Çiftleşme ve yumurta evreleme: embriyo oluşturmak ve bunları gelişim aşamasına göre sıralamak için bir yöntem

- Yumurtaların düşmesine izin veren çıkarılabilir bir parçaya sahip bir tank olan bir çiftleşme tankı ile başlayın. Gece boyunca birbirlerine alışmak için embriyo toplamadan önceki akşam bölünmüş bir çiftleşme tankına iki erkek ve üç dişi yetişkin balık ekleyin.

Ertesi sabah, balığı sistem suyu içeren yeni bir çiftleşme tankına aktarın ve bölücüyü çıkarın. Balığa çiftleşmesi ve yumurtlaması için zaman tanımak için 15 ila 30 dakika bekleyin.

Şimdi embriyoları toplayın ve Hank'in embriyo ortamını içeren bir Petri kabında saklayın. Onları protokol boyunca 28,5 santigrat derecede büyütün. Embriyoların morfolojisini diseksiyon mikroskobu altında inceleyin.

Birkaç gelişimsel özellik gözlemleyeceksiniz. Blastodiskin bölünmesi birden fazla hücreye yol açar. Blastoderm, yumurta sarısı hücresinin üzerinde ters çevrilmiş bir kap şeklini alır. Paraksiyel mezoderm segmentleri embriyonun dorsal kısmında gelişir ve bu böyle devam eder.

Döllenmeden 24 saat sonra, embriyoları toplam vücut uzunluğuna göre sıralayın. Örnek protokolde, transgenik mCherry muhabir balıklarının çiftleşmesini ayarlayacağız ve elde edilen embriyoları sıralayacağız.

- Başlamak için, embriyoları üreme olgunluğu olan üç aylık