CUBIC Tabanlı Protein Ekspresyonunun Görselleştirilmesi: Tam Kalınlıkta Fare Derisi Biyopsilerinde Protein Ekspresyonunun Görselleştirilmesi İçin Bir Prosedür

- Deri, birden fazla katman halinde düzenlenmiş çeşitli hücre popülasyonlarından oluşan karmaşık bir organdır. Doku temizleme tabanlı üç boyutlu bir görüntüleme tekniği olan CUBIC, tüm cilt biyopsilerini kullanarak bu cilt hücrelerinin içindeki protein ekspresyon modellerini görselleştirmeye yardımcı olur. Ötenazi yapılmış bir fare alarak ve sırt boyun bölgesindeki tüyleri alarak başlayın. Bir parça deri kesin ve küçük parçalar halinde kesin.

Parçaları bir CUBIC1 temizleme çözeltisine batırın ve inkübe edin. Deri hücreleri, ışık saçılımına neden olan kromoforların ve lipitlerin varlığı nedeniyle şeffaf değildir. CUBIC solüsyonundaki kimyasallar bu molekülleri uzaklaştırır, böylece ışık saçılımını azaltır ve dokuyu şeffaf hale getirir.

Daha sonra, dokuyu, cilt hücrelerinde eksprese edilen hedef hücre içi proteinlerine spesifik olarak bağlanan istenen birincil antikorlarla tedavi edin. Ayrıca, protein-primer antikor komplekslerine bağlanan floresan etiketli ikincil antikorlarla tedavi edin. Dokuya, çekirdeği boyayan DNA bağlayıcı bir boya ile karşı boyayın.

Son olarak, numuneyi bir CUBIC2 çözeltisine daldırın. Solüsyon, doku içindeki ışık saçılımını daha da azaltarak onu görüntüleme