Summary

Creazione di un modello murino di fistola oronasale

Published: September 08, 2023
doi:

Summary

Questo articolo delinea una procedura passo passo per stabilire un modello di topi con una fistola oronasale. La fistola oronasale è stata creata impiegando un cauterizzatore oftalmologico riscaldato per danneggiare la porzione mediana del palato duro, con conseguente formazione di un’apertura tra le cavità orali e nasali.

Abstract

Questo studio presenta un metodo che utilizza il cauterizzazione oftalmologica riscaldata per sviluppare un modello praticabile per lo studio delle fistole oronasali. I topi C57BL/6 sono stati utilizzati per stabilire il modello di fistola oronasale (ONF). Per creare l’ONF, i topi sono stati anestetizzati e immobilizzati e i loro palati duri sono stati esposti. Durante la procedura chirurgica, è stata indotta una lesione della mucosa a tutto spessore di 2,0 x 1,5 mm nella linea mediana del palato duro utilizzando la cauterizzazione oftalmologica. Era fondamentale controllare le dimensioni dell’ONF e ridurre al minimo il sanguinamento per garantire il successo dell’esperimento. La verifica dell’efficacia del modello ONF è stata condotta il 7° giorno dopo l’intervento, comprendendo sia valutazioni anatomiche che funzionali. La presenza del setto nasale all’interno della cavità orale e il deflusso di acqua sterile dalle narici al momento dell’iniezione nella cavità orale hanno confermato il successo del modello ONF. Il modello ha dimostrato una fistola oronasale pratica e di successo, caratterizzata da un basso tasso di mortalità, variazioni di peso significative e variazioni minime nelle dimensioni dell’ONF. Studi futuri potrebbero prendere in considerazione l’adozione di questa metodologia per chiarire i meccanismi di guarigione delle ferite del palato ed esplorare nuovi trattamenti per le fistole oronasali.

Introduction

La fistola oronasale (ONF), un’apertura anomala tra la cavità orale e quella nasale, si manifesta clinicamente come un difetto in un’area strutturale dal processo alveolare all’ugola, che si verifica comunemente come complicanza dopo la riparazione della palatoschisi1. I pazienti con ONF soffrono di reflusso alimentare, disturbi articolari e compromissione della funzione velofaringea, con un impatto significativo sulla qualità della vita 2,3,4. Il tasso di ONF post-operatoria varia dal 2,4% al 55% a causa di fattori quali la larghezza della schisi, il tipo di Veau e il metodo chirurgico 5,6,7,8. Inoltre, il tasso di recidiva dopo la riparazione dell’ONF è elevato, compreso tra lo 0% e il 43%9.

Diversi nuovi trattamenti si sono recentemente dimostrati promettenti nel campo dell’ONF, tra cui diversi materiali, farmaci e nuove tecniche 10,11,12,13,14,15,16,17. Una valutazione accurata degli effetti terapeutici è essenziale in quanto fornisce la base per la selezione e l’ulteriore sviluppo dei trattamenti per l’ONF. Tuttavia, ottenere una valutazione valida a breve termine per gli effetti terapeutici diversi dalla chirurgia è difficile, poiché le caratteristiche degli ONF variano tra i diversi pazienti. Pertanto, è necessario stabilire un modello di malattia ONF per verificare l’efficacia di questi metodi di trattamento.

Per diversi decenni, i ricercatori hanno generato il modello della fistola oronasale (ONF) in varie specie animali, tra cui ratti18,19, suinetti20,21, minipig22 e cani23, poiché queste specie possiedono un palato duro sostanziale adatto alla manipolazione chirurgica. Tuttavia, i topi hanno una sequenza genetica e un intero genoma simili a quelli degli esseri umani, il che li rende un modello importante per la ricerca e lo sviluppo di nuovi farmaci24,25,26. Inoltre, i topi offrono poche variazioni da lotto a lotto, il che li rende una scelta favorevole per stabilire il modello ONF12,13,27.

Tuttavia, i passaggi dettagliati per la creazione di ONF non sono stati descritti e la stabilità delle dimensioni ONF non è stata presa in considerazione. Inoltre, la verifica della formazione di ONF si basava esclusivamente sull’osservazione28, senza garantire la comunicazione diretta tra la cavità orale e quella nasale. Non è stato dimostrato con altri mezzi, come la perdita di peso corporeo del topo a causa delle difficoltà alimentari causate dall’ONF. Inoltre, non è stata presa in considerazione la normale variazione delle dimensioni della ferita, che è fondamentale per gli studi su farmaci o materiali che promuovono o inibiscono la guarigione della ferita. Pertanto, vi è una forte necessità di stabilire un modello ONF stabile e convalidato.

L’obiettivo di questo studio è stato quello di sviluppare un modello pratico di ONF che affronti le questioni di cui sopra, con la speranza che questo protocollo serva come base per la ricerca futura sui meccanismi di guarigione delle ferite palatali e nuovi trattamenti per l’ONF.

Protocol

Tutte le procedure sugli animali in questo studio sono state esaminate e approvate dal Comitato Etico della Scuola di Stomatologia della Cina Occidentale, Università del Sichuan. Per il presente studio sono stati utilizzati topi adulti C57BL/6 (femmine). 1. Preparazione chirurgica Raccogli gli strumenti chirurgici necessari per la procedura: germinatore, cauterizzazione oftalmologica, forbici microchirurgiche, pinzette microchirurgiche, siringhe e aghi (26 g x 0,63 …

Representative Results

Per valutare la fattibilità e la stabilità di questo metodo sperimentale, la stessa procedura è stata eseguita su dieci topi e sono state fatte osservazioni riguardanti la mortalità, i cambiamenti nelle dimensioni della ferita, il peso corporeo e l’analisi istologica. I topi sono stati soppressi il giorno 7. La procedura ha mostrato un basso tasso di mortalità. Il cauterizzazione oftalmologica e il germinatore, raffigurati nella Figura 1A-C<s…

Discussion

I ricercatori hanno esplorato vari materiali, farmaci e nuove tecniche per il trattamento dell’ONF 10,11,12,13,14,15,16,17. Con i progressi nelle procedure chirurgiche, l’incidenza e la recidiva di ONF sono state ridotte. Tuttavia, a causa delle caratterist…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Questo lavoro è stato supportato dal programma di ricerca e sviluppo, dall’ospedale di stomatologia della Cina occidentale, dall’Università del Sichuan (RD-02-202107), dal programma di supporto alla scienza e alla tecnologia della provincia del Sichuan (2022NSFSC0743) e dalla sovvenzione della Fondazione scientifica post-dottorato del Sichuan (TB2022005) a H. Huang.

Materials

Germinator Electron Microscopy Sciences  66118-20 Heating and disinfection equipment
Latex gloves Allmed or similar
Lights Olympus A1813
Meloxicam MedChemExpress HY-B0261 crushed; 5 mg/kg
Microsurgical instruments (scissors and tweezers) Jiangsu Tonghui Medical Devices Co. M-Y-0087 Surgical instrument
Ophthalmologic cautery Suqian Wenchong Medical Equipment Co. 1.00234E+13 Surgical instrument
Sterile cotton, Yancheng Begu Technology Co. or similar
Sterile metal foil Biosharp or similar
Sterile sheets 3M XH003801129 or similar
Surgical drapes Yancheng Begu Technology Co. or similar
Syringes Yancheng Begu Technology Co. S-015301 or similar
Tape Bkmamlab or similar
Temperature maintenance device Harvard Apparatus  LE-13-2104
Zoletil50 Virbac 80 mg/kg

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Cite This Article
Chen, J., Yin, J., Zhang, S., Zhuang, S., Yang, R., Xu, Y., Zheng, Q., Shi, B., Huang, H. Establishment of an Oronasal Fistula Mice Model. J. Vis. Exp. (199), e65578, doi:10.3791/65578 (2023).

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