Konak-Patojen Etkileşim Çalışmaları için Hemolitik Staphylococcus aureus Kültürü Hazırlanıyor

Kan içeren RBC içeren seçici bir besin agar tabağı ile başlayın.

Streak Staphylococcus aureus (S.aureus), Gram-pozitif patojenik bir bakteri, agar'a ve kuluçkaya girer.

İnkubasyon sırasında bakteriler besinleri kullanır, büyür ve koloniler oluşturur.

S. aureus , agardaki RBC'leri lizize eden ve kolonide berrak, şeffaf bölgeler oluşturan gözenek oluşturan bir toksin olan hemolisin salgılar.

Bir hemolitik koloni seçin, besin suyu haline getirin ve bakteri büyümesini desteklemek için döner koşullarda kuluçka yapın.

Spektrofotometre kullanarak, bakteri konsantrasyonunu belirlemek için optik yoğunluk (OD) ölçülür.

Aşırı doz ölçümüne göre, bir aliquot hücreleri seyreltmek için taze bir besin suyu içinde inkubasyon yapın.

Aşırı dozu düzenli aralıklarla ölçün.

0.8 civarındaki bir OD, bakterilerin tekiz fizyolojiyle üstel büyüme aşamasına ulaştığını gösterir.

Bu hemolitik S. aureus , konak-patojen-etkileşim çalışmalarına hazırdır.

S'yi çizgi çizerek başlayın. Kan agar plakalarında ilgilenen aureus suşları, donmuş gliserol stokundan alınır ve plakaları 37 derece Celsius'ta 16 ila 24 saat boyunca inkubka yaparak, hemolitik fenotiplerini kırmızı kan hücrelerini parçalama ve şeffaf bölgeler oluşturma yeteneklerine göre doğrular.

Her suşun tek koloni izolasyonlarını 4 mililitre triptik soya çorbasıyla (TSB) steril cam tüplerde aşılayın ve tüpleri 37 derece Celsius'ta yaklaşık 70 derece açı ve dakikada 70 dönüş ile bir tüp silindirinde 16 ila 24 saat boyunca döndürün. Ertesi sabah, kültürlerin optik yoğunluğunu spektrofotometrede 600 nanometre veya OD₆₀₀ olarak ölçür ve hücreleri 125 mililitre DeLong şişelerinde 25 mililitre steril TSB'de 5'e 1 şişe/hacim oranında_{0,05 OD 600'e} seyreltirin. Kültürleri 37 derece Celsius su banyosunda dakikada 280 dönüş hızında kuluçka yapın.