JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyoloji
0 görüntülenme • 2:52 dk. • April 30th, 2023
- Yumurtaların düşmesine izin veren çıkarılabilir bir parçaya sahip bir tank olan bir çiftleşme tankı ile başlayın. Gece boyunca birbirlerine alışmak için embriyo toplamadan önceki akşam bölünmüş bir çiftleşme tankına iki erkek ve üç dişi yetişkin balık ekleyin.
Ertesi sabah, balığı sistem suyu içeren yeni bir çiftleşme tankına aktarın ve bölücüyü çıkarın. Balığa çiftleşmesi ve yumurtlaması için zaman tanımak için 15 ila 30 dakika bekleyin.
Şimdi embriyoları toplayın ve Hank'in embriyo ortamını içeren bir Petri kabında saklayın. Onları protokol boyunca 28,5 santigrat derecede büyütün. Embriyoların morfolojisini diseksiyon mikroskobu altında inceleyin.
Birkaç gelişimsel özellik gözlemleyeceksiniz. Blastodiskin bölünmesi birden fazla hücreye yol açar. Blastoderm, yumurta sarısı hücresinin üzerinde ters çevrilmiş bir kap şeklini alır. Paraksiyel mezoderm segmentleri embriyonun dorsal kısmında gelişir ve bu böyle devam eder.
Döllenmeden 24 saat sonra, embriyoları toplam vücut uzunluğuna göre sıralayın. Örnek protokolde, transgenik mCherry muhabir balıklarının çiftleşmesini ayarlayacağız ve elde edilen embriyoları sıralayacağız.
- Başlamak için, embriyoları üreme olgunluğu olan üç aylık olana kadar kültür embriyoları. Embriyo toplamadan önceki akşam iki yetişkin erkek ve üç dişi balığı istenen suştan taze sistem suyuyla bölünmüş çiftleşme tanklarına ayırın. Ertesi sabah ışıklar yandıktan sonra, bölücüyü çıkarın ve tankın dibinde embriyolar görülene kadar balığın doğal olarak çiftleşmesine izin verin.
Embriyoları 30 dakikalık aralıklarla toplayın ve istenen sayı toplanana kadar embriyo ortamının Petri kaplarını ayırın. Embriyoları evrelemek için, tüm embriyoların tutarlı gelişimsel zamanlamasını teşvik etmek için onları 10 santimetrelik Petri kabı başına 50 ila 75'lik gruplar halinde kültürleyin. Ardından plakaları 28,5 santigrat derecede tutun.
Segmentasyondan sonra döllenmeden yaklaşık 24 saat sonrasına kadar somit sayısı veya HPF kullanarak embriyo yaşını ölçün ve embriyoları gelişim yaşına göre ayırın.