Манипуляция Tuina для уменьшения воспаления и потери хряща у крыс с остеоартритом коленного сустава

Summary

Мы представляем протокол манипуляций Tuina, выполненных на крысах с остеоартрозом коленного сустава, вызванным гипсом. Основываясь на предварительных результатах, он предположил, что эффективность метода основана на уменьшении воспаления и потери хряща.

Abstract

Клинические испытания показывают, что манипуляция Tuina эффективна при лечении остеоартрита коленного сустава (KOA), в то время как для выяснения ее механизма необходимы дальнейшие исследования. Поэтому манипуляции на животных моделях остеоартроза коленного сустава имеют решающее значение. Этот протокол обеспечивает стандартный процесс манипуляций с Туиной на крысах КОА и предварительное исследование механизма Туина для КОА. Метод манипуляций с прессом и разминанием (разновидность манипуляции Туйна, которая относится к надавливанию и разминанию определенного участка поверхности тела) применяется на 5 акупунктурных точках вокруг коленного сустава крыс. Сила и частота манипуляций стандартизировались с помощью записей давления пальцами, а положение крысы во время манипуляции подробно описано в протоколе. Эффект манипуляции можно измерить с помощью болевых тестов и микроскопических данных синовиальной и хрящевой оболочки. Крысы с КОА показали значительное улучшение болевого поведения. Воспалительная инфильтрация синовиальной ткани была снижена в группе Туйна, а экспрессия фактора некроза опухоли (ФНО)-α была достоверно ниже. По сравнению с контрольной группой, апоптоз хондроцитов был меньше в группе Туина. В этом исследовании представлен стандартизированный протокол манипуляций с Туиной на крысах с КОА и предварительное доказательство того, что терапевтические эффекты Туина могут быть связаны с уменьшением воспаления синовиальной оболочки и отсроченного апоптоза хондроцитов.

Introduction

Остеоартроз коленного сустава (КОА) – это дегенеративное заболевание, которое в основном проявляется болью в суставах. Фиброз, растрескивание, изъязвление и потеря суставного хряща являются основными причинами этого заболевания¹. КОА имеет высокую распространенность и может оказывать глубокое влияние на повседневную жизнь пациентов, вызывая инвалидность в тяжелых случаях. Среди людей в возрасте 45-84 лет распространенность КОА увеличивается с возрастом, а распространенность среди людей в возрасте 85 лет и старше составляет 15%, с преобладанием у женщин ^2,3%. Кроме того, KOA может стать серьезным экономическим бременем как для отдельного человека, так и для общества. Опрос показал, что прямые расходы на здравоохранение на душу населения достигают 8 858 долларов США ± 5 120 долларов США^{в год.} Со старением общества КОА стала глобальной проблемой здравоохранения и серьезной социальной проблемой, а также актуальной проблемой для научных исследований.

Научно обоснованные исследования показали эффективность манипуляций Туина при лечении КОА⁵. Манипуляция Туина может облегчить боль и улучшить дисфункцию у пациентов с КОА, механизм которой связан с противовоспалительным действием ^6,7. Ученые обнаружили, что манипуляции Туина эффективно ингибируют экспрессию воспалительных факторов интерлейкина (ИЛ)-β и 5-гидрокситриптамина и замедляют дегенерацию суставного хряща у кролика модели^{КОА 8}. Было высказано предположение, что Туина может способствовать кровообращению и метаболизму в месте поражения, что помогает устранить воспалительные факторы, такие как IL-1, IL-6 и фактор некроза опухоли (TNF)-α, тем самым облегчая клинические симптомы КОА⁹. Кроме того, пассивное движение сустава с помощью манипуляций Туина может способствовать проникновению и диффузии синовиальной жидкости в суставной хрящ и улучшает метаболизм питательных веществ в тканях¹⁰. Другие исследования показали, что манипуляции Туина могут эффективно улучшать биомеханические показатели у пациентов с КОА¹¹. Манипуляции, применяемые к мягким тканям, могут улучшить распределение нагрузки по конечностям и улучшить функцию равновесия^12,13. В то же время при некоторых манипуляциях с выравниванием суставов выравнивание нижних конечностей также может быть скорректировано для коррекции аномальной походки^14,15.

Механизм действия манипуляций Туина при лечении КОА еще предстоит изучить, а потому необходимо экспериментальное исследование. Ключом к применению Tuina на экспериментальных животных является стандартизация методов моделирования, фиксации животных и вмешательства¹⁶. Метод моделирования определяет, может ли подопытное животное проявлять признаки заболевания. Между тем, соответствующие методы фиксации могут облегчить вмешательство манипуляции Туйна и лучше отразить эффект Туины. Стандартизация методов вмешательства является самой сложной частью манипуляции Туйна. В 2010 г. в базовой системе китайских стандартов акупунктуры упоминались стандарты акупунктурных точек для экспериментальных животных, обеспечивающие возможность проведения операций иглоукалывания и туйна в экспериментах на животных¹⁷. Тем не менее, по-прежнему существуют трудности со стандартизацией манипуляций с Туйной. Существует несколько видов манипуляций Туина¹⁸. Выбор конкретной манипуляции в основном зависит от заболевания, подлежащего лечению, и терапевтических теорий, которые предпочитает исполнитель. В исследовании Туйна для КОА больше внимания было уделено манипуляциям с точечным нажатием (нажатие на определенные акупунктурные точки большим пальцем или локтем), манипуляциям Ичичичань (манипуляция с надавливанием большим пальцем) и манипуляциям с нажимом и разминанием (что относится к надавливанию и разминанию определенной области поверхности тела пальцем или ладонью)¹⁹. Манипуляции с прессом и разминанием являются одной из наиболее широко используемых манипуляций Туины, которая сочетает в себе надавливание и разминание для перемещения подкожной клетчатки²⁰. Манипуляции с прессом и разминанием, применяемые к акупунктурным точкам, могут улучшить кровообращение и облегчить боль и представляют собой терапевтический эффект Туйна на КОА¹⁹.

В этом протоколе будет подробно описана операция манипуляций с прессом и разминанием на крысах с КОА, включая выбранные акупунктурные точки, интенсивность и частоту манипуляций и положение тела крысы, чтобы обеспечить ориентир для будущих исследований.

Protocol

Это исследование прошло проверку этики животных, проведенную экспериментальным комитетом по этике животных больницы интегрированной традиционной китайской и западной медицины Юэян при Шанхайском университете традиционной китайской медицины (YYLAC-2022-166). 1. Подготовк…

Representative Results

Тесты болевого поведенияРезультаты МВТ показали, что МВТ правой задней конечности после моделирования была достоверно ниже, чем до (стр<0,05). По сравнению с контрольной группой, MWT крыс была достоверно повышена после Tuina (p<0,05; Рисунок 5 и таблица 2). <p cl…

Discussion

В этом исследовании представлен протокол манипуляций Туина на крысах с КОА. С помощью тестов болевого поведения и гистоморфологических данных было высказано предположение, что такая серия манипуляций с Туйной, примененная к крысам с КОА, может уменьшить воспаление синовиальной оболо?…

Materials

absolute ethanol	Supelco	PHR1070	For making specimen
ALMEMO admeasuring apparatus	ahlborn	2450-1	For Mechanical Withdrawal Threshold test
Anti-Digoxin antibody	Sigma-Aldrich	SAB4200669	For HE stain IHC or TUNEL
Anti-IL-1 beta	abcam	ab283818	For HE stain IHC or TUNEL
DAB Substrate kit	Solarbio	DA1010	For HE stain IHC or TUNEL
Denture base materials	Shanghai New Century	20000356	For model making
eosin	bioswamp	PAB180016	For HE stain IHC or TUNEL
Finger pressure recordings	Suzhou Changxian Optoelectronic Technology	CX1003w	For Tuina manipulation
formic acid solution	Sigma-Aldrich	695076	For decalcification
H2O2	Sigma-Aldrich	386790-M	For HE stain IHC or TUNEL
hematoxylin	bioswamp	PAB180015	For HE stain IHC or TUNEL
Isoflurane	Shanghai Yuyan Scientific Instrument Company	S10010533	For gas anesthesia
neutral resins	bioswamp	PAB180017	For HE stain IHC or TUNEL
Paraformaldehyde Fix Solution	Sigma-Aldrich	100496	For histology
PBS	Sigma-Aldrich	P3813	For HE stain IHC or TUNEL
Plantar Test Apparatus	IITC Life Science	/	For Paw Withdrawal Latency test
plaster of Paris bandage	WANDE	20150023	For model making
Proteinase K	Sigma-Aldrich	124568	For HE stain IHC or TUNEL
TNF Alpha Monoclonal antibody	Proteintech	60291-1-Ig	For HE stain IHC or TUNEL
TUNEL	Servicebio	GDP1042	For HE stain IHC or TUNEL
Wax	Sigma-Aldrich	327204	For making specimen
xylene	Shanghai Sinopharm Group	100092	For making specimen