Summary
Denne protokollen demonstrerer hvordan man bruker planteverten til å oppdage spyttproteiner av bladhopper og plantevirale proteiner frigjort av bladhoppervektorer.
Abstract
Insektvektorer overfører horisontalt mange plantevirus av landbruksmessig betydning. Mer enn halvparten av plantevirus overføres av hemipteran insekter som har piercing-sugende munndeler. Under viral overføring bygger insektspyttet bro over virusvektorverten fordi spyttvektorvirusene og insektproteinene utløser eller undertrykker immunresponsen til planter fra insekter til planteverter. Identifisering og funksjonelle analyser av spyttproteiner blir et nytt fokusområde i forskningsfeltet arbovirus-vert interaksjoner. Denne protokollen gir et system for å oppdage proteiner i spytt av bladhoppere ved hjelp av planteverten. Bladhoppervektoren Nephotettix cincticeps infisert med risdvergvirus (RDV) tjener som et eksempel. Vitellogenin og hoved ytre kapsidprotein P8 av RDV vektorert av spytt av N. cincticeps kan detekteres samtidig i risplanten som N. cincticeps spiser på . Denne metoden er anvendelig for testing av spyttproteiner som holdes forbigående i planteverten etter insektfôring. Det antas at dette deteksjonssystemet vil være til nytte for studiet av hemipteran-virus-plante- eller hemipteran-planteinteraksjoner.
Introduction
Vektor-vert overføringsmodus for arbovirus, et grunnleggende problem, er på grensen til biologisk vitenskap. Mange plantevirus av landbruksmessig betydning overføres horisontalt av insektvektorer1. Mer enn halvparten av plantevirus er vektorert av hemipteran insekter, inkludert bladlus, hvitefugler, bladhopper, plantehoppere og thrips. Disse insektene har forskjellige egenskaper som gjør at de effektivt kan overføre plantevirus1. De har piercing-sugende munndeler og spiser på saften fra floem og xylem, og skiller ut spyttet 1,2,3,4. Med utvikling og forbedring av teknikker blir identifisering og funksjonelle analyser av spyttkomponenter et nytt fokus for intensiv forskning. De kjente spyttproteinene i spytt inkluderer mange enzymer, som pektinesterase, cellulase, peroksidase, alkalisk fosfatase, polyfenoloksidase og sukrase, blant annet 5,6,7,8,9,10,11,12,13 . Proteinene i spytt inkluderer også elicitors som utløser vertsforsvarsresponsen, og dermed endrer ytelsen til insekter, og effektorer som undertrykker vertsforsvaret, noe som forbedrer insektkondisjon og komponenter som induserer vertspatologiske responser14,15,16,17. Derfor er spyttproteiner viktige materialer for kommunikasjon mellom insekter og verter. Under overføring av virus inneholder spytt utskilt av spyttkjertlene av piercing-sugende viruliferous insekter også viruliferous proteiner. Virale komponenter utnytter spyttstrømmen for å frigjøre dem fra insektet til planteverten. Derfor bygger insektspyttet bro over virus-vektor-vert tritrofisk interaksjon. Undersøkelse av den biologiske funksjonen til spyttproteiner utskilt av viruliferous insekter bidrar til å forstå forholdet mellom virus-vektor-vert.
For dyrevirus er det rapportert at spytt av mygg medierer overføring og patogenicitet av West Nile virus (WNV) og Dengue virus (DENV). Spyttproteinet AaSG34 fremmer dengue-2-virusreplikasjon og overføring, mens spyttproteinet AaVA-1 fremmer overføring av DENV og Zika-virus (ZIKV) ved å aktivere autofagi18,19. Myggens spyttprotein D7 kan hemme DENV-infeksjon in vitro og in vivo via direkte interaksjon med DENV-virionene og det rekombinante DENV-konvoluttproteinet20. I plantevirus induserer begomovirustomatgult bladkrøllvirus (TYLCV) hvitefuglspyttproteinet Bsp9, som undertrykker den WRKY33-medierte immuniteten til planteverten, for å øke preferansen og ytelsen til hvite fluer, og til slutt øke overføringen av virus21. Fordi studier av rollen som insektspyttproteiner spiller i planteverter, har ligget bak dyrevertene, er det nødvendig med et stabilt og pålitelig system for å oppdage spyttproteiner i planteverter.
Planteviruset kjent som risdvergvirus (RDV) overføres av bladhopperen Nephotettix cincticeps (Hemiptera: Cicadellidae) med høy effektivitet og på en vedvarende forplantende måte22,23. RDV ble først rapportert å bli overført av en insektvektor og forårsaker en alvorlig sykdom av ris i Asia24,25. Virionen er icosahedral og dobbeltlags sfærisk, og det ytre laget inneholder P8 ytre kapsidprotein22. Den sirkulative overføringsperioden for RDV i N. cincticeps er 14 dager 26,27,28,29,30. Når RDV kommer til spyttkjertler, frigjøres virioner i spyttlagrede hulrom i spyttkjertlene via en eksocytoselignende mekanisme23. Vitellogenin (Vg) er eggeplommeproteinforløperen som er essensiell for oocyttutvikling hos kvinnelige insekter31,32,33. De fleste insektarter har minst ett Vg-transkript på 6-7 kb, som koder for et forløperprotein på ca. 220 kDa. Proteinforløperne til Vg kan vanligvis spaltes i store (140 til 190 kDa) og små (<50 kDa) fragmenter før de går inn i eggstokken18,19. Tidligere proteomiske analyser avslørte tilstedeværelsen av peptidene avledet fra Vg i det utskilte spyttet til bladhopperen Recilia dorsalis, selv om deres funksjon er ukjent (upubliserte data). Det er nylig rapportert at Vg, som er muntlig utskilt fra plantehoppere, fungerer som en effektor for å skade plantenes forsvar34. Det er ukjent om Vg av N. cincticeps også kunne frigjøres til planteverten med spyttstrøm, og deretter kunne spille en rolle i planten for å forstyrre planteforsvaret. For å adressere om N. cincticeps utnytter spyttproteiner, som Vg, for å hemme eller aktivere planteforsvar, er det første trinnet å identifisere proteiner som frigjøres til planten under fôring. Å forstå metoden for å identifisere spyttproteinene som er tilstede i planten er potensielt viktig for å forklare spyttproteinets funksjon og samspillet mellom Hemiptera og planter.
I protokollen som presenteres her, brukes N. cincticeps som et eksempel for å gi en metode for å undersøke tilstedeværelsen av spyttproteiner i planteverten introdusert gjennom insektfôring. Protokollen beskriver primært innsamling og påvisning av spyttproteiner og er nyttig for videre undersøkelse på de fleste hemipteraner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
De ikke-viruliferøse voksne bladhopperne ble forplantet i Vector-borne Virus Research Center i Fujian Agriculture and Forestry University, Kina.
1. Ikke-viruliferous insektoppdrett
- Bak de voksne på risplanter i et kubebur som er 40 cm x 35 cm x 20 cm (lengde x bredde x høyde). Hold den ene siden av buret dekket med et insektsikkert nett for ventilasjon.
- Hold burene med bladhoppere i en inkubator som inneholder en innebygd fuktighetsregulator ved 26 °C med en relativ fuktighet på 60-75% under en fotoperiode på 16 timer lys og 8 timer mørk.
- Bruk en aspirator til å forsiktig overføre alle voksne fra buret til et nytt bur som inneholder ferske risplanter hver uke.
- La mer enn 200 voksne parre seg og legge egg i risen.
- Behold de gamle risplantene for at nymfene skal dukke opp. Bak disse nye nonviruliferous nymfer til 2-instar scenen.
2. Virusoppkjøp og innsamling av viruliferous insekter
- Overfør forsiktig de 2-instar nonviruliferous nymfer til et glasskulturrør (2,5 cm i diameter og 15 cm høyt) i 1-2 timer for sult ved hjelp av aspiratoren.
- Slipp nymfene til et bur som inneholder en RDV-infisert risplante dyrket i en gryte.
- La nymferne mate på den infiserte risplanten i 2 dager.
MERK: Vann risplanten forsiktig og unngå å vaske bort nymfene. 2-stjernenymfene er ca. 1,6-2 mm lange.
- Overfør forsiktig disse nymfene til et nytt bur som inneholder ferske virusfrie risplanter med en relativ fuktighet på 60-75% under en fotoperiode på 16 timer lys og 8 timer mørk. La nymfene mate på den infiserte risplanten i 12 dager for å fullføre den sirkulative overføringsperioden for RDV.
3. Innsamling av spyttproteiner ved hjelp av et fôringsbur
- Forbered fem små rørlignende fôringsbur (2,5 cm i diameter og 4 cm høy) der den ene enden er dekket med insektsikker netting.
- Begrens 15-20 bladhoppere i hvert fôringsbur, og dekk deretter den andre enden av buret med en tynn skummatte.
- Fest en risplante (5-6 cm høy) mellom enden av buret og en skummatte med bånd. Sørg for at bladhopperne i fôringsburet kan mate på risplanter utsatt for det indre av buret.
- Fordyp frøplanterøttene i vann slik at risplanten forblir i live. La bladhopperne mate på dem i 2 dager.
- Fjern bladhopperne fra fôringsburene og samle risplantene de matet på. Klipp delene av frøplanter utenfor buret og gjenopprett fôringsområdene av frøplanter.
MERK: Denne prøven kan lagres ved -80 °C i maksimalt 3 måneder hvis den ikke umiddelbart brukes til deteksjon.
4. Forberedelse av reagens
- Oppløs 15,1 g Tris-base, 94 g glycin og 5 g SDS i 1 liter sterilt vann for å forberede 5xTris-glycinbuffer. Fortynn 200 ml 5xTris-glycinbuffer med 800 ml sterilt vann for å fremstille 1xTris-glycinbuffer (se tabell 1 for buffersammensetning).
- Løs opp 80 g NaCl, 30 g Tris-base og 2 g KCl i 1 liter sterilt vann for å forberede 10xTris-bufret saltvann (TBS) buffer. Autoklav oppløsningen ved 121 °C i 15 minutter.
- Løs opp 8 g SDS, 4 ml ß-merkaptoetanol, 0,02 g bromfenolblått og 40 ml glyserol i 40 ml 0,1 M Tris-HCl (pH 6,8) for å fremstille 4x proteinprøvebuffer.
- Bland 800 ml Tris-glycinbuffer med 200 ml metanol for å forberede overføringsbufferen.
- Tilsett 100 ml 10xTBS-løsning og 3 ml mellom 20 til 900 ml sterilt vann for å klargjøre TBS-bufferen med Tween 20 (TBST)-løsning.
5. Vestlig blotting for å oppdage spytt og virale proteiner
- Mal 0,1 g av risprøvene med flytende nitrogen til vevet blir et pulver. Tilsett 200 μL 4x proteinprøvebuffer i prøven og kok den i 10 minutter. Sentrifuger prøvene ved 12 000 x g i 10 minutter ved romtemperatur.
- Fjern supernatanten og legg den i et nytt hetteglass. Legg 10 μL av prøven i en SDS-PAGE gel, og kjør den i Tris-glycinbuffer ved 150 V i 45-60 minutter.
MERK: Resten etter sentrifugering kan kastes.
- Fjern supernatanten og legg den i et nytt hetteglass. Legg 10 μL av prøven i en SDS-PAGE gel, og kjør den i Tris-glycinbuffer ved 150 V i 45-60 minutter.
- Sett en 0,45 μm nitrocellulosemembran og andre sandwichforsyninger i overføringsbufferen i 30 minutter.
MERK: Dette trinnet kan gjøres før gelen har fullført kjøringen. - Sandwich gelen og overfør den i 90-120 min ved 100 V i overføringsbufferen.
- Ta membranen og legg den i 7% fettfri tørrmelkblokkerende løsning i TBST-løsning i 20 minutter. Legg det spesifikke antistoffet mot RDV P8 eller Vg til en 7% løsning av ikke-fett tørr melk i TBST. Inkuber med antistoffet for farging av membranen i 2 timer eller over natten.
- Vask membranen med TBST oppløsning tre ganger, med 5 min vask hver gang.
- Tilsett geitantikaninen IgG som et sekundært antistoff mot 7% fettfri tørr melk med TBST. Inkuber med antistoffet i 60-90 min ved romtemperatur.
- Vask membranen med TBST oppløsning tre ganger i 5 min hver gang.
- Bruk ECL Western-settet til den kjemiluminescerende metoden. Bland deteksjonsreagenser 1 og 2 i settet i forholdet 1: 1 i et rør. Sett det blandede reagenset på membranen og inkuber flekken i 5 minutter.
- Tøm overflødig reagens og ta et kolorimetrisk bilde av det kjemiluminescerende bildet. Kombiner dem for å se stigen med proteinbånd.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 1 illustrerer alle trinnene i denne protokollen: insektoppdrett, virusoppkjøp, innsamling av spyttproteiner via risfôring og western blot. De vestlige blottresultatene viste at spesifikke og forventede bånd på ca. 220 kDa ble observert i prøvene av fôring av ris og spyttkjertler av insekter på membranen inkubert med antistoffer mot Vg. Derimot ble det ikke observert noe bånd i risprøven uten fôring. Resultatet i figur 2 indikerer at Vg ble frigjort til planteverten som spyttprotein. På membranen inkubert med antistoffer mot RDV P8 ble det også observert et spesifikt og forventet bånd på ca. 46 kDa i prøvene fra ris som hadde blitt utsatt for fôring og kroppene til viruliferøse insektlegemer. Derimot ble det ikke observert noe bånd i risprøven uten fôring og de ikke-viruliferøse bladhopperkroppene, som vist i figur 3. Dette resultatet viste at virusproteinene også kunne påvises i fôringsanleggene.
Figur 1: Oversikt over trinnene i påvisning av spyttproteiner. Trinnene inkluderer insektoppdrett, virusoppkjøp, spyttproteininnsamling via plantefôring og vestlig blotting. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Vestlig blotanalyse av Vg i plante- og insektprøver. Lane 1, ikke-fôringsanlegg; Lane 2, viruliferous leafhopper-fôring planter; Lane 3, viruliferous leafhopper spyttkjertler; Lane M, markør. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Western blot-analyse av P8 i plante- og insektprøver. Lane 1, ikke-fôringsanlegg; Lane 2, viruliferous leafhopper-fôring planter; Lane 3, viruliferous leafhopper kropper; Lane 4, nonviruliferous leafhopper kropper; M, markør. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
| Buffer | Komposisjon | Kommentarer / Beskrivelse |
| 5x Tris-glycin buffer | 15,1 g Tris base 94 g glycin 5 g SDS i 1 l sterilt vann |
Lagerløsning |
| 1x Tris-glycin buffer | 200 ml 5x Tris-glycinbuffer 800 ml sterilt vann |
Arbeidsløsning, for SDS-PAGE |
| 10x Tris-bufret saltvann (TBS) buffer | 80 g NaCl 30 g Tris base 2 g KCl i 1 l sterilt vann |
Lagerløsning |
| TBS med Tween 20 (TBST)-løsning | 100 ml 10x TBS løsning 3 ml mellom 20 900 ml sterilt vann |
Arbeidsløsning |
| 4x proteinprøvebuffer | 8 g SDS 4 ml β-merkaptoetanol 0,02 g bromfenolblått 40 ml glyserol i 40 ml 0,1 m Tris-HCl (pH 6,8) |
For proteinekstraksjon |
| Overføringsbuffer | 800 ml Tris-glycin buffer 200 ml metanol |
For proteinoverføring |
Tabell 1: Buffere, løsninger og reagenser brukt i studien. Sammensetningen av bufferne og løsningene, sammen med bruken av dem, er oppført.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Spyttet som utskilles direkte av spyttkjertlene til de piercingsugende insektene, spiller en sentral rolle fordi det fordøyer og avgifter vertsvevet og vektorenes biologiske faktorer på tvers av kongeriketi vertene 1,3,4. De biologiske faktorene på tvers av riket, inkludert elicitorer, effektorer og lite RNA, er kritiske for insekt-vertkommunikasjon14,15,16. Derfor vil avdekking av flere varianter og funksjoner av spyttkomponenter fremme forståelsen av forholdet mellom insekter og verter. Her ble det gitt et deteksjonssystem for spyttproteiner i planteverten, som vil muliggjøre videre undersøkelser av spyttproteinets funksjon i planteverter.
Denne protokollen gir teknikker for å oppdage spyttproteiner av bladhoppere med piercing-sugende munndeler ved å samle fôringsanleggene. Noen bemerkelsesverdige punkter bør noteres for å oppnå de beste og pålitelige resultatene. (1) Den virale belastningen i de infiserte risplantene er kritisk. De virale titerne i risplanter påvirker direkte oppkjøpet av insekter. Når insektkolonien er svært viruliferous, vil sannsynligheten for å samle virale proteiner i spytt in vitro økes. Derfor vil de virale proteinene som frigjøres fra spytt til planteverten være mye lettere å oppdage. Å velge infiserte planter som viser betydelige symptomer, anbefales å tjene som kilde for virus. (2) Deteksjon timing. Det antas at noen av spyttproteinene er forbigående i planteverten fordi de blir utsatt for nedbrytning av planteverten eller fortynnet i planten. Øyeblikkelig deteksjon av fôringsanleggene etter 2-dagers fôring anbefales. Det er også antatt at en lengre retensjonstid ville være bedre for noen spesifikke spyttproteiner i planten. Derfor kan deteksjonstidspunktet for noen spyttproteiner bestemmes i videre studier. (3) Forsikre deg om at det er nok replikater. Antall insekter som overlever vil gå ned fordi de innesperrede insektene i fôringsmerden har begrenset aktivitet og evne til å fôre. Bruk av nok replikater vil bidra til å berike spyttproteinene. Tre til fem replikater er vanligvis nok. Hvis det bare er en replikat, ville det være bedre å begrense 15-20 bladhoppere for å mate på en risplante.
Disse representative resultatene viste tilstedeværelsen av viralt protein P8 i fôringsanlegget av viruliferous leafhoppers. Det ble avslørt at viruset blandet med spyttstrømmen frigjøres fra spyttkjertlene. Det ble deretter frigjort fra insektet til planteverten, og til slutt avsluttet den virale horisontale overføringen. Det er imidlertid fortsatt ukjent om Vg spiller rollen som elicitor eller effector i prosessen med insektfôring og hvorvidt det utløser eller undertrykker immunresponsen til planteverten. Tidligere ble spytt fra mer enn 10 000 R. dorsalis samlet inn via membranfôring og analysert ved hjelp av LC-MS/MS (upubliserte data). Tilstedeværelsen av Vg i spyttet ble bekreftet, selv om funksjonen er ukjent. Her er det bevist at Vg også finnes i spyttet til N. cincticeps og til og med slippes ut i planten. Kombinert med studiene på plantehoppere16, antas det at tilstedeværelsen av Vg i hemipteran spytt er universell. Et nytt funn rapporterer at Vg av plantehopperspytt er en effektor for å skade planteforsvarssystemet34. Flere studier er nødvendig for å undersøke om Vg i de fleste hemipteran spytt fungerer som en effektor. Det antas at denne protokollen gir en stabil og pålitelig metode for å undersøke tilstedeværelsen av spyttproteiner utskilt av bladhopper i planter. Denne protokollen forventes å være anvendelig for påvisning av spyttproteiner hos de fleste hemipteraner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra National Natural Science Foundation of China (31772124 og 31972239) og Fujian Agriculture and Forestry University (Grant KSYLX014).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| Tris base | Roche | D609K69032 | For 5×Tris-glycine buffer and 10×TBS buffer preparation |
| glycine | Sigma-Aldrich | WXBD0677V | For 5×Tris-glycine buffer preparation |
| SDS | Sigma-Aldrich | SLCB4394 | For 5×Tris-glycine buffer preparation |
| NaCl | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10019318 | For 10×TBS buffer preparation |
| KCl | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10016318 | For 10×TBS buffer preparation |
| ß-mercaptoethanol | Xiya Reagent | B14492 | For 4× protein sample buffer preparation |
| bromophenol blue | Sigma-Aldrich | SHBL3668 | For 4× protein sample buffer preparation |
| glycerol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10010618 | For 4× protein sample buffer preparation |
| methanol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10014118 | For transfer buffer preparation |
| Tween 20 | Coolaber SCIENCE&TeCHNoLoGY | CT30111220 | For TBST preparation |
| non-fat dry milk | Becton.Dickinso and company | 252038 | For membrane blocking, antibodies dilution |
| goat anti-rabbit IgG | Sangon Biotech | D110058-0001 | Recognization of the primary andtibody |
| ECL Western kit | ThermoFisher Scientific | 32209 | Chemiluminescent substrate |
| nitrocellulose membrane | Pall Corporation | 25312915 | For proteins transfer |
| Buffers and Solutions | |||
| Buffer | Composition | Comments/Description | |
| 5×Tris-glycine buffer | 15.1 g Tris base 94 g glycine 5 g SDS in 1 L sterile water |
Stock solution | |
| 1×Tris-glycine buffer | 200 mL of 5×Tris-glycine buffer 800 mL sterile water |
Work solution, for SDS-PAGE | |
| 10×Tris-buffered saline (TBS) buffer | 80 g NaCl 30 g Tris base 2 g KCl in 1 L sterile water |
Stock solution | |
| TBS with Tween 20 (TBST) solution | 100 mL 10×TBS solution 3 mL Tween 20 900 mL sterile water |
Work solution | |
| 4× protein sample buffer | 8 g SDS 4 mL ß-mercaptoethanol 0.02 g bromophenol blue 40 mL glycerol in 40 mL 0.1 M Tris-HCl (pH 6.8) |
For protein extraction | |
| Transfer buffer | 800 mL Tris-glycine buffer 200 mL methanol |
For protein transfer | |
| Instruments | |||
| Bromophenol blue | Sigma-Aldrich | SHBL3668 | For 4x protein sample buffer preparation |
| Constant temperature incubator | Ningbo Saifu Experimental Instrument Co., Ltd. | PRX-1200B | For rearing leafhoppers |
| Electrophoresis | Tanon Science & Technology Co.,Ltd. | Tanon EP300 | For SDS-PAGE |
| Electrophoretic transfer core module | BIO-RAD | 1703935 | For SDS-PAGE |
| glycerol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10010618 | For 4x protein sample buffer preparation |
| glycine | Sigma-Aldrich | WXBD0677V | For 5x Tris-glycine buffer preparation |
| goat anti-rabbit IgG | Sangon Biotech | D110058-0001 | Recognization of the primary andtibody |
| High-pass tissue grinding instrument | Shanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd. | JXFSIPRP-24 | For grinding plant tissues |
| KCl | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10016318 | For 10x TBS buffer preparation |
| methanol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10014118 | For transfer buffer preparation |
| Mini wet heat transfer trough | BIO-RAD | 1703930 | For SDS-PAGE |
| NaCl | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10019318 | For 10x TBS buffer preparation |
| nitrocellulose membrane | Pall Corporation | 25312915 | For proteins transfer |
| non-fat dry milk | Becton.Dickinso and company | 252038 | For membrane blocking, antibodies dilution |
| Pierce ECL Western kit | ThermoFisher Scientific | 32209 | Chemiluminescent substrate |
| Protein color instrument | GE Healthcare bio-sciences AB | Amersham lmager 600 | For detecting proteins |
| SDS | Sigma-Aldrich | SLCB4394 | For 5x Tris-glycine buffer preparation |
| Tris base | Roche | D609K69032 | For 5x Tris-glycine buffer and 10×TBS buffer preparation |
| Tween 20 | Coolaber SCIENCE&TeCHNoLoGY | CT30111220 | For TBST preparation |
| Vertical plate electrophoresis tank | BIO-RAD | 1658001 | For SDS-PAGE |
| Water bath | Shanghai Jinghong Experimental equipment Co., Ltd. | XMTD-8222 | For boil the protein samples |
| β-mercaptoethanol | Xiya Reagent | B14492 | For 4x protein sample buffer preparation |
References
- Hogenhout, S. A., Ammar el, D., Whitfield, A. E., Redinbaugh, M. G. Insect vector interactions with persistently transmitted viruses. Annual Review of Phytopathology. 46, 327-359 (2008).
- Cranston, P. S., Gullan, P. J. Phylogeny of insects. Encyclopedia of Insects. Resh, V. H., Carde, R. T. , Academic. Amsterdam. (2003).
- Ammar el, D., Tsai, C. W., Whitfield, A. E., Redinbaugh, M. G., Hogenhout, S. A. Cellular and molecular aspects of rhabdovirus interactions with insect and plant hosts. Annual Review of Entomology. 54, 447-468 (2009).
- Wei, T., Li, Y.
- Hattori, M., Konishi, H., Tamura, Y., Konno, K., Sogawa, K. Laccase-type phenoloxidase in salivary glands and watery saliva of the green rice leafhopper, Nephotettix cincticeps. Journal of Insect Physiology. 51 (12), 1359-1365 (2005).
- Ma, R., Reese, J. C., William, I. V., Bramel-Cox, P. Detection of pectinesterase and polygalacturonase from salivary secretions of living greenbugs, schizaphis graminum (Homoptera: aphididae). Journal of Insect Physiology. 36 (7), 507-512 (1990).
- Miles, P. W. Dynamic aspects of the chemical relation between the rose aphid and rose buds. Entomologia Experimentalis et Applicata. 37 (2), 129-135 (2011).
- Urbanska, A., Tjallingii, W. F., Dixon, A., Leszczynski, B. Phenol oxidising enzymes in the grain aphid's saliva. Entomologia Experimentalis et Applicata. 86 (2), 197-203 (1998).
- Miles, P. W., Peng, Z. Studies on the salivary physiology of plant bugs: detoxification of phytochemicals by the salivary peroxidase of aphids. Journal of Insect Physiology. 35 (11), 865-872 (1989).
- Will, T., van Bel, A. Physical and chemical interactions between aphids and plants. Journal of Experimental Botany. 57 (4), 729-737 (2006).
- Ma, R. Z., Reese, J. C., Black, W. C., Bramel-Cox, I. Chlorophyll loss in a greenbug-susceptible sorghum due to pectinases and pectin fragments. Journal of the Kansas Entomological Society. 71 (1), 51-60 (1998).
- Madhusudhan, V. V., Miles, P. W. Mobility of salivary components as a possible reason for differences in the responses of alfalfa to the spotted alfalfa aphid and pea aphid. Entomologia Experimentalis et Applicata. 86 (1), 25-39 (1998).
- Funk, C. J. Alkaline phosphatase activity in whitefly salivary glands and saliva. Archives of Insect Biochemistry & Physiology. 46 (4), 165-174 (2010).
- Hogenhout, S. A., Bos, J. I. Effector proteins that modulate plant-insect interactions. Current Opinion in Plant Biology. 14 (4), 422-428 (2011).
- Tomkins, M., Kliot, A., Maree, A. F., Hogenhout, S. A. A multi-layered mechanistic modelling approach to understand how effector genes extend beyond phytoplasma to modulate plant hosts, insect vectors and the environment. Current Opinion in Plant Biology. 44, 39-48 (2018).
- Huang, H. J., Lu, J. B., Li, Q., Bao, Y. Y., Zhang, C. X. Combined transcriptomic/proteomic analysis of salivary gland and secreted saliva in three planthopper species. Journal of Proteomics. , (2018).
- Hogenhout, S. A., Bos, J. I. Effector proteins that modulate plant--insect interactions. Current Opinion in Plant Biology. 14 (4), 422-428 (2011).
- Sun, P., et al. A mosquito salivary protein promotes flavivirus transmission by activation of autophagy. Nature Communications. 11 (1), 260 (2020).
- Sri-In, C., et al. A salivary protein of Aedes aegypti promotes dengue-2 virus replication and transmission. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 111, 103181 (2019).
- Conway, M. J., et al. Aedes aegypti D7 saliva protein inhibits dengue virus infection. Plos Neglected Tropical Diseases. 10 (9), 0004941 (2016).
- Wang, N., et al. A whitefly effector Bsp9 targets host immunity regulator WRKY33 to promote performance. Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 374 (1767), 20180313 (2019).
- Omura, T., Yan, J. Role of outer capsid proteins in transmission of phytoreovirus by insect vectors. Advances in Virus Research. 54, 15-43 (1999).
- Chen, Q., Liu, Y., Long, Z., Yang, H., Wei, T. Viral release threshold in the salivary gland of leafhopper vector mediates the intermittent transmission of rice dwarf virus. Frontiers in Microbiology. 12, 639445 (2021).
- Fukushi, T. Further studies on the dwarf disease of rice plant. Journal of the Faculty of Agriculture, Hokkaido Imperial University. 45 (3), 83-154 (1940).
- Miyazaki, N., et al. The functional organization of the internal components of rice dwarf virus. Journal of Biochemistry. 147, 843-850 (2010).
- Wei, T., Shimizu, T., Hagiwara, K., Kikuchi, A., Omura, T. Pns12 protein of rice dwarf virus is essential for formation of viroplasms and nucleation of viral-assembly complexes. Journal of General Virology. 87, 429-438 (2006).
- Chen, Q., Zhang, L., Chen, H., Xie, L., Wei, T. Nonstructural protein Pns4 of rice dwarf virus is essential for viral infection in its insect vector. Virology Journal. 12, 211 (2015).
- Chen, Q., et al. Nonstructural protein Pns12 of rice dwarf virus is a principal regulator for viral replication and infection in its insect vector. Virus Research. 210, 54-61 (2015).
- Chen, Q., Zhang, L., Zhang, Y., Mao, Q., Wei, T. Tubules of plant reoviruses exploit tropomodulin to regulate actin-based tubule motility in insect vector. Scientific Reports. 7, 38563 (2017).
- Wei, T., et al. The spread of Rice dwarf virus among cells of its insect vector exploits virus-induced tubular structures. Journal of Virology. 80 (17), 8593-8602 (2006).
- Mao, Q., et al. Insect bacterial symbiont-mediated vitellogenin uptake into oocytes to support egg development. mBio. 11 (6), 01142 (2020).
- Tufail, M., Takeda, M.
- Sappington, T. W., Raikhel, A. S. Molecular characteristics of insect vitellogenins and vitellogenin receptors. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 28 (5-6), 277-300 (1998).
- Ji, R., et al. Vitellogenin from planthopper oral secretion acts as a novel effector to impair plant defenses. New Phytologist. , (2021).
