Name: Kardiyojenik İndüksiyon Verimlilik miktarının için modifiye Fare Embriyonik Kök Hücre tabanlı Testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-22T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 8 s
Description: Öğrenin fare embriyonik kök hücreleriyle kardiyojenik indüksiyon verimliliğini standartlaştırılmış bir yöntemle nasıl ölçeceğinizi. Wnt/β-catenin ve BMP sinyal yollarının kritik zaman pencerelerini belirleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Savaş Gazileri İşleri ve NIH hibe 5U01HL100398 ve 1R01HL104040 tarafından desteklenmiştir.

1. 96-yuvarlak alt microtiter plakalar kullanarak Embriyonik Vücut (EB) oluşumu <ol><li> Fare fare ES hücre orta LIF ile desteklenmiş 10cm hücre kültürü plakaları ES hücrelerinin büyütün. </li><li> ES hücrelerinin (genellikle% 50-70 izdiham) kullanıma hazır olduğunda, ES medya kaldırmak ve 5ml steril PBS ile hücreler bir kez yıkayın. </li><li> 3 ~ 5 dakika için, her bir plaka ve 37 inkübe plakaları ° C için 2 ml% 0.05 &#39;tripsin / EDTA, 3 ml ES medya ile tripsin EDTA Quench. </li><li> 1000 rpm&#39;de 3 dakika 50ml şahin tüpler ve spin hücreleri aktarın. </li><li> Süpernatantı ve EB medya istenilen miktarı ile tekrar süspansiyon hücre pelletini. </li><li> Hücre sayısını saymak ve EB medyada 5 x10 3 hücre / ml hücreleri sulandırmak. </li><li> - 96, her kuyuya yuvarlak iyi microtiter plakalar hücreleri içeren EB medya 100μl eklemek için çok kanallı pipet kullanın. </li><li> Yeri 96 - bir inkübatör içine yuvarlak iyi microtiter plakalar. </li></ol> 2. Cardiogenesis için önemli sinyal yolağı (ler) in kritik zaman pencereleri tanımlanması <ol><li> Her 96, 0 gün, günde 1 gün 2 gün 3 gün 4, kuyular, vb Yarım gibi çeşitli zaman noktalarında ES hücreleri içeren 96-kuyu microtiter plakalar her bir kuyunun içine özel bir sinyal yollar ve araç kontrolü modülatörleri ekle iyi plaka (48 kuyulardan), tedavi her başlangıç ​​zaman noktası için kullanılır. </li><li> Modülatörleri, farklı durdurma zaman noktalarında her 48 kuyu için EB ortamı değiştirerek yıkayın. Örneğin, gün 0 itibaren ES hücreleri için iki günlük bir tedavi almak için, günde 2 modülatörleri yıkayın. 48 saatten daha uzun süre herhangi bir tedavi için, istenen durma zamanı noktalarına kadar her iki günde bir, taze modülatörleri ile desteklenmiş EB ortamı değiştirmek. </li><li> 7 gün sonra mikroskop altında EB daralma inceleyin. Puan yüzdeleri, her biri farklı bir tedavi süresi dersler için EBS sözleşme almak için pozitif olanlar gibi EBS sözleşme ile kuyu. </li><li> ES cardiogenesis için kritik zaman noktalarında araç kontrol ile kıyaslandığında EBS sinyalizasyon modülatörleri tarafından tedavi edilen sözleşme, en yüksek oranda içerdiği hangi zaman dilimlerinde. </li></ol> 3. EBS cardiogenesis için sinyal zaman pencereleri Doğrulama asılı damlacıklar <ol><li> Buharlaşmasını önlemek için 3-4 ml PBS ekleyerek Petri kapları hazırlayın. </li><li> Adımları 1.1 ~ 1.5 ES hücrelerinin 2.5x10 4 hücre / ml son hücre yoğunluğu hazırlamak için izleyin. </li><li> Kolay erişim için bakteriyel çanak içine hücre karışımı dökün. Çok kanallı pipet kullanarak, ters kapakları üzerine 20 ul damla (yaklaşık 500 hücre içeren) ekleyin. Bireysel damlacıkları temas etmesine izin vermeyin. Genellikle bir kapak 80 damla kadar sığabilir. PBS içeren çanak kapağı üzerinde geri çevirin. Bir kuluçka EB oluşumunu sağlamak için 24 saat veya 48 saat inkübe edin. </li><li> EB medya ve havuz EBS yeni bir Petri kabı 2 kapakları 3 ml her kapağı asılı damlacıklar oluşur EB aşağı doğru yıkayın. EB medya 10ml toplam hacmi ekleyin. </li><li> % 0.2 günde 4 jelatin kaplı 6 kuyucuğu üzerine askıya Transfer EBS. Genel 30 EBS, her bir kuyunun aktarılır. Her bir kuyu için 2 ml son hacmi EB medya ekleyin. </li><li> 96-plaka deneyleri belirlenen süre modülatörleri sinyalizasyon inkübe edin. </li><li> Gün 7 ve cardiogenesis sonra mikroskop altında EB daralma, RT-PCR, immün ve diğerleri, gerekirse daha ile karakterize olabilir dikkat edin. </li></ol>

<ol><li>Fukuda, K., Yuasa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+as+a+source+of+regenerative+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+research%22%5BJournal%5D)">Stem cells as a source of regenerative cardiomyocytes.</a> Circulation research. 98, 1002-1013 (2006).</li>
<li>Foley, A. C., Mercola, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+induction+by+Wnt+antagonists+depends+on+the+homeodomain+transcription+factor+Hex%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">Heart induction by Wnt antagonists depends on the homeodomain transcription factor Hex.</a> Genes Dev. 19, 387-396 (2005).</li>
<li>Naito, A. T., Shiojima, I., Akazawa, H., Hidaka, K., Morisaki, T., Kikuchi, A., Komuro, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+stage-specific+biphasic+roles+of+Wnt%2Fbeta-catenin+signaling+in+cardiomyogenesis+and+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Developmental stage-specific biphasic roles of Wnt/beta-catenin signaling in cardiomyogenesis and hematopoiesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 19812-19817 (2006).</li>
<li>Hao, J., Daleo, M. A., Murphy, C. K., Yu, P. B., Ho, J. N., Hu, J., Peterson, R. T., Hatzopoulos, A. K., Hong, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsomorphin%2C+a+selective+small+molecule+inhibitor+of+BMP+signaling%2C+promotes+cardiomyogenesis+in+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Dorsomorphin, a selective small molecule inhibitor of BMP signaling, promotes cardiomyogenesis in embryonic stem cells.</a> PloS one. 3, e2904-e2904 (2008).</li>
</ol>

Asılı damla yöntemi, EB oluşumu için ve in vitro ayrımında kullanılan geleneksel bir yöntem olmuştur. Ancak, zahmetli ve lojistik endişeleri nedeniyle deneysel esnekliği sınırlar. Deneyci beceri asılı damla kadar başarılı EB oluşumu ve manipülasyon için çok önemli olduğu gibi aynı şekilde, sonuçları doğrulamak için daha zordur. Daha basit bir yöntem, tek aşamalı bir süreç olarak Yuvarlak tabanlı 96-plaka EBS oluşturmaktır. Bu biçim standart in vitro farklılaşma sağlar ve daha deneysel koşullar altında, EB oluşumu ve alt manipülasyon (örneğin modülatör eklenmesi veya çıkarılması) kolaylığı nedeniyle barındırabilir. Ayrıca, 96 plaka biçimi fare ES hücrelerinin etkin bir tarama aracı olarak optimize edilebilir.

<ul><li> Fare CGR8 hücreler ağırlıklı olarak kullanılırlar. </li><li> ES orta:% 10 ısı ile inaktive edilmiş FBS ile takviye GMEM medya, 2 mM L-glutamin, 2-merkaptoetanol 0.05 mM ve 200 U / ml murin LIF. </li><li> EB orta:% 20 ısı ile inaktive edilmiş FBS IMDM ortamı hazırlayın, 1.6 mM L-glutamin, 2-merkaptoetanol 0.08 mM ve 1X MEM Non-esansiyel amino asit çözeltisi. </li></ul>

kardiyojenik İndüksiyon verimlilik miktarının için modifiye fare embriyonik kök hücre tabanlı testi

Modified Mouse Embryonic Stem Cell based Assay for Quantifying  Cardiogenic Induction Efficiency

Tuşa birden fazla sinyal yollarının zamansal ve mekansal yönetmelikle pluripotent kök hücre farklılaşması sıkı kontrol edilir. Anlayışı engellerden biri farklılaşma verimliliği önemli sinyal olayların değişiklikler arasındaki ilişkiyi çeşitli yöntemler olmuştur. Biz burada (ES), bir fare embriyonik kök hücre temelli tahlil Wnt / β-katenin ve kardiyojenik indüksiyon sırasında BMP sinyal aktivasyonu için kritik zaman pencere tanımlamak için kullandıklarını açıklarlar. 96-plaka formatında embriyonik organları (EBS) sözleşme için puanlama, biz hızlı kardiyojenik verimliliğini ölçmek ve Wnt / β-katenin ve belirli modülatör tedavileri aşağıdaki bir zaman içerisinde BMP sinyal aktivasyonu için çok önemli zaman belirlemek. Burada özetlenen başlıca kalp indüksiyon yalnız bunlarla sınırlı değildir, ve diğer pek çok hücre soylarının çalışma yönünde uygulanabilir. Buna ek olarak, 96-well formatında, daha yüksek verimlilik, daha sofistike deneysel hipotezleri test etmek için izin verecek şekilde otomatik tahlil olarak geliştirilen potansiyeline sahiptir.

Biz bir fare ES hücre tabanlı testin Wnt / β-katenin ve kardiyojenik indüksiyon sırasında BMP sinyal aktivasyonu için kritik zaman pencere tanımlamak için kullandıklarını açıklarlar. Bu yöntem, güvenilir bir kardiyojenik verimliliği rakamlarla standart bir platform sağlar ve diğer hücre soylarının çalışma için geçerlidir.

Kardiyojenik İndüksiyon Verimlilik miktarının için modifiye Fare Embriyonik Kök Hücre tabanlı Testi

Plüripoten kök hücrelerin farklılaşması, birden fazla temel sinyal yolağının zamansal ve mekansal düzenlemesi tarafından sıkı bir şekilde kontrol edilir. Karşılaşılan engellerden biri...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, fare embriyonik kök hücrelerinde kardiyomiyosit diferansiyasyonu için gerekli olan kritik zamansal düzenlemeyi belirlemektir. Bu, ikinci bir adım olarak EB oluşumunu standardize etmek için öncelikle 96 kuyucuklu yuvarlak tabanlı bir plaka içinde embriyonik gövdeler oluşturularak gerçekleştirilir. Protein veya kimyasal modülatörler, önceden belirlenmiş bir zaman çizelgesi boyunca EB'lere eklenir; bu da incelenen yolakların zamansal kontrolüne olanak tanır.Ardından, çeşitli sinyal modülasyon şemalarının indüksiyon verimliliğini belirlemek için atan EBS'ler manuel olarak sayılır. Oluşan atan EBS yüzdesi ve asma damla yöntemi kullanılarak yapılan doğrulama ile, kardiyomiyosit farklılaşması için temel sinyal yollarının zamansal gereksinimlerini gösteren sonuçlar elde edilir. Bu tekniğin asma damla gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, emek yoğun bir prosedürü standart hale getirip basitleştirmesi ve niceliksel belirleme için doğrudan bir okuma imkanı sunmasıdır.Bu yöntem, farklılaşmayı istenen hücre tipine yönlendiren temel sinyal koagülasyonlarının belirlenmesi gibi, kök hücre biyolojisi alanındaki kritik soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu prosedüre başlamak için, fare embriyonik kök hücrelerini, lösemi inhibitör faktörü ile desteklenmiş fare ES hücresi ortamı içeren 10 santimetrelik hücre kültürü plaklarında büyütün. ES hücreleri %50 ila %70 konfluansa ulaştığında, kullanıma hazır hale gelirler.ES medyumunu uzaklaştırın ve hücreleri beş mililitre steril PBS ile bir kez yıkayın. Her plağa iki mililitre %0,05 tripsin EDTA ekleyin ve plakları 37 °C'de üç ila beş dakika inkübe edin. Ardından, plak başına üç mililitre ES medyumu ile tripsin EDTA'yı nötralize edin ve hücreleri 50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktarın.Dakikada 1000 devirde üç dakika boyunca santrifüjleyin. Santrifüj işleminden sonra süpernatantı uzaklaştırın ve hücre peletini istenen miktarda EB besiyeri ile yeniden süspande edin. Hücre sayısını belirleyin ve ardından hücreleri mililitre başına 5 × 10³ hücre olacak şekilde dilüe edin.Çok kanallı bir pipet kullanarak, hücre içeren 100 µL EB medyumunu 96 kuyucuklu yuvarlak tabanlı bir mikrotitrasyon plakasının her bir kuyucuğuna ekleyin. Gereken 96 kuyucuklu plaka sayısı, deneydeki koşulların ve zaman noktalarının sayısına bağlı olarak değişecektir. Kardiyogenez için temel sinyal yolaklarının kritik zaman pencerelerini belirlemek amacıyla, 96 kuyucuklu yuvarlak tabanlı mikrotitrasyon plakalarını nemlendirilmiş 37 °C %5 CO2 inkübatörüne yerleştirin.Belirli sinyal yolaklarının modülatörleri ES hücrelerine eklenir. 96 kuyucuklu yuvarlak tabanlı plakaların her bir kuyucuğuna, çeşitli zaman noktalarında besiyerinde seyreltilmiş sinyal modülatörü eklenir. Her bir 96 kuyucuklu plaktaki kuyucukların yarısı, her bir başlangıç tedavi zaman noktası için kullanılır.Her zaman noktası için diğer 48 kuyucuğa bir araç kontrolü eklenir. Farklı durdurma noktalarında, medyayı değiştirerek her kuyucuktaki sinyal modülatörlerini yıkayacağız ve bunu yaparken embriyonik gövdelerin bozulmasını önlemek için büyük özen gösterilmelidir. Farklı durdurma zaman noktalarında, kuyucuklar için EB medyasını değiştirerek modülatörleri yıkayın. 96 kuyucuklu plakayı yaklaşık 10 derecelik bir açıyla eğin ve bir çok kanallı pipet ile medyayı kuyucuktan nazikçe alın.Ardından, 48 saatten uzun süren tüm işlemler için her kuyucuğa modülatör içermeyen EB medyumu ekleyin. İstenen durdurma zamanına kadar, taze modülatörlerle desteklenmiş EB medyumunu iki günde bir değiştirin. ES hücrelerinin 96 kuyucuklu plakalara aktarılmasıyla EB'lerin indüklendiği tarihten yedi gün sonra, EB kontraksiyonunu bir mikroskop altında inceleyin.Her bir farklı işlem zaman seyri için kasılan EBS yüzdelerini elde etmek amacıyla, kasılan EBS içeren kuyucukları pozitif olarak puanlayın. 96 kuyucuklu plaka deneyleri ile belirlenen kardiyojenez sinyal zaman pencereleri, asılı damlalar şeklinde hazırlanan EBS'lerde doğrulanabilir. Öncelikle, damlacıkların daha sonra bozulmasını önlemek için Petri kaplarına üç ila dört mililitre PBS ekleyerek hazırlık yapın.Ardından, final yoğunluğu 2,5 x 10⁴ hücre/mL olacak şekilde hazırlanan bir ES hücre süspansiyonu, kolay erişim için bir bakteri kabına dökülür. Çok kanallı bir pipet kullanarak, Petri kaplarının ters çevrilmiş kapaklarına 20 µL'lik ES hücresi damlacıkları ekleyin. Münferit damlacıkların birbirine temas etmesine izin vermeyin.Genellikle, bir kapak 80 damlaya kadar kapasiteye sahiptir. Ardından, kapağı PBS içeren Petri kabının üzerine ters çevirin ve EB oluşumu için 37 °C'de %5 karbon dioksit içeren bir inkübatörde 48 saat bekletin. 48 saat sonra, her kapağın asılı damlalarından oluşan EB'leri üç mililitre EB medyası ile yıkayarak toplayın.İki EBS kapağını yeni bir Petri kabına alın. Petri kabını 37 °C sıcaklıkta ve %5 karbondioksit içeren bir inkübatörde dört gün boyunca inkübe edin. Dördüncü günde, süspansiyon halindeki EBS'leri genel olarak %0,2 Jelatin kaplı altı kuyucuklu plakalara aktarın. Her kuyucuğa 30 EBS aktarın; sinyal modülatörlerini, 96 kuyucuklu plaka deneylerinden belirlenen zaman diliminde, asılı damlacıklar oluşturulduktan yedi gün sonra inkübe edin.EB kasılmasını gözlemlemek için EBS'leri mikroskop altında inceleyin; 96 kuyucuklu bir plakanın yuvarlak dipli kuyucuklarında büyütülen ES hücreleri, dördüncü günde oluşmuş bir EB'yi gösteren bu temsilci görüntüde olduğu gibi EBS'ler oluşturacaktır. ES kardiyogenezi için kritik zaman noktaları, araç kontrolü ile karşılaştırıldığında, sinyal modülatörleri ile tedavi edilmiş kasılan EBS'lerin en yüksek yüzdesini içeren zaman pencereleridir. Burada, 96 kuyucuklu bir mikrotitr plakasında, farklılaşmanın 10. gününde dorsal morfin ile tedavi edilmiş ES hücrelerinden oluşmuş, kendiliğinden kasılan bir kardiyomiyosit odağı gösterilmektedir.Bu videoyu izledikten sonra, ES kardiyogenezindeki temel sinyal yolaklarının kritik zamansal düzenleme pencerelerinin nasıl verimli bir şekilde belirleneceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmanız gerekir.

modified-mouse-embryonic-stem-cell-based-assay-for-quantifying

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz büyük bir tedarik kardiyovasküler onarım için insan kalp atalarıdır ve fonksiyonel kardiyomiyositlerde türetilmesi sağlayan küçük moleküller ile tanımlanmış koşullar altında tutulan pluripotent insan embriyonik kök hücreleri doğrudan cardioblasts indüksiyonu için bir protokol kurduk.

Küçük Molekül İndüksiyon Pluripotent İnsan Embriyonik Kök Hücreleri İnsan Kardiyak Öncüleri ve kardiyomiyositlerde Verimli türetilmesi

Bu el yazması, Gata4, Hand2, Mef2c ve Tbx5'in retrovirüs aracılı bir iletimini kullanarak çeşitli yeniden programlanmış kardiyak alt tiplerin oluşturulması ve ölçülmesi için adım adım bir protokolü açıklar.

Fare embriyonik fibroblastlar transkripsiyon faktör aracılı yeniden programlanması sonra kardiyomiyosit alt tiplerini değerlendirilmesi

Burada, fonksiyonel, sözleşme, cardiomyocyte benzeri hücreler üretmek için kardiyak farklılaşma potansiyeli insan Mezenkimal kök hücrelerin genç kaynaklarının verimli koşum için bir yöntem mevcut tüp bebek.

Vitro İnsan Mezenkimal Kök hücre farklılaşma fonksiyonel Cardiomyocyte benzeri hücre içine

Burada birincil embriyonik fibroblastlar içine fonksiyonel cardiomyocytes overexpression GATA4, Hand2, Mef2c, Tbx5, miR-1 ve miR-133, TGF-β sinyal inhibisyon yanında (GHMT2m) aracılığıyla yeniden programlamak için sağlam bir yöntem mevcut. Bizim iletişim kuralı dayak cardiomyocytes 7 gün sonrası iletim % 60 ile olduğu kadar erken oluşturur verimlilik.

Pro-fibrotik sinyal bastırma faktörü-aracılı fare embriyonik fibroblastlar indüklenen Cardiomyocytes yeniden programlama Potentiates

Burada elektrik ve mekanik uyaranlara kardiyak Fizyoloji taklit kullanan bir hücre kesimin eğitim için bir iletişim kuralı mevcut. Bu elektromekanik stimülasyon işlem görmüş hücreleri cardiomyogenic potansiyelini artırır ve daha fazla hücre tedavisi, hastalık modelleme ve uyuşturucu taraması için umut verici bir stratejidir.

Hücrelerin Cardiomyogenic potansiyeli geliştirmek için aynı anda elektrik ve mekanik stimülasyon

Bu protokolde, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerinin kardiyomiyosit farklılaşma ve arıtma için nasıl kullanılacağı ve daha fazla, Rho ile ilişkili protein kinaz inhibitörü ile transplantasyon verimliliğini nasıl iyileştirebileceğini gösteriyoruz. bir fare miyokard infarktüsü modelinde ön tedavi.

Rho kinase aktivitesinin geçici Inhibisyonu ile ınsan kaynaklı pluripotent kök hücreli türev Kardiyomiyositlerin engraftment artırılması

Burada, kardiyak yeniden programlama değerlendirmesi için bir Tg (Myh6-cre)1Jmk/J /Gt(ROSA)26Sortm38(CAG-GCaMP3)Hze/J (aşağıdaki αMHC-Cre/Rosa26A-Flox-Stop-Flox-GCaMP3 olarak adlandırılır) fare muhabir hattının kurulmasını ve uygulanmasını açıklıyoruz. Fare zorlanmasından izole edilen yenidoğan kardiyak fibroblastlar (NCF'ler) indüklenmiş kardiyomiyositlere (iCM' ler) dönüştürülerek, kalsiyum (Ca2+) akı yoluyla iCM'lerin yeniden programlama verimliliğinin ve fonksiyonel olgunlaşmasının rahat ve...

Bir GCaMP3 Muhabiri ile Kardiyak Spesifik Kalsiyum Akısını Ölçerek Kardiyak Yeniden Programlamanın İn vitro Değerlendirmesi

Farelerde miyokard enfarktüsü bölgesi etrafında ultrason rehberliğinde hücre dağıtımı, hücre nakli için güvenli, etkili ve uygun bir yoldur.

Miyokard Enfarktüslü Farelerde Ultrason Rehberliğinde İndüklenen Pluripotent Kök Hücre Kaynaklı Kardiyomiyosit İmplantasyonu

Lazer porasyon ve mikroelektrot dizilerinin (MEA) kombinasyonu, ekili birincil ve kök hücre kaynaklı kardiyomiyositlerin aksiyon potansiyeli benzeri kayıtlarına izin verir. Dalga formu şekli, test bileşiklerinin hareket tarzı hakkında standart kayıtlardan daha üstün bir fikir verir. Gelecekte kardiyo güvenliği araştırmalarını daha da optimize etmek için yama kelepçesi ve MEA okumasını birbirine bağlar.

Güvenlik Farmakolojisinin Artan Predivititesi için Mikroelektrot Dizileri Üzerindeki Kardiyomiyositlerin Lazerle İndüklenen Aksiyon Potansiyeli Benzeri Ölçümleri

Bu protokol, gelişmekte olan fare kalplerinde kalp hücrelerinin elektroporasyona dayalı transgenezi için ayrıntılı bir metodolojik çerçeve sunar. Burada sağlanan video varlıkları, bu çok yönlü tekniğin öğrenilmesini kolaylaştıracaktır.

Fare Embriyonik Kalbinde Gen İletimi için Etkili Bir Transgenez Yaklaşımı

Bu protokol, fare embriyonik kök hücrelerinde intergenik ve intragenik güçlendirici RNA'ların kararlılığını ve yarı ömrünü Aktinomisin D tedavisi, RT-qPCR ve doğrusal olmayan regresyon analiziyle nicel olarak ölçer. Konuma özgü normalleştirme stratejileri, eRNA bozunma dinamiklerini bağlama bağlı olarak doğru şekilde modellemek için dahil edilir.

Fare embriyonik kök hücrelerinde Enhancer RNA Stabilitesinin Optimize Edilebilir Nicel Değerlendirmesi

Öğrenin fare embriyonik kök hücreleriyle kardiyojenik indüksiyon verimliliğini standartlaştırılmış bir yöntemle nasıl ölçeceğinizi. Wnt/β-catenin ve BMP sinyal yollarının kritik zaman pencerelerini belirleyin.

Kardiyojenik İndüksiyon Verimlilik miktarının için modifiye Fare Embriyonik Kök Hücre tabanlı Testi

Daha fazla video keşfet