Summary
पर्याप्त संज्ञाहरण के तहत, माउस के दिल को इंटरकोस्टल स्पेस के माध्यम से बाहरी बनाया गया था, और मायोकार्डियल रोधगलन को अधिकांश प्रयोगशालाओं में आसानी से उपलब्ध सामग्रियों का उपयोग करके बाएं पूर्वकाल अवरोही धमनी (एलएडी) को लिगेट करके सफलतापूर्वक प्रेरित किया गया था।
Abstract
मायोकार्डियल रोधगलन (एमआई) मृत्यु के प्रमुख कारणों में से एक का प्रतिनिधित्व करता है। एमआई मॉडल का व्यापक रूप से पोस्ट-एमआई रीमॉडेलिंग और उपन्यास चिकित्सीय के मूल्यांकन के पैथोमैकेनिज्म की जांच के लिए उपयोग किया जाता है। एमआई को प्रेरित करने के लिए विभिन्न तरीकों (जैसे, आइसोप्रोटेनॉल उपचार, क्रायोइंजरी, कोरोनरी धमनी बंधाव आदि) का उपयोग किया गया है। आइसोप्रोटेनॉल उपचार और क्रायोइंजरी की तुलना में, कोरोनरी धमनी बंधाव एमआई के बाद इस्केमिक प्रतिक्रिया और पुरानी रीमॉडेलिंग को बेहतर ढंग से प्रतिबिंबित कर सकता है। हालांकि, चूहों में कोरोनरी बंधाव के लिए पारंपरिक तरीके तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण हैं। वर्तमान अध्ययन आसानी से उपलब्ध सामग्री के साथ चूहों में एमआई के प्रेरण के लिए एक सरल और कुशल प्रक्रिया का वर्णन करता है। स्थिर संज्ञाहरण के तहत माउस छाती की त्वचा को काट दिया गया था। पेक्टोरिस मेजर और पेक्टोरलिस माइनर के कुंद पृथक्करण के बाद दिल को तुरंत इंटरकोस्टल स्पेस के माध्यम से बाहरी किया गया था। बाईं पूर्ववर्ती अवरोही शाखा (एलएडी) को इसके मूल से 3 मिमी 6-0 सीवन के साथ जोड़ा गया था। एलएडी बंधाव के बाद, 2,3,5-ट्राइफेनिलटेट्राज़ोलियम क्लोराइड (टीटीसी) के साथ धुंधला होना एमआई के सफल प्रेरण और पोस्ट-एमआई निशान आकार के अस्थायी परिवर्तनों का संकेत देता है। इस बीच, उत्तरजीविता विश्लेषण के परिणामों ने एमआई के बाद 7 दिनों के भीतर मृत्यु दर दिखाई, मुख्य रूप से हृदय टूटने के कारण। इसके अलावा, पोस्ट-एमआई इकोलॉजिकल मूल्यांकन ने सिकुड़ा हुआ शिथिलता और वेंट्रिकुलर रीमॉडेलिंग के सफल प्रेरण का प्रदर्शन किया। एक बार महारत हासिल करने के बाद, आसानी से उपलब्ध सामग्री के साथ 2-3 मिनट के भीतर चूहों में एक एमआई मॉडल स्थापित किया जा सकता है।
Introduction
मायोकार्डियल रोधगलन (एमआई) दुनिया भर में मृत्यु और विकलांगता के महत्वपूर्ण कारणों में से एक का प्रतिनिधित्व करता है 1,2,3,4,5. समय पर रीपरफ्यूजन के बावजूद, वर्तमान में पोस्ट-एमआई कार्डियक रीमॉडेलिंग के इलाज के लिए प्रभावी उपचारों की कमी है। तदनुसार, एमआई 6,7,8 के लिए यंत्रवत अन्वेषण और चिकित्सा शोषण के लिए काफी प्रयास किए गए हैं। ध्यान दें, एमआई मॉडल की स्थापना इन छोरों को पूरा करने के लिए एक शर्त है।
छोटे जानवरों में एमआई मॉडल को प्रेरित करने के लिए कई तरीकों (जैसे, आइसोप्रोटेनॉल उपचार, क्रायोइंजरी, कोरोनरी धमनी बंधाव, आदि) का प्रस्ताव किया गया है। आइसोप्रोटेनॉल उपचार एमआई प्रेरण के लिए एक सरल विधि है, लेकिन यह लक्षित क्षेत्र9 के रोधगलन को प्रेरित नहीं कर सकता है। क्रायोइंजरी सीधे इस्किमिया10 के बजाय बर्फ के क्रिस्टल और कोशिका झिल्ली के विघटन के उत्पादन के माध्यम से मायोकार्डियल नेक्रोसिस की ओर जाता है। इसके विपरीत, कोरोनरी धमनी बंधाव रोड़ा स्थल और इन्फ्रैक्ट क्षेत्र की सीमा के सटीक नियंत्रण की अनुमति देता है और रोधगलन11,12 के बाद ईमानदारी से रीमॉडेलिंग प्रतिक्रिया को पुन: उत्पन्न करता है। कोरोनरी धमनी बंधाव आमतौर पर इंटुबैशन, मैकेनिकल वेंटिलेशन और थोराकोटॉमी के बाद किया जाता है, जो तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण13,14 है। कोरोनरी धमनी बंधाव (जैसे, वेंटिलेशन मुक्त) के लिए कई संशोधित प्रोटोकॉल रिपोर्ट किए गए थे और एमआई के प्रेरण को शक्तिशाली बनाया गया था, लेकिन विस्तृत दृश्य प्रदर्शनों में15,16,17 की कमी है। ये मुद्दे एमआई मॉडल का उपयोग करके अनुसंधान में संलग्न होने के इच्छुक समूहों के लिए एक महत्वपूर्ण वित्तीय और तकनीकी बाधा पैदा करते हैं। यह रिपोर्ट चूहों में एमआई के प्रेरण के लिए एक दृष्टिकोण प्रस्तुत करती है। वर्तमान विधि आसान, समय बचाने वाली है, और अधिकांश प्रयोगशालाओं में आसानी से पाए जाने वाले सर्जिकल उपकरण और उपकरणों का उपयोग करती है।
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Protocol
जानवरों के काम से जुड़े प्रयोगों को रेनजी अस्पताल, शंघाई जिओ टोंग विश्वविद्यालय, स्कूल ऑफ मेडिसिन (आर 52021-0506) की प्रयोगशाला पशु कल्याण आचार समिति से सभी आवश्यक अनुमोदन के साथ किया जाता है। अध्ययन में 8-10 सप्ताह की आयु के महिला और पुरुष C57BL / 6J चूहों का उपयोग किया गया था।
1. सरलीकृत संज्ञाहरण उपकरण की तैयारी (वैकल्पिक)
नोट: यह एक वैकल्पिक प्री-ऑपरेटिव सेटअप है और इसे धारा 2 में उल्लिखित टिट्राटेबल एनेस्थीसिया के साथ प्रतिस्थापित किया जा सकता है। पशु प्रक्रियाओं में इस सेट अप को अनुकूलित करने से पहले संस्थागत पशु नैतिकता समिति और पशु चिकित्सा (ओं) से परामर्श किया जाना चाहिए।
- 15 एमएल सेंट्रीफ्यूज ट्यूब लें, और उद्घाटन से लगभग 3 सेमी ट्यूब की लंबी धुरी के लंबवत एक कट बनाएं।
नोट: सुनिश्चित करें कि कट ट्यूब लुमेन की परिपत्र परिधि के आधे से अधिक है ताकि वाल्व को सफलतापूर्वक डाला जा सके। - कट और ट्यूब खोलने के बीच सेंट्रीफ्यूज ट्यूब की दीवार पर ड्रिल छेद (व्यास, 2 मिमी)।
- एक प्लास्टिक शीट से वाल्व के उपयुक्त आकार के टुकड़े को काटें और ट्यूब की दीवार पर कट में वाल्व डालें।
नोट: सम्मिलन की गहराई को बदलकर आइसोफ्लुरेन की रिलीज दर को नियंत्रित करने के लिए वाल्व का उपयोग किया जा सकता है। - एक फ्यूम हुड के अंदर, ट्यूब के निचले हिस्से को काटें और इसे ऑक्सीजन की आपूर्ति से कनेक्ट करें। ट्यूब के निचले छोर के पास एक कपास की गेंद रखें, कपास की गेंद पर 0.5 एमएल आइसोफ्लुरेन (जैसा कि प्राप्त किया गया है, सामग्री की तालिका देखें) लोड करें, और वाल्व को बंद करें।
- ऊपर वर्णित ट्यूबों के साथ चूहों को मास्क करके संज्ञाहरण प्रभावकारिता का परीक्षण करें। पैर की अंगुली चुटकी प्रतिक्रिया द्वारा श्वास दर और संज्ञाहरण की गहराई की निगरानी करें।
नोट: 10 बार / 10 सेकंड से कम श्वास दर अत्यधिक संज्ञाहरण का सुझाव देती है, और वाल्व की सम्मिलन गहराई को समायोजित किया जाना चाहिए। संज्ञाहरण से जुड़ी सभी प्रक्रियाओं के लिए, सक्रिय चारकोल शीट से भरे एक गैस फिल्टर का उपयोग किया जाना चाहिए (चित्रा 1 ए-आई), और सर्जरी एक हुड के भीतर की जानी चाहिए।
2. ऑपरेटिव तैयारी और संज्ञाहरण
- सर्जरी के दिन सभी आवश्यक उपकरणों को तैयार करें और निष्फल करें, जिसमें एक जोड़ी फोर्सप्स, एक माइक्रो-मच्छर हेमोस्टैट, सर्जिकल कैंची की एक जोड़ी, सुई धारकों के दो जोड़े, 4-0 रेशम सर्जिकल सीवन, 6-0 रेशम सर्जिकल सीवन, एक गैस फिल्टर और एक प्रकाश स्रोत (सामग्री की तालिका देखें) (चित्रा 1 ए) शामिल हैं।
- एक सर्जिकल मास्क और बाँझ दस्ताने पहनें।
- माउस छाती पर डिपिलेटरी क्रीम लागू करें और 1 मिनट तक प्रतीक्षा करें। धीरे-धीरे गीली धुंध के साथ डिपिलेटरी क्रीम और बालों को पोंछ लें।
- डिपिलेशन के बाद माउस को प्रमुख हाथ से पकड़ें। ऑक्सीजन की आपूर्ति (1 एल / मिनट) के साथ वाष्पीकृत आइसोफ्लुरेन (4%) के साँस लेने के माध्यम से संज्ञाहरण को प्रेरित करें और 2-3% आइसोफ्लुरेन पर बनाए रखें।
- पैर की अंगुली पिंच प्रतिक्रिया की कमी से पर्याप्त संज्ञाहरण की पुष्टि करें।
- कॉर्नियल ड्राईनेस को रोकने के लिए दोनों आंखों पर स्टेराइल आई क्रीम लगाएं।
- लापरवाह स्थिति में सर्जरी प्लेटफॉर्म पर चूहों को सुरक्षित करें। पोविडोन-आयोडीन स्वैब ( सामग्री की तालिका देखें) को छाती पर तीन बार लागू करें और कीटाणुरहित छाती को बाँझ ड्रेप से कवर करें।
3. मायोकार्डियल रोधगलन का प्रेरण
- बाँझपन सुनिश्चित करने के लिए दूषित दस्ताने बदलें।
- लिडोकेन के साथ स्थानीय ब्लॉक के बाद ज़िफॉइड और बगल को जोड़ने वाली रेखा के साथ 0.5 सेमी की त्वचा काट लें।
- चौथे इंटरकोस्टल स्पेस को उजागर करने के लिए फोर्सप्स और एक माइक्रो-मॉस्किटो हेमोस्टैट का उपयोग करके पेक्टोरल मेजर और पेक्टोरल माइनर मांसपेशियों को स्पष्ट रूप से अलग करें।
- माइक्रो-मॉस्किटो हेमोस्टैट का उपयोग करके चौथे इंटरकोस्टल स्पेस को खोलें।
- बाएं हाथ की तर्जनी उंगली से दिल को चौथे इंटरकोस्टल स्पेस की ओर धकेलकर दिल को बाहरी बनाएं।
- बाएं हाथ से दिल को सुरक्षित करें, और बाईं पूर्ववर्ती अवरोही शाखा को उसके मूल से 6-0 सीवन 3 मिमी के साथ घुमाएं।
- हृदय को जल्दी से वक्ष गुहा में वापस रखें।
नोट: 30 सेकंड से कम समय के लिए दिल को बाहर निकालना सुरक्षित है। - छाती गुहा के कोमल प्रेस द्वारा वक्ष गुहा से हवा को मैन्युअल रूप से बाहर निकालें।
- 6-0 रेशम सीवन के साथ पसलियों पर मांसपेशियों की परत को बंद करें।
- त्वचा को 4-0 रेशम सीवन के साथ बंद करें।
- ऑपरेशन के तुरंत बाद चूहों को एक पैड (37 डिग्री सेल्सियस) पर रखें।
- 72 घंटे तक पोस्ट-ऑपरेटिव दर्द को कम करने के लिए हर 4-6 घंटे में बुप्रेनोर्फिन (0.05-0.1 मिलीग्राम / किग्रा) को चमड़े के नीचे इंजेक्ट करें।
- पूरी तरह से ठीक होने पर संचालित चूहों को पिंजरों में वापस कर दें।
नोट: सर्जरी के बाद चूहों को 3-5 मिनट के भीतर पूरी तरह से ठीक कर दिया जाएगा। - चूहों की सावधानीपूर्वक निगरानी करें और 7 दिनों तक गीला भोजन प्रदान करें।
4. ऊतकों की कटाई
- गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था द्वारा एमआई स्थापना के बाद अलग-अलग समय बिंदुओं पर चूहों की बलि दें।
- लापरवाह स्थिति में सर्जरी प्लेटफॉर्म पर बलिदान किए गए चूहों को सुरक्षित करें।
- ऊपरी पेट में एक उदर चीरा (~ 3-4 सेमी) बनाएं। वक्ष गुहा के दोनों किनारों से पसलियों को काट दें, और डायाफ्राम को हटा दें।
- इंट्रावेंट्रिकुलर इंजेक्शन के माध्यम से 10 एमएल कोल्ड फॉस्फेट-बफर्ड सेलाइन (1x पीबीएस, 4 डिग्री सेल्सियस) के साथ दिल को संक्रमित करें।
- महाधमनी जड़ को काटकर दिल को इकट्ठा करें और तुरंत दिल को -80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
नोट: लेखकों के अनुभव के अनुसार, भंडारण के दो सप्ताह के भीतर टीटीसी धुंधला प्रदर्शन करना संभव है। - 2,3,5-ट्राइफेनिलटेट्राज़ोलियम क्लोराइड (टीटीसी) के साथ दिल को दाग दें।
- रेजर ब्लेड का उपयोग करके बर्फ पर जमे हुए दिल को 1 मिमी मोटे खंडों में काट लें।
- तैयार दिल के स्लाइस को 1% टीटीसी घोल (1x पीबीएस में घुलित) में 37 डिग्री सेल्सियस पर 10-15 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें।
नोट: 15 मिनट इनक्यूबेशन के बाद, टीटीसी समाधान को त्याग दें और दाग वाले दिल के स्लाइस को 1x पीबीएस में डुबो दें।
- एक डिजिटल कैमरे का उपयोग करके स्लाइस को चित्रित करें।
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Representative Results
प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल और कुछ महत्वपूर्ण कदम चित्रा 1 में दिखाए गए हैं। सरलीकृत संज्ञाहरण उपकरण प्रेरित संज्ञाहरण। जैसा कि चित्रा 2 ए में दिखाया गया है, प्रेरित संज्ञाहरण स्थिर था, जैसा कि नियमित श्वास दर (परीक्षण किए गए चूहों में 90-107 सांस / मिनट से भिन्न) द्वारा परिलक्षित होता है। कोरोनरी धमनी बंधाव के बाद, टीटीसी धुंधला विश्लेषण ने मायोकार्डियल रोधगलन के सफल प्रेरण और पोस्ट-एमआई निशान आकार के अस्थायी परिवर्तनों का संकेत दिया (चित्रा 2 बी)। इस बीच, उत्तरजीविता विश्लेषण परिणामों ने पुरुष और महिला सी 57बीएल / 6 जे चूहों (चित्रा 2 सी, डी) में एमआई के बाद 7 दिनों के भीतर मृत्यु दर दिखाई। वेंट्रिकुलर टूटना (पुरुष चूहों में 56%, महिला चूहों में 40%) पोस्ट-एमआई मृत्यु का एक सामान्य कारण था। इसके अलावा, पोस्ट-एमआई इकोलॉजिकल मूल्यांकन ने सिकुड़ा हुआ शिथिलता और वेंट्रिकुलर रीमॉडेलिंग (चित्रा 2 ई, एफ) के सफल प्रेरण का प्रदर्शन किया।
चित्रा 1: एमआई प्रेरण के लिए संशोधित तरीकों में सामग्री और महत्वपूर्ण कदम । (ए) इस प्रोटोकॉल के लिए आवश्यक सर्जिकल उपकरण और सामग्री। (ए) 4-0 रेशम सीवन। (ख) 6-0 रेशम सीवन। (ग) बल। (घ) कैंची। (e-f) सुई धारक। (छ) सूक्ष्म मच्छर हेमोस्टैट। (ज) प्रकाश स्रोत। (i) गैस फिल्टर। (बी) चूहों में एमआई को प्रेरित करने के लिए महत्वपूर्ण कदम दिखाने वाली प्रतिनिधि छवियां। (ए) माउस को संज्ञाहरण के बाद सुरक्षित किया गया था, और सर्जिकल साइट पर पोविडोन-आयोडीन लगाया गया था। (ख) शल्य चिकित्सा स्थल लपेटा हुआ है। (ग) लिडोकेन के साथ स्थानीय ब्लॉक के बाद शल्य चिकित्सा स्थल पर 0.5 सेमी की कटौती। (घ) उजागर पसलियां। तीर पसलियों को इंगित करता है। (ई) चौथे इंटरकोस्टल स्पेस को उजागर करने के लिए पेक्टोरल मेजर और पेक्टोरल माइनर मांसपेशियों को विच्छेदित किया गया। (च) बाह्य हृदय। (g-h) 6-0 रेशम सीवन के साथ लिगेटेड एलएडी। तीर एलएडी को इंगित करता है। (i) हृदय को छाती गुहा में वापस रखा जाता है। (ञ) वक्ष गुहा से वायु को निकाला गया। (ट) मांसपेशियों की परत पसलियों पर 6-0 रेशम सीवन के साथ बंद हो जाती है और त्वचा 4-0 रेशम सीवन के साथ बंद हो जाती है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 2: कोरोनरी धमनी बंधाव के बाद हिस्टोलॉजिकल और कार्यात्मक परिवर्तन। (ए) सरलीकृत संज्ञाहरण उपकरण (एन = 10) द्वारा एनेस्थेटाइज्ड चूहों में श्वास दर। (बी ) एमआई के बाद अलग-अलग समय बिंदुओं पर दिल के स्लाइस (प्रत्येक दिल से 4 स्लाइस) के टीटीसी धुंधला परिणाम एकत्र किए गए थे। सफेद क्षेत्र ने एक रोधगलित क्षेत्र का संकेत दिया, और लाल क्षेत्र ने व्यवहार्य मायोकार्डियम का खुलासा किया। (सी ) कपलान-मीयर वक्र पुरुष चूहों (एन = 20 प्रति समूह) में पोस्ट-एमआई मृत्यु दर को दर्शाता है। (डी ) कपलान-मीयर वक्र मादा चूहों (एन = 20 प्रति समूह) में पोस्ट-एमआई मृत्यु दर को दर्शाता है। (ई) एमआई के बाद अलग-अलग समय बिंदुओं पर ईकोलॉजिकल विश्लेषण की प्रतिनिधि छवियां (शाम, 3 दिन, 7 दिन, 21 दिन और 28 दिन पोस्ट-एमआई)। (एफ) संकेतित समूहों (एन = 5 प्रति समूह) के बीच बाएं वेंट्रिकुलर इजेक्शन अंश (एलवीईएफ), बाएं वेंट्रिकुलर फ्रैक्शनल शॉर्टनिंग (एलवीएफएस), बाएं वेंट्रिकुलर एंड-सिस्टोलिक व्यास (एलवीएसडी), और बाएं वेंट्रिकुलर एंड-डायस्टोलिक आयाम (एलवीडीडी) मूल्यों का मात्रात्मक विश्लेषण। ** p<0.01 या ***p<0.001 बनाम। धोखा; ##p<0.01 या ###p<0.001 बनाम। सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए पोस्टहॉक ट्यूकी एचएसडी (ईमानदारी से महत्वपूर्ण अंतर) परीक्षण के साथ विचरण का एक-तरफ़ा विश्लेषण किया गया था। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
वर्तमान रिपोर्ट ने आसानी से उपलब्ध सामग्रियों के साथ चूहों में एमआई प्रेरण के लिए एक आसान प्रोटोकॉल का प्रदर्शन किया, जिसे गाओ16 द्वारा रिपोर्ट की गई विधि से संशोधित किया गया था। मुराइन एमआई मॉडल पोस्ट-एमआई डिसफंक्शन और रीमॉडेलिंग12 के लिए यांत्रिक अन्वेषण और दवा स्क्रीन के लिए अपरिहार्य हैं। एमआई प्रेरण के लिए मौजूदा तकनीकों में, कोरोनरी धमनी बंधाव सबसे अधिक प्रचलित का प्रतिनिधित्व करता है। कोरोनरी धमनी बंधाव मायोकार्डियल रोधगलन की इस्किमिया प्रकृति को ईमानदारी से पुन: उत्पन्न करता है और नैदानिक परिदृश्य18,19 के समान निशान उपचार और रीमॉडेलिंग प्रतिक्रिया की ओर जाता है। हालांकि, कोरोनरी धमनी बंधाव के लिए पारंपरिक प्रोटोकॉल में इंटुबैशन, वेंटिलेशन और छाती का एक विस्तृत उद्घाटन शामिल है, जो तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण और समय लेने वाला है। पिछले वर्षों में, कोरोनरी धमनी बंधाव के लिए विभिन्न प्रोटोकॉल की सूचना दी गई है और कुछ हद तक एमआई की स्थापना को 15,16,17 तक मजबूत किया गया है। वर्तमान अध्ययन ने अधिकांश प्रयोगशालाओं में आसानी से पाए जाने वाले सर्जिकल उपकरणों और उपकरणों का उपयोग करके एक सरल और कुशल प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया।
महत्वपूर्ण कदम और समस्या निवारण
इस विधि का अभ्यास करने में इष्टतम प्रदर्शन के लिए, कई महत्वपूर्ण कदम ध्यान देने योग्य हैं। हृदय को बाहरी बनाने के लिए, छाती गुहा को जमकर निचोड़ा नहीं जाना चाहिए, जो कोरोनरी रक्त प्रवाह को नकारात्मक रूप से प्रभावित करेगा और कोरोनरी धमनी को अस्पष्ट करेगा, जिससे कोरोनरी धमनी की अदृश्यता और एलएडी बंधाव की विफलता होगी। इसके अलावा, इसके परिणामस्वरूप फेफड़ों की गंभीर चोट हो सकती है। ज्यादातर मामलों के लिए, छाती की दीवार के दाईं ओर एक कोमल धक्का खुले इंटरकोस्टल स्पेस के माध्यम से दिल को सफलतापूर्वक बाहर निकाल देगा। कभी-कभी, दिल के बाहरीकरण के दौरान प्रतिरोध की भावना दिल के शीर्ष और इंटरकोस्टल उद्घाटन के बेमेल का संकेत दे सकती है। इसे मिडएक्सिलरी लाइन के साथ माइक्रो-मच्छर हेमोस्टैट के मामूली आंदोलनों द्वारा संबोधित किया जा सकता है। एक और महत्वपूर्ण बिंदु मांसपेशियों और त्वचा को ट्यूरिंग करने से पहले वक्ष गुहा में अवशिष्ट हवा की पर्याप्त निकासी है। ऐसा करने में विफल रहने से न्यूमोथोरैक्स के कारण पोस्ट-ऑपरेटिव मृत्यु दर बढ़ जाएगी।
लाभ और सीमाएं
कोरोनरी बंधाव के लिए पारंपरिक तरीकों में इंटुबैशन, यांत्रिक वेंटिलेशन, पसलियों को काटने की आवश्यकता होती है, और उच्च हृदय गति के कारण कोरोनरी धमनी की पहचान के लिए आसान नहीं है। ये मुद्दे नाटकीय रूप से ऑपरेशन के समय को बढ़ाते हैं और ऑपरेशन से संबंधित मृत्यु दर को बढ़ाते हैं। पारंपरिक तरीकों की तुलना में, संशोधित प्रोटोकॉल निम्नलिखित फायदे प्रस्तुत करता है: (1) यह समय की बचत है (यानी, एनेस्थीसिया, एलएडी बंधाव से सफल त्वचा ट्यूरिंग तक लगभग 3 मिनट लगते हैं); (2) आवश्यक शल्य चिकित्सा उपकरण और सामग्री अधिकांश प्रयोगशालाओं में आसानी से उपलब्ध हैं। हालांकि, इस अनूठी विधि की एक महत्वपूर्ण सीमा यांत्रिक वेंटिलेशन समर्थन की कमी के कारण हृदय बाह्यकरण के बाद एलएडी बंधाव के लिए सीमित समय की अनुमति है। इस प्रकार, शुरुआती लोगों के लिए न्यूमोथोरैक्स के कारण उच्च मृत्यु दर की उम्मीद की जा सकती है। लेखकों के अनुभव के आधार पर, 30 सेकंड से कम समय के लिए हृदय बाह्यकरण सभी परीक्षण किए गए चूहों द्वारा अच्छी तरह से सहन किया जाता है। यह समय खिड़की एक अनुभवी तकनीशियन के लिए कम पेरीओपरेटिव मृत्यु दर (<5%) के साथ एमआई प्रेरण को पूरा करने के लिए पर्याप्त है।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
इस काम को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (81930007, 81625002, 81800307, 81470389, 81500221, 81770238), शंघाई आउटस्टैंडिंग एकेडमिक लीडर्स प्रोग्राम (18एक्सडी1402400), शंघाई नगर पालिका के विज्ञान और प्रौद्योगिकी आयोग (201409005200), शंघाई पुजियांग टैलेंट प्रोग्राम (2020पीजेडी030), और चाइना पोस्टडॉक्टरल साइंस फाउंडेशन (2020एम671161, BX20190216) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride | SIGMA | T8877-25G | TTC staining |
| 4-0 silk suture | YUANKANG | 4-0 | Surgical instrument |
| Autoclave | HIRAYAMA | HVE-50 | Sterilization for the solid |
| Buprenorphine | Qinghai Pharmaceutical FACTORY Co., Ltd. | H10940181 | reduce post-operative pain |
| Centrifugation tube | Biological Hope | 1850-K | 15ML |
| Depilatory cream | ZIKER BIOTECHNOLOGY | ZK-L2701 | Depilation agent for laboratory animals |
| Forcep | RWD | F12028 | Surgical instrument |
| Gas filter | ZHAOXIN | SA-493 | Operator protection |
| Isoflurane | RWD | 20071302 | Used for anesthesia |
| Light source | Beijing PDV | LG-150B | Operating lamp |
| Micro-mosquito hemostat | FST | 13011-12 | Surgical instrument |
| Needle | BINXIONG | 42180104 | Surgical instrument |
| Needle and the 6-0 silk suture | JIAHE | SC086 | Surgical instrument |
| Needle holder | ShangHaiJZ | J32030 | Surgical instrument |
| Needle holder | ShangHaiJZ | J32010 | Surgical instrument |
| Povidone-iodine swabs | SingleLady | GB26368-2010 | Skin disinfection |
| Scissors | CNSTRONG | JYJ1030 | Surgical instrument |
| Sterile eye cream | Shenyang Xingqi Pharmaceutical Co., Ltd. | H10940177 | prevent corneal dryness |
| Ultra-high resolution ultrasound imaging system for small animals | VisualSonics | Vevo 2100 | Echocardiographic analysis |
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