Manipulação de Tuina para Reduzir a Inflamação e Perda de Cartilagem em Ratos com Osteoartrite de Joelho

Summary

Apresentamos um protocolo para manipulação de Tuina realizada em ratos com osteoartrite de joelho induzida por gesso imobilizado. Com base nos resultados preliminares, sugeriu-se que a eficácia do método dependia da redução da inflamação e da perda de cartilagem.

Abstract

Ensaios clínicos sugerem que a manipulação de Tuina é eficaz no tratamento da osteoartrite do joelho (OA), enquanto mais estudos são necessários para descobrir seu mecanismo. Portanto, a manipulação de modelos animais de osteoartrite de joelho é fundamental. Este protocolo fornece um processo padrão para a manipulação de Tuina em ratos KOA e uma exploração preliminar do mecanismo de Tuina para KOA. O método de manipulação de prensagem e amassamento (um tipo de manipulação de Tuina que se refere a pressionar e amassar a área específica da superfície corporal) é aplicado em 5 acupontos ao redor da articulação do joelho de ratos. A força e a frequência de manipulação foram padronizadas por meio de registros de pressão dos dedos, e a posição do rato durante a manipulação é descrita em detalhes no protocolo. O efeito da manipulação pode ser medido por testes de comportamento da dor e achados microscópicos na sinovial e cartilagem. Ratos KOA apresentaram melhora significativa no comportamento da dor. O infiltrado inflamatório do tecido sinovial foi reduzido no grupo Tuina e a expressão do fator de necrose tumoral (TNF)-α foi significativamente menor. Em comparação com o grupo controle, a apoptose de condrócitos foi menor no grupo Tuina. Este estudo fornece um protocolo padronizado para manipulação de Tuina em ratos KOA e prova preliminar de que os efeitos terapêuticos de Tuina podem estar relacionados à redução da inflamação sinovial e retardo da apoptose de condrócitos.

Introduction

A osteoartrite do joelho (OA) é uma doença degenerativa que se manifesta principalmente por dores articulares. Fibrose, fissuras, ulceração e perda de cartilagem articular são as principais causas dessa doença¹. A OA tem alta prevalência e pode resultar em profundo impacto no cotidiano dos pacientes, causando incapacidade em casos graves. Entre pessoas de 45 a 84 anos, a prevalência de OAB aumenta com a idade, e a prevalência entre pessoas com 85 anos ou mais é de 15%, com predomínio em mulheres ^2,3. Além disso, a KOA pode trazer um sério fardo econômico tanto para o indivíduo quanto para a sociedade. Uma pesquisa mostrou que os custos diretos de saúde com KOA per capita atingiram até US$ 8.858 ± US$ 5.120 por ano⁴. Com o envelhecimento da sociedade, o OAB tornou-se um problema de saúde mundial e uma importante questão social, bem como um tema atual para a pesquisa científica.

Estudos baseados em evidências demonstraram a eficácia da manipulação de Tuina no tratamento de OA⁵. A manipulação da Tuina poderia aliviar a dor e melhorar a disfunção em pacientes com OA, cujo mecanismo está relacionado a efeitos anti-inflamatórios ^6,7. Estudiosos descobriram que a manipulação de Tuina efetivamente inibiu a expressão dos fatores inflamatórios interleucina (IL)-β e 5-hidroxitriptamina e retardou a degeneração da cartilagem articular em um modelo de KOA de coelho⁸. Sugeriu que Tuina poderia promover circulação sanguínea e metabolismo no local da lesão, o que ajudou a eliminar fatores inflamatórios como IL-1, IL-6 e fator de necrose tumoral (TNF)-α, aliviando assim os sintomas clínicos da OA⁹. Além disso, o movimento passivo da articulação através da manipulação de Tuina pode promover a penetração e difusão do líquido sinovial na cartilagem articular e melhorar o metabolismo tecidual de nutrientes¹⁰. Outros estudos sugeriram que a manipulação de Tuina pode efetivamente melhorar os índices biomecânicos em pacientes com OA¹¹. Manipulações aplicadas sobre tecidos moles podem melhorar a distribuição do estresse sobre os membros e melhorar a função de equilíbrio^12,13. Ao mesmo tempo, com algumas manipulações de ajuste articular, o alinhamento dos membros inferiores também pode ser ajustado para corrigir marchas anormais^14,15.

O mecanismo de ação da manipulação de Tuina no tratamento de OA ainda precisa ser explorado e, portanto, um estudo experimental é necessário. A chave para a aplicação de Tuina em animais de experimentação é a padronização dos métodos de modelagem, fixação animal e^{intervenção16}. O método de modelagem determina se o animal de experimentação pode apresentar as características da doença. Enquanto isso, métodos de fixação apropriados podem facilitar a intervenção da manipulação de Tuina e refletir melhor o efeito de Tuina. A padronização dos métodos de intervenção é a parte mais difícil da manipulação de Tuina. Em 2010, o sistema básico de normas chinesas de acupuntura mencionou os padrões de ponto de acupuntura para animais de experimentação, proporcionando a possibilidade de operações de acupuntura e Tuina em experimentos com animais¹⁷. No entanto, ainda existem dificuldades na padronização da manipulação de Tuina. Existem vários tipos de manipulação de Tuina¹⁸. A escolha da manipulação específica depende principalmente da doença a ser tratada e das teorias terapêuticas preferidas pelo executor. No estudo de Tuina para OA, mais atenção foi dada à manipulação de pressão pontual (pressionar os acupontos específicos com o polegar ou cotovelo), manipulação de empurrar Yizhichan (uma manipulação de empurrar mexendo o polegar) e manipulação de pressão e amassamento (que se refere a pressionar e amassar a área específica da superfície corporal pelo dedo ou palma da mão)¹⁹. A manipulação da prensagem e do amassamento é uma das manipulações de Tuina mais utilizadas, que combina pressão e amassamento para movimentar o tecido subcutâneo²⁰. A manipulação da prensagem e do amassamento aplicada em acupontos pode promover a circulação sanguínea e aliviar a dor e representa o efeito terapêutico do Tuina na^covid-19.

Neste protocolo, a operação de manipulação da prensagem e amassamento em ratos KOA será descrita em detalhes, incluindo acupontos selecionados, intensidade e frequência da manipulação e a posição corporal do rato, de modo a fornecer uma referência para pesquisas futuras.

Protocol

Este estudo passou pela revisão ética animal conduzida pelo comitê de ética animal experimental do Hospital Yueyang de medicina tradicional chinesa e ocidental integrada afiliada à Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Xangai (YYLAC-2022-166). 1. Preparação e agrupamento de animais experimentais Preparo AnimalCriar um total de 10 ratas saudáveis SPF SD de 200-220 g à temperatura ambiente (18-21 °C), umidade 40%-50%, 12 h: 12 h alternância…

Representative Results

Testes de comportamento da dorOs resultados do TCM mostraram que o TCM do membro posterior direito após a modelagem foi significativamente menor do que antes (p<0,05). Em comparação com o grupo controle, o TCM dos ratos foi significativamente elevado após Tuina (p<0,05; Figura 5 e Tabela 2). <stro…

Discussion

Este estudo fornece um protocolo para manipulação de Tuina em ratos KOA. Através de testes de comportamento da dor e achados histomorfológicos, sugeriu-se que tal série de manipulação de Tuina aplicada em ratos KOA poderia reduzir a inflamação sinovial e a apoptose da cartilagem, o que poderia ser uma referência da manipulação de Tuina em modelos animais de KOA.

Existem vários procedimentos críticos durante o protocolo. Primeiro, é importante escolher um método apropriado para …

Materials

absolute ethanol	Supelco	PHR1070	For making specimen
ALMEMO admeasuring apparatus	ahlborn	2450-1	For Mechanical Withdrawal Threshold test
Anti-Digoxin antibody	Sigma-Aldrich	SAB4200669	For HE stain IHC or TUNEL
Anti-IL-1 beta	abcam	ab283818	For HE stain IHC or TUNEL
DAB Substrate kit	Solarbio	DA1010	For HE stain IHC or TUNEL
Denture base materials	Shanghai New Century	20000356	For model making
eosin	bioswamp	PAB180016	For HE stain IHC or TUNEL
Finger pressure recordings	Suzhou Changxian Optoelectronic Technology	CX1003w	For Tuina manipulation
formic acid solution	Sigma-Aldrich	695076	For decalcification
H2O2	Sigma-Aldrich	386790-M	For HE stain IHC or TUNEL
hematoxylin	bioswamp	PAB180015	For HE stain IHC or TUNEL
Isoflurane	Shanghai Yuyan Scientific Instrument Company	S10010533	For gas anesthesia
neutral resins	bioswamp	PAB180017	For HE stain IHC or TUNEL
Paraformaldehyde Fix Solution	Sigma-Aldrich	100496	For histology
PBS	Sigma-Aldrich	P3813	For HE stain IHC or TUNEL
Plantar Test Apparatus	IITC Life Science	/	For Paw Withdrawal Latency test
plaster of Paris bandage	WANDE	20150023	For model making
Proteinase K	Sigma-Aldrich	124568	For HE stain IHC or TUNEL
TNF Alpha Monoclonal antibody	Proteintech	60291-1-Ig	For HE stain IHC or TUNEL
TUNEL	Servicebio	GDP1042	For HE stain IHC or TUNEL
Wax	Sigma-Aldrich	327204	For making specimen
xylene	Shanghai Sinopharm Group	100092	For making specimen