Karanlık Alan Mikroskobu Kullanılarak Antikor Konjuge Nanopartikül Tabanlı Miktar Tayini: Vücut Sıvılarından Belirli Eksozomları Yakalama ve Ölçme Prosedürü
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:43 dk. • April 30th, 2023
Eksozomlar, hücreler tarafından hücre dışı boşluğa salgılanan küçük, zarla çevrili yapılardır. Eksozomlar biyosıvılarda bol miktarda bulunur.
Vücut sıvılarından belirli eksozomları tanımlamak ve yakalamak için, çok kuyulu bir immünolojik test slaydı alarak başlayın. Bu slayt, antijen görevi gören ve spesifik antikorlara bağlanan proteinlerle işlevselleştirilir.
Slaytı istenen birincil antikor çözeltisi ile destekleyin ve inkübe edin. Bu antikorlar, kayma yüzeyindeki önceden kaplanmış antijenlere bağlanır.
Bağlanmamış antikorları çıkarmak için kalan çözeltiyi aspire edin. Şimdi, serbest antijenleri bloke eden ve böylece eksozomların spesifik olmayan bağlanmasını önleyen bir bloke edici tampon ekleyin.
Daha sonra, bloke edici tamponu çıkarın, serum süspansiyonu içeren eksozomları lam üzerine yükleyin ve inkübe edin. Bu, hedefe özgü eksozomların yakalanan primer antikorlara özel olarak bağlanmasına izin verir.
Daha sonra, slayt yüzeyine altın nanopartikül konjuge ikincil antikorlardan oluşan bir süspansiyon yükleyin. Bu antikorlar önceden bağlanmış eksozomlara bağlanır ve bir tespit kompleksi oluşturur.
Son olarak, bir pipet kullanarak, bağlanmamış ikincil antikorları atın. Slaytları
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin