Name: Üç Boyutlu İnsan Cilt Model Yeniden İnşa: Aracı Normal Cilt ve Melanom İlerleme Eğitim (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-03T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: Keşfedin üç boyutlu insan cilt modeli yeniden inşa yöntemini; melanosit, melanom ve kök hücre biyolojisini incelemek için kullanılan bu model, preklinik ilaç değerlendirmesinde değerli bir araçtır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz Wistar Enstitüsü Hayvan Tesisi, Mikroskopi Tesis, Histotechnology Tesis ve Araştırma Kaynağı Merkezi teşekkür ederim. Bu çalışma, Ulusal Sağlık CA 076.674 Enstitüleri, CA 098.101, 025.874 CA ve CA 10815 hibe kısmen finanse edildi.

1. Üç Boyutlu İnsan Cilt Modeli Yeniden İnşa: <ol><li> Acellular tabakasının Hazırlanışı: 0.59 ml 10X EMEM, 50 ul 200mm L-glutamin, 0.6 ml FBS, 120 ul% 7.5 Sodyum bikarbonat ve 4.6 mL sığır kollajen I. 1 ml: 50 ml tüp içinde buz üzerinde aşağıdaki reaktifler karıştırın doku kültürü tepsileri her ekleme içine karışımı. Oda sıcaklığında 30 dakika inkübe ve jel katılaşmaya izin. Saman-sarı karışımı rengi pembe olmalıdır. </li><li> DMEM nötralize etmek için% 10 FBS içeren eklemek için,% 0.25 'lik tripsin / EDTA ile kültür şişeler insan fibroblastlar Trypsinize. % 10 FBS ile 1,5 mL DMEM santrifüj ve tekrar süspansiyon 0.45 x 10 6 hücre hücre toplayın. Dermal kök hücreler için küreler, santrifüj ayırmak için balon dokunarak 6600 dermal küreler (dermal kök hücreler kök hücre ortamda büyür, onlar neurospheres benzer bir şekilde küre formunda) toplamak. </li><li> Hücre tabakasının Hazırlanışı: 50 ml tüp içinde buz üzerinde aşağıdaki karıştırın: 1.65 ml 10X EMEM, 150 ul 200 mM L-glutamin, 1.85 ml FBS, 350 ul% 7.5 Sodyum bikarbonat, 14 mL sığır kollajen I ve 1.5 mL fibroblastlar süspansiyon Adım 2 (alternatif olarak, 1.5 mL cildin dermal kök hücre yeniden yapılandırır için orta yeniden 0.45 x 10 6 fibroblastlar ve 6600 dermal küreler kombinasyonunu kullanabilirsiniz), iyice karıştırın. Her acellular tabaka kaplı eklemek için 3 ml karışımı ekleyin. , 37 ° C'de% 5 CO 2 doku kültürü inkübatör 45 dakika inkübe edin . Karışımın rengi pembe sarı saman olmalıdır. Sonra jel katılaşır, DMEM% 10 FBS (içinde 2 ml ve 10 ml dışında cilt yeniden tepsileri her bir kuyunun eklemek) içeren ekleyin. 4 gün boyunca inkübe ve jel sözleşmeleri emin olun. </li><li> Içinde ve dışında her ekleme orta aspire. Düzenli serum yıkayın için eklemek dışında iç ve 10 ml (% 1 diyaliz FBS ile HBSS) 2 ml orta yıkama ekleyin. 37 1 saat inkübe ° C </li><li> Cildin hazırlanması yeniden orta: <ol><li> Normal melanosit ve dermal kök hücre için yeniden yapılandırır: temel, orta (500 ml) yapmak için, aşağıdaki reaktifler karışımı: 490 ml serum serbest keratinosit orta, 1.8 ml sığır hipofiz ekstresi, 10 ml diyaliz fetal sığır serumu, 10 mikrogram / 500 ul ml SCF, 562,5 4 mcg / mL bFGF ve 264 mikrogram / mL ET-3, 500 ul ul. Orta I: 10 ul 100 mg / ml 100 ml temel orta EGF ekleyin. Orta II: 2 ul EGF 100 ml temel orta ekleyin. Orta III: 720 ul CaCl 2 1 M 300 ml temel orta ekleyin. </li><li> Melanom cilt için yeniden: Orta I (100 ml), aşağıdaki reaktifler karışımı yapmak: DMEM, 72.5 ml, F12 24 ml (HAM Kullanıcı), 2 mL 200 mM L-glutamin, 269 g / ml, 200 200 ul hidrokortizon 500X ul ITES 0.05 200 ul O-phosphorylethanolamine M, 90 mM 200 ul adenin, 2 nM 200 ul Progesteron, 1 240 ul CaCl 2 M 10 nM 200 ul Siteye girmekle bu şartları ve chelexed yeni doğan buzağı serum 100 ul (100 ml serum Chelex 100 3 g çözülür 1.5 saat karıştırın 4 ° C, sterilize). Orta II (100 ml) yapmak için, aşağıdaki reaktifler karışımı: DMEM, 72.5 ml, F12 24 ml (HAM Kullanıcı), 2 mL 200 mM L-glutamin, 269 g / ml, 500X, 200 ul ITES 200 ul hidrokortizon, 200 ul 0.05 'O-phosphorylethanolamine M, 200 mM 90 ul adenin, 2 nM 200 ul Progesteron, 1 M 240 ul CaCl2, 10 nM ve 100 ul yeni doğmuş buzağı serumu 200 ul Siteye girmekle bu şartları. Orta III (300ml) yapmak için, aşağıdaki reaktifler karışımı: DMEM, 142,5 ml, F12 142,5 ml (HAM Kullanıcı), 200 mM L-glutamin 6 ml, 269 g / ml, 500X, 600 ul ITES 600 ul hidrokortizon 0.05, 600 ul O-phosphorylethanolamine M, 600 mM 90 ul adenin, 2 nM 600 ul Progesteron, 1 720 ul CaCl 2 M, 10 nM ve 6 ml yeni doğmuş buzağı serumu 600 ul Siteye girmekle bu şartları. </li></ol></li><li> 0.05% tripsin / EDTA ile kültür şişeler insan keratinositler Trypsinize soya fasulyesi tripsin inhibitörü (250 mg / L 1x fosfat tamponlu salin) ile nötralize tripsin, aşağı dönmeye yeniden orta deride 4,17 x10 6 hücre / ml hücre pelletini tekrar süspansiyon I. </li><li> Cilt x10 6 hücre / mL orta I. yeniden aşağı döndürmek 0.83 hücre pelletini tekrar süspansiyon, soya fasulyesi tripsin inhibitörü nötralize tripsin ile,% 0.05 tripsin / EDTA ile insan melanosit veya melanom hücrelerinin kültür şişeler Trypsinize </li><li> Her ekleme hem de iç ve dış yıkama, orta çıkarın. </li><li> Cildin orta (iç ve dışında her ekleme 10 ml 1.5 ml) yeniden ekleyin. </li><li> Keratinosit ve melanosit veya melanom hücrelerinin 600 ul hücre süspansiyonu 600 ul hücre süspansiyonu atın iyice karıştırın. Her ucun içine damla 200 ul karışık hücre süspansiyonu damla koyun. Dermal kök hücre yeniden, sadece keratinosit süspansiyon 100 ul kullanın. 37 az 2 gün boyunca inkübe ° C. </li><li> Aspire cilt orta yenideniçinde ve her ucun dışında. Cilt orta II (içerden ve dışarıdan 10 ml 2 ml) yeniden ekleyin. 37 başka bir 2 gün boyunca inkübe ° C. </li><li> Aspire cilt içine orta II yeniden ve her ucun dışında, 7.5 ml deri sadece dışarıdan orta III yeniden ekleyin. Bu noktadan itibaren, yüzey havaya maruz kalma başlar yeniden yapılandırır. Orta III 18 gün kadar her gün değiştirin. </li><li> Hasat gün 18 cilt yeniden: <ol><li> Medya içinde ve dışında ekler aspire. </li><li> Forseps ile ekler tepsiden çıkarın. </li><li> Neşter bir bıçak ile bir daire kenarına yakın izleme (polikarbonat filtre dahil) yeniden Kes. </li><li> Yarısında sert bir yüzey üzerinde yeniden ve filtre kesin. </li></ol></li><li> Parafin bölümler için: 2 siyah TBS biyopsi makaleleri arasında bir histoloji kaset yeniden ve en fazla 4 saat süreyle% 10 formalin içinde tüm kaset emmek bir buçuk yerleştirin. Ardından% 70 etanol içinde kaset yeri ve 4 saklayın ° C parafine gömme için yeniden işlemek için hazır olana kadar. </li><li> Frozen için: <ol><li> Diğer yarısını yerleştirin 4% 50 sakaroz yeniden ° C, 1-2 saat, daha sonra 2M sakaroz değiştirmek ve başka bir 1-2 saat 4 ° C sıcaklıkta saklayın. </li><li> Teknenin yaklaşık% 50 doldurur, böylece tek bir baz kalıp içine optimum kesim sıcaklık donma medya (OCT) koyun. OCT kabarcıkları kaçının. </li><li> Forseps ile yeniden kenarına alın ve sakaroz yeniden kaldırmak. Kimwipes sakaroz absorbe kadar Kimwipes yerleştirin. </li><li> Forseps ve spatula kullanarak, OCT üstüne baz kalıp içine yeniden aktarın. Baz kalıp tamamen dolu olduğu kadar daha fazla OCT ile yeniden üst kapağı. Zor kesim yapacak OCT kabarcıkları zorunda değilsiniz emin olun. </li><li> Baz kalıp ezilmiş kuru buz üzerinde eşit olarak yerleştirin ve OCT tamamen dondurmak için izin. </li><li> Kalay folyo ile sarın ve temel kalıp -70 saklayın ° C ile bir Kriyostat kesmek için hazır olana kadar. </li></ol></li><li> Greft bir deri bir fare üzerinde yeniden: <ol><li> 5 ml DMEM (dondurma ve buz çözme fare cilt için) 50 ml şahin tüp hazırlayın. </li><li> 6 hafta etrafında bir kadın SCID tüysüz outbred fare kullanın. </li><li> Fare izofluran (EZ anestezi sistemi) ile anestezi: İlk anestezi 4 izofluran (% fare cerrahi yatağa taşındı önce) ve korumak anestezi ile işlem sırasında bir roket ucu konisi havalandırma yoluyla indüksiyon odasında yapılır (izofluran% 1.5-2 .) Hipotermi ve anestezi sırasında göz yaralanmasını önlemek için uygulanan steril oftalmik yağ önlemek için ısıtılmış bir yastık ısı desteği. </li><li> Bir beher içinde 600 ml su koyun ve 40 arasında su sıcaklığı tutmak için sıcak bir plaka üstüne bırakın - 60 ° C. </li><li> Bileşik benzoin tentürü ve alkol hazırlık bezlerden fare cilt temizleyin. </li><li> Fare sırt üstünde bir çizgi, daha sonra dikilmesi için aynı pozisyonda tutmak için işaretleyin. </li><li> Iris makas ve forseps kullanarak fare sırtın üst kısmında 1.2 cm çapında yuvarlak bir yara kesin. , Steril gazlı bez sünger ile yara yatak örtüsü. Tamamen donmuş kadar DMEM 5 ml yuvarlak fare cilt koyun, sonra sıvı azot kabı bırakmak. Defrost sıcak bir plaka üstüne sıcak su tüp tamamen çözülmüş kadar. 3 kez tekrarlayın. </li><li> Cilt cerrahi bıçak kullanarak transwell yeniden ve çok dikkatli bir şekilde membran kaldırmak Ayır, deride yara üstüne yeniden aktarmak (kadar epidermis tarafında). </li><li> Cilt yeniden üstüne farenin deri (epidermis kadar tarafı) yerleştirin. </li><li> Önceden etiketli marker ilk dikiş, fare derisi düzeltmek için iki tarafta sütürler daha sonra, alt tarafındaki ikinci olun. </li><li> Aşılama sonrası Temizlik fare cilt. Roket ucu konisi çıkarın ve uyanık ve ayaktan kadar ısıtılmış pad üzerinde fare tutmak. </li><li> Yeni bir kafesin içine fare koyun. </li><li> Ameliyattan hemen sonra deri altı enjeksiyon, ameliyat sonrası 24 saat ve 48 saat Meloksikam (1 mg / kg): operatif analjezi gönderin. </li></ol></li></ol> 2. Temsilcisi Sonuçlar: Cilt Normal melanositler ve dermal kök hücreleri ile yeniden yapılandırır Cilt, ekleriyle birlikte özel bir 6 kuyu tepsi kültüre yeniden yapılandırır. Dermal bölmesi (Şekil 1A), ilk dört gün için% 10 FBS ile DMEM kültür. Cilt yeniden orta keratinositler melanosit veya melanom hücrelerinin (Şekil 1B) numaralı seribaşı zaman kullanılır. Epidermis 9 gün havaya maruz kalan ve bu keratinositler (Şekil 1C) ayırt etmek için izin verir. 18 gün, cildin epidermis tabakalı keratinosit katmanlardan oluşmaktadır yeniden yapılandırır. Farklılaşmamış sırayla farklılaşmış bazal tabaka ve katmanları dikey odaklı (Şekil 1D). Lekemelanositik işaretleyici S100 ile yeniden yapılandırır bölümünde ing bu melanositlerin bazal tabakası olan epidermis ve iletişim dendrit uzantıları (Şekil 1E) yoluyla birden fazla keratinositler hizalanır gösterir. Dermal bölmesi bir kollajen tip I matriks içinde gömülü fibroblastlar içerir. Tevdi kollajen IV epidermis, dermis (Şekil 1F) ayıran bazal membran gösterir. Dermal kök hücreler (GFP lentiviral vektör ile etiketlenen) fibroblastlar kollajen ben matris gömülü ettiklerinde, epidermisin göç ve melanosit (1), (Şekil 2) farklılaşırlar. Epidermisin keratinositlerin çoklu katmanlar geliştirilmiştir. Cilt melanom tümörleri, yeniden yapılandırır Klinikopatolojik çalışmalar göstermektedir ki melanomlar kademeli bir şekilde ilerleme: sık görülen edinsel nevus, displastik nevüs, ALP (radyal büyüme fazı) melanomlar, VGP melanomlar (dikey büyüme fazı) ve metastatik melanomlar (7). Melanom hücre hatları farklı aşamalarında 2-GE kültürü (Şekil 3A-D) birbirlerine morfolojik olarak benzer ancak cildi yeniden yapılandırır dahil olduğunda, hücrelerin davranışını in vivo özellikleri yansıtır . Konumu ve normal melanosit büyüme hızı, sıkı deri (Şekil 3E) yeniden yapılandırır kontrol edilir. VGP melanomlar WM793 dermis (Şekil 3G) invaziv büyümeye ise ALP primer melanomlar WM35, epidermis (Şekil 3F) ağırlıklı olarak çoğalırlar. Metastatik melanomlar 1205Lu agresif derin dermis (Şekil 3H) işgal etti. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/2937/2937fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Cilt Normal melanositler ile yeniden yapılandırır. Cildin brüt görünümü AC gösterilir yeniden yapılandırır. A. Fibroblastlar kollajen ile karışık% 10 içeren DMEM FBS ve form dermal bölmesi yetiştirilmektedir. B. Keratinositler ve melanosit dermisin üst numaralı seribaşı ve yeniden orta deride gelişir. C. Epidermis 9 gün havaya maruz kalmaktadır. D. H &amp; E-lekeli cilt yeniden dikey olarak oluşan Epidermis, bazal tabaka odaklı, ve sırayla farklılaşmış tabakalı hücre tabakaları sunar. Dermis kollajen tip I matris gömülü fibroblastlar içerir. E. S100-pozitif melanosit (siyah ok), bazal membran ve iletişim birden fazla keratinositler ile hizalanır. F. Kollajen IV-boyama, epidermis, dermis ayıran bazal membran, gösterir. DF tüm renklendirmeler formalin ile fikse, parafine gömülü bölümler yapıldı. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/2937/2937fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. Ciltte dermal kök hücreleri, epidermisin göç ve melanosit içine ayırt yeniden yapılandırır. Tohumlama keratinositler At 5 gün sonra, tek GFP pozitif hücreler (yeşil) kürelerden göç başlar . Epidermis, hala tek bir katman oluşur. 8 gün, birkaç hücre epidermis-dermis arabirimi ulaşır. 10. günde, GFP pozitif hücreler bazal membran pozisyonda sıkıca hizalanır. Göç, GFP pozitif hücreler epidermisin ifade melanositik işaretleyici HMB45 (kırmızı, beyaz oklarla gösterildiği gibi). Çekirdekler DAPI (mavi) ile boyandı. Epidermis çoklu katmanlar olarak geliştirilmiştir. Bazal membran beyaz noktalı çizgiler ile gösterilir. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/2937/2937fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Cilt melanomlar farklı aşamalarında yeniden yapılandırır: AD. Normal melanositler ve melanom hücrelerinin 2D kültürlerde büyüdü. A. sünnet derisi Melanositler. B. ALP WM35 hücreleri. C. VGP WM793 hücreleri. D. metastatik melanom 1205Lu hücreleri. E. Normal melanositler bazal membran bulunmaktadır. F. ALP melanom WM35 hücreler epidermiste hücre kümeleri olarak büyür. G. VGP melanom WM793 hücreler bazal membran ile dermis içine işgal etti. H. metastatik melanom 1205Lu hücreleri agresif dermis derinliklerine işgal etti. Sorun Giderme <table border="1"><tbody><tr><td> Sorun </td><td> Sorun Giderme </td></tr><tr><td> Kollajen karışım katılaşmaya değildir </td><td> Kollajen karışımı rengi pembe saman sarı olmalıdır, aksi takdirde pH yanlış ve kollajen jel olmayabilir. Sarı rengi parlak, daha fazla sodyum bikarbonat damla damla ilave edilmelidir. </td></tr><tr><td> Kollajen erken mixuture içinde çökeltileri </td><td> Tüm bileşenleri kollajen karışımı yerleştirin üzerine yerleştirilir kadar buz tutunuz </td></tr><tr><td> Sözleşmeli kolajen (bir tarafı diğer tarafı daha kalın) bile değildir </td><td> Kalibre raf kuluçka </td></tr><tr><td> Epidermis en az üç keratinosit katmanları ile oluşur. </td><td> Alt geçişleri farklılaşmamış keratinositler kullanın </td></tr></tbody></table>

<ol><li>Sun, T., Jackson, S., Haycock, J. W., MacNeil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+skin+cells+in+3D+rather+than+2D+improves+their+ability+to+survive+exposure+to+cytotoxic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Culture of skin cells in 3D rather than 2D improves their ability to survive exposure to cytotoxic agents.</a> J Biotechnol. 122, 372-381 (2006).</li>
<li>Smalley, K. S., Lioni, M., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Life+isn%27t+flat%3A+taking+cancer+biology+to+the+next+dimension%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Anim%22%5BJournal%5D)">Life isn't flat: taking cancer biology to the next dimension.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 42, 242-247 (2006).</li>
<li>Sun, T., Norton, D., McKean, R. J., Haycock, J. W., Ryan, A. J., MacNeil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+3D+cell+culture+system+for+investigating+cell+interactions+with+electrospun+fibers%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol+Bioeng%22%5BJournal%5D)">Development of a 3D cell culture system for investigating cell interactions with electrospun fibers.</a> Biotechnol Bioeng. 97, 1318-1328 (2007).</li>
<li>Kremer, M., Lang, E., Berger, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypical+engineering+of+differentiated+composite-skin+equivalents+of+human+keratinocytes+in+a+collagen-GAG+matrix+%28INTEGRA+Artificial+Skin%29+in+a+perfusion+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Langenbecks+Arch+Surg%22%5BJournal%5D)">Organotypical engineering of differentiated composite-skin equivalents of human keratinocytes in a collagen-GAG matrix (INTEGRA Artificial Skin) in a perfusion culture system.</a> Langenbecks Arch Surg. 386, 357-363 (2001).</li>
<li>Escámez, M. J., Garcí, M., Larcher, F., Meana, A., Muñoz, E., Jorcano, J. L., Del Río, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vivo+model+of+wound+healing+in+genetically+modified+skin-humanized+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">An in vivo model of wound healing in genetically modified skin-humanized mice.</a> J Invest Dermatol. 123, 1182-1191 (2004).</li>
<li>Li, L., Fukunaga-Kalabis, M., Yu, H., Xu, X., Kong, J., Lee, J. T., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+dermal+stem+cells+differentiate+into+functional+epidermal+melanocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Human dermal stem cells differentiate into functional epidermal melanocytes.</a> J Cell Sci. 123, 853-860 (2010).</li>
<li>Meier, F., Nesbit, M., Hsu, M. Y., Martin, B., Van Belle, P., Elder, D. E., Schaumburg-Lever, G., Garbe, C., Walz, T. M., Donatien, P., Crombleholme, T. M., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+melanoma+progression+in+skin+reconstructs%3A+biological+significance+of+bFGF%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Human melanoma progression in skin reconstructs: biological significance of bFGF.</a> Am J Pathol. 156, 193-200 (2000).</li>
<li>Yu, H., McDaid, R., Lee, J., Li, L., Kumar, S. M., Elder, D. E., Van Belle, P., Gimotty, P., Guerra, M., Hammond, R., Nathanson, K. L., Dalla Palma, M., Herlyn, M., Xu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+BRAF+mutation+and+p53+inactivation+during+transformation+of+a+subpopulation+of+primary+human+melanocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">The role of BRAF mutation and p53 inactivation during transformation of a subpopulation of primary human melanocytes.</a> Am J Pathol. 174, 2367-2377 (2009).</li>
<li>Lee, J. T., Li, L., Brafford, P. A., van den Eijnden, M., Halloran, M. B., Sproesser, K., Haass, N. K., Smalley, K. S., Tsai, J., Bollag, G., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PLX4032%2C+a+potent+inhibitor+of+the+B-Raf+V600E+oncogene%2C+selectively+inhibits+V600E-positive+melanomas%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">PLX4032, a potent inhibitor of the B-Raf V600E oncogene, selectively inhibits V600E-positive melanomas.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 23, 820-827 (2010).</li>
<li>Tsai, J., Lee, J. T., Wang, W., Zhang, J., Cho, H., Mamo, S., Bremer, R., Gillette, S., Kong, J., Haass, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Discovery+of+a+selective+inhibitor+of+oncogenic+B-Raf+kinase+with+potent+antimelanoma+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Discovery of a selective inhibitor of oncogenic B-Raf kinase with potent antimelanoma activity.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 105, 3041-3046 (2008).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Biz 3D cilt üreten normal insan melanosit, deri kök hücreleri ve melanom hücreleri ile yeniden yapılandırır tarif var. Tek tabakalı kültür yetiştirilen, melanositik hücreler, benzer bir morfoloji (basık, mil veya dendritik şekilli daha) klinik evre kökenlerine bakılmaksızın sunar. Buna karşılık, 3D cilt, melanom hücrelerinin aşamalı özgü özellikleri özetlemek yeniden yapılandırır. Normal insan melanosit tek bir hücre olarak epidermal ve dermal katmanlar arasındaki bazal membran bulunur. Daha agresif VGP melanom hücrelerinin bazal membran dermis içine kırarak büyük kümeler olarak büyümeye ise ALP primer melanom hücrelerinin bazal membran boyunca küçük küme olarak büyür. Metastatik melanom hücrelerinin tüm yönlerde büyümeye ve tek hücre veya kümeler gibi dermis derinliklerine işgal. Kantitatif analizler, invazyon derinliği ve yayılması ölçüde ölçerek bu model üzerinde yapılabilir. Yanı sıra, normal ve malign melanositik hücrelerin karakterizasyonu, model kullanarak doğrudan (E-kaderin upregülasyonu yoluyla keratinositler iyi niyetli iletişim kurmak epidermisin bazal tabaka ev ve olgunlaştı melanosit dermal kök hücrelerin farklılaşma, uyarabilir 6). Viral vektörler kullanarak, ya da etkinleştirmek veya melanosit dönüşüm mekanizmaları sadece çalışma için verimli bir model olmayı vaat ediyor dinamikleri ve her hücre türüne göre cilt genlerin fonksiyonel önemi daha iyi bir anlayış yeniden yapılandırır, gen fonksiyonu etkisiz hale değil, aynı zamanda ilerlemesini melanom (8). Hücre fenotipleri Uzun vadeli gözlem cilt bağışık yetmezliği olan hayvanların yeniden yapılandırır, aşılama ile mümkün olmuştur. Böyle bir insan-fare cilt chimera melanomagenesis ve melanom metastazı çalışma için mükemmel bir araştırma aracı. Cilt ilaç değerlendirilmesi için yararlı bir platform da olabilir yeniden yapılandırır. 2D kültür koşullarda kanser hücrelerini yok Birçok ilaç genellikle deneysel ve klinik uygulamalarda çok az etkisi var. Görüldüğü gibi in vivo tümör, 3D kültürlerde melanom hücrelerinin mikroçevresinin melanom sinyal yolları modüle düşündüren, 2D kültürlerde hücrelere yanıt ilaçlara dirençli. Başarılı bir ilaç keşfi için, 3D cilt yeniden modeli, in vivo bileşikler (9,10) etkileri tahmin etmek için ideal bir preklinik bir araçtır. Özetle, deri modelleri, in vitro ve in vivo çalışmalar arasında köprü yeniden . Onlar bu dönüşüme katkıda bulunan genler dönüşüm ve kök hücre nasıl yer aldığı daha iyi anlaşılmasına yol açacaktır.

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th></tr><tr><td> 10x EMEM </td><td> Bio Whittaker </td><td> 12-684F </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Gibco </td><td> 25030-081 </td></tr><tr><td> Fetal sığır serumu </td><td> Hyclone </td><td> SH-30.071,02 </td></tr><tr><td> Sığır Tendon Asit-Çıkarılan Kollajen </td><td> Organogenez </td><td> 200/50 </td></tr><tr><td> Doku Kültürü ekler ile 6-iyi Tepsiler </td><td> Organogenez </td><td> 9285 </td></tr><tr><td> Keratinosit Serum Ücretsiz Orta </td><td> Gibco </td><td> 17005042 </td></tr><tr><td> Diyaliz Fötal Buzağı Serumu </td><td> Hyclone </td><td> SH-30.079,03 </td></tr><tr><td> Rekombinant İnsan Kök Hücre Faktörü </td><td> Fitzgerald Sektörler </td><td> RDI-307-255X </td></tr><tr><td> Temel FGF </td><td> Fitzgerald Sektörler </td><td> 30R-AF015 </td></tr><tr><td> Endotelin-3, insan </td><td> Amerikan Peptid A.Ş. </td><td> 88-5-10 </td></tr><tr><td> Kalsiyum Klorür </td><td> Sigma </td><td> C-7902 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> JRH biyoloji </td><td> 56.430-10L </td></tr><tr><td> F12 (HAM Kullanıcı) </td><td> Gibco </td><td> 11765-54 </td></tr><tr><td> Hidrokortizon </td><td> Sigma </td><td> H-0888 </td></tr><tr><td> İnsülin, transferrin, etanolamin, Selenyum (ITES) </td><td> BioWhittaker </td><td> 17839Z </td></tr><tr><td> O-Phosphorylethanolamine </td><td> Sigma </td><td> P0503 </td></tr><tr><td> Adenin </td><td> Sigma </td><td> A9795 </td></tr><tr><td> Progesteron </td><td> Sigma </td><td> P-8783 </td></tr><tr><td> Triiyodotironin </td><td> Sigma </td><td> T-5516 </td></tr><tr><td> Yenidoğan buzağı serumu </td><td> Hyclone </td><td> SH3011802 </td></tr><tr><td> 10% formalin tampon </td><td> Surgipath </td><td> 00600 </td></tr><tr><td> Optimal kesme sıcaklığı donma medya (OCT) </td><td> Sakura </td><td> 4583 </td></tr><tr><td> Çok kasetleri </td><td> Surgipath </td><td> 02.293-BX </td></tr><tr><td> TBS biyopsi kağıtları </td><td> Üçgen Biyomedikal Bilimleri </td><td> BP-B </td></tr><tr><td> TBS biyopsi kağıtları </td><td> Üçgen Biyomedikal Bilimleri </td><td> BP-B </td></tr><tr><td> Tek kullanımlık Base Kalıplar </td><td> Balıkçı </td><td> 15-182-501C </td></tr><tr><td> Bileşik benzoin tentürü </td><td> Profesyonel Tek, Inc. </td><td> S42450 </td></tr><tr><td> Alkol Hazırlık Swablar </td><td> CVS eczane </td><td></td></tr><tr><td> İpek Siyah Örgülü 5-0 </td><td> Ethicon </td><td> 682G </td></tr><tr><td> Tül süngerler (steril) </td><td> CVS eczane </td><td></td></tr><tr><td> Forseps </td><td> Roboz </td><td> RS5070 </td></tr><tr><td> İris makası </td><td> Roboz </td><td> RS5913 </td></tr><tr><td> Cerrahi bıçaklar </td><td> Tüy </td><td> 2976 </td></tr><tr><td> EZ anestezi </td><td> Euthanex Corp. </td><td></td></tr><tr><td> SCID tüysüz outbred fare </td><td> Charles nehir </td><td></td></tr></tbody></table>

Üç boyutlu İnsan cilt model yeniden İnşa: aracı normal cilt ve melanom İlerleme eğitim

The Three-Dimensional Human Skin Reconstruct Model: a Tool to Study Normal  Skin and Melanoma Progression

Biriken hücreler farklı davranırlar 3D ekstra-hücresel matrisi içinde yetiştirilen ve aynı zamanda diğer hücreleri ile (1-5) etkileşim içinde olduğunu gösterir iken Çoğu in vitro çalışmalarda deneysel cilt biyoloji, 2-boyutlu (2D) monokültürler yapılmıştır var . Fare modelleri geniş in vivo doku morfolojilerinden incelemek için kullanılmıştır. Ancak fare ve insan deri, hücre mimarisi ve fizyolojisi, zor insanlar için fare çalışmalar yapmamızı da yapar önemli farklılıklar var. Fare deride melanosit çoğunlukla saç köklerinin lokalize olduğundan, onlar, epidermisin bazal tabaka öncelikle bulmak insanların bu farklı biyolojik özellikleri var. 3D insan derisinin son gelişme modelleri, hücre-matriks ve hücre-hücre etkileşimleri farklı hücre türleri arasındaki araştırmak için alanında sağladı yeniden. Gömülü fibroblastlar kollajen I matrisi, tabakalı, farklılaştırılmış keratinositler ve fonksiyonel bir bazal membran, dermis epidermis ayıran oluşan bir &quot;Epidermis&quot;, bir &quot;dermis&quot; oluşur yeniden yapılandırır. Kollajen, iskele, besin teslimat ve hücre-hücre etkileşimi için potansiyeli sağlar. Melanositik hücreler, insan derisinde melanosit homeostazı ve melanom ilerlemesi doğal özellikleri özetlemek içeren 3D deri modelleri. In vivo olarak, yeniden inşa deride melanosit, bazal tabaka keratinositler serpiştirilmiş bazal membran lokalize . Melanom hücreleri, in vivo olarak orijinal tümör evresi (ALP, VGP ve metastatik melanom hücrelerinin) yansıtan aynı özellikleri gösterirler . Son zamanlarda, dermal kök hücreler, insan dermis (6) tespit edilmiştir. Bu çok güçlü kök hücreleri epidermisin göç ve melanosit ayırt etmek için kullanılır.

Bu raporda, üç boyutlu bir cilt, mimari ve kompozisyon insan deri taklit modeli yeniden açıklar. Melanosit fizyolojisi, melanom ilerlemesi ve dermal kök hücre kaderi cilt modeli yeniden kullanarak incelenmiştir. Model preklinik ilaç değerlendirilmesi için bir araç olarak da yararlıdır.

Üç Boyutlu İnsan Cilt Model Yeniden İnşa: Aracı Normal Cilt ve Melanom İlerleme Eğitim

Deneysel deri biyolojisindeki in vitro çalışmaların çoğu iki boyutlu (2D) monokültürlerde gerçekleştirilmiştir; ancak biriken kanıtlar hücrelerin...

Bu prosedürün genel amacı, melanosit, melanoma ve cilt kök hücresi biyolojisi çalışmalarında kullanılmak üzere 3 boyutlu bir insan cilt rekonstrüksiyonu oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle doku kültürü tepsisi eklerinin nötralize sığır kolajeni ile kaplanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, fibroblastlar ve kolajen kullanılarak hücresel dermal kompartımanın oluşturulmasıdır.Ardından, keratinositlerin melanositler veya melanoma hücreleri ile karıştırılmasıyla epidermal kompartıman oluşturun. Prosedürün son adımı, 18. günde bir deri rekonstrüksiyonu hasat etmek ve bu deri rekonstrüksiyonunu bir fareye greftlemektir. Nihayetinde, greftin immünohistokimyasal ve immünofloresan analizleri; melanosit içeren normal deri mimarisini, normal kök hücrelerin migrasyonunu ve diferansiyasyonunu ve evreye özgü melanoma fenotiplerini göstermektedir.Normal melanositlerin veya melanoma hücrelerinin bir kapta kültüre edildiğinde, doku bağlamındaki hücrelerden çok farklı davrandığını çalışmalarımızın erken aşamalarında fark ettiğimiz için 20 yıl önce cilt rekonstrüksiyon modelini geliştirdik. Bu nedenle, cilt rekonstrüksiyon modeli, hücrelerin cildin bir kompartımanından diğer herhangi bir yere nasıl hareket ettiğini görmemiz için idealdir. Önceden hazırlanmış aselüler tabaka karışımını buz üzerinde collagen karışımıyla hazırlayın ve ardından altılı bir insert'in her birine bir mililitre saman sarısı çözeltiden ekleyin.Kuyu tipi doku kültürü tepsisini, jelin katılaşması için oda sıcaklığında 30 dakika boyunca inkübe edin. Bu süre zarfında jel katılaşırken, solüsyonun rengi sarıdan pembeye dönmelidir. Jel katılaşırken, kültür flaskındaki insan fibroblastlarını %0,25 tripsin EDTA ile beş dakika boyunca tripsinizleyin. Tripsinizasyon işlemini nötralize etmek için %10 FBS içeren DMEM ekleyin.Ayrılmış hücreleri oda sıcaklığında 200 G'de beş dakika boyunca santrifüjle toplayın ve ardından hücreleri 1,5 mililitre %10FBS ile desteklenmiş DMEM içinde 4,5 x 10⁵ hücre olacak şekilde yeniden süspande edin. Ardından, 50 mililitrelik bir tüpü önceden hazırlanmış hücresel tabaka kolajen karışımıyla doldurun ve tüpü buz üzerine yerleştirin.Tüpe 1,5 mililitre fibroblast süspansiyonu ekleyin ve iyice karıştırın. Her bir aselüler tabaka kaplı inserte üç mililitre saman sarısı renkli hücresel tabaka çözeltisi ekleyin. Ardından, doku kültürü tepsisini inkübasyon süresi boyunca %5 karbon dioksit içeren bir doku kültürü inkübatöründe 37 derece Celsius'ta 45 dakika boyunca inkübe edin.Hücresel tabaka solüsyonunun rengi de sarıdan pembeye dönmelidir. Üst tabaka jel katılaştıktan sonra, doku kültürü tepsisindeki insertin içine %10 FBS içeren iki mililitre DMEM ve dışına 10 mililitre ekleyin. Doku kültürü tepsilerini dört gün boyunca inkübe edin.İnkübasyonun dördüncü gününde jel büzülmesini kontrol ederek, her bir insertin içinden ve dışından medyumu aspire edin. Normal serumu yıkamak için insertlerin içine iki mililitre, dışına ise 10 mililitre yıkama medyumu ekleyin. Ardından, epidermis oluşumu için tepsileri 37 °C'de bir saat boyunca inkübe edin.İlk olarak insan keratinositleri tripsinize edinir. Ardından, ayrılan hücreler 200 G'de beş dakika santrifüj edildikten sonra tripsini nötralize etmek için beş dakika boyunca soya fasulyesi tripsin inhibitörü kullanın. Hücre peletini skin içinde mililitrede 4,17 x 10⁶ hücre olacak şekilde yeniden süspanse edin.Keratinositler toplandıktan sonra birinci ortamı yeniden oluşturun. İnsan melanositlerini bir ila iki dakika boyunca tripsinle inkübe edin. Ardından, tripsini soya fasulyesi tripsin inhibitörü ile nötralize edin.Ardından, hücreleri daha öncekiyle aynı koşullar altında santrifüjle çöktürdükten sonra, melanosit peletini skin ortamında 8,3 × 10⁵ hücre/mL konsantrasyonunda yeniden süspande edin. Medium 1'i de aynı şekilde hazırlayın. Sonrasında, hazırlanmış bir dermal tabaka doku kültürü tepsisindeki her bir insertin hem iç hem de dış kısmından yıkama medyumunu uzaklaştırın.Her bir insertin içine 1,5 mililitre ve dışına 10 mililitre deri rekonstrüksiyon medyumu ekleyerek yıkama medyumunu değiştirin. Ardından, 600 mikrolitre keratinosit hücre süspansiyonunu 600 mikrolitre melanosit süspansiyonu ile karıştırın. Karıştırılmış hücre süspansiyonundan 200 mikrolitre dağıtın.Her bir insertin içine damla damla ekleyin. Doku kültürü tepsisini 37 °C'de iki gün boyunca inkübe edin. Hücreleri inkübe ettikten sonra, her bir insertin hem içinden hem de dışından skin, reconstruct medium one'ı aspire edin ve ardından insertlerin içine 2 mL skin, reconstruct medium two ve dışına 10 mL ekleyin.Ardından, rekonstrüktleri 37 °C'de iki gün daha inkübe edin. İkinci iki günlük inkübasyonun ardından, her bir insertin içinden ve dışından deri rekonstrüksiyon medyumu iki'yi aspire edin. Şimdi, insertlerin yalnızca dış kısmına 7,5 mL deri rekonstrüksiyon medyumu üç ekleyin.Rekonstrüktleri inkübatöre geri yerleştirin ve besiyerini değiştirin. 18. güne kadar gün aşırı olarak rekonstrükt besiyeri 3'ü ile değişim yapın. İnkübasyonun 18. gününde, deri rekonstrükt yüklü doku kültürü tepsisindeki insertlerin iç ve dış kısımlarındaki besiyerlerini aspire edin.Ekleri pens ile tepsiden çıkarın. Polikarbonat filtreyi de kapsayacak şekilde, neşter ucuyla kenara yakın bir daire çizerek konstrüktü kesin. Ardından, filtre üzerindeki rekonstrüktü sert bir yüzeye yerleştirin ve bıçakla ikiye bölün.Rekonstrüksiyonun bir yarısını siyah bir TBS biyopsi kağıdına yerleştirin ve ardından kağıdı bir histoloji kasetine koyun. Tüm kaseti dört saatten fazla süreyle %10 formalin içinde bekletin. Ardından kaseti %70 etanol içine yerleştirin ve rekonstrüksiyonu parafin gömme işlemi için hazırlayana kadar dört °C'de saklayın.Rekonstrüksiyonun diğer yarısını, 4 °C'de bir ila iki saat boyunca %50 sükroz içerisinde bekletin. Ardından sükrozu 2 M ile değiştirin ve 4 °C'de bir ila iki saat daha saklayın. Bir taban kalıbının yarısını optimal kesme sıcaklığı (optimal cutting temperature), dondurma medyumu veya OCT ile doldurun.Hava kabarcığı oluşumundan kaçının. Rekonstrüktün kenarından forsepsle tutun ve rekonstrüktü sakrozdan çıkarın. Sakroz emilene kadar Kim wipe üzerine yerleştirin.Pens ve spatula kullanarak, rekonstrüktü OCT üzerindeki tekneye aktarın. Tekne tamamen dolana kadar rekonstrüktün üzerini daha fazla OCT ile kapatın. Yine, hava kabarcığı oluşmamasına dikkat edin.OCT'nin tamamen donmasını sağlamak için tekneyi kırılmış kuru buz üzerine eşit şekilde yerleştirin. Ardından baz kalıbını ve folyoyu sarın ve kriyostat ile kesmeye hazır olana kadar -70 °C'de saklayın. Bir farede deri rekonstrüksiyonu greftleme işlemine hazırlanmak için bir kabı sıvı azot ile doldurun ve 50 mL'lik bir tüpe 5 mL DMEM ekleyin.Bir beherin içerisine 600 mililitre musluk suyu doldurun ve ısıtmak için beheri bir ısıtıcı plakanın üzerine yerleştirin. Ardından, yaklaşık altı haftalık dişi bir skid tüysüz outbred fare seçin. Fareyi izoflorin ile anestezi ettikten sonra.İşlem boyunca anesteziyi sürdürmek için bir burun konisi kullanın. Hipotermiyi önlemek için steril oftalmik lubrikant uygulayın ve ısı desteği sağlayın. Ardından, fare derisini bileşik benzoik tinktür ve alkollü hazırlık tamponlarıyla temizleyin.Sonraki sütür işlemi için aynı konumu korumak amacıyla fare sırtının üzerine bir çizgi işaretleyin. İris makası ve pens kullanarak fare sırtında yuvarlak bir yara yatağı kesin ve ardından yara yatağını steril gazlı bezlerle kapatın. Yuvarlak fare derisini 50 milliliter DMEM içeren tüpe yerleştirin.Tüm besiyeri ve doku tamamen donana kadar tüpü bir sıvı azot kabına daldırın. Ardından, tüp tamamen çözülene kadar sıcak su dolu bir behere yerleştirerek çözdürün. Bu dondurma ve çözdürme işlemini üç kez tekrarlayın.Bir deri rekonstrüksiyonunu bir insertten ayırmak için cerrahi bir bıçak kullanın. Membranı çok dikkatli bir şekilde çıkarın ve ardından deri rekonstrüksiyonunu fare yara yatağının üzerine transfer edin. Şimdi, fare derisini deri rekonstrüksiyonunun üzerine yerleştirin.İlk sütürün daha önce etiketlenmiş işaretçinin üzerinde ve ikincisinin ise altta olduğundan emin olun. Ardından, fare derisini sabitlemek için deri rekonstrüksiyonunun yan kısımlarında iki sütür daha kullanın. Greftleme işleminden sonra fare derisini temizleyin ve ardından fareyi yeni bir kafese yerleştirin.18. günde, deri rekonstrüktünün epidermisi stratifiye keratinosit tabakalarından oluşur; farklılaşmamış bazal tabaka ve sırasıyla farklılaşmış tabakalar dikey olarak yönlenmiştir. Rekonstrükt kesitinin melanositik marker ile boyanması.Siyah oklarla belirtilen S 100, melanositlerin epidermisin bazal tabakasında sıralandığını ve dendrit uzantıları aracılığıyla birden fazla keratinosit ile etkileşim kurduğunu göstermektedir. Dermal kompartman, bir kolajen tip bir matriksine gömülmüş fibroblastlar içerir; biriktirilmiş kolajen dört, epidermisi dermisten ayıran bazal membranı belirtir. Aşağıdaki şekiller, epidermisteki çok sayıda keratinosit tabakasının nasıl geliştiğini göstermektedir.GFP lentiviral vektörü ile işaretlenmiş dermal kök hücreler fibroblastlarla birlikte gömüldüğünde, kolajen tip bir matris içerisinde epidermise göç ederler ve beşinci günde melanositlere farklılaşırlar. Keratinositlerin ekilmesinin ardından, tek hücreler kürelerden dışarı göç etmeye başlar.Epidermisin hâlâ tek bir tabakadan oluştuğuna dikkat edin. Sekizinci günde, birkaç hücre epidermis-dermis ara yüzüne ulaşır.10. güne gelindiğinde, burada görülebileceği üzere GFP pozitif hücreler bazal membran konumunda sıkı bir şekilde dizilmişlerdir. Epidermiste göç eden GFP pozitif hücreler, melanositik belirteç HMB 45 eksprese ederler. Melanoma hücre hatlarının farklı evreleri deri rekonstrüktlarına dahil edildiğinde, hücrelerin davranışı in vivo özelliklerini yansıtır.Burada, 2D kültürlerde büyütülmüş normal melanositler ve melanoma hücreleri bu şekilde görülebilir. Burada görüldüğü üzere, cilt rekonstrüksiyonlarında normal melanositlerin konumu ve büyüme hızı sıkı bir şekilde kontrol edilir; radyal büyüme evresindeki primer melanomalar ağırlıklı olarak epidermiste çoğalırken, dikey büyüme evresindeki melanomalar bu şekilde görüldüğü gibi dermise doğru invaziv olarak büyür. Son olarak, metastatik melanomaların dermisin derinliklerine agresif bir şekilde nasıl invaze olduğu burada görülebilir.Normal cilt üzerindeki çalışmalarımız, melanom gelişimi ve ilerlemesinin daha iyi anlaşılması için temel oluşturmaktadır.

the-three-dimensional-human-skin-reconstruct-model-tool-to-study

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu videoda, melanom ilerlemesini incelemek için in vitro 3D organotipik cilt rekonstrüksiyonları oluşturmak için ayrıntılı protokol açıklanmaktadır. Bu cilt modeli, in vivo organların hem mimarisini hem de çok hücreli karmaşıklığını taklit eder.

Organotipik Tam Cilt Rekonstrüksiyonlarının Oluşturulması: İnsan Derisi Örneklerini Kullanarak 3D Cilt Modeli Oluşturma Prosedürü

Karsinojenez kanser hücrelerinin ve kanser mikro arasındaki etkileşimi içeren bir süreçtir. Moleküler olayları incelemek için, bir kanser gelişimi boyunca farklı aşamalarda farklı hücre popülasyonu izole etmek gerekmektedir. Bazal hücreli karsinom için bir fare modeli kullanarak, kanser sırasında hücre analizleri için bir protokol açıklar.

Hücre Nüfus Analizler Cilt Karsinojenez sırasında

Bu protokolün amacı, doğal cilde benzeyen üç boyutlu tam kalınlıkta bir cilt eşdeğeri oluşturmaktır. Özel olarak yapılmış bir otomatik yaralama cihazı ile, sterilitenin korunması altında hassas ve tekrarlanabilir yaralar oluşturulabilir.

Üç-boyutlu Tam Kalınlığı Deri Üretimi Eşdeğer ve Otomatik Yaralama

Bu makromoleküler Crowders (MMC) kullanarak, hücre dışı matris protein açısından zengin hücre-türevi matrisleri elde etmek için bir protokol mevcut. Buna ek olarak, yapının vadesinin korurken kültür süresini azaltır 3D Organotipik bir deri ko-kültür üretimi bölgesi MMC içeren bir protokol mevcut.

Geliştirilmesi 2D ve 3D Cilt<em&gt; İn Vitro</emMakromoleküler Dışlamasını Kullanma&gt; Modeller

Burada, biz mevcut her iki mimari beyannamedir bir 3D organotypic Melanom küresel Cilt modeli oluşturmak için bir protokol ve bir organ/tümör vivo içinde ama aynı zamanda çok hücreli karmaşıklık barındırır sistematik deneysel müdahale.

3D Organotypic Melanom küresel Cilt modeli

Bu protokol, üç boyutlu yeniden oluşturulmuş insan epidermisini tekrarlanabilir ve sağlam bir şekilde yetiştirmek için basit bir yöntemi açıklar. Ek olarak, epidermal bariyer modelinin yapı-işlev ilişkisini karakterize eder. Yeniden inşa edilen insan epidermisinin proinflamatuar uyaranlar üzerine biyolojik tepkileri de sunulmaktadır.

Büyük Ölçekte Üç Boyutlu Yeniden Yapılandırılmış İnsan Epidermisi Yetiştirmek

Bu protokolün amacı, uzun vadeli kültür için erişilebilir ve basit teknikler kullanarak damarlı insan derisi eşdeğerlerinin neslini ve hacimsel analizini tanımlamaktır. Mümkün olduğu ölçüde, adımların gerekçesi, araştırmacılara araştırma ihtiyaçlarına göre özelleştirme olanağı sağlamak için açıklanmıştır.

Kendi Kendine Monte Edilmiş Vaskülerleştirilmiş İnsan Derisi Eşdeğerlerinin Üretimi

Mevcut protokol, insan derisinin obez olmayan diyabetik (NOD)-scid interlökin-2 gama zinciri reseptörü (NSG) farelere nasıl aşılanacağını açıklamaktadır. Nakil için insan derisinin hazırlanması, nakil için farelerin hazırlanması, bölünmüş kalınlıkta insan derisinin nakli ve nakil sonrası iyileşme prosedürünün ayrıntılı bir açıklaması raporda yer almaktadır.

İnsan Bağışıklık Tepkilerini In Vivo'da Manipüle Etmek için Ksenograft Cilt Modeli

Burada, bir hücre kültürü laboratuvarında rutin araştırmalar için çeşitli 3D cilt modellerini tanıtmak için ucuz ve basit prosedürler sunuyoruz. Araştırmacılar, ticari olarak mevcut modellere güvenmeden ihtiyaçlarına göre uyarlanmış modeller oluşturabilirler.

Çok Sayıda Uygulama için Cilt Modelleri Oluşturma - İki Boyutlu (2D) Monokültürden Üç Boyutlu (3D) Çoklu Kültüre

Iletken metalik mürekkeplerin düzlemsel ve üç boyutlu baskı açıklanmıştır. Bizim yaklaşımımız imalatı basılı, elektronik, optoelektronik ve microscale alışılmadık düzenleri biyomedikal cihazlar için yeni yollar sağlar.

İletken Mürekkepler düzlemsel ve Üç Boyutlu Baskı

Keşfedin üç boyutlu insan cilt modeli yeniden inşa yöntemini; melanosit, melanom ve kök hücre biyolojisini incelemek için kullanılan bu model, preklinik ilaç değerlendirmesinde değerli bir araçtır.

Üç Boyutlu İnsan Cilt Model Yeniden İnşa: Aracı Normal Cilt ve Melanom İlerleme Eğitim

Daha fazla video keşfet