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Medicine

무릎 골관절염 쥐의 염증과 연골 손실을 줄이기 위한 Tuina 조작

Published: June 30, 2023
doi:
10.3791/65451
, , , , ,
1Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine

Summary

우리는 석고로 고정된 무릎 골관절염 쥐에 대해 수행되는 Tuina 조작에 대한 프로토콜을 제시합니다. 예비 결과에 기초하여, 상기 방법의 효능은 염증 및 연골 손실의 감소에 의존한다는 것을 시사하였다.

Abstract

임상 시험에 따르면 Tuina 조작은 무릎 골관절염 (KOA) 치료에 효과적이며 그 메커니즘을 발견하기 위해서는 추가 연구가 필요합니다. 따라서, 무릎 골관절염의 동물 모델의 조작은 매우 중요하다. 이 프로토콜은 KOA 쥐에 대한 Tuina 조작을 위한 표준 프로세스와 KOA에 대한 Tuina의 메커니즘에 대한 예비 탐색을 제공합니다. 프레스 및 반죽 조작 방법 (신체 표면의 특정 부위를 누르고 반죽하는 것을 의미하는 Tuina 조작의 일종)은 쥐의 무릎 관절 주위의 5 개의 경혈에 적용됩니다. 조작의 힘과 빈도는 손가락 압력 기록에 의해 표준화되었으며 조작 중 쥐의 위치는 프로토콜에 자세히 설명되어 있습니다. 조작의 효과는 통증 행동 테스트와 활액막과 연골의 현미경 소견으로 측정할 수 있습니다. KOA 쥐는 통증 행동에서 상당한 개선을 보였다. 활막 조직 염증 침윤은 Tuina 그룹에서 감소했으며 종양 괴사 인자 (TNF) -α의 발현은 현저히 낮았다. 대조군에 비해, 연골세포 아폽토시스는 Tuina 그룹에서 더 적었다. 이 연구는 KOA 쥐에 대한 Tuina 조작에 대한 표준화된 프로토콜과 Tuina의 치료 효과가 활막 염증 감소 및 지연된 연골 세포 사멸과 관련이 있을 수 있다는 예비 증거를 제공합니다.

Introduction

무릎 골관절염(KOA)은 주로 관절통에서 나타나는 퇴행성 질환입니다. 섬유화, 갈라짐, 궤양, 관절 연골 손실이 이 질환의 주요 원인이다1. KOA는 유병률이 높으며 환자의 일상 생활에 지대한 영향을 미쳐 심한 경우 장애를 유발할 수 있습니다. 45-84 세의 사람들 중 KOA의 유병률은 나이가 들면서 증가하고 85 세 이상 인구의 유병률은 15 %이며 여성이 우세합니다 2,3. 또한 KOA는 개인과 사회 모두에 심각한 경제적 부담을 줄 수 있습니다. 설문 조사에 따르면 1인당 KOA의 직접 의료 비용은 연간 $5,120 ± $8,858에 달했습니다4. 사회의 고령화와 함께 KOA는 전 세계적인 건강 문제이자 주요 사회 문제이자 과학 연구의 주제가 되었습니다.

증거 기반 연구에 따르면 KOA5 치료에 Tuina 조작의 효과가 있음이 밝혀졌습니다. Tuina 조작은 KOA 환자의 통증을 완화하고 기능 장애를 개선 할 수 있으며, 그 메커니즘은 항 염증 효과와 관련이 있습니다 6,7. 학자들은 Tuina 조작이 염증 인자인 인터루킨(IL)-β 및 5-하이드록시트립타민의 발현을 효과적으로 억제하고 토끼 KOA 모델8에서 관절 연골의 퇴행을 늦춘다는 것을 발견했습니다. Tuina는 병변 부위의 혈액 순환과 신진 대사를 촉진하여 IL-1, IL-6 및 종양 괴사 인자 (TNF) -α와 같은 염증 인자를 제거하여 KOA9의 임상 증상을 완화 할 수 있음을 시사했습니다. 또한, Tuina 조작을 통한 관절의 수동적 움직임은 관절 연골로의 활액의 침투 및 확산을 촉진하고 조직 영양소 대사를 향상시킬 수 있습니다10. 다른 연구에서는 Tuina 조작이 KOA 환자의 생체역학적 지표를 효과적으로 개선할 수 있다고 제안했다11. 연조직에 적용된 조작은 팔다리의 스트레스 분포를 개선하고 균형 기능을 향상시킬 수 있습니다12,13. 동시에, 일부 관절 조정 조작을 통해 비정상적인 보행을 교정하기 위해 하지의 정렬을 조정할 수도 있습니다(14,15).

KOA 치료에서 Tuina 조작의 작용 메커니즘은 아직 연구되지 않았으므로 실험적 연구가 필요합니다. 실험동물에 투이나를 적용하는 핵심은 모델링, 동물 고정, 개입 방법의 표준화이다16. 모델링 방법은 실험 동물이 질병의 특성을 나타낼 수 있는지 여부를 결정합니다. 한편, 적절한 고정 방법은 Tuina 조작의 개입을 용이하게하고 Tuina의 효과를보다 잘 반영 할 수 있습니다. 개입 방법의 표준화는 Tuina 조작에서 가장 어려운 부분입니다. 2010년 중국 침술 기준의 기본 체계는 실험동물에 대한 경혈 기준을 언급하여 동물실험에서 침술 및 투이나(Tuina) 수술의 가능성을 제공했다17. 그러나 Tuina 조작을 표준화하는 데는 여전히 어려움이 있습니다. Tuina 조작에는 여러 유형이 있습니다18. 특정 조작의 선택은 주로 치료할 질병과 수행자가 선호하는 치료 이론에 달려 있습니다. KOA에 대한 Tuina의 연구에서는 포인트 프레싱 조작(엄지손가락이나 팔꿈치로 특정 경혈을 누르는 것), Yizhichan 푸시 조작(엄지손가락을 흔들어 누르는 조작), 프레스 및 주무르기 조작(손가락이나 손바닥으로 신체 표면의 특정 부위를 누르고 주무르는 것을 말함)에 더 많은 주의를 기울였습니다.19. 프레스 및 반죽 조작은 피하 조직을 이동시키기 위해 압착 및 반죽을 결합하는 가장 널리 사용되는 Tuina 조작 중 하나이다(20). 경혈에 적용되는 프레스 및 반죽 조작은 혈액 순환을 촉진하고 통증을 완화시킬 수 있으며 KOA19에 대한 Tuina의 치료 효과를 나타냅니다.

이 프로토콜에서는 향후 연구를 위한 참고 자료를 제공하기 위해 선택된 경혈, 조작의 강도 및 빈도, 쥐의 신체 위치를 포함하여 KOA 쥐에 대한 프레스 및 반죽 조작 작업을 자세히 설명합니다.

Protocol

이 연구는 상하이 한의과대학 부속 한중한의학통합병원 웨양병원 실험동물윤리위원회에서 실시한 동물윤리검토를 통과했다(YYLAC-2022-166). 1. 실험동물 준비 및 그룹화 동물 준비실온(18-21°C), 습도 40%-50%, 12시간: 12시간 일주기 리듬 교대에서 200-220g의 총 10마리의 건강한 SPF SD 암컷 래트를 후면합니다. 동물 윤리 지침 및 지침의 관련 조항을 엄격히 준?…

Representative Results

통증 행동 테스트MWT 결과는 모델링 후 오른쪽 뒷다리의 MWT가 이전보다 현저히 낮은 것으로 나타났습니다(p<0.05). 대조군과 비교하여, 래트의 MWT는 Tuina (p<0.05; 그림 5 및 표 2). 그림 5. 기계적 인출 역치 ?…

Discussion

이 연구는 KOA 쥐에 대한 Tuina 조작에 대한 프로토콜을 제공합니다. 통증 행동 테스트와 조직형태학적 소견을 통해 KOA 쥐에 적용된 이러한 일련의 Tuina 조작이 활막 염증과 연골 세포 사멸을 감소시킬 수 있음을 시사했으며, 이는 KOA 동물 모델에 대한 Tuina 조작의 참고 자료가 될 수 있습니다.

프로토콜 중에는 몇 가지 중요한 절차가 있습니다. 첫째, KOA 모델을 유도하기 위한 적?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작업은 Shanghai Critical Clinical Specialties Construction Project(보조금 번호: Shslczdzk04001)의 지원을 받았습니다. 상하이 과학 기술위원회의 항해 프로그램 (보조금 번호 : 22YF1444300); Shanghai University of Traditional Chinese Medicine(허가 번호: 2021LK091)의 예산 범위 내 프로젝트.

Materials

absolute ethanol Supelco PHR1070 For making specimen
ALMEMO admeasuring apparatus ahlborn 2450-1 For Mechanical Withdrawal Threshold test
Anti-Digoxin antibody Sigma-Aldrich SAB4200669 For HE stain IHC or TUNEL
Anti-IL-1 beta abcam ab283818 For HE stain IHC or TUNEL
DAB Substrate kit Solarbio DA1010 For HE stain IHC or TUNEL
Denture base materials Shanghai New Century 20000356 For model making
eosin bioswamp  PAB180016  For HE stain IHC or TUNEL
Finger pressure recordings Suzhou Changxian Optoelectronic Technology CX1003w For Tuina manipulation
formic acid solution Sigma-Aldrich 695076 For decalcification
H2O2 Sigma-Aldrich 386790-M For HE stain IHC or TUNEL
hematoxylin bioswamp  PAB180015 For HE stain IHC or TUNEL
Isoflurane Shanghai Yuyan Scientific Instrument Company S10010533 For gas anesthesia
neutral resins bioswamp  PAB180017 For HE stain IHC or TUNEL
Paraformaldehyde Fix Solution Sigma-Aldrich 100496 For histology
PBS Sigma-Aldrich P3813 For HE stain IHC or TUNEL
Plantar Test Apparatus IITC Life Science / For Paw Withdrawal Latency test
plaster of Paris bandage WANDE 20150023 For model making
Proteinase K Sigma-Aldrich 124568 For HE stain IHC or TUNEL
TNF Alpha Monoclonal antibody Proteintech 60291-1-Ig For HE stain IHC or TUNEL
TUNEL  Servicebio GDP1042 For HE stain IHC or TUNEL
Wax Sigma-Aldrich 327204 For making specimen
xylene Shanghai Sinopharm Group 100092 For making specimen
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References

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Keywords: Knee OsteoarthritisTuina ManipulationInflammationCartilage LossAnimal ModelStandardizationSynovial InflammationChondrocyte ApoptosisPain BehaviorTNF-α
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Su, X., Song, P., Meng, F., Xu, W., Xing, H., Zhang, H. Tuina Manipulation to Reduce Inflammation and Cartilage Loss in Knee Osteoarthritis Rats. J. Vis. Exp. (196), e65451, doi:10.3791/65451 (2023).
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