her seferinde pistonu çekmeye özen gösterin.
- Lokal anestezinin etkili olması için yaklaşık 5 dakika bekleyin. Biyopsi alanını nazikçe prod etmek için steril bir neşter kullanın i) lokal anestezinin etkili olduğundan emin olun ve ii) anestezi yapılan alanın sınırlarını belirleyin. Gerekirse, bir veya iki dakika daha bekleyin ve yeniden değerlendirin.
- Lokal anestezinin çalıştığından emin olduktan sonra, cildi ve yağ dokusunu hafifçe sıkıştırın (adım 3.8'de olduğu gibi) ve ciltte 1-2 mm'lik küçük bir delinme yapmak için steril bir neşter kullanın.
NOT: Bunun sadece 14 G iğnenin girişini kolaylaştıracak kadar büyük olması ve kapatmak için dikiş gerektirmeyecek kadar küçük olması gerekir. Bu noktadan itibaren bir parça steril gazlı bezle kontrol edilebilen bazı kanamaların meydana gelmesi yaygındır. - İlk önce, 5 veya 10 mL'lik bir şırıngaya 14 G'lik bir iğne uygulayın. Daha sonra, cildi ve yağ dokusunu nazikçe sıkıştırırken, iğneyi delinme yoluyla yavaş yavaş anestezi yapılan bölgede yaklaşık olarak merkezi olarak ve cildin yüzeyine göre 10 ° 'den daha büyük olmayan bir açıyla yağ dokusuna yerleştirin.
NOT: Adım 3.11'deki tüm iğne ilerlemesi durumları için, 10°'den büyük olmayan bir şırınga açısı korunmalıdır.- Pistonu yaklaşık 2,5 mL işaretine çekerek emme uygulayın. İğneyi hızlı bir şekilde ileri ve geri hareket ettirerek biyopsi yapın ve yağ dokusunun parçalarını dilimleyin. Yaklaşık 30 sn sonra, iğneyi ve şırıngayı 90 ° 'den döndürün ve daha sonra emme ile şırıngaya aspire edilen yağ dokusu parçalarını parçalamak için bu prosedürü tekrarlayın.
NOT: Diğer şırınga boyutları kullanılabilir. Araştırmacının, hem şırınga üzerinde iyi bir tutuşa hem de vakumun bakımı için piston geri çekilmesini rahatça sürdürmeye izin veren bir şırınga boyutu seçmesi önemlidir. Vakumu koruyan, iğne kontrolünü iyileştirebilen ve biyopsi alan 5 için algılanan zorluğu azaltabilen kilitleme şırıngaları mevcuttur. - Adım 3.11.1'in yaklaşık 45-60 s'sinden sonra, iğneyi çıkarın ve şırınga içeriğini bir tartım teknesini kaplayan bir gazlı bez tabakasına boşaltın. Potansiyel kan sıçramasını önlemek için iğnenin lümeninin aşağı baktığından emin olun.
- 3.11.1 ve 3.11.2 adımlarını en fazla 3 kez yineleyin. Yukarıdaki prosedürün her tekrarından önce katılımcının devam etmekten memnun olup olmadığını kontrol edin.
- 3.11.1 ve 3.11.2 adımlarını uygularken, asistana numuneleri analiz/depolama için işlemesi ve hazırlaması talimatını verin (bkz. bölüm 5).
- Pistonu yaklaşık 2,5 mL işaretine çekerek emme uygulayın. İğneyi hızlı bir şekilde ileri ve geri hareket ettirerek biyopsi yapın ve yağ dokusunun parçalarını dilimleyin. Yaklaşık 30 sn sonra, iğneyi ve şırıngayı 90 ° 'den döndürün ve daha sonra emme ile şırıngaya aspire edilen yağ dokusu parçalarını parçalamak için bu prosedürü tekrarlayın.
4. Biyopsi sonrası prosedür
- Tatmin edici bir yağ dokusu örneği (yani ~ 200 mg) elde edildikten sonra, delinme yarasının üzerine 1-2 kat steril gazlı bez yerleştirin, ardından bunların üzerine bir buz torbası yerleştirin ve hemostazı indüklemek için yaklaşık 10 dakika boyunca sert basınç uygulayın.
- Hemostaz meydana geldiğinde, iyot bazlı herhangi bir çözeltiyi / kurutulmuş kanı steril gazlı bezle silin ve bölgeye emici ped ile yapışkan bir yara örtüsü uygulayın. Katılımcının kendini iyi hissedip hissetmediğini kontrol edin ve biyopsi sitesi sonrası bakım konusunda sözlü ve yazılı talimatlar verin.
- Katılımcıların önümüzdeki birkaç gün boyunca muhtemelen biraz morarma sergileyeceğini vurgulayın. Onlara, adım 4.1'deki buz paketi tarafından en aza indirilmesine ve kalıcı etkiler olmadan çözülmesine rağmen, bunun önemli olabileceğini bildirin.
- Katılımcıların, anestezi yıprandıktan sonra herhangi bir rahatsızlık / ağrı hissetmeleri durumunda, paket üzerindeki talimatları izleyerek parasetamol gibi analjezikler almalarını, ancak antikoagülan aktiviteleri olan analjezikleri (örneğin, ibuprofen veya aspirin) almaktan kaçınmalarını tavsiye edin.
- Şişlik, kızarıklık veya biyopsi bölgesinden akıntının enfeksiyon belirtileri olduğunu açıklayın. Bu belirtilerin veya semptomların ortaya çıkması durumunda, katılımcıya acilen bir doktordan veya yerel Kaza ve Acil Durum biriminden tıbbi yardım almasını söyleyin. Katılımcıya, tıbbi tavsiye almaları durumunda, araştırma ekibini de bilgilendirmeleri gerektiğini bildirin.
NOT: Araştırma personeli olarak, ne biyopsi alıcısı ne de asistan tıbbi tavsiye veya tedavi sağlayamaz; Bununla birlikte, araştırma ekibinin biyopsi prosedüründen kaynaklanan tüm komplikasyon vakalarının farkında olması ve kaydetmesi önemlidir. - Katılımcıların, insizyon bölgesi kapanana kadar 48 saat boyunca yüzmeyi veya aşırı yorucu aktiviteyi önlemelerini tavsiye edin.
- Kullanılmış kesici uçları ve kontamine olmuş malzemeleri belirlenmiş kesici uçlara ve/veya klinik atık konteynerlerine temizleyin.
- Biyopsi işleminde kullanılan tüm yüzeyleri% 70 etanol sprey ve temiz kağıt havlu kullanarak temizleyin. Tek kullanımlık ve tek kullanımlık olmayan yatak takımlarını sırasıyla bertaraf veya temizlik için uygun klinik torbalara yerleştirin.
5. Örnek işleme - asistan için talimatlar
- Görünür kirleticileri (yani kan, vaskülatür) gidermek için yağ dokusu örneğini durulamak için steril cımbız ve% 0.9 salin kullanın. Ardından, dijital terazileri kullanarak yağ dokusu örneklerini tartın. Dokuyu aşağı akış analizi için uygun boyutta parçalara bölün ve steril cımbız kullanarak uygun depolama tüplerine yerleştirin. Yağ dokusu biyopsilerini içeren tüpleri -190 °C'de sıvı azota batırın ve numuneler -80 °C'de saklanana kadar dondurun.
NOT: Asistan, olası numune bozulmasını en aza indirmek için numune işlemeyi mümkün olduğunca çabuk, tipik olarak numune aspirasyonundan sonraki 3 dakika içinde tamamlamalıdır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Tarif edilen yağ dokusu biyopsisi prosedürü, araştırmacıların insan gönüllülerden deri altı yağ dokusu örnekleri almaları için etkili ve düşük riskli bir tekniktir. Tanımlanan prosedürü kullanarak 11 sağlıklı, normal kilolu kadında (yaş, 27.4 ± 3.3 yıl; vücut kitle indeksi (VKİ), 22.6 ± 1.5 kg.m2) tanımlanan prosedürü kullanarak 39 adet deri altı yağ dokusu biyopsisi gerçekleştirdik. Tüm katılımcılar 8-12 saatlik oruç dönemini takiben 07:00-10:00 saatleri arasında laboratuvara katılmışlardır. Bu yağ dokusu biyopsisi prosedürü kullanılarak alınan numune verimi 192.0 ± 97.1 mg (aralık = 32.8-393.6 mg) idi (Şekil 4). Biyopsi verimi ile katılımcı VKİ'si arasında bir ilişki gözlenmedi (p= 0.643), ancak katılımcıların VKİ'lerinin hepsi sağlıklı kilo aralığında (aralık= 21.1-25.4 kg/m2) idi. Yeterli numune ağırlığı tipik olarak 2-3 seans doku toplamayı takiben elde edildi (yani, 3.11.1 ve 3.11.2 adımlarının tekrarlama sayısı). Yağ dokusu biyopsilerini takiben, tüm katılımcılar bir çürük yaşadı, ancak hiçbiri ağrı kesiciler tarafından hafifletilmeyen aşırı ağrı yaşamadı. Başka advers reaksiyon da yoktu (Tablo 1). Bu, yağ dokusu biyopsileri için daha önce bildirilen komplikasyon oranları ile tutarlıdır 1,5.
Şekil 1: Prosedür için gerekli malzemeler. (A) Prosedür için gerekli malzemelerle birlikte yerleştirilen araba. (B) Steril alanda düzenlenmiş malzemeler. 1: steril alan; 2: steril eldivenler; 3: neşter; 4: 14 G iğne; 5: 21 G iğne; 6: 26 G iğne; 7: 5mL şırınga; 8: lidokain% 2; 9: steril gazlı bez; 10: yapışkan yara pansumanı; 11: iyot bazlı çözelti. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: Lokal anestezinin uygulanması için fan şeklindeki enjeksiyon bölgelerinin şeması. Katı ve noktalı çizgiler, anestezinin sırasıyla 26 G ve 21 G iğnesi kullanılarak uygulanması gereken yeri temsil eder. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3: Sağlıklı, normal kilolu kadınlardan yağ dokusu örneği verimi (n= 39). Hata çubukları içeren çubuk grafik, standart sapmanın ortalama ± temsil eder. Daireler tek tek veri noktalarını temsil eder. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 4: Erken bir eğitim denemesinden kaynaklanan bir çürük örneği. Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
| Komplikasyon | Yanıt | |
| Ağrı | Katılımcı, gerekirse paket üzerindeki talimatları izleyerek analjezikler alabilir (örneğin, parasetamol). Katılımcılar, antikoagülan aktiviteleri olan analjezikler almaktan kaçınmalıdır. | |
| Kanama | Katılımcıya bir miktar kanama beklenmesi gerektiği bildirilmelidir. | |
| Mora -rma | Katılımcıya morarmanın beklenmesi gerektiği bildirilmelidir. | |
| Skar dokusu | Katılımcıya, biyopsi bölgesinde bazı skar dokusunun gelişiminin beklenmesi gerektiği bildirilmelidir. | |
| Enfeksiyon | Katılımcı, biyopsiden önce biyopsi bölgesindeki bir enfeksiyonun tüm belirtileri hakkında bilgilendirilmelidir. Katılımcılara, bu semptomların ortaya çıkması durumunda bir doktordan veya yerel Kaza ve Acil Durum biriminden tıbbi yardım almaları ve araştırma ekibini geriye dönük olarak bilgilendirmeleri talimatı verilmelidir. | |
Tablo 1: Katılımcıların yaşayabileceği komplikasyonların listesi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Tarif edilen protokol ve ilişkili video, karın bölgesinden deri altı yağ dokusu örnekleri elde etmek için mini liposuction tekniğine adım adım genel bir bakış sunmaktadır. Bu araştırma grubu, katılımcılarda herhangi bir yan etkisi olmadan 19 ay boyunca toplam 124 biyopsi gerçekleştirmiştir. Prosedür güvenlidir ve açıklanan güvenlik önlemlerine uyulması koşuluyla katılımcılar veya biyopsi ekibi için minimum risk ile ilişkilidir. Aseptik teknik (steril ekipmanın kirletilmeden açılması ve dağıtılması, steril eldivenlerin uygun şekilde giyilmesi/çıkarılması, genel el hijyeni dahil), prosedürü uygulayan araştırmacılar tarafından her zaman korunmalıdır (katılımcıya enfeksiyon riskini en aza indirmek için)6. Ek olarak, kullanılmış keskinliklerin uygun bir şekilde bertaraf edilmesi, iğne çubuğu yaralanmaları riskini azaltarak araştırmacının ve bu atıkları işleyen diğer kişilerin güvenliğini sağlar7.
Prosedür "düşük riskli" olarak sınıflandırılabilse de, olumsuz etkileri en aza indirmek için izlenmesi gereken aseptik tekniğe ve uygun atık bertarafına ek olarak birkaç kritik adım vardır. Öncelikle, katılımcılar amino amid ailesindeki (örneğin, lidokain) lokal anesteziklere veya kullanılan lokal anesteziğin ilaç ailesine, iğnelerde bulunabilecek bazı metallere (krom, nikel ve kobalt) ve iyot bazlı bir cilt dezenfektan çözeltisi kullanıyorsa kabuklu deniz ürünleri / iyota alerjileri olmadığını doğrulamalıdır (adım 2.4). Katılımcılar anestezinin adına aşina olmayabileceğinden ve lidokain diş prosedürlerinde yaygın olarak kullanıldığından, bu bağlamda anestezik uygulamaya tepki gösterip göstermediklerini sormak yararlı olabilir. Benzer şekilde, katılımcılara özellikle krom ve nikel yerine herhangi bir mücevher / piercing'e alerjik reaksiyonları olup olmadığı sorulabilir. Şu anda antikoagülan kullanan bireyler, aşırı kanama riski yüksek oldukları için prosedüre tabi tutulmamalıdır. Rutin olarak düşük doz aspirin alan katılımcılar biyopsi protokolüne katılımı engellemez; Bununla birlikte, katılımcılar hemostaz8 oranını etkileyebileceğinden biyopsi alıcısını bilgilendirmelidir. Omega-3 yağ asitleri takviyesi biyopsinin yapılmasını engellemezken, katılımcılar bu tür takviyelerin (veya yağ bakımından zengin balıkların) rutin diyetlerinin bir parçası olup olmadığını doğrulamalıdır, çünkü bu kan viskozitesini etkileyebilir9. Prosedüre başlamadan önce, katılımcılara biyopsiyi etkileyebilecek herhangi bir koşula sahip olup olmadıkları da sorulmalıdır. Örneğin, kozmetik cerrahi (yani, liposuction) doku örneğinin miktarını / kalitesini etkileyecektir ve önceki yara izleri / dövme bölgelerinden kaçınılmalıdır. Son olarak, biyopsi ekibi, biyopsi alanını daha görünür hale getirmek için katılımcıları önemli miktarda vücut kılı ile tıraş etmeyi düşünmek isteyebilir.
Biyopsi alanını seçerken (adım 3.1), araştırmacı, proksimal alan çok vasküler olduğu için bölgenin göbeğinden (yaklaşık 5-10 cm) yeterince uzak olduğundan emin olmalıdır. Göbek kemiğine çok yakın bir biyopsi bölgesi seçmek, gereksiz yere geniş morarmalara yol açabilir (örneğin, Şekil 4). Aşırı morarma, uygun bir biyopsi alanı seçimi ve prosedürü takiben bir buz torbasının uygulanması ile sınırlandırılabilirken, katılımcılara bir dereceye kadar morarma meydana gelme ihtimalinin yüksek olduğu bildirilmelidir. Bu araştırma grubunda, bu tür kontüzyonların 3-5 gün içinde dağıldığını anekdotsal olarak gözlemledik. Ek olarak, bazı katılımcılar biyopsi bölgesinde bazı skar dokusu geliştirebilir ve dokunması zor bir doku yumruğu olarak ortaya çıkabilir. Biyopsi prosedürü geçiren herkes, skar dokusunun geçici olduğu ve 2-3 hafta içinde kendiliğinden düzeleceği konusunda bilgilendirilmelidir. Hastanın tolere edilebilirliğini en üst düzeye çıkarmak için, araştırmacı lokal anesteziden etkilenen alanı tanımlamalıdır (adım 3.9): Bir neşter kullanarak ve biyopsi alanını nazikçe dürterek, araştırmacı katılımcıyla alanın başarılı bir şekilde uyuşturulduğunu sözlü olarak doğrulayabilir. Anestezi yapılan bölgenin sınırları, alanın dışına çıkılarak doğrulanmalıdır. Katılımcıya bunun yapılacağını ve çok hafif bir rahatsızlık hissedebileceğini bildirin. Bu özellikle önemli bir adımdır, çünkü biyopsi iğnesini anestezi yapılmamış bölgelere yerleştirmek katılımcıların rahatsızlığına neden olacaktır.
Burada anlatılan mini liposuction biyopsi tekniği cerrahi işlemlere düşük maliyetli bir alternatiftir ve uzman aletler gerektirmez. Basitlikleri nedeniyle, bu biyopsiler rutin olarak çok az veya hiç sorun olmadan gerçekleştirilebilir. Yağ dokusu örneklemesi yapılırken karşılaşılan en yaygın sorun, 14 G iğnenin şaftının tıkanarak şırıngaya yağ dokusu aspirasyonunu önleyebilmesidir. Tarif edilen biyopsi tekniğinde eğitilmiş deneyimli bir birey, şırınganın pistonunun duyarlılığındaki değişikliklerle tıkanıklığı fark edecektir (yani, yerinde "yapışır"). Bir iğne tıkanıklığı meydana gelirse, araştırmacıya primiste, iğne eğimi tartım teknesinin üzerindeyken pistonu zorla bastırarak tıkanıklığı gidermeye çalışması önerilir. Tıkanıklık sıkıca yerleştirilmişse, ikinci seçenek iğneyi ve şırıngayı değiştirmektir. İşlemden sonra, bir iğneye yerleştirilen doku, steril salin iğneden geçirilerek alınabilir. Numune bozulmasını önlemek için, elde edilen doku prosedürü takiben mümkün olan en kısa sürede temizlenmeli, işlenmeli ve saklanmalıdır10. RNA bozunmasını en aza indirmek için, numune işleme adımı17'de bir stabilizasyon çözeltisi kullanılabilir (lütfen Malzeme Tablosuna bakın).
Bu tekniğin ana sınırlaması, nispeten hızlı (eğitimli ve deneyimli bir birey için ~ 15 dakika) ve uygun maliyetli olmasına rağmen, yalnızca orta büyüklükte bir örneklemle (~ 200 mg) sonuçlanmasıdır. Bu örneklem büyüklüğü tipik olarak çeşitli metabolik analizler için yeterli olsa da, araştırmacının beklenen numune veriminin amaçlanan numune analizi için yeterli olmasını sağlaması önerilir. Tarif edilen teknik kullanılarak elde edilen numune verimi tipik olarak cerrahi tekniklerden daha düşüktür11; Bununla birlikte, cerrahi biyopsilerde kullanılan daha büyük kesi bölgeleri katılımcılara daha fazla rahatsızlık verir ve tamamen iyileşene kadar belirli günlük aktivitelere katılmalarını engelleyebilir11. Bu tekniklerin ayrıca katılımcıları araştırma çalışmalarına kaydolmaktan caydırma ve eğitimli bir klinisyen gerektirme olasılığı daha yüksektir. Bu videoda açıklanan mini liposuction biyopsisinin önemli bir avantajı, tıbbi olmayan araştırmacılar tarafından klinik olmayan bir ortamda hızlı bir şekilde gerçekleştirilebilmesidir. Ayrıca, aynı gün içinde bir katılımcı üzerinde birden fazla biyopsi tamamlayabilmek, araştırmacıların akut öncesi-sonrası beslenme / egzersiz müdahalesi çalışmaları yapmalarını sağlar. İngiltere'de, lidokain uygulamasının bir reçete gerektirdiği belirtilmelidir; Ekibimizin bir üyesi tıbbi olmayan reçeteleme konusunda niteliklidir. Lokal anestezi uygulanmadan önce lokal düzenlemeler kontrol edilmelidir.
Birçok araştırma grubu, çeşitli araştırma soruları için mini liposuction tekniğini uygulamıştır. Bunlar, diyabetli katılımcılarda yağ dokusu hormon profillerinin sağlanması, bunlarla sınırlı olmamak üzere, 2, metabolik işlev bozukluğu olan hastalarda yağ dokusu miRNA ekspresyonunun varyasyonunun ölçülmesi 12 ve aşırı kilolu popülasyonlarda beslenme ve egzersiz müdahalelerinin değerlendirilmesini içerir13,14. Ek olarak, yağ dokusu örneklerinin derhal işlenmesi izin verir; hücre kültürü için pre-adipositlerin izolasyonu15; ve lipolitik hız16, hormon sekresyonu 13 ve mitokondriyal solunum14 gibi ex vivo metabolik parametrelerin analizi. Tarif edilen teknikle elde edilen yağ dokusu örneklerinin, kesme iğnesi veya neşter kullanılarak cerrahi tekniklerle elde edilen örneklerle karşılaştırıldığında yüksek düzeyde parçalanma seviyelerine sahip olduğu unutulmamalıdır5. Bu, mimari ve morfolojik parametrelerin değerlendirilmesi için analitik tekniklerin başarılı bir şekilde kullanılmasını engellemektedir5. Araştırmacılar mimari ve morfolojik parametrelerin analizi için yağ dokusu örnekleri almayı planlıyorlarsa, alternatif yöntemler doku parçalanmasının azalması ile ilişkilidir18. Bununla birlikte, tarif edilen teknikle yağ dokusu örnekleri elde etmek, çok çeşitli anahtar fizyolojik süreçlerin araştırılmasına izin verir.
Özetle, bu video ve yazıda deri altı abdominal yağ dokusu elde etmek için klinik olmayan bir mini liposuction biyopsi tekniği anlatılmaktadır. Uygun kontroller uygulandığında, yöntem nispeten ağrısız, güvenli ve zaman / maliyet etkindir. Bu biyopsi yöntemi, özellikle çalışma öncesi-sonrası tasarımını uygulayan ve büyük miktarda doku örneği gerektirmeyen çalışmalar için çok uygundur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların beyan edecekleri herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Acknowledgments
Yazarların beyan edecek bir fonu yoktur.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Item: 14 G needle 14 G x 3 1/8" 210 mm x 80 mm |
B Braun | 4665473 | Per biopsy: 1 |
| Item: 21 G needle 21 G x 1 1/2" 0.8 mm x 38 mm |
Terumo | AN*2138R1 | Per biopsy: 2 |
| Item: 26 G needle 26 G x 1/2" microlance needle 0.45 mm x 13 mm |
BD | 303800 | Per biopsy: 2 |
| Item: 5 mL syringe 5 mL luer |
DB plastipak | 302187 | Per biopsy: 2 |
| Item: Adhesive wound dressing Opsite Post-Op Dressing 9.5 x 8.5 |
Smith & Nephew | 6600709 | Per biopsy: 1 |
| Item: Disposable sterile scalpel Disposable Scalpel Sterile Blade no. 10 |
Swann Morton | /0501 | Per biopsy: 1 |
| Item: Icepack BlueDot Reusable Hot/Cold Pack 26.5 cm x 13.0 cm |
NuCare | F711 | Per biopsy: 1 |
| Item: Iodine based antiseptic Videne antiseptic solution |
Ecolab Videne | 3030440 | Per biopsy: q.s |
| Item: Lidocaine 2% w/o epinephrine Lidocaine 2% injection 5 mL |
B Braun | 3558553 | Per biopsy: 5 mL |
| Item: Non-sterile gloves Starguard sensitive powder free nitrile gloves |
Starguard | SG-N-S | Per biopsy: pair |
| Item: Sodium chloride 0.9% Sodium chlride 0.9% w/v intravenous infusion BP |
BBraun | S8004-5384 | Per biopsy: q.s. |
| Item: Stabilization solution* RNAlater Stabilization Solution |
ThermoFisher Scientific | AM7020 | Per biopsy: q.s |
| Item: Sterile forceps Sterile forceps |
Rocialle | RML109-006 | Per biopsy: 1 |
| Item: Sterile gauze swabs Non woven swabs sterile 7.5 x 7.5 cm |
Prestige | 1860 | Per biopsy: 5 |
| Item: Sterile gloves Prestige soft vinyl sterile powder free medical gloves |
Prestige | S: P4301 M:P3302 L:P3301 |
Per biopsy: pair |
| Item: Sterile Microcentrifuge tubes 1.5 mL Sterile Microcentrifuge Tubes |
StarLab | I1415-5510 | Per biopsy: q.s |
| Item: Sterile sheet Paper plain white 90 x 90 cm |
Rocialle | RML 126-216 | Per biopsy: 1 |
| Item: Weighing boat Diamond shape weigh boats |
Heathrow Scientific | HS1427C | Per biopsy: 1 |
| * denotes optional materials |
References
- Beynen, A. C., Katan, M. B. Rapid sampling and long-term storage of subcutaneous adipose-tissue biopsies for determination of fatty acid composition. American Journal of Clinical Nutrition. 42 (2), 317-322 (1985).
- Moran, C. N., et al. Effects of diabetes family history and exercise training on the expression of adiponectin and leptin and their receptors. Metabolism. 60 (2), 206-214 (2011).
- Jialal, I., Devaraj, S. Subcutaneous adipose tissue biology in metabolic syndrome. Hormone Molecular Biology and Clinical Investigation. 33 (1), (2018).
- WHO Guidelines on hand hygiene in health care: a summary. World Health Organization. , Available from: https://www.who.int/gpsc/5may/tools/who_guidelines-handhygiene_summary.pdf (2009).
- Kettwich, L. G., et al. New device technologies for subcutaneous fat biopsy. Amyloid. 19 (2), 66-73 (2012).
- Preston, R. M. Aseptic technique: evidence-based approach for patient safety. British Journal of Nursing. 14 (10), 540-546 (2005).
- Handiyani, H., Meily Kurniawidjaja, L., Irawaty, D., Damayanti, R. The effective needle stick injury prevention strategies for nursing students in the clinical settings: a literature review. Enfermeria Clinica. 28, Suppl 1 167-171 (2018).
- Raggio, B. S., Barton, B. M., Kandil, E., Friedlander, P. L. Association of continued preoperative aspirin use and bleeding complications in patients undergoing thyroid surgery. JAMA Otolaryngology-Head & Neck Surgery. 144, 335 (2018).
- Cartwright, I. J., Pockley, A. G., Galloway, J. H., Greaves, M., Preston, F. E. The effects of dietary omega-3 polyunsaturated fatty acids on erythrocyte membrane phospholipids, erythrocyte deformability and blood viscosity in healthy volunteers. Atherosclerosis. 55 (3), 267-281 (1985).
- Hemmrich, K., Denecke, B., Paul, N. E., Hoffmeister, D., Pallua, N. RNA isolation from adipose tissue: an optimized procedure for high RNA yield and integrity. Laboratory Medicine. 41 (2), 104-106 (2010).
- Chachopoulos, V., et al. A technique for subcutaneous abdominal adipose tissue biopsy via a non-diathermy method. Journal of Visual Experiments: JoVE. (127), e55593 (2017).
- Civelek, M., et al. Genetic regulation of human adipose microRNA expression and its consequences for metabolic traits. Human Molecular Genetics. 22 (15), 3023-3037 (2013).
- Chen, Y. C., et al. Feeding influences adipose tissue responses to exercise in overweight men. American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 313 (1), 84-93 (2017).
- Mendham, A. E., et al. Exercise training results in depot-specific adaptations to adipose tissue mitochondrial function. Scientific Reports. 10 (1), 3785 (2020).
- Carswell, K. A., Lee, M. J., Fried, S. K. Culture of isolated human adipocytes and isolated adipose tissue. Methods in Molecular Biology. 806, 203-214 (2012).
- Arner, P., Andersson, D. P., Backdahl, J., Dahlman, I., Ryden, M. Weight gain and impaired glucose metabolism in women are predicted by inefficient subcutaneous fat cell lipolysis. Cell Metabolism. 28 (1), 45-54 (2018).
- Mutter, G., et al. Comparison of frozen and RNALater solid tissue storage methods for use in RNA expression microarrays. BMC genomics. 5, 88 (2004).
- Coleman, S. Structural fat grafting: more than a permanent filler. Plastic and Reconstructive Surgery. 118, Suppl 3 108-120 (2018).
