Opisujemy to test na przyczepność drożdży i inwazji agar jako miara zróżnicowania inwazyjne i pseudohyphal. Ten prosty test może być wykorzystane do oceny inwazyjnym fenotypem różnych mutantów, jak również wpływu na środowisko pamięci i szlaków sygnałowych różnicowania drożdży.
Drożdże są na naturalnych biofilmu, gdzie wielu mikroorganizmów kolonizacji powierzchni. W sztucznych warunkach, takich jak powierzchnie obiekty stworzone przez człowieka, biofilmu może zmniejszyć wydajności przemysłu, zniszczyć struktury i zagrażają ludzkiemu życiu. 03/01 Z drugiej strony, wykorzystanie mocy biofilmu może pomóc czyste środowisko oraz zrównoważony energii. 08/04 Możliwość S. cerevisiae do kolonizacji powierzchni i uczestniczą w złożonych biofilm był zazwyczaj ignorowane aż do ponownego odkrycia programów zróżnicowanie wywołane przez różne szlaki sygnałowe i wskazówki dla środowiska w tym organizmie. 9, 10 nadal zainteresowanie wykorzystaniem S. cerevisiae jako organizm modelowy do zrozumienia interakcji i zbieżności ścieżek sygnałowych, takich jak Ras-PKA, Kss1 MAPK i Hog1 osmolarności ścieżek, szybko umieścić S. cerevisiae w zbiegu biofilmu biologii i badaniach transdukcji sygnału. 20/11 W tym celu różnicowania komórek drożdży w długie, klej, nici pseudohyphal stał się wygodny odczyt do aktywacji szlaków transdukcji sygnału na różne zmiany w środowisku. Jednak filamentacji jest złożonym kolekcji fenotypów, co sprawia, oznaczanie to tak, jakby był prosty fenotyp mylące. W ciągu ostatniej dekady, kilka testów udało się przyjąć od bakteryjnego biofilmu badań do badań drożdże, takie jak testy formacji MAT do pomiaru rozprzestrzeniania kolonii w miękkim agarze i barwienia fioletem krystalicznym ilościowego pomiaru powierzchni komórek przestrzegania. 12, 21 Jednak nie było pewne zamieszanie w testach opracowanych do jakościowo ocenić kleju i inwazyjne fenotypy drożdży w agar. Poniżej przedstawiamy proste i niezawodne metody oceny kleju i inwazyjne jakości szczepy drożdży z łatwym do zrozumienia kroki w celu odizolowania oceny przyczepności z oceny inwazji. Nasze metody, przyjęte z poprzednich badań, 10, 16 dotyczy komórek rosnących w ciekłych i poszycia na różnicy odżywczych warunków dla wzrostu dużych punktów, które następnie zmyć wodą w celu oceny przyczepności i pocierać komórek całkowicie z powierzchni agaru ocenić inwazję agar. Eliminujemy potrzebę smug komórek na agar, co wpływa na inwazję komórek w agar. Ogólnie rzecz biorąc, zauważyliśmy, że haploidalnych szczepów, które atakują agar zawsze kleju, ale nie wszystkie szczepy kleju można najechać agarze. Nasze podejście może być stosowany w połączeniu z innymi testy dokładnie przeanalizujemy kroki różnicowania i wymagania transdukcji sygnału drożdży, różnicowanie, wykrywania kworum, a tworzenie biofilmu.
Drożdże wyświetlania różnych rodzajów zróżnicowania w zależności od składników odżywczych dostępności i warunków środowiskowych, w tym formowanie sporów w warunkach głodu i stresu, filamentacji w różnych substancji odżywczych podkreśla i flokulacji. Różne drożdży, w tym S. cerevisiae i C. albicans, można znaleźć również w biofilm utworzony przez zestaw różnorodnych mikroorganizmów. Choć istnieje pewna korelacja z filamentacji i zachowania inwazyjne, nie jest jasne, jak dokładnie filamentacji może spowod…
Chcielibyśmy podziękować Lisa Schneper i Katrin Duevel ich wgląd w rozwój tego testu.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Moticam 350 | Camera | Motic | discontinued (new model: Moticam 352) | A relatively cheap camera that attaches to eye pieces of microscopes and captures digital images for PC or Mac. |