Testa Nikotin Tolerans i Bladlöss med konstgjord Diet experiment

Summary

I denna video och analysen är visat att testerna toleransen av nikotin till två typer av bladlöss en som infests tobaksplantor i fält och en som inte gör det.

Abstract

Växter kan upregulate produktionen av många olika seconday metaboliter som svar på insekter utfodring. En av dessa metaboliter, nikotin, är ett välkänt att ha insektsbekämpande egenskaper. Ett svar av tobak växter till herbivori, eller att gnagde på av insekter, är att öka produktionen av denna neurotoxiska alkaloid. Här kommer vi att visa hur du ställer in ett experiment för att ta itu med frågan om en tobaks-anpassad stam av den gröna persika bladlöss, Myzus persicae, kan tolerera högre halter av nikotin än en stam av denna insekt som inte angripa tobak fältet.

Protocol

I detta experiment är 4 vuxna bladlöss inneslutna i en liten plastmugg. De foder från flytande kost pipetteras mellan två lager av parafilm sträckte sig över toppen av koppen. Efter tre dagars utfodring, är toxicitet kost som innehåller olika halter av nikotin jämfört med kontroll kost genom att räkna vuxna och larver bladlöss i varje kopp.

1. Gör lösningar som innehåller sackaros och 20 aminosyror. Bladlöss kan livnära sig på denna diet, reproduktion på normala nivåer, i minst en vecka. Vänligen se bifogad fil för artificiell diet.
2. Alikvotera 1 ml av denna diet i 6 olika Eppendorf-rör som innehåller nikotin. Märka dem med avseende på olika koncentrationer av nikotin som används, allt från 0-500μM.
3. Välj 4 bladlöss, antingen röd eller grön, och tas i dessa experimentella koppar.
4. Vid val av bladlöss, är det viktigt att de konsekvent ålder. Typiskt, leta efter bladlöss av liknande storlek och färg (den röda bladlöss blir mörkare när de är äldre).
5. Täck koppen med en bit parafilm. Bifoga kosten mellan 2 bitar av parafilm. Delvis sträcka den andra parafilm nivån runt kanterna på koppen. Alikvotera den flytande kost mellan lager och tätning det översta lagret ner.
6. Förvara dessa koppar i insekten rummet under lampor i en lång dag fotoperiod i 3 dagar, varefter data för experimentet kan samlas in.

Besök de årliga översynerna av växtbiologi för mer information om detta protokoll och anläggning immunitet mot insekter herbivori.