Summary
Her beskriver vi metoderne til at inducere allergisk kontaktdermatitis i museører med 1-fluor-2,4-dinitrobenzen (DNFB) og hvordan man vurderer sværhedsgraden af allergisk kontaktdermatitis.
Abstract
Hud er menneskekroppens første forsvarslinje og et af de mest udsatte organer for miljøkemikalier. Allergisk kontaktdermatitis (ACD) er en almindelig hudsygdom, der manifesterer sig som et lokalt udslæt, rødme og hudlæsioner. Forekomsten og udviklingen af ACD påvirkes af både genetiske og miljømæssige faktorer. Selvom mange forskere har konstrueret en række modeller af ACD i de senere år, er de eksperimentelle protokoller for disse modeller alle forskellige, hvilket gør det vanskeligt for læserne at etablere dem godt. Derfor er en stabil og effektiv dyremodel af stor betydning for yderligere at studere patogenesen af atopisk dermatitis. I denne undersøgelse beskriver vi en modelleringsmetode ved hjælp af 1-fluor-2,4-dinitrobenzen (DNFB) til at inducere ACD-lignende symptomer i ørerne på mus og beskriver flere metoder til vurdering af sværhedsgraden af dermatitis under modellering. Denne eksperimentelle protokol er blevet anvendt med succes i nogle eksperimenter og har en vis salgsfremmende rolle inden for ACD-forskning.
Introduction
Allergisk kontaktdermatitis (ACD) er en almindelig hudsygdom, der er karakteriseret ved eksemlignende symptomer på kontaktstedet, ødem og erytem i moderate tilfælde og papler, erosion, ekssudation eller endda massive ar i alvorlige tilfælde1. Det påvirker op til 20% af befolkningen og kan påvirke mennesker i alle aldre2. ACD forekommer ofte hos personer, der gentagne gange har været udsat for allergener og kan være forårsaget af individets immunrespons på et eller flere allergener i deres hjem eller arbejdsplads3. Type IV forsinket overfølsomhed betragtes som den vigtigste type immunrespons i ACD4. I områder af huden, der gentagne gange har været udsat for allergener, akkumuleres cirkulerende hukommelses-T-celler i stort antal og fremkalder immun- og inflammatoriske reaktioner 3,5,6. Formålet med dette arbejde er at foreslå en pålidelig laboratorieteknik til yderligere undersøgelse af immunologiske og inflammatoriske reaktioner i udviklingen af ACD.
Udbruddet af ACD skyldes normalt kontaktoverfølsomhed forårsaget af gentagen eksponering for kemikalier. Talrige forskere har udviklet forskellige ACD-dyremodeller i husmus 7,8, marsvin 9,10 og andre dyr i løbet af de sidste par årtier for at simulere sygdommens begyndelse. De fleste af de eksperimentelle metoder består af to faser: abdominal sensibilisering (induktion) og tilvejebringelse af stimuli på ryggen eller øreflippen (stimulering). Almindeligt anvendte kemiske stoffer omfatter hovedsageligt 1-fluor-2,4-dinitrobenzen (DNFB) / 1-chlor-2,4-dinitrobenzen (DNCB) 8,9,11, oxazolon 12, urushiol 13 osv. Blandt dem er DNFB og DNCB de mest udbredte, først rapporteret i oktober 195810. Nikkelsensibiliseringsmodel14 og fotoallergisk kontaktdermatitis model15 anvendes også ofte.
Vi præsenterer en eksperimentel metode til opbygning af ACD-modellen. Denne metode er opsummeret og optimeret på baggrund af tidligere undersøgelser og ved sammenligning med flere eksperimenter. Sammenlignet med andre ACD-modeller har denne model nogle fordele, såsom små individuelle forskelle, korte eksperimentelle perioder, en lille mængde kemisk stimulering osv. Derudover er denne undersøgelse anvendelig på mus, som ikke kun er økonomiske, men også har flere muligheder for genknockout eller transgen museforberedelse16. Vi beskriver også de forskellige metoder, der bruges til at overvåge ACD-fremskridt i eksperimentet, såsom måling af øretykkelse, brug af Evans blå farvestof til måling af inflammatorisk ekssudation osv. Denne model kan ikke kun analysere museører, blod, milt og andre prøver ved laboratoriemidler for at udforske patogenesen af ACD, men er også anvendelig til præklinisk evaluering af nye terapeutiske metoder, som har en vis salgsfremmende betydning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Al pleje og behandling af musene var i overensstemmelse med retningslinjerne fra Institutional Animal Care and Use Committee ved Yangzhou University og blev godkendt af Institutional Animal Care and Use Committee under projektlicensen SYXK (SU) 2022-0044. BALB/c han- og hunmus i alderen 6-8 uger blev anvendt i dette studie. Hver gruppe bestod af seks mus (se Materialetabel). Burene blev anbragt i et temperaturkontrolleret kammer (22 ± 2 °C, 12 timers lys/mørk cyklus) med fri adgang til mad og vand. Et eksperimentelt flowdiagram er vist i figur 1.
1. Tilberedning af dyr
- Start modelleringen efter 1 uges akklimatisering til miljøet.
- Brug en ultraviolet lampe og 75% alkohol desinfektionsmiddel til at rengøre og desinficere miljøet og bordpladerne, før du manipulerer musene.
BEMÆRK: For at undgå påvirkning af eksterne faktorer kan mærkning af musene til identifikation ikke udføres på museøret; Farvning på ryggen eller på halen kan bruges som et alternativ. - Brug en lille vatpind til at påføre sæbevand på musenes underliv (ca. 1-2 cm2 i størrelse). Barber området i retning af hårvækst med et blad eller en barbermaskine (se materialetabellen) i begyndelsen af modelleringen (dag 0; Figur 2A).
BEMÆRK: Brug af et lige barberblad til hårfjerning kræver en dygtig operatør. Hvis det ikke udføres korrekt, kan det forårsage hudirritation. Overvej at bruge hårfjerningscreme, klipper eller en barbermaskine til hårfjerning. - Vej musen og sammenlign vægtændringerne mellem hver gruppe.
2. Stimulering af abdominal sensibilisering
- Sørg for fuld genopretning af enhver mindre skade på mavens hud induceret af barbering. Påfør abdominal sensibilisering 2 dage efter barbering (dag 2).
- Forbered 0,5% DNFB-opløsningen: Fortynd DNFB med en acetone:olivenolieblanding i forholdet 4:1 (f.eks. 400 μL acetone blandet med 100 μL olivenolie; se materialetabel). Brug en pipettepistol til at blæse og bland 20 gange for at blande DNFB-opløsningen grundigt. Før hver administration af DNFB-opløsning til musen skal du blæse og blande den tre til fem gange.
BEMÆRK: Forbered opløsningen før brug, og pakk den ind i aluminiumsfolie for at beskytte den mod direkte sollys. - Påfør 25 μL af 0,5% DNFB-opløsningen på huden i det barberede område på musenes mave med en pipettor (figur 2B).
- Drible DNFB-opløsningen over midten af mavebarberingsområdet og spred let med den glatte side af pipetterspidsen for at sprede den ensartet.
- 30 sekunder efter DNFB-stimulering anbringes musene i tomme bure uden strøelse for at forhindre dem i at gnide DNFB-opløsningen. Når DNFB-opløsningen er helt tør (ca. 2 min), sættes musene tilbage i deres oprindelige bur.
- Brug handsker, når du håndterer DNFB-opløsningen, da den er stærkt irriterende for menneskers hud.
3. Stimulering af øresensibilisering
- Forbered en 0,2% DNFB-opløsning som ovenfor, køretøjsopløsningen (en 4:1 blanding af acetone og olivenolie) og rent vand.
- Orienter musekroppen og lad den udvendige kant af auricleen vende nedad under hele operationen for at forhindre opløsningen i at komme ind i øregangen under DNFB-stimulering.
- På dag 4, 6, 8 og 10 anvendes en pipettor til langsomt og ensartet at påføre 20 μL af 0,2 % DNFB-opløsningen eller køretøjsopløsningen på den indre overflade af musenes venstre aurikler. For at undgå, at DNFB-opløsningen trænger ind i øregangen, skal du bruge den glatte side af pipettor spidsen til forsigtigt at fordele DNFB-opløsningen under administration. Lad højre øre være ubehandlet (figur 2C).
- Vent, indtil DNFB-opløsningen er tør, og læg musene tilbage i buret (ca. 30 s).
- Brug handsker, når du håndterer DNFB-opløsningen.
4. Registrering af musevægt og ACD-symptomer
- Vej musen hver dag, start på dag 1, og sammenlign med dens tilsvarende vægt på dag 0; evaluere effekten af ACD på mus' kropsvægt som vægtændring (g) ± standardfejl for gennemsnittet (SEM).
- Tag billeder i høj opløsning af museørerne for at registrere ACD kliniske symptomer hver 2. dag, startende på dag 1.
5. Måling af auricletykkelsen
- Mål auricletykkelsen hver 2. dag, startende på dag 1. Mål og registrer begge ører i detaljer.
- Brug vernierkalibre (se materialetabellen) til at måle auricletykkelsen på samme tid hver dag for nøjagtige resultater (figur 3A). Stop vernierkalibrene fra at fortsætte indadgående fastspænding, når der er en lille blokering, for at forhindre vævsskade på museøret. Hold positionen fast, og registrer dataene.
- Saml tykkelsen fra tre forskellige steder på hver auricle (figur 3B). Registrer gennemsnittet af de tre data som en gyldig værdi. Evaluer ørehævelsen i mikrometer (μm) ± standardfejl for middelværdien (SEM).
6. Evaluering af graden af inflammatorisk hævelse
- Forbered 0,5% Evans blåt farvestof (se materialetabel) opløsning: fortynd Evans blåt farvestof med fosfatbufret saltvand (PBS) på dag 11. Brug altid en laboratoriefrakke og handsker, da Evans blå farvestof er lidt giftigt for mennesker.
- Immobiliser musene med en fixator: Åbn fiksatorens låg (se materialetabel), hold musehalen, få musens hoved til at vende mod fiksatoren, og få musen instinktivt til at klatre ind i fiksatoren. Dæk låget, få musehalen til at komme ud af hullet på låget, og juster længden af fiksatoren for at udsætte hele musehalen.
- Tør halen gentagne gange med en alkoholbomuldskugle eller blød den i varmt vand i 30 s, og klem forsigtigt roden af halen for at fylde og udvide venerne på begge sider. Udfør injektionen under bestråling af en kold lyskilde.
- Injicer langsomt Evans blå farvestofopløsning i musens halevene ved hjælp af en 1 mm insulinnål. Vent i 15 minutter, og tag derefter billeder af museørerne.
BEMÆRK: Sæt musen på bordet, og hold den forsigtigt for at udsætte øreområdet for billedoptagelse. Kort efter injektion med Evans blå farvestofopløsning og iagttagelse af tilsvarende indikationer, brug cervikal dislokation til at aflive musen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Under gentagen DNFB-stimulering viste museørerne i DNFB-gruppen tydelige kliniske symptomer, der kunne sammenlignes med ACD, med følsomme områder, der viste de typiske symptomer på rødme, tørhed og endda erosion og ekssudation. Øreadministration af rent vand (kontrolgruppe) eller opløsningsmiddelkontrol (vehikelgruppe) fremkaldte imidlertid ikke lignende symptomer (figur 4).
I DNFB-gruppen sammenlignet med det ubehandlede højre øre steg tykkelsen af venstre øre signifikant efter DNFB-stimulering (figur 5A), mens der ikke var nogen signifikant forskel i kontrol- og vehikelgrupperne (figur 5B). DNFB-gruppens venstre ører blev naturligvis mørkeblå efter injektionen af Evans blå farvestof på den 11. modelleringsdag, hvilket var visuelt forskelligt fra højre øre. Imidlertid havde venstre og højre øre hos mus i kontrol- og køretøjsgrupperne omtrent samme farve (figur 5C).
Desuden blev ændringer i kropsvægt hos mus analyseret. Vægtøgning med mus blev lidt langsommere af DNFB eller simpel køretøjsstimulering (figur 6A), men resulterede ikke i signifikant vægttab (figur 6B). Samtidig blev milten isoleret umiddelbart efter, at musene blev ofret. Miltindekset blev beregnet i henhold til musens vægt og miltvægt; Beregningsformlen var som følger:
Miltindeks = miltvægt (g) / kropsvægt (g) x 100
Resultatet viser, at gentagen DNFB-stimulering i museøret resulterede i miltforstørrelse (figur 6C) og en stigning i miltindekset (figur 6D), mens miltindekset for mus i køretøjsgruppen ikke ændrede sig signifikant. Det blev bevist, at immunresponsfunktionen hos mus i DNFB-gruppen under stimulering af DNFB var hyperaktiv.
Figur 1: Skematisk diagram over ACD-støbningstidsaksen. Pilene angiver, hvad der blev gjort på det tilsvarende tidspunkt. De involverede relaterede operationer inkluderer barbering, sensibilisering, auriclemåling, vejning, fotografering og Evans blå farvestofapplikation. Forkortelser: DNFB = 1-fluor-2,4-dinitrobenzen. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: Driftsmetoden for ACD-modeletableringen . (A) Manipulation af abdominal barbering. (B) Manipulation af abdominal sensibiliserende stimulering. (C) Manipulation af øresensibiliserende stimulering. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 3: Evalueringsmetode for ørehævelse . (A) Manipulation af øretykkelsesmålinger hos mus. (B) Stederne for måling af øretykkelse hos mus. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 4: Repræsentativt billede af effekten af DNFB-administration på musens ører over tid . (A) Kontrolgruppe. (B) Køretøjsgruppe. C) DNFB-koncernen. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 5: Effekt af DNFB-administration på ørehævelse hos mus. (A) Forskel i øretykkelse mellem venstre og højre øre hos mus under modellering. (B) Sammenligning af venstre og højre øretykkelse hos mus i hver gruppe ved afslutningen af modelleringen. (C) Virkning af DNFB-administration på ørevaskulær permeabilitet hos mus. (n = 6. ***p < 0,001, sammenligning mellem højre øre og venstre øre; N.S. = Ingen signifikant). Alle data blev udtrykt som gennemsnittet ± SEM. Forskellige behandlingsanalyser blandt grupper blev analyseret ved hjælp af en uparret elevs t-test eller envejsanalyse af varians med Dunnetts test. P-værdier mindre end 0,05 blev betragtet som statistisk signifikante. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 6: Virkninger af DNFB-administration på kropsvægt og miltindeks hos mus. (A) Ændringer i kropsvægt hos mus i hver gruppe under modellering. (B) Sammenligning af ændringer i kropsvægt hos mus i hver gruppe på dag 11. (C) Sammenligning af miltstørrelse i hver gruppe mus. (D) Sammenligning af miltindeks mellem grupper af mus. (n = 6. *p < 0,05 sammenlignet med kontrolgruppen; N.S. = Ingen signifikant). Alle data blev udtrykt som gennemsnittet ± SEM. Forskellige behandlingsanalyser blandt grupper blev analyseret ved hjælp af en uparret elevs t-test eller envejsanalyse af varians med Dunnetts test. P-værdier mindre end 0,05 blev betragtet som statistisk signifikante. Klik her for at se en større version af denne figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Protokollen beskrevet her til inducering af ACD-lignende symptomer i ørerne på mus kan bruges til at studere patofysiologien af ACD og som et screeningsværktøj til udvikling af nye lægemidler.
Der er to vigtige trin til at etablere en ACD-model: indledende sensibilisering og efterfølgende stimulering. Underlivet er normalt stedet for indledende sensibilisering, men det efterfølgende stimuleringssted blev valgt lidt anderledes. Tidligere undersøgelser har vist, at de fleste forskere vælger at bruge kemiske sensibilisatorer som DNFB / DNCB eller oxazolon til at etablere ACD-modeller på ryggen eller halsen af mus, og det er uundgåeligt at bruge knive eller trimmere til at depilere modelleringsområdet for mus17,18,19. Dette trin kan dog let ødelægge hudbarrieren og påvirke de efterfølgende eksperimenter. Desuden er det dryppende stof vanskeligt at fordele jævnt og absorberes let af det nærliggende hår på grund af det store område på nakken og indflydelsen fra det omgivende hår.
I denne eksperimentelle protokol fandt vi, at udførelse af manipulationen til efterfølgende stimulering i den indre overflade af museaurikler gjorde det muligt for os at lindre nogle af ovenstående problemer, hvilket hjalp med at etablere en stabil og meget reproducerbar ACD-model. I overensstemmelse med vores gentagne eksperimenter20 optimerede og justerede vi også intervallet for den sensibiliserende stimulus og forsøgsperioden. I overensstemmelse med den givne eksperimentelle metode kan der opnås en meget åbenlys modelleringseffekt på den 10. dag. Da modelleringsområdet desuden er på den relativt uafhængige indre side af auricleen, hvor eksterne faktorer har mindre interferens, er der mindre forskel i sværhedsgraden af ACD hos mus i samme eksperimentelle gruppe i dette eksperiment.
Denne eksperimentelle protokol har også nogle mangler. For det første skal anvendelse af kemiske sensibilisatorer på øret udføres med forsigtighed for at undgå, at kemikalier kommer ind i øregangen og skader musene. For det andet bruges ACD-modeller ofte som et middel til at studere kronisk kløe hos mus. I ACD-modellen, der blev etableret på nakken af mus, kunne anfaldene af ridser hos mus intuitivt observeres, og sværhedsgraden af kløesymptomet hos mus kunne måles ved dette. Selvom der også blev observeret kradseadfærd hos mus under vores eksperiment, havde musene også spontane ørerensningsvaner, hvilket gjorde det vanskeligt at skelne fra patologisk kradseadfærd. Dette begrænsede brugen af denne model til at observere ACD-induceret ridseadfærd. Hvorvidt protokollen finder anvendelse på denne type undersøgelser, underkastes yderligere eksperimentel verifikation.
For at spore ACD's patologiske forløb blev der anvendt en række overvågningsmetoder, såsom kliniske øresymptomer, måling af øretykkelse og refleksion af vaskulær permeabilitet. Disse patologiske indikatorer er mere synlige i øret end i nakken og baghuden. Ved måling af en mus' øretykkelse vil der opstå målefejl på grund af musens kæmpende adfærd og ørets ujævne tykkelse. For at reducere målefejl skal målinger udføres tre forskellige steder på hvert øre. Ved at injicere Evans farvestof for at evaluere den vaskulære permeabilitet af det modellerede område kan sværhedsgraden af dermatitis ses, men dette kræver også en høj succesrate for haleveneinjektion. Hvis yderligere sammenlignende analyse er påkrævet, kan absorbansen af supernatanten af museørevævshomogenat bestemmes.
Det er også værd at nævne, at ørevævsstrukturen i vores tidligere forskning20 var velorganiseret og mindre påvirket af andre uordnede vævsstrukturer (f.eks. Hårsække) end i nakke- og ryghudvævet, hvilket førte til valg af dette område til forskning.
Afslutningsvis er modellen af ACD beskrevet i dette papir en stabil og effektiv modelleringsmetode og er værd at fremme i efterfølgende undersøgelser af allergisk kontaktdermatitis.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne rapporterer ingen interessekonflikter i dette arbejde.
Acknowledgments
Dette arbejde blev støttet af National Natural Science Foundation of China (NSFC) til N.-N. Y. (81904212); Jiangsu Traditionel kinesisk medicin videnskab og teknologi projekt (YB201995); og det særlige finansieringsprojekt for postdoc-forskere i Kina (2020T130562).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB) | Merck | 200-734-3 | 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene, ≥99% |
| Acetone | Sinopharm Chemical Reagent Co. LTD | 10000418 | ≥99.5% |
| Aluminum foil | Cleanwrap | CF-2 | |
| Evans blue dye | Solarbio | 314-13-6 | Dye content approx. 80% |
| Mouse fixator | ZHUYANBANG | GEGD-SM1830 | |
| Olive oil | Solarbio | 8001-25-0 | 500 ml |
| Pipet tip | Biofount | FT-200 | 10 - 200 μl |
| Pipettor | Eppendorf AG | 3123000250 | 20 - 200 μl |
| Razor blade | Shanghai Gillette Co. LTD | 74-S | |
| Vernier calipers | Delixi Electric | DECHOTVCS1200 |
References
- Neale, H., Garza-Mayers, A. C., Tam, I., Yu, J. Pediatric allergic contact dermatitis. Part I: Clinical features and common contact allergens in children. Journal of the American Academy of Dermatology. 84 (2), 235-244 (2021).
- Koppes, S. A., et al. Current knowledge on biomarkers for contact sensitization and allergic contact dermatitis. Contact Dermatitis. 77 (1), 1-16 (2017).
- Martin, S. F., et al. Mechanisms of chemical-induced innate immunity in allergic contact dermatitis. Allergy. 66 (9), 1152-1163 (2011).
- Kimber, I., Basketter, D. A., Gerberick, G. F., Dearman, R. J.
- Vocanson, M., Hennino, A., Rozieres, A., Poyet, G., Nicolas, J. F. Effector and regulatory mechanisms in allergic contact dermatitis. Allergy. 64 (12), 1699-1714 (2009).
- Gamradt, P., et al. Inhibitory checkpoint receptors control CD8+ resident memory T cells to prevent skin allergy. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 143 (6), 2147.e9-2157.e9 (2019).
- Fraginals, R., Blasi, N. A., Lepoittevin, J. P., Benezra, C. A successful murine model for contact sensitization to a sesquiterpene-alpha-methylene-gamma-butyrolactone: sensitization to alantolactone in four strains of mice. The Journal of Investigative Dermatology. 97 (3), 473-477 (1991).
- Knop, J., Riechmann, R., Neumann, C., Macher, E. Modulation of suppressor mechanisms in allergic contact dermatitis: 5. Evidence that inhibition of suppressor T lymphocytes by Corynebacterium parvum is mediated by interferon. The Journal of Investigative Dermatology. 79 (6), 385-388 (1982).
- Polak, L., Scheper, R. J. Antigen-specific T-cell lines in DNCB-contact sensitivity in guinea pigs. The Journal of Investigative Dermatology. 80 (5), 398-402 (1983).
- Witten, V. H., March, C. H. Studies of the mechanism of allergic eczematous contact dermatitis. II. Use of C14 labelled 2:4-dinitrochlorobenzene in guinea pigs. The Journal of Investigative Dermatology. 31 (2), 97-102 (1958).
- Knop, J., Riechmann, R., Macher, E. Modulation of suppressor mechanism in allergic contact dermatitis. IV. Selective inhibition of suppressor T-lymphocytes by serum obtained from Corynebacterium parvum treated mice. The Journal of Investigative Dermatology. 77 (6), 469-473 (1981).
- Rubic-Schneider, T., et al. GPR91 deficiency exacerbates allergic contact dermatitis while reducing arthritic disease in mice. Allergy. 72 (3), 444-452 (2017).
- Stampf, J. L., Benezra, C., Byers, V., Castagnoli Jr, N. Induction of tolerance to poison ivy urushiol in the guinea pig by epicutaneous application of the structural analog 5-methyl-3-n-pentadecylcatechol. The Journal of Investigative Dermatology. 86 (5), 535-538 (1986).
- Dhingra, N., et al. Molecular profiling of contact dermatitis skin identifies allergen-dependent differences in immune response. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 134 (2), 362-372 (2014).
- Maguire Jr, H. C., Kaidbey, K. Experimental photoallergic contact dermatitis: a mouse model. The Journal of Investigative Dermatology. 79 (3), 147-152 (1982).
- Qiu, Z., et al. A dysregulated sebum-microbial metabolite-IL-33 axis initiates skin inflammation in atopic dermatitis. The Journal of Experimental Medicine. 219 (10), e2021397 (2022).
- Kim, H., et al. Anti-inflammatory activities of Dictamnus dasycarpus Turcz., root bark on allergic contact dermatitis induced by dinitrofluorobenzene in mice. Journal of Ethnopharmacology. 149 (2), 471-477 (2013).
- Zhou, P., et al. Effect of 6'-acetylpaeoniflorin on dinitrochlorobenzene-induced allergic contact dermatitis in BALB/c mice. Immunologic Research. 64 (4), 857-868 (2016).
- Donglang, G., et al. Comparative study on different skin pruritus mouse models. Frontiers in Medicine. 8, 630237 (2021).
- Yang, N., Shao, H., Deng, J., Liu, Y. Network pharmacology-based analysis to explore the therapeutic mechanism of Cortex Dictamni on atopic dermatitis. Journal of Ethnopharmacology. 304, 116023 (2023).
