Summary
El manuscrito y el video asociado demuestran una técnica de biopsia percutánea para obtener muestras de tejido adiposo subcutáneo de las áreas que rodean el ombligo. Este método es una forma eficiente y de bajo riesgo de investigar una serie de parámetros (por ejemplo, expresión génica o proteica, actividad enzimática, contenido de lípidos) dentro del tejido adiposo.
Abstract
Los estudios sobre el tejido adiposo son útiles para comprender las afecciones metabólicas y de otro tipo. El tejido adiposo subcutáneo humano es accesible. Con la capacitación adecuada y el estricto cumplimiento de la técnica aséptica, los investigadores pueden obtener muestras adiposas subcutáneas de manera segura y eficiente en un entorno no clínico. Después de la administración de anestesia local lateral al ombligo, se inserta una aguja de 14 G conectada a una jeringa de 5 o 10 ml a través de la piel hasta el tejido subcutáneo. Bajo succión, la jeringa se mueve en un movimiento alternativo de corte para aislar fragmentos de tejido adiposo. Retirar el émbolo es suficiente para asegurar que los fragmentos de tejido adiposo se aspiren a través de la aguja en la jeringa. Una sola biopsia puede recolectar aproximadamente 200 mg de tejido. Esta técnica de biopsia es muy segura tanto para los participantes como para el personal investigador. Después de la biopsia, los participantes pueden reanudar la mayoría de las actividades cotidianas, aunque deben evitar nadar y actividades demasiado extenuantes durante 48 h para evitar el sangrado excesivo. Los participantes pueden someterse de forma segura a 2 biopsias en un solo día, lo que significa que la técnica se puede aplicar en estudios de intervención aguda antes-después.
Introduction
El tejido adiposo puede proporcionar información útil sobre la función metabólica de los seres humanos. El tejido adiposo subcutáneo humano es fácilmente accesible. Una técnica para la extracción subcutánea de tejido adiposo fue descrita por primera vez a mediados de los años 801; Desde entonces, el protocolo inicial se ha mejorado para aumentar el rendimiento y mejorar la tolerabilidad de los participantes del estudio. El tejido adiposo subcutáneo se puede obtener de numerosos sitios, más comúnmente de los glúteos1 y el área abdominal2. Las muestras de estos últimos pueden ser más deseables, ya que proporcionan información más valiosa en contextos relacionados con enfermedades metabólicas3.
La biopsia subcutánea de tejido adiposo utilizando el método de mini-liposucción se puede realizar de manera segura y eficiente en un entorno no clínico. Después de la capacitación adecuada por parte de un médico certificado por la junta y utilizando una técnica aséptica estricta, los investigadores pueden realizar rutinariamente estas biopsias con un riesgo mínimo tanto para el participante como para los investigadores. El equipo de biopsia debe estar formado por al menos 2 personas: la persona que realizará la biopsia y un asistente.
La persona responsable de la biopsia tiene la tarea de confirmar la identidad del participante, verificar que el participante pueda someterse al procedimiento de manera segura (consulte los pasos del protocolo 2.1-2.4 a continuación), garantizar que el participante se sienta cómodo durante todo el procedimiento, garantizar que la técnica estéril se mantenga durante todo el procedimiento, llevar a cabo el procedimiento y proporcionar al participante procedimientos verbales y escritos de cuidado posterior. La función del asistente es manipular y procesar rápidamente el tejido adiposo obtenido para su posterior análisis y/o almacenamiento. El asistente también ayuda al ser las "manos no estériles" y garantizar que el participante esté a gusto durante todo el procedimiento. El propósito de este video y documento es describir el procedimiento de biopsia paso a paso para obtener de manera segura el tejido adiposo subcutáneo del área abdominal.
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Protocol
NOTA: El Comité de Investigación Clínica o Invasiva del NHS de la Universidad de Stirling aprobó el procedimiento de biopsia que se describe a continuación. Todos los estudios de investigación que utilicen este procedimiento deben ser aprobados por el comité de ética independiente apropiado. El tomador de la biopsia debe haber completado la capacitación formal en la técnica descrita de acuerdo con los requisitos de su institución. Por lo general, esto implica observar una demostración de la técnica de biopsia de tejido adiposo descrita por un médico certificado, seguida de una práctica supervisada. Una vez que el aprendiz haya realizado 10 biopsias de tejido adiposo de práctica en sujetos voluntarios bajo supervisión, será examinado por un médico certificado por la junta para garantizar un buen conocimiento y práctica del procedimiento. Luego, el médico certificado por la junta proporciona al individuo un formulario de examen firmado.
1. Preparación de la sala de laboratorio
- Asegúrese de que el laboratorio tenga una habitación privada adecuada con superficies limpias y limpiables, no porosas y una cama limpia y cómoda (preferiblemente no porosa) en la que el participante pueda acostarse en posición supina. Limpie todas las superficies requeridas para el procedimiento de biopsia con aerosol de etanol al 70% y limpie las toallas de papel. Proporcione almohadas o cojines limpios para apoyar al participante si es necesario.
- Mantenga los contenedores de eliminación de objetos punzantes apropiados y las bolsas de desechos de riesgo biológico al alcance del área donde se realiza la biopsia y al alcance de la persona que realiza la biopsia.
- Prepare el equipo requerido para el procedimiento y configúrelo en un carro médico general recién limpiado antes de que el participante llegue al laboratorio (Figura 1). Para obtener una lista completa de los consumibles necesarios, consulte la Tabla de materiales.
2. Preparación de los participantes
- Asegurar que todos los participantes den su consentimiento informado por escrito antes de someterse al procedimiento de acuerdo con los protocolos requeridos por el comité de ética independiente de la institución. Además, pida a los participantes que completen un cuestionario escrito para asegurarse de que no son alérgicos a ningún material utilizado en el procedimiento (a saber, níquel, cromo, anestésico local, yodo, mariscos y tiritas).
- Confirme la identidad del participante. Asegúrese de que el participante entienda el procedimiento que se llevará a cabo y los posibles efectos secundarios, incluidos hematomas, dolor e infección (Tabla 1). Reunir el consentimiento verbal además del consentimiento informado por escrito obtenido previamente.
- Describa al participante cómo se llevará a cabo el procedimiento, con énfasis en cómo se sentirá la administración del anestésico y la biopsia en sí. Asegúrese de que el participante se sienta cómodo con el procedimiento.
NOTA: La anestesia subcutánea local producirá una sensación de picadura, similar a una picadura de abeja de corta duración. Muchos participantes reportan la administración de anestesia como la parte más incómoda de la técnica. Una vez que el anestésico ha hecho efecto, el participante no debe sentir más que una ligera sensación de tirón durante la biopsia. - Asegúrese de que el participante no tenga alergias al anestésico local (específicamente del tipo aminoamida, si usa lidocaína o similar), ciertos metales (níquel y cromo) y mariscos (si usa soluciones a base de yodo). Además, asegúrese de que los participantes no estén tomando ningún tipo de medicamento anticoagulante.
- Proporcione al participante la oportunidad de ir y vaciar su vejiga si es necesario, para asegurarse de que no tenga que interrumpir el procedimiento o experimentar molestias indebidas en el paso 4.1.
3. Procedimiento de biopsia - instrucciones para el tomador de biopsia
- Una vez que el participante esté acostado en posición supina, identifique el sitio de la biopsia aproximadamente 5-10 cm lateral al ombligo.
NOTA: Si el participante se va a someter a múltiples biopsias el mismo día, identifique los sitios de biopsia en lados opuestos del ombligo para cada biopsia. Esto asegurará la máxima distancia entre cada sitio de biopsia. - Lávese las manos con jabón y agua tibia de acuerdo con las pautas médicas estándar4.
- Coloque la hoja estéril en el carro o área de trabajo limpia, teniendo cuidado de tocar solo los bordes exteriores de la hoja.
- Póngase guantes quirúrgicos estériles utilizando la técnica aséptica adecuada. Haga que el asistente abra el resto del equipo de tal manera que caiga sobre la lámina estéril preparada sin tocar / contaminar el equipo. Asegúrese de que el asistente tenga cuidado de no tocar los artículos al retirar las herramientas de sus envolturas estériles.
- Indique al asistente que dispense una pequeña cantidad de solución a base de yodo en una gasa estéril (sin sobresaturar la gasa) en la superficie de trabajo.
- Esterilice aproximadamente 5-10 cm2 alrededor del sitio de biopsia elegido usando la gasa estéril y la solución a base de yodo. Asegúrese de que la piel se limpie en un movimiento en espiral que se mueva hacia afuera desde el sitio de biopsia propuesto. Repita el procedimiento de limpieza de la piel dos veces. Elimine el exceso de líquido (p. ej., escurriendo el área estéril) limpiando con una gasa estéril fresca.
- Junto con el asistente, confirme verbalmente el contenido del vial de anestesia local (lidocaína al 2% en este protocolo) y que está dentro de su fecha de caducidad. Indique al asistente que sostenga el vial abierto boca abajo y extraiga 5 ml de anestésico local en una jeringa, utilizando una aguja de 21 G. Deseche la aguja en el contenedor de objetos punzantes y asegúrese de que la jeringa esté libre de burbujas de aire.
- Aplique una aguja de 26 G a la jeringa y expulse cualquier burbuja de aire. Pellizque suavemente la piel abdominal y el tejido adiposo, alejándolo de la pared abdominal. Luego, inserte la aguja horizontalmente en el tejido subcutáneo en un ángulo no mayor de 10 ° con respecto a la superficie de la piel.
- Extraiga el émbolo de la jeringa 0,5 ml adicionales (para asegurarse de que la aguja no esté en un vaso sanguíneo). Si aparece sangre en la jeringa, retire y vuelva a insertar la aguja en un ángulo diferente.
- Elevar una ampolla de 2-4 mm de diámetro para anestesiar el área de inserción.
- Introduzca la aguja en el tejido subcutáneo y administre ~1 ml de lidocaína en forma de abanico (Figura 2), teniendo cuidado de retirar el émbolo cada vez antes de inyectar el anestésico.
- Retire y deseche la aguja de 26 G, aplique una aguja de 21 G a la jeringa, expulse cualquier burbuja de aire y administre los ~ 4 ml restantes de lidocaína en un patrón en forma de abanico (Figura 2), teniendo cuidado de retirar el émbolo cada vez antes de inyectar el anestésico.
- Espere aproximadamente 5 minutos para que el anestésico local haga efecto. Use un bisturí estéril para pinchar suavemente el área de la biopsia para i) asegurarse de que el anestésico local haya surtido efecto y ii) identificar los límites del área anestesiada. Si es necesario, espere uno o dos minutos adicionales y vuelva a evaluar.
- Una vez satisfecho de que el anestésico local está funcionando, pellizque suavemente la piel y el tejido adiposo (como en el paso 3.8) y use un bisturí estéril para hacer una pequeña punción de 1-2 mm en la piel.
NOTA: Esto solo necesita ser lo suficientemente grande como para facilitar la entrada de la aguja de 14 G y debe ser lo suficientemente pequeño como para que no se requiera sutura para cerrarla. Es común que se produzca un sangrado a partir de este punto, que se puede controlar con un trozo de gasa estéril. - Primero, aplique una aguja de 14 G a una jeringa de 5 o 10 ml. Luego, mientras pellizca suavemente la piel y el tejido adiposo, inserte gradualmente la aguja a través de la punción en el tejido adiposo aproximadamente en el centro del área anestesiada y en un ángulo no mayor de 10 ° con respecto a la superficie de la piel.
NOTA: Para todos los casos de avance de la aguja en el paso 3.11, se debe mantener un ángulo de jeringa no superior a 10°.- Aplique succión retirando el émbolo hasta aproximadamente la marca de 2,5 ml. Tome la biopsia moviendo la aguja en un movimiento rápido hacia atrás y hacia adelante para cortar fragmentos de tejido adiposo. Después de aproximadamente 30 s, gire la aguja y la jeringa 90° y repita este procedimiento para romper los fragmentos de tejido adiposo, que luego son aspirados en la jeringa por la succión.
NOTA: Se pueden usar otros tamaños de jeringa. Es esencial que el investigador seleccione un tamaño de jeringa que permita tanto un buen agarre de la jeringa como mantener cómodamente la retracción del émbolo para el mantenimiento del vacío. Hay jeringas de bloqueo disponibles que mantienen el vacío, lo que puede mejorar el control de la aguja y reducir la dificultad percibida para el tomador de biopsia 5. - Después de aproximadamente 45-60 s del paso 3.11.1, retire la aguja y vacíe el contenido de la jeringa en una capa de gasa que cubra un bote de pesaje. Asegúrese de que la luz de la aguja esté hacia abajo para evitar posibles salpicaduras de sangre.
- Repita los pasos 3.11.1 y 3.11.2 para un máximo de 3 veces. Compruebe que el participante está contento de proceder antes de cada repetición del procedimiento anterior.
- Mientras realiza los pasos 3.11.1 y 3.11.2, indique al asistente que procese y prepare las muestras para su análisis/almacenamiento (ver sección 5).
- Aplique succión retirando el émbolo hasta aproximadamente la marca de 2,5 ml. Tome la biopsia moviendo la aguja en un movimiento rápido hacia atrás y hacia adelante para cortar fragmentos de tejido adiposo. Después de aproximadamente 30 s, gire la aguja y la jeringa 90° y repita este procedimiento para romper los fragmentos de tejido adiposo, que luego son aspirados en la jeringa por la succión.
4. Procedimiento posterior a la biopsia
- Una vez que se haya obtenido una muestra satisfactoria (es decir, ~ 200 mg) de tejido adiposo, coloque 1-2 capas de gasa estéril sobre la herida punzante, luego coloque una bolsa de hielo sobre ellas y aplique una presión firme durante aproximadamente 10 minutos para inducir la hemostasia.
- Cuando se haya producido hemostasia, limpie cualquier solución a base de yodo / sangre seca con una gasa estéril y aplique un apósito adhesivo para heridas con almohadilla absorbente en el sitio. Verifique que el participante se sienta bien y proporcione instrucciones verbales y escritas sobre el cuidado posterior del sitio de la biopsia.
- Haga hincapié en que los participantes probablemente exhibirán algunos moretones durante los próximos días. Infórmeles que esto puede ser sustancial, aunque se minimiza con la bolsa de hielo en el paso 4.1 y se resolverá sin efectos duraderos.
- Recomendar que si los participantes sienten alguna molestia / dolor una vez que el efecto de la anestesia haya desaparecido, tomen analgésicos como paracetamol siguiendo las instrucciones del paquete, pero se abstengan de tomar analgésicos que tengan actividades anticoagulantes (por ejemplo, ibuprofeno o aspirina).
- Explique que la hinchazón, el enrojecimiento o la secreción del sitio de la biopsia son indicaciones de infección. En el improbable caso de que se presenten estos signos o síntomas, indique al participante que busque urgentemente el consejo médico de un médico o de la unidad local de Accidentes y Emergencias. Informe al participante que si busca consejo médico, también debe notificar al equipo de investigación.
NOTA: Como personal de investigación, ni el tomador de la biopsia ni el asistente pueden proporcionar asesoramiento o tratamiento médico; Sin embargo, es importante que el equipo de investigación conozca y registre todos los casos de complicaciones resultantes del procedimiento de biopsia. - Recomiende que los participantes eviten nadar o realizar actividades demasiado extenuantes durante 48 h hasta que el sitio de la incisión se haya cerrado.
- Retire cualquier objeto punzante usado y materiales contaminados en objetos punzantes designados y / o contenedores de desechos clínicos.
- Limpie todas las superficies utilizadas en el procedimiento de biopsia con aerosol de etanol al 70% y limpie las toallas de papel. Coloque los artículos desechables y no desechables de ropa de cama en bolsas clínicas apropiadas para su eliminación o limpieza, respectivamente.
5. Procesamiento de muestras - instrucciones para el asistente
- Use pinzas estériles y solución salina al 0,9% para enjuagar la muestra de tejido adiposo para eliminar contaminantes visibles (es decir, sangre, vasculatura). Luego, pese las muestras de tejido adiposo utilizando balanzas digitales. Divida el tejido en trozos del tamaño adecuado para el análisis posterior y colóquelos en tubos de almacenamiento apropiados utilizando pinzas estériles. Sumergir los tubos que contienen las biopsias de tejido adiposo en nitrógeno líquido a -190 °C para congelar rápidamente hasta que las muestras se almacenen a -80 °C.
NOTA: El asistente debe completar el procesamiento de la muestra lo más rápido posible, generalmente dentro de los 3 minutos posteriores a la aspiración de la muestra, para minimizar la posible degradación de la muestra.
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Representative Results
El procedimiento de biopsia de tejido adiposo descrito es una técnica eficiente y de bajo riesgo para que los investigadores obtengan muestras de tejido adiposo subcutáneo de voluntarios humanos. Se realizaron 39 biopsias de tejido adiposo subcutáneo mediante el procedimiento descrito en 11 mujeres sanas de peso normal (edad, 27,4 ± 3,3 años; índice de masa corporal (IMC), 22,6 ± 1,5kg.m2). Todos los participantes asistieron al laboratorio entre las 07:00 y las 10:00 después de un período de ayuno de 8-12 h. El rendimiento de la muestra utilizando este procedimiento de biopsia de tejido adiposo fue de 192,0 ± 97,1 mg (rango = 32,8-393,6 mg) (Figura 4). No se observó ninguna relación entre el rendimiento de la biopsia y el IMC de los participantes (p = 0,643), aunque el IMC de los participantes estaba dentro del rango de peso saludable (rango = 21,1-25,4 kg/m2). Por lo general, se obtuvo un peso adecuado de la muestra después de 2-3 episodios de recolección de tejido (es decir, número de repeticiones de los pasos 3.11.1 y 3.11.2). Después de las biopsias de tejido adiposo, todos los participantes experimentaron un hematoma, pero ninguno experimentó dolor excesivo que no se alivió con analgésicos. Tampoco hubo otras reacciones adversas (Tabla 1). Esto es consistente con las tasas de complicaciones previamente reportadas para biopsias de tejido adiposo 1,5.
Figura 1: Materiales necesarios para el procedimiento. (A) El carro dispuesto con los materiales requeridos para el procedimiento. (B) Materiales dispuestos en el campo estéril. 1: campo estéril; 2: guantes estériles; 3: bisturí; 4: aguja de 14 g; 5: aguja de 21 g; 6: aguja de 26 G; 7: jeringa de 5 ml; 8: lidocaína 2%; 9: gasa estéril; 10: apósito adhesivo para heridas; 11: Solución a base de yodo. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: Esquema de los sitios de inyección en forma de abanico para la administración del anestésico local. Las líneas sólidas y punteadas representan dónde se debe administrar el anestésico utilizando la aguja de 26 G y 21 G, respectivamente. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3: Rendimiento de la muestra de tejido adiposo de mujeres sanas y de peso normal (n = 39). El gráfico de barras con barras de error representa la media ± la desviación estándar. Los círculos representan puntos de datos individuales. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4: Un ejemplo de un hematoma resultante de un intento de entrenamiento temprano. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
| Complicación | Respuesta | |
| Dolor | El participante puede tomar analgésicos si es necesario, siguiendo las instrucciones del paquete (por ejemplo, paracetamol). Los participantes deben abstenerse de tomar analgésicos que tengan actividades anticoagulantes. | |
| Hemorragia | Se debe advertir al participante que se espera algo de sangrado. | |
| Hematomas | Se debe advertir al participante que se esperan hematomas. | |
| Cicatriz | Se debe advertir al participante que se espera el desarrollo de algo de tejido cicatricial en el sitio de la biopsia. | |
| Infección | El participante debe ser informado de todos los síntomas de una infección en el sitio de la biopsia antes de la biopsia. Los participantes deben ser instruidos para buscar consejo médico de un médico o unidad local de Accidentes y Emergencias en caso de que ocurran estos síntomas y notificar al equipo de investigación retrospectivamente. | |
Tabla 1: Lista de complicaciones que pueden experimentar los participantes.
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Discussion
El protocolo descrito y el video asociado proporcionan una visión general paso a paso de una técnica de mini-liposucción para obtener muestras de tejido adiposo subcutáneo del área abdominal. Este grupo de investigación ha realizado un total de 124 biopsias en el transcurso de 19 meses sin efectos adversos en los participantes. El procedimiento es seguro y se asocia con un riesgo mínimo para los participantes o el equipo de biopsia, siempre que se sigan las medidas de seguridad descritas. La técnica aséptica (incluyendo abrir y dispensar equipos estériles sin contaminarlos, ponerse / quitar adecuadamente los guantes estériles, higiene general de las manos) debe ser mantenida en todo momento por los investigadores que realizan el procedimiento (para minimizar el riesgo de infección para el participante)6. Además, la eliminación de objetos punzantes usados de manera adecuada garantiza la seguridad del investigador y de otras personas que manejan estos desechos al reducir el riesgo de lesiones por pinchazos de aguja7.
Aunque el procedimiento puede clasificarse como de "bajo riesgo", hay varios pasos críticos además de la técnica aséptica y la eliminación adecuada de residuos que deben seguirse para minimizar los efectos adversos. Principalmente, los participantes deben confirmar que no tienen alergias a los anestésicos locales de la familia de las aminoamidas (p. ej., lidocaína) o a la familia de fármacos del anestésico local utilizado, ciertos metales que pueden estar contenidos en agujas (cromo, níquel y cobalto) y mariscos/yodo si usan una solución desinfectante para la piel a base de yodo (paso 2.4). Como los participantes pueden no estar familiarizados con el nombre del anestésico, y como la lidocaína se usa comúnmente en procedimientos dentales, podría ser útil preguntar si han tenido una reacción a la administración de anestesia en ese contexto. Del mismo modo, se les puede preguntar a los participantes si tuvieron reacciones alérgicas a alguna joyería / piercings en lugar de específicamente cromo y níquel. Las personas que actualmente toman anticoagulantes no deben someterse al procedimiento, ya que tienen un mayor riesgo de sangrado excesivo. Los participantes que toman aspirina de forma rutinaria en dosis bajas no impedirían la participación en el protocolo de biopsia; sin embargo, los participantes deben informar al tomador de la biopsia ya que esto puede afectar la tasa de hemostasia8. Si bien la suplementación con ácidos grasos omega-3 no impediría la realización de la biopsia, los participantes deben confirmar si tales suplementos (o pescado rico en grasas) son parte de su dieta de rutina, ya que esto puede afectar la viscosidad de la sangre9. Antes de comenzar el procedimiento, también se debe preguntar a los participantes si tienen alguna afección que de otro modo podría afectar la biopsia. Por ejemplo, la cirugía estética (es decir, la liposucción) afectaría la cantidad / calidad de la muestra de tejido, y se deben evitar las cicatrices / sitios de tatuajes anteriores. Por último, el equipo de biopsia puede considerar afeitarse a los participantes con cantidades sustanciales de vello corporal para hacer que el área de la biopsia sea más visible.
Al seleccionar el área de la biopsia (paso 3.1), el investigador debe asegurarse de que el sitio esté lo suficientemente lejos del ombligo (aproximadamente 5-10 cm) ya que el área proximal es muy vascular. Elegir un sitio de biopsia demasiado cerca del ombligo puede provocar hematomas innecesariamente extensos (p. ej., Figura 4). Si bien los hematomas excesivos pueden limitarse mediante una elección adecuada del área de biopsia y la aplicación de una bolsa de hielo después del procedimiento, se debe informar a los participantes de que es probable que ocurra algún grado de hematomas. Dentro de este grupo de investigación, observamos anecdóticamente que tales contusiones se disipan en 3-5 días. Además, algunos participantes pueden desarrollar algo de tejido cicatricial en el sitio de la biopsia, presentándose como un bulto de tejido duro al tacto. Cualquier persona que se someta al procedimiento de biopsia debe ser consciente de que el tejido cicatricial es transitorio y se resolverá en 2-3 semanas. Para maximizar la tolerabilidad del paciente, el investigador debe identificar el área afectada por el anestésico local (paso 3.9): utilizando un bisturí y pinchando suavemente el área de la biopsia, el investigador puede confirmar verbalmente con el participante que el área ha sido anestesiada con éxito. Los límites del área anestesiada deben confirmarse yendo más allá del área. Informe al participante que esto se hará y que puede sentir alguna molestia muy leve. Este es un paso particularmente importante, ya que colocar la aguja de biopsia en áreas no anestesiadas causará molestias a los participantes.
La técnica de biopsia por mini-liposucción descrita aquí es una alternativa de bajo costo a los procedimientos quirúrgicos y no requiere herramientas especializadas. Debido a su sencillez, estas biopsias se pueden realizar de forma rutinaria con poco o ningún problema. El problema más común encontrado al realizar el muestreo de tejido adiposo es que el eje de la aguja 14 G puede obstruirse, evitando la aspiración de tejido adiposo en la jeringa. Un individuo experimentado entrenado en la técnica de biopsia descrita notará la obstrucción a través de cambios en la capacidad de respuesta del émbolo de la jeringa (es decir, se "pega" en su lugar). Si se produce una obstrucción de la aguja, se aconseja al investigador in primis que intente eliminar la obstrucción presionando con fuerza el émbolo mientras el bisel de la aguja está sobre el bote de pesaje. Si la obstrucción está firmemente alojada, la segunda opción es reemplazar la aguja y la jeringa. Después del procedimiento, el tejido alojado en una aguja se puede recuperar empujando solución salina estéril a través de la aguja. Para evitar la degradación de la muestra, el tejido obtenido debe limpiarse, procesarse y almacenarse lo antes posible después del procedimiento10. Para minimizar la degradación del ARN, se puede utilizar una solución de estabilización en el paso17 de procesamiento de muestras (consulte la Tabla de materiales).
La principal limitación de esta técnica es que, si bien es relativamente rápida (~ 15 minutos para un individuo capacitado y experimentado) y rentable, da como resultado solo una muestra de tamaño moderado (~ 200 mg). Si bien este tamaño de muestra suele ser adecuado para varios ensayos metabólicos, se recomienda que el investigador se asegure de que el rendimiento esperado de la muestra sea suficiente para el análisis de la muestra previsto. El rendimiento muestral obtenido utilizando la técnica descrita es típicamente menor que el de las técnicas quirúrgicas11; Sin embargo, los sitios de incisión más grandes utilizados en las biopsias quirúrgicas causan más molestias a los participantes y pueden evitar que participen en ciertas actividades cotidianas hasta que se curen completamente11. También es más probable que estas técnicas desanimen a los participantes de inscribirse en estudios de investigación y requieren un médico capacitado. Una ventaja clave de la biopsia de mini-liposucción descrita en este video es que puede ser realizada rápidamente en un entorno no clínico por investigadores no médicos. Además, poder completar múltiples biopsias en un participante dentro del mismo día permite a los investigadores realizar estudios de intervención nutricional / ejercicio agudos antes-después. Cabe señalar que en el Reino Unido, la administración de lidocaína requiere receta médica; Un miembro de nuestro equipo está calificado en prescripción no médica. Las regulaciones locales deben verificarse antes de la administración de anestesia local.
Muchos grupos de investigación han aplicado la técnica de mini-liposucción para una variedad de preguntas de investigación. Estos incluyen, pero no se limitan a, proporcionar perfiles de hormonas del tejido adiposo en participantes con diabetes2, cuantificar la variación de la expresión de miARN del tejido adiposo en pacientes con disfunción metabólica 12 y evaluar las intervenciones nutricionales y de ejercicio en poblaciones con sobrepeso13,14. Además, el procesamiento inmediato de muestras de tejido adiposo permite; aislamiento de preadipocitos para cultivo celular15; y análisis de parámetros metabólicos ex vivo, como la tasa lipolítica16, la secreción hormonal13 y la respiración mitocondrial14. Cabe señalar que las muestras de tejido adiposo obtenidas por la técnica descrita tienen altos niveles de fragmentación en comparación con las muestras obtenidas mediante técnicas quirúrgicas con aguja cortante o bisturí5. Esto impide el uso exitoso de técnicas analíticas para la evaluación de parámetros arquitectónicos y morfológicos5. Si los investigadores pretenden obtener muestras de tejido adiposo para el análisis de parámetros arquitectónicos y morfológicos, métodos alternativos se asocian con una fragmentación tisular reducida18. No obstante, la obtención de muestras de tejido adiposo a través de la técnica descrita permite la investigación de una amplia gama de procesos fisiológicos clave.
En resumen, el presente video y artículo describen una técnica de biopsia de mini-liposucción no clínica para obtener tejido adiposo abdominal subcutáneo. Con los controles apropiados en su lugar, el método es relativamente indoloro, seguro y rentable / rentable. Este método de biopsia es particularmente adecuado para estudios que implementan un diseño de estudio de antes y después y no requieren grandes cantidades de muestra de tejido.
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Disclosures
Los autores no tienen conflictos de intereses que declarar.
Acknowledgments
Los autores no tienen fondos para declarar.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Item: 14 G needle 14 G x 3 1/8" 210 mm x 80 mm |
B Braun | 4665473 | Per biopsy: 1 |
| Item: 21 G needle 21 G x 1 1/2" 0.8 mm x 38 mm |
Terumo | AN*2138R1 | Per biopsy: 2 |
| Item: 26 G needle 26 G x 1/2" microlance needle 0.45 mm x 13 mm |
BD | 303800 | Per biopsy: 2 |
| Item: 5 mL syringe 5 mL luer |
DB plastipak | 302187 | Per biopsy: 2 |
| Item: Adhesive wound dressing Opsite Post-Op Dressing 9.5 x 8.5 |
Smith & Nephew | 6600709 | Per biopsy: 1 |
| Item: Disposable sterile scalpel Disposable Scalpel Sterile Blade no. 10 |
Swann Morton | /0501 | Per biopsy: 1 |
| Item: Icepack BlueDot Reusable Hot/Cold Pack 26.5 cm x 13.0 cm |
NuCare | F711 | Per biopsy: 1 |
| Item: Iodine based antiseptic Videne antiseptic solution |
Ecolab Videne | 3030440 | Per biopsy: q.s |
| Item: Lidocaine 2% w/o epinephrine Lidocaine 2% injection 5 mL |
B Braun | 3558553 | Per biopsy: 5 mL |
| Item: Non-sterile gloves Starguard sensitive powder free nitrile gloves |
Starguard | SG-N-S | Per biopsy: pair |
| Item: Sodium chloride 0.9% Sodium chlride 0.9% w/v intravenous infusion BP |
BBraun | S8004-5384 | Per biopsy: q.s. |
| Item: Stabilization solution* RNAlater Stabilization Solution |
ThermoFisher Scientific | AM7020 | Per biopsy: q.s |
| Item: Sterile forceps Sterile forceps |
Rocialle | RML109-006 | Per biopsy: 1 |
| Item: Sterile gauze swabs Non woven swabs sterile 7.5 x 7.5 cm |
Prestige | 1860 | Per biopsy: 5 |
| Item: Sterile gloves Prestige soft vinyl sterile powder free medical gloves |
Prestige | S: P4301 M:P3302 L:P3301 |
Per biopsy: pair |
| Item: Sterile Microcentrifuge tubes 1.5 mL Sterile Microcentrifuge Tubes |
StarLab | I1415-5510 | Per biopsy: q.s |
| Item: Sterile sheet Paper plain white 90 x 90 cm |
Rocialle | RML 126-216 | Per biopsy: 1 |
| Item: Weighing boat Diamond shape weigh boats |
Heathrow Scientific | HS1427C | Per biopsy: 1 |
| * denotes optional materials |
References
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