Formalinle Sabitlenmiş Parafine Gömülü Tümör Örneklerinin Hazırlanması: Küçük Hücreli Dışı Akciğer Kanserinden (KHDAK) Doku ve Sitoloji Örneklerini Koruma Protokolü

- Başlamak için, akciğer tümörü örneklerini doku örnekleri olarak veya bronşiyal yıkamalardan sitoloji örnekleri olarak alın - hava yollarının içinden hücreler içeren bir tuzlu su yıkama. Doku örneklerini hazırlamak için, yeni kesilmiş akciğer dokusunu bir gömme kasetine aktarın. Dokuyu uygun formalin konsantrasyonu ile sabitleyin ve koruyun.

Sitoloji örneklerini hazırlamak için önce bronşiyal yıkamaları homojenizasyon için DL-ditiyotreitol ile muamele edin. Süpernatanı santrifüjleyin ve çıkarın. Daha sonra, mukusu sıvılaştırmak ve hücreleri ayırmak için mukolitik bir çözelti ile muamele edin. Hücreleri peletlemek için santrifüjleyin ve formalin ile sabitleyin. Küçük pelet hacimleriyle çalışırken numuneyi konsantre etmek için hücreleri uygun bir hücre bloğu hazırlama reaktifi ile muamele edin.

Peleti bir gömme kasetine aktarın. Her iki numune türünü de bir dizi dereceli alkol banyosundan geçirerek dehidre ederek işleyin. Uygun bir temizleme maddesi kullanarak alkolü çıkarın ve ardından balmumu sızmasını izleyin. Kaseti sıvı parafin mumuna gömün ve katılaşmasına izin verin. Bu, numuneyi yerinde tutan dokunun etrafında bir tabaka oluşturur.

İnce dilimlenmiş bölümler elde etmek için bir mikrotom kullanın. Yapışmayı kolaylaştırmak için bölümleri pozitif yüklü cam slaytların üzerine yerleştirin. Slaytları mikroskop altında gözlemlemek için kurutun ve boyayın. Aşağıdaki protokolde akciğer tümör dokusu ve sitoloji örneklerinden örnek hazırlama teknikleri gösterilmektedir.

Başlamak için, tümör dokusunu bir kasette% 10 nötr tamponlu formalin içinde sabitleyin ve kaseti metin protokolünde belirtildiği gibi parafine gömün. Sızan dokuyu erimiş parafin ile doldurulmuş bir kalıbın içine gömün. Parafin katılaşana kadar dokuların kalıpta kalmasına izin verin. Bundan sonra, parafine gömülü dokuyu üç mikrometre kalınlığında bölmek için bir mikrotom kullanın.

Parafin şeridini pozitif yüklü bir cam mikroskop lamına aktarın. Ardından slaytı 37 santigrat derecede bir saat kurutun. İlk olarak, bronşiyal yıkamaları koruyucu bir solüsyonda toplayın. Yıkamaları 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarın. İki gram DL-ditiyotreitol ekleyin ve tüpü 30 dakika boyunca girdaplayın. Daha sonra oda sıcaklığında beş dakika boyunca 250 kez g'de santrifüjleyin.

Süpernatanı çıkarın ve 10 mililitre mukolitik çözelti ekleyin. Numuneyi orta hızda 20 dakika çalkalayın ve oda sıcaklığında beş dakika boyunca 250 kez g'de santrifüjleyin. Bundan sonra, süpernatanı çıkarın ve hücre peletini %10 nötr tamponlu formalin içeren bir toplama tüpüne koyun.

Dört damla hücre bloğu hazırlama maddesi ekleyin. Hücre peletini bir kasete aktarın. Tümör dokusu örneklerini hazırlamak için daha önce açıklanan işlemi kullanarak parafin gömme ve kesitleme için hücre peletini sabitleyin.