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Medicine

एक यूटेरोसेक्रल लिगामेंट सस्पेंशन रैट मॉडल का विकास

Published: August 17, 2022 doi: 10.3791/64311
Automatic Translation
1, 2, 3, 1,3, 4
1Department of Chemical Engineering, University of Virginia, 2Electrophysiology Division, Abbott, 3Department of Biomedical Engineering, University of Virginia, 4Department of Obstetrics and Gynecology, Division of Pelvic Medicine and Reconstructive Surgery, University of Virginia

Summary

पेल्विक ऑर्गन प्रोलैप्स दुनिया भर में लाखों महिलाओं को प्रभावित करता है और फिर भी कुछ सामान्य सर्जिकल हस्तक्षेपों में विफलता दर 40% तक होती है। इस स्थिति की जांच के लिए मानक पशु मॉडल की कमी प्रगति में बाधा डालती है। हम निम्नलिखित प्रोटोकॉल को यूटेरोसेक्रल लिगामेंट सस्पेंशन और विवो तन्यता परीक्षण के लिए एक मॉडल के रूप में प्रस्तावित करते हैं।

Abstract

पेल्विक ऑर्गन प्रोलैप्स (पीओपी) एक आम पेल्विक फ्लोर डिसऑर्डर (पीएफडी) है जिसमें एक महिला के जीवन की गुणवत्ता को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित करने की क्षमता है। संयुक्त राज्य अमेरिका में प्रोलैप्स के इलाज के लिए लगभग 10% -20% महिलाएं पेल्विक फ्लोर मरम्मत सर्जरी से गुजरती हैं। पीएफडी मामलों के परिणामस्वरूप अकेले संयुक्त राज्य अमेरिका में कुल $ 26.3 बिलियन वार्षिक लागत होती है। इस बहुक्रियात्मक स्थिति का जीवन की गुणवत्ता पर नकारात्मक प्रभाव पड़ता है और फिर भी उपचार के विकल्प केवल हाल के दिनों में कम हो गए हैं। एक आम सर्जिकल विकल्प गर्भाशयसेक्रल लिगामेंट सस्पेंशन (यूएसएलएस) है, जो आमतौर पर योनि तिजोरी को श्रोणि में गर्भाशयसेक्रल लिगामेंट से चिपकाकर किया जाता है। इस मरम्मत में जाल वृद्धि वाले लोगों की तुलना में जटिलताओं की कम घटनाएं होती हैं, लेकिन 40% तक की अपेक्षाकृत उच्च विफलता दर के लिए उल्लेखनीय है। पेल्विक फ्लोर डिसफंक्शन का अध्ययन करने के लिए मानक पशु मॉडल की कमी को ध्यान में रखते हुए, लागत प्रभावी और सुलभ पशु मॉडल विकसित करने पर ध्यान देने के साथ इस क्षेत्र में नवाचार की तत्काल नैदानिक आवश्यकता है। इस पांडुलिपि में, हम यूएसएलएस के एक चूहे के मॉडल का वर्णन करते हैं जिसमें एक पूर्ण हिस्टेरेक्टॉमी शामिल है, जिसके बाद शेष योनि तिजोरी को यूटेरोसेक्रल लिगामेंट में स्थिर किया जाता है। इस मॉडल का लक्ष्य महिलाओं पर की गई प्रक्रिया की नकल करना है ताकि मॉडल का उपयोग करने में सक्षम हो सके ताकि रिपेरेटिव रणनीतियों की जांच की जा सके जो लिगामेंट अटैचमेंट की यांत्रिक अखंडता में सुधार करते हैं। महत्वपूर्ण रूप से, हम सर्जिकल हस्तक्षेप के बाद चुने हुए समय बिंदुओं पर इंटरफ़ेस अखंडता को चिह्नित करने के लिए एक सीटू तन्यता परीक्षण प्रक्रिया के विकास का भी वर्णन करते हैं। कुल मिलाकर, यह मॉडल भविष्य के अध्ययनों के लिए एक उपयोगी उपकरण होगा जो यूएसएलएस के माध्यम से पीओपी मरम्मत के लिए उपचार विकल्पों की जांच करता है।

Introduction

पेल्विक ऑर्गन प्रोलैप्स (पीओपी) एक आम पैल्विक फ्लोर विकार है जो दुनिया भर में लाखों महिलाओं को प्रभावित करता है, जिसमें एक महिला के जीवन के कई पहलुओं को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित करने की क्षमता होती है, खासकर1 साल की उम्र के साथ। विशेष रूप से, संयुक्त राज्य अमेरिका में लगभग 13% महिलाएं प्रोलैप्स या मूत्र असंयम2 के लिए सर्जरी से गुजरेंगी। गर्भावस्था और प्रसव के बाद सबसे आम स्थिति, प्रोलैप्स को पेल्विक अंगों के वंश की विशेषता है, मुख्य रूप से योनि और / या गर्भाशय के विभिन्न डिब्बे, पेरिटोनियल गुहा में उनकी सामान्य स्थिति से परे। यह योनि उभार या दबाव, आंत्र, मूत्राशय और यौन रोग के परेशान लक्षणों की ओर जाता है, और जीवन की समग्र रूप से कम गुणवत्ता। पीओपी के लिए अन्य जोखिम कारकों में मोटापा, तंबाकू का उपयोग, पुरानी खांसी और कब्ज शामिलहैं।

स्वस्थ महिलाओं में, पेल्विक फ्लोर अंगों को लेवेटर एनी मांसपेशियों, गर्भाशयसेक्रल लिगामेंट्स (यूएसएल), कार्डिनल लिगामेंट्स, पेल्विक साइडवॉल के संयोजी ऊतक अनुलग्नक और पेरिनेल बॉडी 4,5 की डिस्टल संरचनाओं द्वारा समर्थित किया जाता है। यूएसएल गर्भाशय और एपिकल योनि दोनों के लिए सबसे महत्वपूर्ण एपिकल सहायक संरचनाओं में से हैं, और इस प्रकार, अक्सर पीओपी (चित्रा 1) के सर्जिकल सुधार में उपयोग किया जाता है। यूएसएल से संरचनात्मक समर्थन त्रिक क्षेत्र में घने कोलेजनस संयोजी ऊतक से उपजा है जो बारीकी से पैक चिकनी मांसपेशियों में संक्रमण करता है। इस रचनात्मक ढाल के कारण, यूएसएल गर्भाशय और योनि मांसलता के साथ जुड़ा हुआ हो जाता है ताकि श्रोणिअंगों के लिए मजबूत समर्थन प्रदान किया जा सके 6,7. यूटेरोसेक्रल लिगामेंट सस्पेंशन (यूएसएलएस) में, यूएसएल को हिस्टेरेक्टॉमी के बाद योनि तिजोरी में सुरक्षित किया जाता है, जिससे योनि और आसपास की संरचनाओं को पेट के डिब्बे में उनकी शारीरिक स्थिति में बहाल किया जाता है। हालांकि, ट्रांसवेजाइनल या लैप्रोस्कोपिक मार्ग की परवाह किए बिना, यूएसएलएस प्रक्रिया कुछ अध्ययनों में 40% तक की अपेक्षाकृत उच्च विफलता दर से ग्रस्त है। एपिकल कम्पार्टमेंट प्रोलैप्स, जैसे यूएसएल के लिए मरम्मत के 5 साल बाद परेशान योनि उभार के लक्षणों की पुनरावृत्ति दर, एक बड़े बहुआयामी यादृच्छिक नियंत्रित परीक्षण9 में लगभग 40% थी। उसी परीक्षण में, 5 साल में आवर्तक प्रोलैप्स के लिए उपचार लगभग 10% था। इस उच्च विफलता दर के तंत्र का अध्ययन नहीं किया गया है, लेकिन योनि और आसपास की संरचनाओं को उनकी शारीरिक स्थिति में बहाल करने के लिए चिकनी मांसपेशी क्षेत्र के बजाय यूएसएल10,11 के घने कोलेजनस क्षेत्र में सीवन प्लेसमेंट की आवश्यकता होती है। इसलिए, उच्च विफलता दर देशी ग्रीवा-यूएसएल लगाव में देखे गए पूर्ण एकीकरण की तुलना में शल्य चिकित्सा से गठित योनि-यूएसएल इंटरफ़ेस के यांत्रिक और रचनात्मक बेमेल के कारण हो सकती है।

इन विकारों के इलाज का आर्थिक प्रभाव भी उल्लेखनीय है, अमेरिका में एम्बुलेटरी केयर12 पर सालाना लगभग $ 300 मिलियन खर्च किए जाते हैं, और सर्जिकल प्रक्रियाओं के लिए प्रत्यक्ष लागत में सालाना $ 1 बिलियन से अधिक खर्च किएजाते हैं। इन स्थितियों के इलाज के लिए समर्पित विशाल आर्थिक संसाधनों के बावजूद, कई प्रोलैप्स सर्जरी से उत्पन्न जटिलताएं हतोत्साहित करती हैं। उदाहरण के लिए, पॉलीप्रोपाइलीन जाल-आधारित एपिकल प्रोलैप्स मरम्मत, जैसे कि सैक्रोकोलोपोपेक्सी, देशी ऊतक मरम्मत14 की तुलना में उच्च सफलता दर प्रदान करते हैं, लेकिन जाल जोखिम या क्षरण जैसी संभावित जटिलताओं की कीमत पर। एफडीए को अकेले 2008 और 2010 के बीच जाल जटिलताओं से संबंधित लगभग 3,000 शिकायतें मिलीं। यह एफडीए द्वारा अप्रैल 201915 में पीओपी के लिए सभी ट्रांसवेजाइनल रूप से रखे गए जाल उत्पादों के निर्माण और बिक्री को रोकने के आदेश में समाप्त हुआ। इसलिए, पॉलीप्रोपाइलीन के अलावा अन्य सामग्रियों की एक मजबूत नैदानिक आवश्यकता है, और मॉडल जिनके साथ उनका परीक्षण किया जाता है, जो देशी ऊतक प्रोलैप्स की मरम्मत को बढ़ा सकते हैं और अकेले सीवन के साथ पारंपरिक तकनीकों की तुलना में सफलता दर में वृद्धि कर सकते हैं।

2019 में एफडीए की घोषणा के बाद से, अधिकांश पेल्विक सर्जनों ने प्रोलैप्स की मरम्मत के लिए ट्रांसवेजाइनल-प्लेस मेष का उपयोग करना बंद कर दिया है, जिससे जांचकर्ताओं को देशी ऊतक मरम्मतको बढ़ाने के लिए नए ऊतक इंजीनियरिंग दृष्टिकोण की तलाश करने के लिए प्रेरित किया गया है जैसे कि मेसेनकाइमल स्ट्रोमल कोशिकाओं (एमएससी) 9,20 के साथ। . फोकस में इस बदलाव के साथ, पशु मॉडल के शोधन की तत्काल आवश्यकता है जो नई सामग्रियों के विकास में सहायता कर सकते हैं; इस प्रक्रिया में चुनौती लागत के साथ नैदानिक प्रासंगिकता को संतुलित कर रही है। इस अंत तक, पेल्विक ऑर्गन प्रोलैप्स का अध्ययन करने वाले बुनियादी विज्ञान और नैदानिक जांचकर्ताओं ने अब तक कई पशु मॉडल का लाभ उठाया है, जिसमें चूहे, चूहे, खरगोश, भेड़, सूअर और गैर-मानव प्राइमेट्स19 शामिल हैं। एक इष्टतम पशु मॉडल की पहचान करने की प्रक्रिया चुनौतीपूर्ण है, क्योंकि मनुष्य द्विपाद हैं, कोई पूंछ नहीं है, और अन्य स्तनधारी प्रजातियों की तुलना में एक दर्दनाक जन्म प्रक्रियाहै। सूअर21 का उपयोग रोबोटिक सैक्रोकोल्पोपेक्सी का अनुकरण करने के लिए किया गया है, जबकि भेड़ का उपयोग योनि प्रोलैप्स मरम्मत22 का अनुकरण करने के लिए किया गया है। ये पशु मॉडल, जबकि चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक हैं, लागत और रखरखाव द्वारा व्यवहार्यता में सीमित हैं। गैर-मानव प्राइमेट्स का उपयोग प्रोलैप्स के रोगजनन का अध्ययन करने के लिए किया गया है; विशेष रूप से गिलहरी बंदर मनुष्यों के अलावा एकमात्र प्रजातियों में से एक हैं जो सहज प्रोलैप्स विकसित कर सकते हैं, जिससे उन्हें सबसे प्रासंगिक पशु मॉडल20 में से एक बना दिया जाता है। गैर-मानव प्राइमेट्स का उपयोग स्त्री रोग संबंधी शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं जैसे कि सैक्रोकोलपोपेक्सी23 और गर्भाशय प्रत्यारोपण24 का अध्ययन करने के लिए भी किया गया है। उनके भेड़ और सूअर समकक्षों के समान, प्रोलैप्स के पशु मॉडल के रूप में गैर-मानव प्राइमेट्स की प्राथमिक सीमा रखरखाव, देखभाल और बोर्डिंगकी लागत है।

यद्यपि कृंतक श्रोणि मनुष्योंकी तुलना में बहुत कम सिर-से-जन्म नहर आकार अनुपात के साथ क्षैतिज रूप से उन्मुख है, चूहे यूएसएलएस सर्जरी के छोटे जानवरों के अध्ययन के लिए उपयुक्त हैं क्योंकि उनके पास मानव यूएसएल25 की तुलना में समान यूएसएल शरीर रचना विज्ञान, सेलुलरता, हिस्टोलॉजिकल आर्किटेक्चर और मैट्रिक्स संरचना है। इसके अलावा, वे रखरखाव और बोर्डिंग के मामले में फायदेमंद हैं। इन लाभकारी विशेषताओं के बावजूद, यूएसएलएस मरम्मत के चूहे के मॉडल की कोई प्रकाशित रिपोर्ट नहीं है। इसलिए, उद्देश्य मल्टीपैरस लुईस चूहे में हिस्टेरेक्टॉमी और यूएसएलएस के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करना है। यह प्रोटोकॉल उन जांचकर्ताओं के लिए फायदेमंद होगा जो इस सुलभ पशु मॉडल का उपयोग करके पीओपी के पैथोफिज़ियोलॉजी और सर्जिकल घटकों का अध्ययन करने का लक्ष्य रखते हैं।

Figure 1
चित्र 1: पेल्विक ऑर्गन प्रोलैप्स( ए) पेरिटोनियल गुहा में अंगों का सामान्य अभिविन्यास और (बी) प्रोलैप्स होने पर नाटकीय अंग विघटन। हिस्टेरेक्टॉमी के बाद, (सी) यूटेरोसेक्रल लिगामेंट निलंबन योनि और आसपास की संरचनाओं को उनकी उचित शारीरिक स्थिति में पुनर्स्थापित करता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Protocol

सभी संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी) दिशानिर्देशों का पालन करें, शुरू करने से पहले सभी पशु प्रक्रियाओं के लिए अनुमोदन प्राप्त करें। सड़न रोकनेवाला सर्जरी तकनीक के लिए आवश्यकताएं गाइड26 और पशु कल्याण विनियम27 से पाई जा सकती हैं। अध्ययन वर्जीनिया संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति प्रोटोकॉल संख्या 4332-11-20 विश्वविद्यालय द्वारा अनुमोदित किया गया था। मल्टीपैरस (दो कूड़े) मादा प्रजनक प्राप्त करें। चूहों को अमेरिकन एसोसिएशन फॉर द एक्रेडिटेशन ऑफ लेबोरेटरी एनिमल केयर द्वारा मान्यता प्राप्त विवेरियम में रखा जाना चाहिए और भोजन और पानी एड लिबिटम प्रदान किया जाना चाहिए। इस अध्ययन में जानवर चार्ल्स नदी से प्राप्त लुईस चूहे थे और दो-कूड़े की आवश्यकता को समायोजित करने के लिए 4 से 6 महीने की उम्र के बीच थे। जानवरों को 12 घंटे के प्रकाश-अंधेरे चक्र पर बनाए रखा गया था।

1. गर्भाशयसेक्राल लिगामेंट सस्पेंशन का उपयोग करके पेल्विक ऑर्गन प्रोलैप्स की मरम्मत

  1. जीवित पशु सर्जरी के लिए उपकरण और शल्य चिकित्सा क्षेत्र की तैयारी
    1. सर्जिकल क्षेत्र को इस तरह से तैयार करें कि सर्जिकल बोर्ड को बाँझ जलरोधक पैड के साथ गर्म पानी हीटिंग पैड का उपयोग करके 37 डिग्री सेल्सियस तक गर्म किया जाए। ब्लीच मुक्त सतह कीटाणुनाशक का उपयोग करके सर्जिकल बोर्ड और सर्जिकल क्षेत्र की बाँझपन सुनिश्चित करें, जिसके बाद 70% इथेनॉल पोंछा हो।
    2. सर्जिकल उपकरणों, सर्जिकल स्पंज (धुंध), कपास स्वैब और एक डिस्पोजेबल ड्रेप सहित सभी ऑटोक्लेव सुरक्षित आपूर्ति को निष्फल करने के लिए ऑटोक्लेव गर्मी नसबंदी का उपयोग करें। बाँझ पैक किए गए सर्जिकल दस्ताने प्राप्त करें।
    3. बाँझ पैक किए गए स्केलपेल ब्लेड और सीवन के साथ इलेक्ट्रिक क्लिपर, ऑप्थेल्मिक मलहम, इथेनॉल वाइप्स, कपास स्वैब और आयोडीन समाधान प्राप्त करें, और वर्क बेंच पर रखें।
  2. जीवित पशु सर्जरी के लिए पशु तैयारी
    1. सावधानी से जानवर को 2% आइसोफ्लुरेन के साथ आपूर्ति किए गए संज्ञाहरण कक्ष में रखें और संज्ञाहरण के उचित तल तक पहुंचने के बाद जानवर का वजन करें। उचित एनेस्थेटाइजेशन की पुष्टि तब की जाती है जब जानवर पैर की अंगुली चुटकी के प्रति गैर-उत्तरदायी होता है।
    2. जानवर को सर्जरी बोर्ड पर 2% आइसोफ्लुरेन के साथ आपूर्ति किए गए संज्ञाहरण शंकु में सुरक्षित रूप से नाक के साथ प्रवण स्थिति में रखें। प्रत्येक जानवर की आंखों पर नेत्र मरहम लागू करें।
    3. ओपिओइड एनाल्जेसिक और एनएसएआईडी एनाल्जेसिक को चमड़े के नीचे प्रशासित करें (सामग्री की तालिका)।
    4. जानवर को लापरवाह स्थिति में रखें, जैसा कि चित्र 2 में दिखाया गया है, और एक्सीफाइड प्रक्रिया से पेट के फर को मूत्रमार्ग छिद्र (8 सेमी x 4 सेमी) तक शेव करें। चीरा साइट तैयार करने के लिए आयोडीन और अल्कोहल के तीन चार्ज के साथ पेट को निष्फल करें।
      नोट: यदि शेविंग के परिणामस्वरूप रक्तस्राव होता है, तो आयोडीन और अल्कोहल प्रेप पैड के साथ त्वचा तैयार करने से पहले दबाव के साथ हेमोस्टेसिस प्राप्त करें। 30 सेकंड के लिए त्वचा पर आयोडीन बनाए रखें।
    5. यदि कोई सर्जिकल सहायक उपलब्ध नहीं है, तो बाँझ उपकरण ट्रे पर बाँझ आपूर्ति और उपकरण जमा करें, जिसमें बाँझ कपास स्वैब, ड्रेप (एस), स्पंज (धुंध), सर्जिकल ब्लेड, सीवन और सर्जिकल मार्कर (वैकल्पिक) शामिल हैं। यदि एक सर्जिकल सहायक उपलब्ध है, तो इस चरण को छोड़ा जा सकता है, और सहायक चरण 1.3.1 के बाद बाँझ उपकरण प्रदान कर सकता है।
  3. हिस्टेरेक्टॉमी और गर्भाशयसेक्राल लिगामेंट सस्पेंशन (यूएसएलएस)
    1. सर्जिकल गाउन, हेड कवर, मास्क और बाँझ दस्ताने पहनें। जानवर को बाँझ क्षेत्र के साथ लपेटें, केवल पेट को उजागर छोड़ दें।
    2. एक स्केलपेल ब्लेड का उपयोग करके xiphoid प्रक्रिया के ठीक नीचे से निचली निप्पल रेखा तक लिनिया अल्बा के नीचे 7 सेमी चीरा लगाएं। चीरा मूत्रमार्ग छिद्र से ~ 0.5-1.0 सेमी रोस्ट्रल समाप्त होना चाहिए। फिर, नीचे की मांसपेशियों की परत के माध्यम से एक चीरा लगाएं। रक्तस्राव को रोकने के लिए पेट की दीवार रक्त वाहिका से बचें।
    3. पेट के प्रत्यावर्तक को इकट्ठा करें और पेट की गुहा का निरीक्षण करें (चित्रा 3 ए)। आईरिस फोर्सप्स का उपयोग करके, धीरे से बाएं गर्भाशय के सींग का पता लगाएं। गर्भाशय आंत्र के अंदर गहरा होता है, जो अक्सर पेरिटोनियल गुहा में प्रवेश करने पर पहली बार सामना की जाने वाली संरचना होती है। पहले अंडाशय (चित्रा 3 बी) और संबंधित डिम्बग्रंथि वसा पैड की पहचान करना फायदेमंद है।
    4. धीरे-धीरे बाएं गर्भाशय के सींग को एक ग्रापर या मच्छर क्लैंप के साथ ऊपर उठाएं और मच्छर क्लैंप का उपयोग करके अंडाशय और डिंबवाहिनी के नीचे सींग को दबाकर हिस्टेरेक्टॉमी शुरू करें। अंडाशय नाजुक संरचनाएं हैं और हेरफेर के साथ आसानी से क्षतिग्रस्त या विकृत हो जाते हैं। गर्भाशय के सींगों को ऊपर उठाते समय ध्यान रखें; इसे प्राप्त करने के लिए सींग को अंडाशय से एक सुरक्षित दूरी पर पकड़ें।
    5. माइक्रो कैंची का उपयोग करके गर्भाशय के सींग से आसन्न वाहिका, संयोजी ऊतक और वसा को दबाकर और ट्रिम करके हिस्टेरेक्टॉमी जारी रखें। रक्तस्राव को कम करने के लिए हटाने से पहले संयोजी ऊतक को दबाएं। क्लैंप को गर्भाशय इंटरफ़ेस के जितना संभव हो उतना करीब रखें, यूटेरोसर्विक जंक्शन (जिसे हॉर्न द्विभाजन भी कहा जाता है) तक।
    6. मच्छर बल का उपयोग करके द्विभाजन बिंदु के पास गर्भाशय के सींग पर क्लैंप करें (चित्रा 4 ए-सी)। रक्तस्राव से बचने के लिए निचले सींग को क्लैंप से अलग किया जाता है। यह गर्भाशय-ग्रीवा जंक्शन (गर्भाशय ग्रीवा के लिए सिर्फ रोस्ट्रल) और गर्भाशय-ट्यूबल लिगेशन बिंदु के बीच स्थित है। हिस्टेरेक्टॉमी (चित्रा 4 डी) के बाद योनि तिजोरी बनी रहेगी।
      नोट: चूहे की वाहिकाओं के छोटे कैलिबर के कारण, अस्थायी क्लैंप के साथ गर्भाशय के स्टंप का बंधाव इस सर्जरी के लिए पर्याप्त था। हालांकि, इस तकनीक को इलेक्ट्रोकेटरी या सीवन लिगेशन के साथ पेडिकल्स की सीलिंग के साथ आवश्यकतानुसार संशोधित किया जा सकता है।
    7. कुल हिस्टेरेक्टॉमी करने के लिए दाएं गर्भाशय के सींग पर चरण 1.3.3-1.3.6 दोहराएं।
    8. निचले श्रोणि को उजागर करने के लिए पेट के पीछे हटने वाले को समायोजित करें। उजागर योनि तिजोरी और पेल्विक फ्लोर सपोर्ट लिगामेंटल और संयोजी ऊतकों का निरीक्षण करें, जिन्हें योनि और गर्भाशय ग्रीवा से जुड़ा हुआ देखा जा सकता है। यदि संभव हो, तो द्विपक्षीय रूप से मूत्रवाहिनी की पहचान करें, जो अंडाशय के लिए सिर्फ औसत दर्जे का है।
    9. चित्र 5 ए में दिखाए गए गर्भाशयसेक्रल स्नायुबंधन28,29 की पहचान करें, जो गर्भाशय के सींगों (योनि तिजोरी) के शेष स्टंप के ठीक नीचे गर्भाशय ग्रीवा से जुड़ा पाया जा सकता है। स्नायुबंधन का पता थैली की ओर एक सेफलाड-मेडियल ओरिएंटेशन में लगाया जाता है।
    10. एक छोटी, पतली सुई पर 3-0 पॉलीडायक्सानोन सीवन का उपयोग करके, बाएं गर्भाशयसेक्रल लिगामेंट के माध्यम से एक सिलाई रखें। सिलाई को स्नायुबंधन पर ऊंचा रखें, थैली के करीब।
    11. टग ऑन सिलाई यह सुनिश्चित करने के लिए कि यह गर्भाशयसेक्रल लिगामेंट पर कब्जा कर लिया है- यूएसएल संरचना मलाशय के पीछे मूल डाइविंग के साथ गर्भाशय ग्रीवा में प्रवेश करती है जहां यह थैली से जुड़ती है। फिर, यह सुनिश्चित करने के लिए मूत्रवाहिनी की पहचान करें कि इसे यूटेरोसेक्रल सिलाई में शामिल या गांठदार नहीं किया गया है।
    12. फिर, योनि तिजोरी (चित्रा 5 बी) के बाएं पहलू के माध्यम से बाएं पॉलीडायक्सानोन सिलाई को पारित करें, योनि कफ के पूर्ववर्ती और पीछे दोनों पहलुओं को शामिल करने की देखभाल के साथ। दाईं ओर यूएसएलएस प्रक्रिया को पूरा करने के लिए चरणों को दोहराएँ। यदि वांछित हो, तो द्विपक्षीय रूप से कई टांके लगाए जा सकते हैं।
    13. एक बार जब गर्भाशयसेक्रल टांके द्विपक्षीय रूप से लगाए जाते हैं, तो एक वर्गाकार गाँठ का उपयोग करके सीवन को सुरक्षित रूप से बांधें, जैसा कि चित्र 5 सी में दिखाया गया है, जैसे कि योनि तिजोरी को थैली की ओर ऊंचा किया जाता है; यह गर्भाशयसेक्रल लिगामेंट निलंबन को पूरा करता है।
  4. सर्जिकल घाव को बंद करना
    1. पेट की सामग्री को पेरिटोनियल गुहा के भीतर उनकी शारीरिक स्थिति में वापस बदलें। पेट की दीवार (पेरिटोनियम, प्रावरणी, मांसपेशियों) की गहरी परतों को 4-0 से 6-0 पॉलीग्लैक्टिन 910 या पॉलीडाइक्सानोन सीवन के निरंतर सीवन पैटर्न के साथ बंद करें।
    2. 4-0 से 6-0 पॉलीडायक्सानोन या पॉलीग्लैक्टिन 910 के रनिंग सबक्यूटिकुलर (या बाधित) स्टिच के साथ त्वचा को बंद करें। सर्जिकल साइट संक्रमण प्रोफिलैक्सिस के लिए आवश्यकतानुसार एंटीबायोटिक को चमड़े के नीचे प्रशासित करें।
    3. शल्य चिकित्सा के बाद की निगरानी तब तक करें जब तक कि जानवर उरोस्थि पुनरावृत्ति बनाए रखने के लिए पर्याप्त चेतना प्राप्त न कर ले। पूरी तरह से ठीक होने तक जानवर को सामाजिक आवास में वापस न करें।

Figure 2
चित्रा 2: लाइव सर्जरी के लिए पशु तैयारी। चीरा साइट के आसपास के क्षेत्र से फर को हटाना उचित सड़न रोकनेवाला तकनीक के लिए आवश्यक है। पैनल (ए) और (बी) में दिखाए गए क्षेत्र दिशानिर्देश हैं। शोधकर्ताओं को पर्याप्त बालों को हटादेना चाहिए जैसे कि बाँझ उपकरण सर्जरी के दौरान बालों के साथ कोई संपर्क नहीं करते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 3
चित्र 3: अंडाशय का संरक्षण। गर्भाशय के सींग आमतौर पर दिखाई नहीं देते हैं जब पेट पहली बार खोला जाता है, जैसा कि (ए) में दिखाया गया है। एक बार जब एक सींग स्थित होता है और (बी) अंडाशय और डिंबवाहिनी को खोजने के लिए अनुसरण किया जाता है जहां वे सींग से जुड़ते हैं, तो सींग के शीर्ष को दबाया जा सकता है, और हिस्टेरेक्टॉमी शुरू करने के लिए सींग को अलग किया जा सकता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 4
चित्र 4: गर्भाशय के सींगों को हटाना। चूहे में हिस्टेरेक्टॉमी में (ए) गर्भाशय के दोनों सींग (बी) गर्भाशय ग्रीवा जंक्शन पर क्लैंप किए जाते हैं और (सी) एक्साइज्ड होते हैं। प्रत्येक सींग से योनि तिजोरी (डी) ग्रीवा / गर्भाशय स्टंप (तीर) के साथ रहती है जो उन्हें जोड़ती है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 5
चित्रा 5: यूटेरोसेक्रल लिगामेंट निलंबन। (ए) बनाई गई योनि तिजोरी संरचनाओं के संबंध में गर्भाशयसेक्रल स्नायुबंधन का अभिविन्यास। यूटेरोसेक्रल लिगामेंट सस्पेंशन (यूएसएलएस) की मरम्मत के लिए सीवन रखते समय, (बी) सीवन गर्भाशयसेक्रल लिगामेंट को पकड़ते हैं और फिर योनि कफ के पूर्ववर्ती और पीछे दोनों पहलुओं से गुजरते हैं। (सी) गर्भाशयसेक्रल लिगामेंट के लिए सुरक्षित, योनि तिजोरी अब थैली की ओर ऊंचा सेफलाड है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

2. एकअक्षीय तन्यता परीक्षण

नोट: उपयोग की जाने वाली परीक्षण प्रणाली और सॉफ्टवेयर अंशांकन और परीक्षण के लिए निर्माता के दिशानिर्देशों का पालन करते हुए संचालित किया गया था। सभी परीक्षण 22 डिग्री सेल्सियस पर हुए।

  1. नमूना तैयार करना
    1. एक आईएसीयूसी-अनुमोदित औषधीय प्रक्रिया का उपयोग करके चूहे को इच्छामृत्यु करें। द्वितीयक भौतिक विधि के माध्यम से मृत्यु सुनिश्चित करें। यहां, कार्डियक पंचर के बाद सीओ2 इनहेलेशन का उपयोग किया गया था। तन्य यांत्रिक परीक्षण की तैयारी में योनि तिजोरी को उजागर करें। वर्तमान अध्ययन में, देशी यूटेरोसेक्रल लिगामेंट्स (नियंत्रण) पर तन्यता परीक्षण करें, साथ ही उन जानवरों पर भी जो ऊपर वर्णित (पीओपी) के अनुसार गर्भाशयसेक्राल लिगामेंट निलंबन से गुजरे थे।
    2. सर्जरी के 24 सप्ताह बाद सीटू में स्नायुबंधन का परीक्षण करें। सीवन के पूर्ण पुन: अवशोषण की अनुमति देने के लिए न्यूनतम 8 सप्ताह का टर्मिनल टाइमपॉइंट सुझाया गया है।
      1. मानवीय इच्छामृत्यु के बाद, पेट को उजागर करने के लिए लिनिया अल्बा के नीचे एक चीरा लगाएं।
      2. योनि तिजोरी दिखाई देने तक वसा ऊतक को विच्छेदित करना शुरू करें। पेट की वसा पैड को तब तक विच्छेदित करना जारी रखें जब तक कि बरकरार यूएसएल स्पष्ट रूप से दिखाई न दें (नियंत्रण जानवर, चित्रा 6 ए) या गर्भाशयसेक्रल लिगामेंट और योनि तिजोरी के बीच का जंक्शन दिखाई दे (पीओपी जानवर, चित्रा 6 सी)। वसा ऊतक को हटाने के लिए जंक्शन पर न खींचने के लिए सावधानी बरतें, बल्कि नमूनों के बीच स्थिरता बनाए रखने के लिए माइक्रो-कैंची के साथ सावधानीपूर्वक कटौती का उपयोग करें।
      3. एक लचीले शासक का उपयोग करके, गर्भाशयसेक्रल सम्मिलन (मलाशय के पीछे) और योनि तिजोरी के बीच की दूरी को मापें। यह मान ऊतक की मूल लंबाई है।
        नोट: नियंत्रण यूएसएल के लिए ऊतक की मूल लंबाई, गेज लंबाई 13.4 ± 0.5 मिमी मापा गया, जबकि यूएसएल मरम्मत के लिए गेज लंबाई 12.8 ± 0.4 मिमी मापा गया।
      4. बरकरार यूएसएल (नियंत्रण, चित्रा 6 बी) या यूएसएलएस जंक्शन (पीओपी, चित्रा 6 डी) के पीछे थ्रेड नाभि टेप इस तरह से है कि ऊतक गर्भनाल टेप पर केंद्रित है। ऊतक की ऊंचाई और चौड़ाई को मापें जहां यह डिजिटल कैलिपर्स का उपयोग करके गर्भनाल टेप के साथ प्रतिच्छेद करता है। इन मानों का उपयोग क्रॉस-अनुभागीय क्षेत्र की गणना करने के लिए किया जाएगा।
      5. बेस एडाप्टर के माध्यम से एक बड़ी संपीड़न प्लेट (सामग्री की तालिका) संलग्न करें और जानवर को शीर्ष पर रखें ताकि नमूना ग्रिप होल्डर के नीचे केंद्रित हो।
  2. तन्यता परीक्षण
    1. सॉफ्टवेयर में तन्यता परीक्षण व्यवस्था प्रोग्राम करें: पूर्व-लोड, पूर्व-शर्त, विफलता को खींचें। यह पिछले पेल्विक फ्लोर29 और प्रजनन ऊतक30 मैकेनिकल परीक्षण प्रोटोकॉल का पालन करता है।
    2. तन्यता परीक्षण की तैयारी में उपकरण स्थापित करें। वर्तमान अध्ययन के लिए, चित्र 7 में दिखाए गए संपीड़न प्लेटन को संलग्न करने के लिए 10 एन लोड सेल, एक 3 डी मुद्रित ग्रिप और एक बेस एडाप्टर का उपयोग करें।
      नोट: कोई भी आधार सेट-अप जो जानवर के पूर्ण आकार का समर्थन कर सकता है स्वीकार्य है। किसी भी ग्रिप का उपयोग करें जो सुरक्षित रूप से गर्भनाल टेप को पकड़ सके। इस परीक्षण में एक कस्टम 3 डी मुद्रित धारक और पिछले अध्ययनों से पकड़31,32 का उपयोग किया गया था। एसटीएल फाइलों को पूरक फ़ाइलों के रूप में शामिल किया गया था।
      1. जानवर को इस तरह से रखें कि नमूना पकड़ के नीचे केंद्रित हो (चित्रा 8 ए)। जानवर को प्लेटन में सुरक्षित करके नमूने के आसपास के श्रोणि क्षेत्र को स्थिर करें (चित्रा 8 बी)।
      2. लोड सेल को कम करें ताकि गर्भनाल टेप की पूंछ आसानी से पकड़ तक पहुंच जाए। नमूना हेरफेर से बचने के लिए टेप को सुस्त छोड़ते हुए, गर्भनाल टेप को पकड़ में सुरक्षित रखें।
    3. सॉफ़्टवेयर इंटरफ़ेस में पूर्व-कंडीशनिंग परीक्षण खोलें और नमूना नाम के साथ परीक्षण लेबल करें। सुनिश्चित करें कि पूर्व-कंडीशनिंग विधि में पूर्व-लोड चरण शामिल है।
    4. प्री-कंडीशनिंग परीक्षण शुरू करने के लिए क्लिक करें, जो नमूना को 0.015 एन पर प्री-लोड करेगा। एक बार पूर्व-लोड बल स्थिर होने के बाद, परीक्षण 30 सेकंड के लिए 0.1 मिमी / सेकंड की बढ़ाव दर पर नमूने को पूर्व शर्त देगा। ऊतक को 1 मिनट के लिए आराम करने दें। प्रतीक्षा करते समय, पुल-टू-विफलता परीक्षण व्यवस्था लोड करें।
      नोट: उपकरण सीमाओं और परीक्षण स्थितियों के आधार पर प्री-लोड बल भिन्न हो सकता है। पिछले अध्ययनों का संदर्भ लें जहां रिपोर्ट किए गए प्री-लोड 0.015 एन से 0.1 एन 29,33,34,35,36 तक हैं।
    5. परीक्षण व्यवस्था खोलें जो विफलता को खींचने के लिए प्रोग्राम किया गया है। नमूना नाम के साथ परीक्षण को लेबल करें और अगली विंडो पर जाने के लिए ओके पर क्लिक करें। नमूने की गेज लंबाई इनपुट करें और फिर परीक्षण पृष्ठ पर संक्रमण के लिए अगला पर क्लिक करें।
    6. सभी को बैलेंस करें और स्टार्ट पर क्लिक करें। परीक्षण को 0.1 मिमी / सेकंड की बढ़ाव दर पर चलने दें जब तक कि ऊतक को विफलता के लिए खींच नहीं लिया जाता है। परीक्षण लोड-विस्थापन डेटा का उत्पादन करेगा।
  3. तन्यता परीक्षण के लिए तनाव, तनाव और मापांक की गणना
    1. लोड-विस्थापन डेटा, क्रॉस-सेक्शनल क्षेत्र और नमूने से गेज लंबाई का उपयोग करके, तनाव (एमपीए) और तनाव (%) की गणना करें जैसा कि पहले 37,38,39,40,41 बताया गया था। नीचे दिखाए गए समीकरण 1 और समीकरण 2 का उपयोग करें। ध्यान दें कि परीक्षण के दौरान टेप के खिंचाव को भी इन गणनाओं में शामिल किया जाना चाहिए।
      Equation 1     समीकरण 1
      Equation 2     समीकरण 2
      1. लोड-विस्थापन वक्र (चित्रा 9 ए, डी) से, कठोरता (रैखिक ढलान, एन / मिमी) और अंतिम भार की गणना करें। तनाव तनाव वक्र से, स्पर्शरेखा मापांक (रैखिक ढलान, एमपीए) और अंतिम तनाव की गणना करें। तनाव तनाव वक्र के रैखिक क्षेत्र को चित्र 9 बी, ई में दोनों प्रयोगात्मक समूहों के लिए चित्रा 9 सी, एफ में दिखाए गए इस क्षेत्र से गणना स्पर्शरेखा मापांक के साथ नोट किया गया है।
        नोट: कठोरता और स्पर्शरेखा मापांक दोनों के लिए, बिंदुओं की एक खिड़की चुनकर रैखिक भाग की पहचान करें जो रैखिक प्रतिगमन37,41 के लिए आर2 मान को अधिकतम करता है।

Figure 6
चित्रा 6: एकअक्षीय तन्यता परीक्षण के लिए नमूना तैयारी। (ए) उजागर नियंत्रण यूएसएल से पहले (बी) गर्भनाल टेप को ऊतक के पीछे पिरोया जाता है। (सी) तन्यता परीक्षण की तैयारी में ऊतक के पीछे पिरोए गए गर्भनाल टेप के साथ सीवन के पूर्ण विघटन के बाद यूएसएल-योनि तिजोरी जंक्शन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 7
चित्र 7: यांत्रिक परीक्षण प्रणाली। (A) तन्यता परीक्षण मोड में परीक्षण प्रणाली (B) 3D मुद्रित धारक के साथ उपयोग की जाती है और (C) 3D मुद्रित नमूना ग्रिप को पकड़ में सुधार करने के लिए बनावट पट्टी के साथ पूर्ण किया जाता है। पैनल (डी) में दिखाए गए टुकड़ों का कॉन्फ़िगरेशन। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 8
चित्र 8: तन्यता परीक्षण का सेट-अप। (A) नमूना पकड़ और धारक के नीचे केंद्रित है। (बी) नमूने के आसपास के जानवर और ऊतक को तन्यता परीक्षण की शुरुआत से पहले स्थिर रखा जाता है। जैसा कि इनसेट छवि द्वारा दिखाया गया है, रुचि के ऊतक को अलग करने के लिए आसपास के ऊतक को सुरक्षित करना आवश्यक है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Figure 9
चित्र 9: तन्यता परीक्षण डेटा आउटपुट और विश्लेषण का उदाहरण। (A) नियंत्रण नमूने के लिए लोड-विस्थापन वक्र के बाद (B) तनाव तनाव विश्लेषण और (C) रेखा वक्र फिट समीकरण का ढलान एमपीए में स्पर्शरेखा मापांक दिखाता है। (डी-एफ) यूएसएलएस नमूने के लिए एक ही प्रक्रिया दिखाता है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Representative Results

सर्जिकल व्यवहार्यता और गर्भाशयसेक्रल सीवन प्लेसमेंट
किसी भी जानवर में हिस्टेरेक्टॉमी या यूटेरोसेक्रल लिगामेंट सस्पेंशन से संबंधित कोई इंट्राऑपरेटिव जटिलताएं नहीं थीं। गर्भाशय के सींगों को हटाने के दौरान कम से कम रक्तस्राव हुआ था, बशर्ते कि हटाने से पहले आसन्न वाहिका को दबा दिया गया हो। सीमित रक्तस्राव ने सीवन प्लेसमेंट के लिए गर्भाशयसेक्रल स्नायुबंधन के अच्छे विज़ुअलाइज़ेशन की अनुमति दी और इंट्रा-ऑपरेटिव आंत्र, मलाशय, मूत्रवाहिनी या मूत्राशय की चोट को रोका। सीवन के प्लेसमेंट के बाद, नवगठित यूएसएल-योनि वॉल्ट जंक्शन ने गर्भाशय ग्रीवा / गर्भाशय स्टंप की गति को रोक दिया जैसा कि चित्र 5 सी में दिखाया गया है। पहले तीन पोस्टऑपरेटिव दिनों के दौरान, जानवरों को दैनिक, और फिर प्रयोग के अंत तक द्वि-साप्ताहिक आधार पर जांच की गई थी। सर्जरी के समय प्रशासित विस्तारित-रिलीज ओपिओइड और एनएसएआईडी एनाल्जेसिक के साथ, अतिरिक्त एनाल्जेसिक अनावश्यक पाए गए। 16 पशु सर्जरी (नियंत्रण और यूएसएलएस समूहों दोनों के लिए एन = 8) के साथ हमारे अनुभव के आधार पर, सर्जरी के बाद पहले सप्ताह में वजन में गिरावट की उम्मीद की जानी चाहिए, जिसमें सर्जरी के दिन के वजन से 5.7 ± 1.4% की औसत हानि होती है। जैसा कि अपेक्षित था, चूहों ने बाद के 23 हफ्तों में धीरे-धीरे वजन बढ़ाया, प्रयोग के दौरान 15.1 ± 4.5% का औसत वजन बढ़ गया।

यूएसएलएस मरम्मत का यांत्रिक परीक्षण
यूएसएलएस मरम्मत की कार्यक्षमता को प्रदर्शित करने के लिए, एकअक्षीय तन्यता परीक्षण किया गया था। चुने हुए पोस्ट-ऑपरेटिव टाइमपॉइंट पर जानवर की इच्छामृत्यु के बाद, इस अध्ययन में 24 सप्ताह, सर्जिकल क्षेत्र को यूएसएल-योनि वॉल्ट जंक्शन की कल्पना करने के लिए सावधानीपूर्वक विच्छेदित किया जाना चाहिए जैसा कि चित्रा 6 ए में दिखाया गया है। अन्य सहायक संरचनाओं और श्रोणि अंगों29,42 के साथ चूहे यूएसएल का परीक्षण करने के लिए अन्य पद्धतियों की तुलना में, यहां वर्णित विधि एक अलग तरीके से चूहे यूएसएल का परीक्षण करने वाली पहली विधि है। इस अध्ययन में प्रयुक्त गर्भनाल टेप को रणनीतिक रूप से इसके लचीलेपन के लिए चुना गया था क्योंकि टेप अनुपालन ने तन्यता परीक्षण तैयारी के दौरान ऊतक के न्यूनतम व्यवधान की अनुमति दी थी। इसलिए, लोड विस्थापन डेटा को गर्भनाल टेप द्वारा योगदान की गई छोटी मात्रा के लिए समायोजित किया जाना चाहिए। चित्रा 9 एक विशिष्ट तनाव-तनाव प्लॉट का एक उदाहरण प्रदान करने वाले चित्रा 9 ए के साथ तन्यता परीक्षण के माध्यम से प्राप्त डेटा का एक उदाहरण प्रदान करता है। तनाव-तनाव डेटा की रिपोर्टिंग की सिफारिश की जाती है क्योंकि यह जानकारी सामान्यीकृत है और नमूनों के आकारसे स्वतंत्र है और अध्ययनों में बेहतर तुलना की जा सकती है। बरकरार गर्भाशयसेक्राल लिगामेंट के लिए, हम संरचनात्मक गुणों जैसे कि अंतिम भार (2.9 ± 0.5 एन) और कठोरता (0.4 ± 0.1 एन / मिमी) के साथ-साथ सामान्यीकृत भौतिक गुणों जैसे कि अंतिम तनाव (2.1 ± 0.4 एमपीए), अंतिम तनाव (1.6 ± 0.5) और स्पर्शरेखा मापांक (4.0 ± 1.1 एमपीए) की रिपोर्ट करते हैं। चूहे के प्रजनन अंगों और मोअल्ली एट अल द्वारा उनके सभी सहायक ऊतक कनेक्शनों पर किए गए एकअक्षीय परीक्षणों में, उन्होंनेपृथक यूएसएल 29 की तुलना में विफलता (13.2 ± 1.1 एन) और कठोरता (2.9 ± 0.9 एन / मिमी) पर अंतिम भार की सूचना दी। मोल्ली एट अल और अन्य साहित्य34,35 द्वारा किए गए काम में परीक्षण किए गए नमूनों के बीच उच्च परिवर्तनशीलता का उल्लेख है जैसा कि यहां प्रस्तुत आंकड़ों में दिखाया गया है। गर्भाशयसेक्राल लिगामेंट सस्पेंशन मरम्मत के लिए, हमने सभी संरचनात्मक सामग्री गुणों (कठोरता, 0.33 ± 0.13 एन / मिमी; अंतिम भार, 2.6 ± 1.3 एन) और सामान्यीकृत सामग्री गुण (अंतिम तनाव, 1.8 ± 0.7 एमपीए; अंतिम तनाव 1.3 ± 0.3; स्पर्शरेखा मापांक, 3.0 ± 0.9 एमपीए) को मूल यूएसएल की तुलना में कम पाया।

Discussion

प्रोटोकॉल कई फायदों के लिए उल्लेखनीय है। हमारे ज्ञान के लिए, यह चूहे के मॉडल में यूएसएलएस का पहला प्रकाशित विवरण है और भविष्य के जांचकर्ताओं को अनुसंधान सेटिंग में इस प्रक्रिया को करने के लिए प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य कदम प्रदान करेगा। दूसरा, हम यूएसएल के मूल और सर्जिकल इंटरफ़ेस के तन्यता परीक्षण के लिए एक नया प्रोटोकॉल शामिल करते हैं। तन्यता परीक्षण प्रोटोकॉल का उपयोग इसी तरह के अध्ययनों में किया जा सकता है जो यूएसएलएस जैसे देशी ऊतक की मरम्मत को बढ़ाने के लिए नए ऊतक इंजीनियरिंग दृष्टिकोणों की जांच करते हैं। इसके अलावा, बड़े पशु मॉडल की तुलना में हैंडलिंग / बोर्डिंग, कम जीवनकाल और लागत दक्षता में आसानी के कारण पैल्विक फ्लोर विकारों के अध्ययन के लिए चूहा मॉडल स्वयं उपयोगी है। प्रोटोकॉल की सीमाओं में यूएसएलएस, मूत्रवाहिनी की मुख्य जटिलताओं में से एक का आकलन करने में असमर्थता शामिल है। इसके बावजूद, हमारे पास इस अध्ययन में अनुमानित मूत्रवाहिनी की चोट का कोई मामला नहीं था। एक और विचार यह है कि श्रोणि का क्षैतिज अभिविन्यास, छोटे भ्रूण सिर-से-जन्म नहर अनुपात, और चूहे के मॉडल में सहज प्रोलैप्स की कमी मनुष्यों के लिए परिणामों की कुछ प्रयोज्यता को सीमित करती है। हालांकि, मल्टीपैरस चूहों का उपयोग इस अध्ययन की एक ताकत है क्योंकि यह पीओपी3 के विकास में प्रमुख जोखिम कारक के लिए जिम्मेदार है।

लुईस चूहे में हिस्टेरेक्टॉमी और यूएसएलएस के लिए एक सफल प्रोटोकॉल की स्थापना भविष्य के शोधकर्ताओं के लिए पीओपी के सर्जिकल घटकों की जांच करने के लिए एक उपयोगी उपकरण होगा, जबकि यूएसएल के यांत्रिक व्यवहार के परीक्षण में परिवर्तनशीलता को कम किया जाएगा। सर्जिकल पशु मॉडल फायदेमंद हैं क्योंकि वे शोधकर्ताओं को चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक प्रयोगों को डिजाइन करने की अनुमति देते हैं जो मनुष्यों में प्रारंभिक अध्ययन के नैतिक जोखिम को कम करते हुए समानता, शरीर द्रव्यमान, रोग और पोषणको नियंत्रित करते हैं। इसके अलावा, पीओपी के लिए मानकीकृत मॉडल शोधकर्ताओं को मानव ऊतक संग्रह की सीमाओं को बायपास करने की अनुमति देते हैं। विशेष रूप से, इस प्रोटोकॉल में वर्णित तन्यता परीक्षण विधियां अध्ययनों के बीच स्थिरता को सक्षम करेंगी। पिछले कृंतक मॉडल ने पूरे श्रोणि क्षेत्र के यांत्रिक गुणों का परीक्षण किया, जिसमें गर्भाशय ग्रीवा, योनि और कई श्रोणि समर्थन स्नायुबंधन29,42 शामिल हैं। यहां वर्णित विधियां यूएसएल के माप के लिए एक तरह से अनुमति देती हैं जो देशी रीढ़ की हड्डी और गर्भाशय ग्रीवा के अनुलग्नकों को बनाए रखती हैं। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि तन्यता परीक्षण विधियां अकेले यूएसएल का आकलन नहीं करती हैं, बल्कि यूएसएल को थैली और गर्भाशय ग्रीवा में इसके सम्मिलन के साथ संयोजन में करती हैं। यह अध्ययन की एक ताकत है क्योंकि यह सामान्य रूप से स्वस्थाने बलों को दर्शाता है जिनके अधीन लिगामेंट होता है। हम स्वीकार करते हैं कि पृथक लिगामेंट का यांत्रिक व्यवहार अलग होगा यदि इसे अपने मूल अनुलग्नकों के बिना विवो में परीक्षण किया गया था। यह विशेष रूप से सच है क्योंकि चूहे की संरचनाएं छोटी हैं और पूर्व विवो परीक्षण के लिए उपयुक्त नमूना एकत्र करने की व्यवहार्यता को सीमित करती हैं। यूएसएल सीटू में कई दिशाओं में लोड होने का अनुभव करते हैं, इसलिए परीक्षण की एकअक्षीय प्रकृति एक सीमा है, लेकिन इस विधि का उपयोग करने से चूहे यूएसएल यांत्रिकी29,42 के पिछले अध्ययनों के बीच सार्थक तुलना की अनुमति मिलती है। जबकि वर्तमान में कोई व्यापक रूप से स्वीकृत मानक यांत्रिक परीक्षण प्रोटोकॉल नहीं है, यह मॉडल क्षेत्र में भविष्य के ऊतक इंजीनियरिंग अध्ययनों के लिए एक उपयोगी उपकरण होगा।

इस प्रोटोकॉल में वर्णित कई कदम जानवरों के स्वास्थ्य और कल्याण के साथ-साथ यूएसएलएस सर्जरी और बाद में तन्यता परीक्षण की प्रजनन क्षमता के लिए महत्वपूर्ण हैं। सबसे पहले, एनाल्जेसिक और विरोधी भड़काऊ दवाओं दोनों को प्राप्त करना आवश्यक है, जिन्हें अकेले एनाल्जेसिक के रूप में वर्णित किया गया था, जो दर्द प्रबंधन के लिए अपर्याप्त पाया गया था। रोगनिरोधी एंटीबायोटिक सर्जिकल साइट संक्रमण के जोखिम को कम करता है और मानव सर्जरी में देखभाल का मानक है। यूएसएलएस शल्य चिकित्सा प्रक्रिया के बारे में, अंडाशय को नुकसान से बचना और रक्त की हानि को कम करना एक सफल सर्जरी के लिए आवश्यक है। चरण 1.3.3 और 1.3.4 आसन्न अंडाशय से गर्भाशय के सींग के शीर्ष को अलग करने का वर्णन करते हैं; अंडाशय के आसपास नाजुक वाहिकाओं के विघटन को रोकने के लिए गर्भाशय के सींग के किनारे इस विच्छेदन को बनाए रखने के लिए ध्यान रखा जाना चाहिए, जिसके परिणामस्वरूप अत्यधिक रक्तस्राव हो सकता है। ध्यान दें, अन्य जांचकर्ताओं ने दिखाया है कि गर्भाशय केसींगों को हटाने के बाद डिम्बग्रंथि समारोह संरक्षित है। इसके अलावा, यदि अंडाशय बाधित या हटा दिए जाते हैं, तो समग्र कोलेजन फाइब्रिल आर्किटेक्चर परेशान हो जाएगा, जिससे इसके ऊतकों के यांत्रिकगुणों में बदलाव होगा 44,45। एक बार गर्भाशय के सींग को अंडाशय से सुरक्षित रूप से अलग करने के बाद, विच्छेदन का एक स्पष्ट विमान होता है जो आसपास के वसा पैड और वाहिका से गर्भाशय के सींग के अलगाव की अनुमति देता है। विच्छेदन के स्पष्ट विमान के बावजूद, गर्भाशय के सींग के साथ पेडिकल्स को माइक्रो कैंची के साथ ट्रांससेक्शन से पहले क्लैंप के साथ सुरक्षित किया जाना चाहिए। मनुष्यों में शल्य चिकित्सा अभ्यास के विपरीत, हमने पाया है कि हिस्टेरेक्टॉमी पेडिकल्स का सीवन बंधाव अनावश्यक है, क्योंकि ट्रांससेक्शन से पहले पेडिकल को दबाने से पर्याप्त हेमोस्टेसिस सुनिश्चित होता है। प्रोटोकॉल का चरण 1.3.6 रक्त की हानि को कम करने के लिए इस सावधानीपूर्वक प्रक्रिया का वर्णन करता है। जैसा कि हिस्टेरेक्टॉमी किया जा रहा है, मूत्रवाहिनी की पहचान करने के लिए बहुत सावधानी बरती जानी चाहिए जैसा कि चरण 1.3.6 और 1.3.8 में उल्लेख किया गया है। मूत्रवाहिनी की शारीरिक निकटता को समझना महत्वपूर्ण है, क्योंकि मनुष्यों में यूएसएल से जुड़ी सबसे आम जटिलताओं में से एक मूत्रवाहिनी की चोटहै।

अंत में, हम एक चूहे के मॉडल में हिस्टेरेक्टॉमी, यूटेरोसेक्रल लिगामेंट निलंबन और यूएसएल के तन्यता परीक्षण करने के लिए एक नया प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। हम उम्मीद करते हैं कि हमारे निष्कर्ष इन प्रक्रियाओं का एक स्पष्ट, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य विवरण प्रदान करके भविष्य के बुनियादी विज्ञान जांचकर्ताओं की सहायता करेंगे और इस तरह पेल्विक ऑर्गन प्रोलैप्स अनुसंधान की प्रगति की अनुमति देंगे।

Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

हम अपने इंस्ट्रोन के उपयोग के लिए प्रोफेसर सिल्विया ब्लेमकर और अपने सर्जिकल स्पेस के साथ-साथ 3 डी मुद्रित धारक और पकड़ के उपयोग के लिए प्रोफेसर जॉर्ज क्राइस्ट को धन्यवाद देते हैं। इस काम को यूवीए-कूल्टर ट्रांसलेशनल रिसर्च पार्टनरशिप और डीओडी (डब्ल्यू 81एक्सडब्ल्यूएच-19-1-0157) द्वारा समर्थित किया गया था।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Alcohol prep pad BD 326895
Artificial Tear Ointment American Health Service Sales Corp PH-PARALUBE-O
Bluehill software Instron Bluehill 3
Cavicide 1 disinfectant Fisher Scientific 22 998 800
Compression platean Instron 2501-163
Cotton swabs Puritan Medical 806-WC
Gauze Sponge, 8-Ply VWR 95038-728
Mosquito Forceps Medline Industries MMDS1222115
Needle Holder Medline Industries DYND04045
Operating Scissors, 5½", Sharp American Health Service Sales Corp 4-222
Opioid Analgesic (Buprenorphine XR) Fidelis Animal Health Ethiqa XR 0.65 mg/kg SC Q72
NSAID Analgesic (Meloxicam SR) Wildlife Pharmaceuticals, LLC Meloxicam SR 1 mg/kg SC q72
PDS II, 3-0 Polydioxanone Suture, SH-1 Ethicon Z316H
PDS II, 5-0 P olydioxanone Suture, RB-1 Ethicon Z303H
Retractor Medline Industries MDS1862107
Scalpel Blade Stainless Surgical #10 Miltex 4-310
Scalpel Handle Medline Industries MDS15210
Scissor, Micro, Curved, 4.5" Westcott MDS0910311
Single Column Universal Testing System Instron 5943 S3873 1 kN force capacity, 10 N load cell
Sterile Natural Rubber Latex Gloves Accutech 91225075
Suture,Vicryl,6-0,P-3 Ethicon J492G
Tape,Umbilical,Cotton,1/8X18" Ethicon U10T
Tension and Compression Load Cell Instron 2530-10N 10N load cell (1 kgf, 2 lbf)
Veterinary surgical adhesive (skin glue) Covetrus 31477

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चिकित्सा अंक 186 चूहा ऊतक यांत्रिकी श्रोणि तल गर्भाशय सर्जरी
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Miller, B. J., Jones, B. K., Turner, … More

Miller, B. J., Jones, B. K., Turner, J. S., Caliari, S. R., Vaughan, M. H. Development of a Uterosacral Ligament Suspension Rat Model. J. Vis. Exp. (186), e64311, doi:10.3791/64311 (2022).

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