Name: Ölçme Caenorhabditis elegans Katı Medya Ömrü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-05-12T00:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 49 s
Description: Keşfedin Caenorhabditis elegans yaşam süresi ölçüm protokolünü katı ortamda UV öldürülmüş bakteri kullanarak. Bu yöntem yaşlanma genetiği ve gelişim biyolojisi araştırmalarında model organizma çalışmalarına değerli katkı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<p class="jove_content"> Bu çalışma Gerontoloji Ödülü ve NIH Hibe MKGS 1R01AG031108-01, Ulusal Sağlık Enstitüsü, eğitim hibe P30AG013280 tarafından desteklenen bir Glenn / Afar buluşlar tarafından desteklenmiştir. MK Yaşlanma Ellison Tıp Vakfı Yeni Scholar. </p>

<p class="jove_title"> Bölüm 1: hazırlayın nematod büyüme ortamı (NGM) plakaları. </p><p class="jove_content"> Bu bölümde, ömrü deneyde kullanılmak üzere sağlam NGM plakaların hazırlanmasında açıklamaktadır. Ampisilin (Amp) ve NGM eklendi fluorodeoxyuridine (FUDR) hiçbir katkı maddesi ve Amp / FUDR tabak, içeren standart NGM tabak, temel bir ömrü deney iki tip plakalar gerektirir. Ampisilin yabancı bakteri bulaşmasını önlemek için kullanılır. FUDR, hücre bölünmesini inhibe yumurta üretimini azaltır, ve kuluçkalık yumurta engeller. Uzun ömürlü analiz için FUDR yetişkin kullanım ömrü etkileyecek ve birkaç gün büyüyen larva onları ayırmak için her solucanları aktarmak için gereksinimini ortadan kaldırır. Her iki tür plakaların <em>E.</em> ile seeded sonradan UV ışınlarına maruz tarafından öldürülen <em>coli</em> OP50 bakteri. </p><ol><li> NGM (tarifi ve depolama notları için bkz: Bölüm 5) ve etiket petri tabak hazırlayın. NGM 10 ml başına 1 60 mm petri tabak gerekir. Önceden hazırlanmış katı NGM ile başlayan iseniz, 1.2 adıma geçin. Taze otoklavlanmış NGM ile başlayan iseniz, 1.4 adıma geçin. </li><li> Tamamen katı NGM 30 saniyelik bakliyat yüksek mikrodalga eritebilir. Kadar bina basınçlı gaz kabarcıklarını engellemek için bakliyat arasındaki Swirl medya. </li><li> 55 ° C su banyosu ya da soğutmak için bankta Yeri sıvı NGM. </li><li> Bir kez NGM ulaştığında 55 ° C, 150 mM FUDR 33 mcL ve 100 mg / ml, 100 ml NGM başına ampisilin (Amp / FUDR plakalar için) ve karıştırın girdap 100 mcL ekleyin. NGM plakaları için ek ilaçsız, 1.5 adıma doğrudan geçin. </li><li> Her 60 mm petri tabak içine steril tekniği, pipetle 10 ml NGM kullanma. Mümkünse kabarcıklar oluşturan kaçının. Kabarcıkları varsa, bunlar bir pipet kullanarak attı. </li><li> NGM katılaşmaya ve kuru izin kapaklarını bankta plakaları bırakın. Mümkünse, bakteri eklemeden önce 2 gün boyunca bankta plakaları bırakın ama plakaları er ihtiyaç vardır 1 gün çalışacaktır. </li><li> Günü plakaları <em>E.</em> taze bir çizgi tek bir koloni ile kurutma, tohum sıvı LB kültür bitirmeden önce LB agar <em>coli</em> OP50 bakteri. 60 mm plaka başına bir gecede OP50 kültürünün en az 1 ml hazırlamalıdır. </li><li> 37 Yeri OP50 kültür ° C çalkalayıcı ve bakteriler (kültür doygunluk ulaşmak olmalıdır) gece boyu büyümeye izin verir. </li><li> Pelet OP50 10 dakika boyunca 3.500 g iplik bakteri. </li><li> Süpernatant ve tekrar süspansiyon bakteri kültürü 10x konsantre% 90 çıkarın. </li><li> Pipet 100 mcL 10x konsantre OP50 kültür merkezi haline katılaşmış NGM plakalar. (Ideal bakteriler plaka duvarları yakınında gelmeden NGM merkezi alanı kapsamalıdır) gerekirse Swirl plakaları yavaşça bakteri kültürü yaymak için. Medya yüzey kusurları NGM içine yuva solucanlar izin verdiği ölçüde, NGM yüzeye pipet dokunmaktan kaçınmak için deneyin. </li><li> Bakteri kültürü katı NGM (genellikle 24 saat sürer) üzerinde kurumasına izin gecede bankta plakaları bırakın. </li><li> Kuruduktan sonra, plakaların yüzey bakterilerin büyüme durması için yeterli bir UV dozu maruz. Bir Stratagene UV Stratalinker 2400 kullanıyorsanız: <ul><li> Yeri Stratalinker plakaları ve kapakları kaldırmak </li><li> Kapıyı kapatın ve Stratalinker açmak </li><li> Basın 'Enerji' </li><li> '9999 'Tuş takımını kullanarak girin </li><li> Press 'Başlat' </li><li> Plakalar yaklaşık 5 dakika süreyle UV ışınlarına maruz kalacağı </li></ul></li><li> UV-öldürülmüş bakteri ile Tabaklar, 4 ° C 1 aya kadar baş aşağı saklanabilir. </li></ol><p class="jove_title"> Bölüm 2: zamanlanmış bir yumurta hayvanların yaş senkronize bir nüfus elde etmek için döşeme gerçekleştirin. </p><p class="jove_content"> Bu bölümde ortak bir ambar güncel solucanları bir nüfusa üretir. Bu üreme aktif yetişkin için zaman belirli bir süre için bir plaka üzerine yumurtalarını bırakmak için izin ve bu yumurtaları geliştirmek için izin gerçekleştirilir. </p><ol><li> (Isteğe bağlı), yaklaşık 20 genç erişkin solucanlar FUDR olmadan yeni bir NGM plaka aktarın. 25 ° C, solucanlar, tüm bakteri gıda yoluyla yaymak ve yemek sağlamak amacıyla plakaları bırakın. Yeni yumurtadan çıkan solucanlar bakteriyel gıda tüketilen edildikten sonra tutuklanan büyüme Dauer sahne girecek. Başlangıçta plaka transfer kaç solucanlar bağlı olarak, bir hafta içinde yaklaşık Dauer larva görmeye başlayacaksınız. Dauer larva 1 ay kadar bir sonraki adımlar için kullanılabilir. </li><li> FUDR olmadan taze NGM plaka (İsteğe bağlı) Transfer 20 30 Dauer larva. , 2 gün içinde üreme aktif yetişkin gıda Dauer larva varlığı haline gelecektir ve bundan sonra 25 üreme birkaç gün boyunca aktif kalır ° C </li><li> 10 ila 15 üreme aktif yetişkin FUDR olmadan yeni bir NGM plaka aktarın. Bu plaka Zamanlı yumurtlama (TEL) plaka olarak adlandırılır. </li><li> 25 ° C 6 saat için izin vermek için TEL plaka bırakınsolucanlar zaman yumurtalarını bırakmak için. </li><li> TEL plaka erişkin solucanlar çıkarın. Plaka yetişkin çıkarmadan önce yumurta için görsel olarak kontrol edilebilir. TEL plaka, solucanlar, yeterli sayıda yumurta koydu varsa erişkin solucanlar çıkarmadan önce 24 saat olmak üzere toplam 25 ° C kadar sol olabilir. </li><li> Place TEL plaka 20 ° C yumurtadan yumurta var ve solucanlar L4 larva dönemi (bu genellikle vahşi tip C. elegans için 2 gün sürer, ama yavaş gelişimi fenotipleri suşları için uzun sürebilir) için geliştirdiği kadar. </li></ol><p class="jove_title"> Bölüm 3: Puan hayvanların ömrü </p><p class="jove_content"> Ölünceye kadar bu bölümde Bölüm 2 solucanlar yaş senkronize nüfus izleyin. Worms, yumurta üretimi ve bakteriyel kontaminasyonu önlemek için Amp / FUDR tabak tutulur ve dış uyaranlara yanıt vermeyen ölü olarak kabul edilir. </p><ol><li> Numaralı seribaşı Amp / FUDR plakaları L4 larva transferi. Her bir gerginlik ya da koşulu test için, plaka başına 25-30 solucanlar ile 2-3 tabak kurmak için tipik bir örneğidir. <em>C.</em> Görüntüler <em>elegans</em> yaşam evrelerinde referans verilmektedir (Şekil 1) <sup>1</sup> </li><li> Place Amp / FUDR plakaları 20 ° C 24 saat boyunca. </li><li> 24 saat sonra, görsel, solucanlar, medya, ve bakteri değerlendirmek. Aşağıdakilerden herhangi birini görülmektedir taze Amp / FUDR plakaları solucanlar transferi: <ul><li> Worms bakteriyel gıda yemiş. Erken, ömrü deney solucanlar tükenmiş olan bakterileri önlemek için bir hafta 1 ila 2 kez transfer edilebilir olacaktır. </li><li> Larvaların önemli bir kısmı mevcuttur. Bu genellikle solucanlar L4s yerine genç yetişkinler olarak Amp / FUDR plakaları ve FUDR yürürlüğe girmiştir önce bazı yumurtalarını bırakmak için mümkün olduğu bir göstergesidir. FUDR genellikle tam yetişkin içine büyüyen larva önlemek, ancak bazen bir kaç yetişkin içine büyümek ve deney hayvanları ile karıştırılmamalıdır olacak. </li><li> Canlı / büyüyen bakteriler gözlenir. Genel olarak, Amp ve UV-öldürme arada hiçbir canlı bakteri deney kontamine sağlayacaktır, ancak zaman zaman ortaya çıkar. </li><li> Mantar büyüme medya görülmektedir. Yeterince erken yakalanmış ise, mantar üremesine genellikle bir pipet veya spatula kullanarak kesip olabilir. Bir kere, birkaç milimetre çapında yeni bir plaka solucanlar aktarmak için genellikle daha kolaydır daha büyük olması yetişir. </li><li> Diseksiyon kapsamı kullanarak, her solucan, canlı ya da ölü olup olmadığını belirlemek. </li><li> Plaka hafifçe dokunun. Solucan dinlenmesine tepki olarak hareket ederse canlıdır. </li><li> Solucan başkanı bölgeye dokunarak levha, zoom için yanıt vermezse. </li><li> Platin transfer mızrapla solucan kafasını hafifçe dokunun. Puan başını hareket ettirerek yanıt vermemesi durumunda ölü olarak solucan. </li><li> Ölü solucanlar plaka çıkarılabilir. </li></ul></li><li> Canlı ve ölü bir tarih ve solucanlar sayısını kaydedin. </li><li> 20 ° C'ye kadar plakaları dön </li><li> Tüm solucanların ölmüş kadar tekrarlayın 3.3 3.6 sayesinde her 2 ila 3 gün adımları. </li></ol><p class="jove_title"> Bölüm 4: Temsilcilik Sonuçları. </p><p class="jove_content"> Bir nematod ömrü deneyi tarafından üretilen ham veri, numaralarını içeren test her bir suş için canlı ve ölü solucanları tarihleri ​​bir liste. Her gün ölen sayısı solucanlar genellikle, bir hayatta kalma eğrisi (Şekil 2B olarak grafiksel olarak çizilen her gün canlı solucanlar oranı (Şekil 2A), hesaplamak için ters; Zamanlı yumurtlama günü 0. gün olarak kabul edilir .) Çalışmada her bir solucan için ömrü, her gün ölen solucanlar sayısı hesaplanır ve suşları arasında karşılaştırma için ortalama ve medyan yaşam süresi hesaplamak için kullanılabilir. Her gün canlı solucanlar sayısı sayımı ömrü analizi doğrudan kullanılmaz. Worms katı ortam üzerinde muhafaza bazen 'kaçmak', ya da medya altındaki plaka veya aşağı duvar ya tarama. Her gün canlı solucanlar deney kurs boyunca pek çok solucan, nasıl kaçtı sayısını belirlemek için kullanılabilir. Kaçmak Solucanlar genellikle analiz kaldırılır. N2, <em>C.</em> için bir kriter olarak, tipik bir medyan yaşam süresi 20 UV-öldürülmüş bakteri muhafaza <em>elegans</em> yabani tip gerilim ° C yumurtadan ölçülen yaklaşık 25 gündür. </p><p class="jove_title"> Bölüm 5: Çözümler </p><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>Nematodu Büyüme Medya (NGM), 100 ml:</strong> </td></tr><tr><td colspan="2"> Birleştirin: </td></tr><tr><td> 0,3 g </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 0.25 g </td><td> Pepton </td></tr><tr><td> 2 g </td><td> Agar </td></tr><tr><td colspan="2"> <strong>40 dakika otoklav ve soğuması ile 55 ° C, sonra ekliyorum:</strong> </td></tr><tr><td> 100 mcL </td><td> 1 M MgSO <sub>4</sub> </td></tr><tr><td> 100 mcL </td><td> 5 mg / ml Kolesterol </td></tr><tr><td> 100 mcL </td><td> 1 M CaCl<sub>2</sub> </td></tr><tr><td> 1.625 ml </td><td> 1.5 M KPI pH 6.0 </td></tr><tr><td colspan="2"> Sıvı NGM oda sıcaklığında plakaları dökmek için hemen kullanılabilir veya sağlamlaştırmak için izin ve uzun vadeli saklanır. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>Luria Broth (LB), 1L:</strong> </td></tr><tr><td> 10 g </td><td> BactoTryptone </td></tr><tr><td> 5 g </td><td> Maya Ekstraktı </td></tr><tr><td> 10 g </td><td> NaCl </td></tr><tr><td> 10 ml </td><td> 1 M Tris pH: 8.0 </td></tr><tr><td> 1 L </td><td> deiyonize su </td></tr><tr><td colspan="2"> Otoklav ve oda sıcaklığında saklayın. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M MgSO <sub>4,</sub> 300 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 73,95 g </td><td> MgSO <sub>4</sub> </td></tr><tr><td> 300 mL </td><td> deiyonize su </td></tr><tr><td colspan="2"> Otoklav ve oda sıcaklığında saklayın. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>5 mg / ml Kolesterol, 200 mL:</strong> </td></tr><tr><td> 1 g </td><td> kolesterol </td></tr><tr><td> 200 mL </td><td> % 100 etanol </td></tr><tr><td colspan="2"> Sterilize Filtre ve oda sıcaklığında muhafaza. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M CaCl <sub>2,</sub> 500 ml:</strong> </td></tr><tr><td> 27,75 g </td><td> CaCl <sub>2</sub> </td></tr><tr><td> 500 mL </td><td> deiyonize su </td></tr><tr><td colspan="2"> Sterilize Filtre ve oda sıcaklığında muhafaza. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1.5 M KPI pH 6.0, 1L:</strong> </td></tr><tr><td colspan="2"> Birleştirin: </td></tr><tr><td> 31.4 g </td><td> KPI dibazik </td></tr><tr><td> 179,6 g </td><td> KPI tekbazlı </td></tr><tr><td> 850 mL </td><td> deiyonize su </td></tr><tr><td colspan="2"> Isı KPI çözüm çözünmesi için karıştırma sırasında. 10 N NaOH ile pH 6,0 'a ayarlayın. </td></tr><tr><td colspan="2"> 1 L. deiyonize su ekleyin </td></tr><tr><td colspan="2"> Otoklav ve oda sıcaklığında saklayın. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M Tris, pH 8.0:</strong> </td></tr><tr><td> 60,57 g </td><td> Tris </td></tr><tr><td> 400 mL </td><td> deiyonize su </td></tr><tr><td colspan="2"> HCl ile pH 8.0 ayarlayın. </td></tr><tr><td colspan="2"> 500 mL deiyonize su ekleyin. </td></tr><tr><td colspan="2"> Sterilize Filtre ve oda sıcaklığında muhafaza. </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>150 mM Fluorodeoxyuridine (FUDR), 10 ml:</strong> </td></tr><tr><td> 0,3693 g </td><td> FUDR </td></tr><tr><td> 10 ml </td><td> steril deiyonize su </td></tr><tr><td colspan="2"> -20 ° C'de muhafaza </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>100 mg / ml ampisilin (Amp), 10 ml:</strong> </td></tr><tr><td> 1 g </td><td> Ampisilin </td></tr><tr><td> 10 ml </td><td> steril deiyonize su </td></tr><tr><td colspan="2"> -20 ° C'de muhafaza </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>50 mg / ml Carbenicillin (Carb), 10 ml:</strong> </td></tr><tr><td> 500 mg </td><td> Carbenicillin </td></tr><tr><td> 10 ml </td><td> steril deiyonize su </td></tr><tr><td colspan="2"> -20 ° C'de muhafaza </td></tr></tbody></table><table border="0"><tbody><tr><td colspan="2"> <strong>1 M İzopropil β-d-Thiogalactopyranoside (IPTG), 10 ml:</strong> </td></tr><tr><td> 2.38 g </td><td> IPTG </td></tr><tr><td> 10 ml </td><td> steril deiyonize su </td></tr><tr><td colspan="2"> -20 ° C'de muhafaza </td></tr></tbody></table><p class="jove_content"><img src="/files/ftp_upload/1152/Figure%201.png" alt="Şekil 1"><br> <strong>Şekil 1.</strong> <em>C.</em> Aydınlık alan görüntüler yumurta da dahil olmak üzere <em>elegans</em> yaşam evreleri, dört larva aşamaları (L1-L4) ve yetişkin. Tüm paneller, yetişkin bir erkek (Wood (1988) Image), sağ alt hariç hermafroditlerde göstermektedir. </p><p class="jove_content"><img src="/files/ftp_upload/1152/Figure%202.png" alt="Şekil 2"><br> <em>C.</em> <strong>Şekil 2</strong> Temsilcisi sonuçları <em>elegans</em> ömrü deneyi <em>daf-2</em> genindeki bir mutasyon içeren bir yük vahşi tip suşu N2 karşılaştırarak. (A) toplanan solucanların yumurtaları beri gün sayısı da dahil olmak üzere veriler, her gün görülen ölü solucanlar sayısını, ve her gün hayatta kalan orijinal numunenin yüzdesi (ölü solucanlar günlük sayıları hesaplanan) gösteren bir tablo . (B) Survival ve (A) ömrü verilere karşılık gelen eğriler. </p><p class="jove_content"><imgsrc files alt='"Şekil'></imgsrc> <strong>Şekil 3</strong> genç ve yaşlı yetişkin <em>C</em> arasında lipofusin Temsilcisi karşılaştırma <em>elegans.</em> Aydınlık alan görüntülerin sağ ve sol DAPI kanal floresan görüntüler gösterilir. En paneller 4 gün eski bir solucan ve alt paneller (yumurta ölçülen gibi) 11 gün eski solucan göstermektedir. </p>

<ol><li>Wood, W. B. <em><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWood%2C+WB+%22The+Nematode+Caenorhabditis+elegans%22">The Nematode Caenorhabditis elegans</a></em>. Wood, W. B. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, NY. 1-16 (1988).</li>
<li>Sutphin, G. L., Kaeberlein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+restriction+by+bacterial+deprivation+increases+life+span+in+wild-derived+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Dietary restriction by bacterial deprivation increases life span in wild-derived nematodes.</a> <em>Exp Gerontol</em>. <strong>43</strong>, 130-135 (2008).</li>
<li>Garigan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+tissue+aging+in+Caenorhabditis+elegans%3A+a+role+for+heat-shock+factor+and+bacterial+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of tissue aging in Caenorhabditis elegans: a role for heat-shock factor and bacterial proliferation.</a> <em>Genetics</em>. <strong>161</strong>, 1101-1112 (2002).</li>
<li>Chen, D., Pan, K. Z., Palter, J. E., Kapahi, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longevity+determined+by+developmental+arrest+genes+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Longevity determined by developmental arrest genes in Caenorhabditis elegans.</a> <em>Aging Cell</em>. <strong>6</strong>, 525-523 (2007).</li>
<li>Curran, S. P., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lifespan+regulation+by+evolutionarily+conserved+genes+essential+for+viability%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Lifespan regulation by evolutionarily conserved genes essential for viability.</a> <em>PLoS Genet</em>. <strong>3</strong>, e56-e56 (2007).</li>
<li>Dillin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rates+of+behavior+and+aging+specified+by+mitochondrial+function+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Rates of behavior and aging specified by mitochondrial function during development.</a> <em>Science</em>. <strong>298</strong>, 2398-2401 (2002).</li>
<li>Hamilton, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+RNAi+screen+for+longevity+genes+in+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">A systematic RNAi screen for longevity genes in C. elegans.</a> <em>Genes Dev</em>. <strong>19</strong>, 1544-1555 (2005).</li>
<li>Hansen, M., Hsu, A. L., Dillin, A., Kenyon, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+genes+tied+to+endocrine%2C+metabolic%2C+and+dietary+regulation+of+lifespan+from+a+Caenorhabditis+elegans+genomic+RNAi+screen%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">New genes tied to endocrine, metabolic, and dietary regulation of lifespan from a Caenorhabditis elegans genomic RNAi screen.</a> <em>PLoS Genet</em>. <strong>1</strong>, 119-128 (2005).</li>
<li>Lee, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+systematic+RNAi+screen+identifies+a+critical+role+for+mitochondria+in+C.+elegans+longevity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">A systematic RNAi screen identifies a critical role for mitochondria in C. elegans longevity.</a> <em>Nat Genet</em>. <strong>33</strong>, 40-48 (2003).</li>
<li>Smith, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-+and+calorie-independent+life+span+extension+from+dietary+restriction+by+bacterial+deprivation+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Age- and calorie-independent life span extension from dietary restriction by bacterial deprivation in Caenorhabditis elegans.</a> <em>BMC Dev Biol</em>. <strong>8</strong>, 49-49 (2008).</li>
<li>Hodgkin, J., Horvitz, H. R., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nondisjunction+Mutants+of+the+Nematode+CAENORHABDITIS+ELEGANS%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Nondisjunction Mutants of the Nematode CAENORHABDITIS ELEGANS.</a> <em>Genetics</em>. <strong>91</strong>, 67-94 (1979).</li>
<li>Emmons, S. W., Sternberg, P. W. <em>C. ELEGANS II</em>. Riddle, D. L., Blumenthal, T., Meyer, B. J., Priess, J. R. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Springs Harbor, NY. (1997).</li>
<li>Lipton, J., Kleemann, G., Ghosh, R., Lints, R., Emmons, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mate+searching+in+Caenorhabditis+elegans%3A+a+genetic+model+for+sex+drive+in+a+simple+invertebrate%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Mate searching in Caenorhabditis elegans: a genetic model for sex drive in a simple invertebrate.</a> <em>J Neurosci</em>. <strong>24</strong>, 7427-7434 (2004).</li>
<li>Davis, B. O., Anderson, G. L., Dusenbery, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Total+luminescence+spectroscopy+of+fluorescence+changes+during+aging+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Total luminescence spectroscopy of fluorescence changes during aging in Caenorhabditis elegans.</a> <em>Biochemistry</em>. <strong>21</strong>, 4089-4095 (1982).</li>
<li>Klass, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+in+the+nematode+Caenorhabditis+elegans%3A+major+biological+and+environmental+factors+influencing+life+span%5BTitle%5D)+AND+%22Mech+Ageing+Dev%22%5BJournal%5D)">Aging in the nematode Caenorhabditis elegans: major biological and environmental factors influencing life span.</a> <em>Mech Ageing Dev</em>. <strong>6</strong>, 413-429 (1977).</li>
<li>Steinkraus, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+restriction+suppresses+proteotoxicity+and+enhances+longevity+by+an+hsf-1-dependent+mechanism+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Dietary restriction suppresses proteotoxicity and enhances longevity by an hsf-1-dependent mechanism in Caenorhabditis elegans.</a> <em>Aging Cell</em>. <strong>7</strong>, 394-404 (2008).</li>
</ol>

<p class="jove_content"> Uzun ömürlü genetik kontrol <em>C.</em> yaygın olarak incelenmiştir <em>elegans,</em> büyük ölçüde ömrü tespit edilebilir olan kolaylığı ve hızı nedeniyle. Bu makalede açıklanan protokol <em>C.</em> tekrarlanabilir ömrü veri elde etmek için temel bir çerçeve tanımlar <em>elegans</em> ve relatednematode türler için de uygulanabilir. <sup>2,</sup> bu işlemler çok çeşitli şartlar altında ömrü ölçmek için adapte edilebilir basit bazı değişiklikler yaparak . Burada RNA enterferans (RNAi), bakteriyel yoksunluk diyet kısıtlama...

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0145-17-0 (214530)</td><td></td></tr><tr><td>Ampisilin</td><td>Reaktif</td><td>MidSci</td><td>0339</td><td></td></tr><tr><td>BactoTryptone</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0123-17-3 (211705)</td><td></td></tr><tr><td>BactoPeptone</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0118-17-0 (211677)</td><td></td></tr><tr><td>CaCl&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9699248 (1332-01)</td><td></td></tr><tr><td>Karbenisilin</td><td>Reaktif</td><td>Gold Biotechnology</td><td>C0109</td><td></td></tr><tr><td>Kolesterol</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C75209</td><td></td></tr><tr><td>Fluorodeoksiridin (FUDR)</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0503</td><td></td></tr><tr><td>İzopropil &amp;#946;-d-Tiyogalaktopiranozid (IPTG)</td><td>Reaktif</td><td>Gold Biotechnology</td><td>I2481C5</td><td></td></tr><tr><td>KPi Dibazik</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td>5087862 (3252-01)</td><td></td></tr><tr><td>KPi Monobazik</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td>5087861 (3246-01)</td><td></td></tr><tr><td>MgSO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9561800 (2500-01)</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td>S251</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Reaktif</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Maya Ekstraktı</td><td>Reaktif</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0886-17-0 (288620)</td><td></td></tr></tbody></table>

Ölçme<em> caenorhabditis elegans</em> katı medya Ömrü

Measuring <em>Caenorhabditis elegans</em> Life Span on Solid Media

<p class="jove_content">Yaşlanma, hücresel bileşenleri ve ölüm ile sonuçlanan organelleri ilerleyici bir bozulma ile karakterize dejeneratif bir süreç. Nematod<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Yaşlanma biyolojisi okumak için kullanılan bir ana model olarak ortaya çıkmıştır. Hemen hemen her biyolojik alt sistemi, artan yaş ile fonksiyonel düşüş uğrar Çünkü yaşlanma toplam oranı göz önüne alındığında, ömrü ilgi birincil son nokta. Nematod, ömrü genellikle bir hayvan dış uyaranlara yanıt kalır gün sayısı olarak tanımlanır. Nematodlar ya da sıvı ortamda veya plakalar katı ortam üzerinde yayılır olabilir ve her şartlar altında ömrü ölçüm teknikleri geliştirilmiştir. Burada katı nematod büyüme ortamı devam nematod ömrü ölçmek için genelleştirilmiş bir protokol mevcut ve UV-öldürülmüş bakteri bir diyetle beslenen. Bu prosedürler kolayca canlı bakteri, diyet kısıtlaması, ve RNA girişim oluşan bir diyet de dahil olmak üzere, çeşitli ortak koşullar altında tahlil ömrü adapte olabilir.</p>

<p class="jove_content">Bu yazıda, UV öldürüldü bakteriyel gıda ile sağlam bir medya üzerinde muhafaza nematod ömrü ölçmek için genel bir protokol mevcut.</p>

Ölçme<em> Caenorhabditis elegans</em> Katı Medya Ömrü

Yaşlanma, hücresel bileşenlerin ve organellerin progresif bozulmasıyla karakterize olan ve ölümle sonuçlanan dejeneratif bir süreçtir. Nematod ...

<p>C. elegans'ta yaşam süresini ölçmek için, zamanlanmış yumurta döşeme yöntemi kullanılarak yaşları senkronize edilmiş bir popülasyon oluşturulur. Aktif yetişkin hermafrodit solucanlar, UV ile öldürülmüş E. coli ekilmiş nematod büyüme medyumu (NGM) plaklarına aktarılarak altı ila sekiz saat boyunca yumurta bırakmalarına izin verilir ve ardından sonraki iki gün içinde uzaklaştırılır; solucanlar bu yumurtalardan çıkarak L4 larva evresine kadar büyür. L4 solucanları, canlı bakteri kontaminasyonunu önlemek için ampisilin ve üremeyi önlemek için FUDR içeren yeni NGM plaklarına aktarılır ve yetişkinliğe ulaşmaları sağlanır.</p><p>Bu noktadan itibaren, tüm solucanlar ölene kadar yetişkin solucanlar her iki ila üç günde bir gözlemlenir. Her zaman noktasında, ölü solucanlar plakadan uzaklaştırılır ve canlı ile ölü solucan sayıları kaydedilir. Ben George Seton, Washington Üniversitesi Patoloji Bölümü'ndeki Matt Capline laboratuvarındanım.</p><p>Bugün size yaşam süresinin nasıl ölçüleceğini göstereceğiz ve hepatitis elegance modelimizi inceleyeceğiz. Yaşlanmanın genetiğini araştırmak için laboratuvarımızda bu prosedürü kullanıyoruz. Öyleyse başlayalım.</p><p>Temel bir yaşam süresi deneyi iki tip plak gerektirir: he</p>

measuring-caenorhabditis-elegans-life-span-on-solid-media

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokolü biz ölçmek için bir yöntem mevcut.

Ölçme<em> Caenorhabditis elegans</em> 96 Şey microtiter Tabaklar Ömrü

Bu videoda, C. elegans'ın ömrünü ölçmek için geleneksel, plaka tabanlı bir yöntem açıklanmaktadır. Örnek protokol, RNAi ile tedavi edilen solucanların ömrünü ölçer.

Yaşam Süresi Analizi: <em>C. elegans Uzun Ömürlülüğün</em> Ölçülmesi

Bir yumurta-in-solucan (EIW) testi yumurtlama davranışı ölçmek için yararlı bir yöntemdir. Yumurtlama değişiklikler model organizma bir davranış tepki...

Üzerinde Bakterilerin Etkilerinin Ölçme<em&gt; C. Elegans</emBir Yumurta Tutma Testi Kullanma&gt; Davranış

Burada, nematod Caenorhabditis elegans'ın embriyonik uzamasının erken ve geç aşamalarında meydana gelen morfojenik kusurları izlemek için özel olarak tasarlanmış protokolleri detaylandırıyoruz. Sonuç olarak, bu protokoller, bu fazları düzenleyen genleri tanımlamak ve embriyonun antero-arka ekseni boyunca diferansiyel gereksinimlerini karakterize etmek için tasarlanmıştır.

Roman Metrik Nematodu Embriyonik Uzama karakterize etmek<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Burada, bir çerçeve geniş menzilli diyet kısıtlaması gen ekspresyonu ve ömrü ile ilgili mevcut. Biz iletişim kuralları bu paradigma altında gen ekspresyonu kantitatif görüntüleme ve geniş menzilli diyet kısıtlaması için açıklar. Daha fazla bilgi işleme özellikleri genetik devrelerin temel gıda algılamalı içinde söz konusu ortaya çıkarmak için hesaplama analizleri anahat.

<em>C. elegans</em> gen ifade seviyeleri sırasında ömrü modülasyon altında geniş menzilli diyet kısıtlama tarafından kodlanmış bilginin bir miktar

Burada biz yineleme kümesi yöntemi, bir yaklaşım kantitatif ölçmek C. elegans ömrü/hayatta kalma ve healthspan yüksek üretilen iş ve sağlam bir şekilde böylece veri kalite ödün vermeden birçok koşullar tarama izin tanımlamak. Bu iletişim kuralı strateji detayları ve yineleme kümesi veri çözümlemesi için bir yazılım aracı sağlar.

Yineleme kümesi yöntemi: Bir yüksek-den geçerek yaklaşım kantitatif ölçü <em>Caenorhabditis elegans</em> ömrü

Caenorhabditis elegans, sağlık süresini, ömrünü ve strese karşı dayanıklılığı araştırmak için sağlam ve düşük maliyetli yöntemlerle mükemmel bir model sistem olarak hizmet eder.

<em>Caenorhabditis elegans'ta</em> Yaşam Süresini ve Sağlık Süresini Ölçmek için Düşük Maliyetli Yöntemlerin İncelenmesi

Burada sunulan, mikrofabrikasyon çok kuyucuklu cihazlarda katı ortam üzerinde izole edilmiş bireysel nematodların kültürlenmesi için optimize edilmiş bir protokoldür. Bu yaklaşım, bireysel hayvanların, aktivite, vücut büyüklüğü ve şekli, hareket geometrisi ve hayatta kalma dahil olmak üzere yaşlanma ve sağlıkla ilgili çeşitli fenotipler için yaşamları boyunca izlenmesini sağlar.

Çok Kuyulu Cihazlarda Katı Ortamda İzole <em>Caenorhabditis elegans'ın</em> Uzun Süreli Kültürü ve İzlenmesi

Burada, yaşam boyu fizyolojik parametre takibi ve floresan ölçümü için katı ortam üzerinde izole edilmiş bireysel nematodların kültürlenmesine yönelik bir protokol sunuyoruz. Bu kültür sistemi, hayvanların kaçmasını önlemek için tek solucan kuyularının etrafında bir palmitik asit bariyeri içerir ve patojenik bakteriler ve kimyasal stresörler de dahil olmak üzere önleyici müdahalelerin kullanılmasına izin verir.

Uzunlamasına floresan izleme ve aversif müdahaleler için katı ortam üzerinde bireysel <em>caenorhabditis elegans'ın</em> uzun süreli kültürü

Burada, C. elegans model organizmasını kullanarak embriyonik canlılığı ve üretilen toplam embriyo sayısını (kuluçka) belirlemek için genel bir yöntem sunuyoruz.

<em>Caenorhabditis elegans'ta</em> embriyonik canlılık ve yavru büyüklüğünün ölçülmesi

Bu protokol, sıvı kültürdeki bakterilerin klirensinin ölçülmesine dayalı olarak Caenorhabditis elegans besleme hızını ölçmek için bir testi tanımlar.

Bakteriyel Klerensi Ölçerek <em>Caenorhabditis elegans'ta Gıda Alımının</em> Ölçülmesi

Keşfedin Caenorhabditis elegans yaşam süresi ölçüm protokolünü katı ortamda UV öldürülmüş bakteri kullanarak. Bu yöntem yaşlanma genetiği ve gelişim biyolojisi araştırmalarında model organizma çalışmalarına değerli katkı sağlar.

Ölçme Caenorhabditis elegans Katı Medya Ömrü

Daha fazla video keşfet