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Medicine

चूहे के घुटने के चक्रीय लोडिंग-प्रेरित इंट्रा-आर्टिकुलर कार्टिलेज लेशन मॉडल उत्पन्न करने के लिए एक गैर-इनवेसिव विधि

Published: July 5, 2021 doi: 10.3791/62660

Summary

यहां, हम चूहे के घुटने के चक्रीय लोडिंग-प्रेरित इंट्रा-आर्टिकुलर कार्टिलेज घाव मॉडल को प्रस्तुत करते हैं, जो 20 एन से अधिक 60 चक्रीय संपीड़न द्वारा उत्पन्न होता है, जिसके परिणामस्वरूप चूहों में ऊरु कोंडिलर उपास्थि को नुकसान होता है।

Abstract

प्राथमिक ऑस्टियोआर्थराइटिस (ओए) के पैथोफिज़ियोलॉजी स्पष्ट नहीं है। हालांकि, अपेक्षाकृत कम आयु समूहों में ओए का एक विशिष्ट उपवर्गीकरण संभवतः आर्टिकुलर कार्टिलेज क्षति और लिगामेंट ऐंठन के इतिहास के साथ सहसंबद्ध है। घुटने के ओए के सर्जिकल पशु मॉडल पोस्ट-ट्रॉमेटिक ओए की शुरुआत और प्रगति को समझने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं और इस बीमारी के लिए नए उपचारों के विकास में सहायता करते हैं। हालांकि, गैर-सर्जिकल मॉडल को हाल ही में दर्दनाक सूजन से बचने के लिए माना गया है जो हस्तक्षेप के मूल्यांकन को प्रभावित कर सकता है।

इस अध्ययन में, विवो चक्रीय संपीड़ित लोडिंग द्वारा प्रेरित एक इंट्रा-आर्टिकुलर कार्टिलेज घाव चूहा मॉडल विकसित किया गया था, जिसने शोधकर्ताओं को (1) भार की इष्टतम परिमाण, गति और अवधि निर्धारित करने की अनुमति दी जो फोकल उपास्थि क्षति का कारण बन सकती है; (2) चोंड्रोसाइट्स जीवन शक्ति में पोस्ट-ट्रॉमेटिक स्पैटियोटेम्पोरल पैथोलॉजिकल परिवर्तनों का आकलन करें; और (3) विनाशकारी या सुरक्षात्मक अणुओं की हिस्टोलॉजिकल अभिव्यक्ति का मूल्यांकन करें जो संयुक्त संपीड़ित भार के खिलाफ अनुकूलन और मरम्मत तंत्र में शामिल हैं। यह रिपोर्ट एक चूहे के मॉडल में इस उपन्यास उपास्थि घाव के लिए प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल का वर्णन करती है।

Introduction

परंपरागत रूप से, छोटे जानवरों में पोस्ट-ट्रॉमेटिक ऑस्टियोआर्थराइटिस (पीटीओए) की जांच के लिए एंटीरियर क्रूसिएट लिगामेंट (एसीएल) ट्रांससेक्शन या मेडियल मेनिस्कस की अस्थिरता को इष्टतम माना जाता है। हाल के वर्षों में, पीटीओए का अध्ययन करने के लिए गैर-इनवेसिव चक्रीय संपीड़न मॉडल का उपयोग किया गया है। यह मॉडल मूल रूप से यांत्रिक लोडिंग1 के लिए कैंसेलस हड्डी प्रतिक्रिया की जांच करने के लिए डिज़ाइन किया गया था और फिर पीटीओए अध्ययन 2,3,4,5,6 के लिए एक गैर-सर्जिकल पशु मॉडल के रूप में संशोधित किया गया था। तर्क एक आवधिक बाहरी बल लागू करके आर्टिकुलर कार्टिलेज को टक्कर देना है, जो भड़काऊ प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला को ट्रिगर करता है। हालांकि, यह मॉडल केवल चूहों पर लागू किया गया है, और बड़े जानवरों पर लोड करने के उचित परिमाण पर चर्चा नहीं की गई है।

पिछले मॉडल के साथ एक और समस्या यह है कि उच्च-मात्रा प्रोटोकॉल में बहुत सारे चक्र शामिल थे, जिसके कारण कई नमूनों में सबकॉन्ड्रल हड्डी का अत्यधिक मोटा होना, एक अवांछित दुष्प्रभावथा। इसलिए, बड़े जानवरों के लिए उपयुक्त परिमाण और कम लोडिंग साइड इफेक्ट के साथ चक्रीय संपीड़न की एक नई विधि विकसितकी गई थी। वर्तमान लेख का समग्र लक्ष्य चूहों में गैर-इनवेसिव चक्रीय संपीड़न मॉडल के प्रोटोकॉल का वर्णन करना और उपास्थि अध: पतन के प्रतिनिधि परिणामों का निरीक्षण करना है। वर्तमान प्रोटोकॉल चूहों पर गैर-इनवेसिव चक्रीय संपीड़न मॉडल के आवेदन में रुचि रखने वाले पाठकों की मदद करेगा।

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Protocol

प्रोटोकॉल को क्योटो विश्वविद्यालय की पशु अनुसंधान समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था (अनुमोदन संख्या: मेड क्यो 17616)।

1. चूहे के घुटने पर विवो चक्रीय संपीड़न में प्रदर्शन करें

  1. प्रयोगात्मक पशु संज्ञाहरण को प्रेरित करें
    1. एनेस्थीसिया बॉक्स में 5% आइसोफ्लुरेन समाधान के साँस द्वारा 12 सप्ताह के विस्टार चूहे (256.8 ± 8.7 ग्राम) में संज्ञाहरण को प्रेरित करें।
    2. इंट्रापरिटोनियल रूप से चूहे के शरीर के वजन के 2 मिलीग्राम / किग्रा पर मेडेटोमिडीन, मिडाज़ोलम और ब्यूटोरफेनोल सहित तीन एनेस्थेटिक एजेंटों9 के मिश्रण को इंजेक्ट करें, और दाहिने घुटने के जोड़ के आसपास के क्षेत्र को शेव करें। पैर की अंगुली-चुटकी के लिए पेडल रिफ्लेक्स की कमी से पर्याप्त एनेस्थेटाइजेशन की पुष्टि करें।
  2. निर्धारण उपकरण पर एनेस्थेटाइज्ड चूहे को माउंट करें।
    1. एनेस्थेटाइज्ड चूहे को बेसप्लेट (चित्रा 1) पर अपने पेट पर रखें, जिसमें दाहिने घुटने को अवतल नाली के साथ राल के एक छोटे टुकड़े से जोड़ा जाए। दाहिने पिछले अंग को कूल्हे के विस्तार, घुटने के लचीलेपन और टखने के विस्तार की स्थिति में रखें, जिसमें घुटने लगभग 140 डिग्री पर फ्लेक्स हो। चल फिक्स्चर पर वेज के आकार की नाली पर चूहे की एड़ी को समायोजित करें।
    2. निर्धारण उपकरण को तनाव / तन्यता परीक्षण उपकरण में ले जाएं ( सामग्री की तालिका देखें)। यह सुनिश्चित करने के बाद कि लोड सेल के साथ कोई संपर्क नहीं है, तनाव / तन्यता परीक्षण उपकरण नियंत्रण सॉफ्टवेयर (सामग्री की तालिका) खोलें और अंशांकन बटन पर क्लिक करें। अंशांकन के बाद, फ्रेम के शीर्ष को लोड सेल में सावधानीसे संलग्न करें। घुटने के जोड़ को फ्रेम से निकटता से जोड़े रखने के लिए, जंगम मुख्य परिचालन पैनल पर रोटरी नॉब को धीरे-धीरे चालू करें जब तक कि प्री-लोड 5 एन तक न पहुंच जाए।
  3. एक लोडिंग विधि बनाएं और संपीड़ित परीक्षण सेट करें।
    1. मुख्य मेनू पर, एक नई विधि बनाएँ पर क्लिक करें | सिस्टम लेबल. परीक्षण मोड को चक्र के लिए सेट करें, और संपीड़न के लिए परीक्षण प्रकार सेट करें। सेंसर लेबल पर क्लिक करें और यह जांचने के लिए टेस्ट टैब का चयन करें कि सीमा 60 एन के भीतर है। इसके अलावा, स्ट्रोक टैब का चयन करें और जांचें कि सीमा 500 मिमी के भीतर है।
      नोट: उपरोक्त कदम तनाव बिंदु पर एक बड़ा विस्थापन होने पर ऑपरेशन को तुरंत रोक देगा।
    2. परीक्षण नियंत्रण लेबल के तहत, 0.3% / पूर्ण पैमाने के साथ मुख्य कार्यक्रम शुरू करने के लिए विकास की उत्पत्ति का चयन करें। एक लोडिंग चक्र में चार खंडों में से, 1 और 3खंडों में नियंत्रण में स्ट्रोक की गति को 1 मिमी / सेकंड पर सेट करें। दूसरे खंड में अधिकतम परीक्षण बल को 20 N पर सेट करें, और 4वें खंड में न्यूनतम परीक्षण बल को 5 N पर सेट करें। पीक लोड के लिए "पकड़ की अवधि" को 0.5 सेकंड और न्यूनतम लोड के लिए 10 s सेट करें (चित्र 2)।
      नोट: जैसा कि यह चरण प्रत्येक चक्र को परिभाषित करता है, सुनिश्चित करें कि संयुक्त सतह एक दूसरे के संपर्क में हैं और उचित गति से आगे बढ़ रहे हैं और गति बनाए रखी गई है।
    3. पृष्ठ के निचले भाग में प्री-लोड टैब में, सुनिश्चित करें कि ऑन की जाँच की गई है, विक्षेप हटाने की गति 100 मिमी / मिनट पर सेट है, और अधिकतम बल 5 एन है। नमूना लेबल में, सामग्री को धातु के रूप में सेट करें
      नोट: ये विस्तृत सेटिंग्स प्रत्येक निर्माता के लिए विशिष्ट हो सकती हैं।
    4. मुख्य मेनू में, चयन विधि और परीक्षण अनुभाग के तहत, उस विधि का चयन करें जो अभी बनाई गई थी, और परीक्षण शुरू करने के लिए स्टार्ट पर क्लिक करें।
      नोट: नीचे दी गई तालिका पीक लोड और विस्थापन के वास्तविक माप को दर्शाती है।
    5. चक्रों की संख्या 60 पर सेट करें।
      नोट: पूरे लोडिंग सत्र में 60 चक्र शामिल हैं, जो लगभग 12 मिनट तक रहता है। नियंत्रण समूह में, चूहों को समान परिस्थितियों में 12 मिनट के प्री-लोड के लिए 5 एन प्री-लोडिंग से गुजरना पड़ा।
  4. लोड होने के बाद, चूहे को उसके पिंजरे में वापस करें और पूरी तरह से ठीक होने तक निगरानी करें। पिंजरे में पर्याप्त स्थान और भोजन विज्ञापन लिबिटम के साथ 12-12 घंटे का हल्का-अंधेरा शेड्यूल बनाए रखें। आवश्यक प्रयोगात्मक अवधि के बाद, विश्लेषण (1 घंटे -8 सप्ताह) के लिए इंट्रापरिटोनियल या कार्बन डाइऑक्साइड इनहेलेशन इंजेक्ट किए गए तीन एनेस्थेटिक एजेंटों के मिश्रण के ओवरडोज के साथ चूहों का बलिदान करें।

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Representative Results

20 एन चक्रीय लोडिंग के अधीन नमूनों में चोंड्रोसाइट्स व्यवहार्यता में अल्पकालिक परिवर्तन (1 घंटे और 12 घंटे) का एक प्रतिनिधि परिणाम प्राप्त किया गया था। जैसा कि चित्रा 3 में दिखाया गया है, मृत चोंड्रोसाइट्स (लाल प्रतिदीप्ति) की संख्या 12 घंटे के पोस्ट-आघात में बढ़ गई। इसके विपरीत, जीवित चोंड्रोसाइट्स (हरे रंग की प्रतिदीप्ति) की संख्या में कमी जारी रही, कुछ नमूनों में प्रभावित क्षेत्र में कोई जीवित चोंड्रोसाइट्स नहीं थे।

हिस्टोलॉजी से पता चला है कि 20 एन गतिशील लोडिंग से गुजरने वाले चूहे के घुटनों के आर्टिकुलर कार्टिलेज क्षतिग्रस्त हो गए थे, और सभी नमूनों में पार्श्व ऊरु कोंडिल में एक फोकल घाव क्षेत्र की पुष्टि की गई थी (चित्रा 4)। हालांकि, 8 सप्ताह की अवलोकन अवधि के दौरान घाव का आकार उत्तरोत्तर नहीं बढ़ा। प्रभावित क्षेत्र में घाव और अप्रभावित उपास्थि के इंटरफ़ेस के अनुरूप सीमा देखी जा सकती है।

Figure 1
चित्रा 1: निर्धारण उपकरण में एक बेसप्लेट और एक निर्धारण उपकरण होता है। बेस प्लेट (लंबाई: 27.5 सेमी, चौड़ाई: 13 सेमी) में चूहे के लचीले घुटने के जोड़ को समायोजित करने के लिए पीछे की तरफ एक राल अवतल नाली (लंबाई: 0.8 सेमी, चौड़ाई: 0.4 सेमी) है। निर्धारण तंत्र में एक वेज-आकार की नाली (नाली की चौड़ाई: 1.5 सेमी, नाली की गहराई: 1 सेमी) होती है जो चूहे की एड़ी को समायोजित करती है, जो दो धातु सलाखों के बीच बेसप्लेट में नेस्टेड होती है। निर्धारण तंत्र का शीर्ष तनाव / तन्यता परीक्षण उपकरण के लोड सेल के साथ सीधे संपर्क में होगा। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 2
चित्रा 2: लोडिंग के एक चक्र के लिए लोड प्रोफ़ाइल। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 3
चित्रा 3: घाव क्षेत्र में चोंड्रोसाइट्स व्यवहार्यता का स्थानिक मूल्यांकन। बलिदान के बाद, घुटने के जोड़ को विच्छेदित किया गया और छोटे बल और कैंची का उपयोग करके अलग किया गया। कैल्सीन एएम और ईटीएचडी -1 दाग के समाधान क्रमशः पीबीएस के 5 एमएल में 1: 500 और 1: 4,000 पर मूल किट (सामग्री की तालिका) को पतला करके तैयार किए गए थे। नमूने कमरे के तापमान पर 20 मिनट के लिए इनक्यूबेट किए गए थे। नियंत्रण नमूने समान परिस्थितियों में पीबीएस में डुबोए गए थे। फ्लोरेसेंसीन आइसोथियोसाइनेट (495 एनएम / 519 एनएम) और प्रोपिडियम आयोडाइड (535 एनएम / 617 एनएम) चैनलों का उपयोग करके फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप (सामग्री की तालिका) का उपयोग करके फ्लोरेसेंस छवियां प्राप्त की गईं। महत्वपूर्ण चोंड्रोसाइट्स ने हरे रंग की प्रतिदीप्ति प्रदर्शित की, जबकि मृत कोशिकाओं ने लाल रंग का प्रदर्शन किया। नियंत्रण नमूनों () में चोंड्रोसाइट्स की तुलना में, लोड किए गए चूहे के घुटने पर मृत चोंड्रोसाइट्स की संख्या 1 घंटे (बी) में बढ़ गई थी और 12 घंटे (सी) पर प्रभावित क्षेत्र के अधिकांश क्षेत्र पर कब्जा कर लिया गया था। हरे और लाल प्रतिदीप्ति क्रमशः जीवित और मृत चोंड्रोसाइट्स के क्षेत्रों का प्रतिनिधित्व करते हैं। स्केल सलाखों = 100 μm. संक्षेप: कैल्सीन एएम = कैल्सीन एसिटोक्सीमिथाइल एस्टर; ईटीएचडी -1 = एथिडियम होमोडिमर -1; पीबीएस = फॉस्फेट-बफर्ड खारा। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 4
चित्रा 4: भरे हुए घुटने में ऊरु कोंडिल का प्रतिनिधि सैफ्रानिन ओ धुंधला होना। पार्श्व ऊरु कोंडिल के वर्गों को दिखाने वाली एक स्लाइड, जो एक सैफ्रानिन ओ / फास्ट ग्रीन और हेमेटॉक्सिलिन समाधान से सना हुआ था। नियंत्रण की तुलना में, प्रभावित क्षेत्र में सैफ्रानिन ओ धुंधला तीव्रता लोडिंग के बाद कम हो गई थी, और ऊपरी / कैल्सीफाइड उपास्थि की एक स्पष्ट सीमा (तीर) देखी गई थी। स्केल सलाखों = 100 μm. संक्षिप्त नाम: w = सप्ताह। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

पहली बार, वर्तमान प्रोटोकॉल दिखाता है कि चूहों में पार्श्व ऊरु कोंडिल पर लोडिंग-प्रेरित उपास्थि घाव का एक मॉडल कैसे स्थापित किया जाए, जो माउस2 जैसे छोटे कृन्तकों में इंट्रा-आर्टिकुलर क्षति मॉडल के समान है। हालांकि, चूहों में लोडिंग प्रोटोकॉल ने गंभीर ओस्टियोफाइट गठन और क्रूसिएट लिगामेंट घावों का कारण बना, जो चक्रीय संपीड़न के प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए आदर्श नहीं था। वर्तमान प्रोटोकॉल ने चूहों में बहुत कम लोडिंग बल के साथ एक फोकल उपास्थि घाव बनाया। प्रोटोकॉल के लिए सही लोडिंग विधि सेटिंग्स महत्वपूर्ण हैं क्योंकि केवल उचित परिमाण, गति और तनाव की अवधि हड्डी के ऊतकों को नुकसान पहुंचाए बिना उपास्थि को नष्ट कर सकती है।

विस्थापन सीमा (प्रोटोकॉल चरण 1.3.1) निर्धारित करना भी महत्वपूर्ण है क्योंकि यह लिगामेंट टूटने के मामले में उपकरण को तुरंत रोकता है या यदि लोडिंग सत्र के दौरान चूहा संज्ञाहरण से जागता है। इष्टतम अधिकतम भार और चूहे की उम्र निर्धारित की जानी बाकी है। हालांकि, प्रारंभिक प्रयोगों में, 50 एन से अधिक के भार के परिणामस्वरूप चूहे के घुटनों में एसीएल टूटने की उच्च संभावना थी। इसके अलावा, वर्तमान मॉडल पुराने (>36 सप्ताह पुराने) चूहों में प्रजनन करना मुश्किल है, संभवतः वृद्धि के रूप में उपास्थि की कठोरता के कारण।

यद्यपि युवा चूहों के लिए विनाशकारी भार सीमा निर्धारित नहीं की गई थी, यह माना जाता है कि भविष्य के अध्ययनों को उपास्थि पर किसी भी उपचय प्रभाव का निरीक्षण करने के लिए अधिकतम भार को 20 एन से नीचे रखना चाहिए। घाव क्षेत्र का दायरा और स्थानीयकरण स्थापित करने के लिए अपेक्षाकृत सरल था, यहां तक कि क्षेत्र में नए लोगों के लिए भी, जैसा कि प्रत्येक नमूने में चोंड्रोसाइट्स-अपक्षयी मात्रा द्वारा अनुमान लगाया गया था, जो संभावित रूप से अपेक्षाकृत संकीर्ण उपास्थि क्षेत्र में हस्तक्षेप के बाद के मूल्यांकन पर केंद्रित था।

हिस्टोलॉजिकल धुंधलापन से पता चला कि 8 सप्ताह की अवलोकन अवधि के दौरान घाव क्षेत्र का दायरा अपेक्षाकृत स्थिर था। हालांकि, मैनकिन के स्कोर लगातार बिगड़ गए जबकि प्रभावित क्षेत्र में मैट्रिक्स स्टेनिंग और सेल वितरण स्कोर में वृद्धि हुई। इसके अलावा, मध्य परत और कैल्सीफाइड उपास्थि के बीच एक स्पष्ट रंग विचलन था, जो दर्शाता है कि केवल टाइडमार्क के ऊपर उपास्थि इंटरआर्टिकुलर संपीड़न से प्रभावित थी।

इसके विपरीत, दुर्लभ नमूनों में हल्के फाइब्रिलेशन के अलावा, उपास्थि की अखंडता पूरे अवलोकन अवधि में काफी हद तक बरकरार रही, जो प्रगतिशील ओए चोट मॉडल10 से अलग है। इसलिए, उपास्थि इंटरफ़ेस टकराव-प्रेरित फोकल घावों के आकलन के लिए एक गैर-शल्य चिकित्सा मॉडल बेहतर हो सकता है, जो खेल की चोटों में अधिक आम हैं। भविष्य में, वर्तमान मॉडल का उपयोग दर्दनाक उपास्थि क्षति पर हाइपरथर्मिया थेरेपी और एरोबिक संयुक्त व्यायाम जैसे दवा या भौतिक चिकित्सा के प्रभावों का आकलन करने के लिए किया जाएगा। इसके अलावा, चक्रीय यांत्रिक उत्तेजना के जवाब में चोंड्रोसाइट्स एनाबोलिज्म और कैटाबोलिज्म को भी इस मॉडल का उपयोग करके जानवरों में विवो में मान्य किया जा सकता है।

वर्तमान प्रोटोकॉल की कई सीमाएं थीं। सबसे पहले, पार्श्व ऊरु कोंडिल पर केवल उपास्थि घावों की जांच की गई थी। पार्श्व टिबिया पर घाव का मूल्यांकन भविष्य के अध्ययनों में भी किया जाना चाहिए। दूसरा, वर्तमान प्रोटोकॉल में अध्ययन किए गए आर्टिकुलर कार्टिलेज का घाव वाला हिस्सा चलने के दौरान मुख्य लोडिंग-असर क्षेत्र नहीं था। उपास्थि की विषमता के कारण, इंट्रा-आर्टिकुलर कार्टिलेज की कठोरता वर्तमान अध्ययन में जांच किए गए हिस्से से भिन्न हो सकती है। इस प्रकार, इन निष्कर्षों को केवल एक संदर्भ के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। अंत में, मॉडल ने उपास्थि अध: पतन की कोई महत्वपूर्ण प्रगति नहीं दिखाई, जो ओए विकास की एक महत्वपूर्ण विशेषता है। आगे के अध्ययन स्पैटियोटेम्पोरल परिवर्तनों का निरीक्षण करने के लिए पूर्व-लोडेड घावों के साथ इनवेसिव सर्जरी को जोड़ सकते हैं।

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Disclosures

लेखक ों ने हितों के टकराव की घोषणा नहीं की है।

Acknowledgments

इस अध्ययन को जेएसपीएस काकेन्ही अनुदान (संख्या जेपी 18 एच 03129 और जेपी 18 के 19739) द्वारा समर्थित किया गया था।
इस शोध को एलायंस फॉर रीजनरेटिव रिहैबिलिटेशन रिसर्च एंड ट्रेनिंग (एआर 3 टी) से भी धन प्राप्त हुआ, जिसे यूनिस कैनेडी श्राइवर नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ चाइल्ड हेल्थ एंड ह्यूमन डेवलपमेंट (एनआईसीएचडी), नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ न्यूरोलॉजिकल डिसऑर्डर एंड स्ट्रोक (एनआईएनडीएस), और नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ बायोमेडिकल इमेजिंग एंड बायोइंजीनियरिंग (एनआईबीआईबी) द्वारा पुरस्कार संख्या पी 2 सीएचडी086843 के तहत राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान द्वारा समर्थित किया गया है। सामग्री पूरी तरह से लेखकों की जिम्मेदारी है और जरूरी नहीं कि राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थानों के आधिकारिक विचारों का प्रतिनिधित्व करती है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Anesthetic Apparatus for Small Animals SHINANO MFG CO.,LTD. SN-487-0T
Autograph AG-X Shimadzu Corp N.A. Precision Universal / Tensile Tester
Fluoview FV10i microscope Olympus Corp N.A. A fully automated confocal laser-scanning microscope
ISOFLURANE Inhalation Solution Pfizer Japan Inc. (01)14987114133400
LIVE/DEA Viability/Cytotoxicity Kit Thermo Fisher Scientific Japan Inc L3224 A quick and easy two-color assay to determine viability of cells
TRAPEZIUM X Software Shimadzu Corp N.A. Data processing software for Autograph AG-X

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References

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Ji, X., Nakahata, A., Zhao, Z.,More

Ji, X., Nakahata, A., Zhao, Z., Kuroki, H., Aoyama, T., Ito, A. A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee. J. Vis. Exp. (173), e62660, doi:10.3791/62660 (2021).

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