Vi beskriver en kvalitativ analys för jäst vidhäftning och agar invasion som ett mått på invasiv och pseudohyphal differentiering. Denna enkla analys kan användas för att bedöma invasiv fenotyp av olika mutanter samt effekterna miljö-signaler och signalvägar i jäst differentiering.
Jäst finns i naturliga biofilm, där många mikroorganismer kolonisera ytor. I konstgjorda miljöer, såsom ytor av syntet-objekt kan biofilmer minska industriell produktivitet, förstöra strukturer och hotar människors liv. 1-3 Å andra sidan kan utnyttja kraften i biofilmen hjälper till att rena miljön och skapa hållbar energi. 4-8 förmåga S. cerevisiae att kolonisera ytor och delta i komplexa biofilm var mestadels ignoreras tills återupptäckten av differentiering program som utlöses av olika signalvägar och miljömässiga ledtrådar i denna organism. 9, 10 Den fortsatta intresset för att använda S. cerevisiae som modellorganism för att förstå interaktion och konvergens av signalvägar, som Ras-PKA, Kss1 MAPK och Hog1 vägar osmolaritet, snabbt placeras S. cerevisiae i korsningen av biofilm biologi och signaltransduktion forskning. 11-20 Därför blev differentiering av jästceller till långa, lim, pseudohyphal filament en bekväm avläsning för aktivering av signaltransduktionsvägar på olika miljöförändringar. Det är dock filamentation en komplex samling av fenotyper, vilket gör testmetoder för det som om det vore en enkel fenotyp missvisande. Under det senaste decenniet har flera analyser framgångsrikt antogs från bakteriell biofilm studier till jäst forskning, såsom analyser MAT bildningen för att mäta koloni sprids på mjuk agar och kristallviolett färgning för att kvantitativt mäta cellytan följsamhet. 12, 21 Däremot har det skett en viss förvirring i analyser utvecklats för att kvalitativt bedöma lim och invasiva fenotyper av jäst i agar. Här presenterar vi en enkel och tillförlitlig metod för att beräkna lim och invasiva kvalitet jäststammar med lätt att förstå steg för att isolera vidhäftning bedömningen från invasion bedömning. Vår metod, som antogs från tidigare studier, 10, 16 innebär att växande celler i flytande media och bordläggning på differentiell näringsämnen förutsättningar för tillväxt av stora fläckar, som vi sedan tvätta med vatten för att bedöma vidhäftning och gnugga cellerna helt bort agarytan att bedöma invasion i agarn. Vi eliminera behovet av strimmor celler på agar, vilket påverkar invasion av celler i agar. I allmänhet noterade vi att haploida stammar som invaderar agar alltid lim, men inte alla lim stammar kan invadera agarsubstratet. Vår strategi kan användas tillsammans med andra analyser att noggrant dissekera den differentiering steg och krav av jäst signaltransduktion, differentiering, quorum sensing och biofilm bildas.
Jästceller visa olika differentiering lägen beroende på tillgången på näringsämnen och miljöförhållanden, inklusive sporer bildas i svält och stress, filamentation under olika näringsämnen påfrestningar och flockning. Olika jäst, inklusive S. cerevisiae och C. albicans kan också hittas i biofilmer som bildas av en mångfald av mikroorganismer. Även om det finns någon korrelation med filamentation och invasiva beteende är det inte klart exakt hur filamentation kan orsaka invasion och kolonisering av ytor och vävnader. Jä…
Vi vill tacka Lisa Schneper och Katrin Duevel för sina insikter i utvecklingen av denna analys.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Moticam 350 | Camera | Motic | discontinued (new model: Moticam 352) | A relatively cheap camera that attaches to eye pieces of microscopes and captures digital images for PC or Mac. |