Viral Genomu Ölçmek için Nokta Blot Testi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Biyolojik Teknikler
0 görüntülenme • 6:57 dk. • July 8th, 2025
Nokta leke tahlilini kullanarak viral DNA'yı ölçmek için, izole edilmiş bir viral DNA süspansiyonu ile başlayın. Çift sarmallı DNA'yı sonraki hibridizasyon için tek sarmallara denatüre etmek için alkali bir çözelti ile muamele edin.
Nokta leke aparatını önceden ıslatılmış bir naylon membran ile monte edin. Denatüre viral DNA ve doğrusallaştırılmış standart plazmid DNA çözeltilerini kuyucuklara yükleyin. Etkili negatif yüklü viral tek sarmallı DNA transferini kolaylaştıran ve elektrostatik etkileşimler yoluyla pozitif yüklü membran yüzeyine bağlanarak nokta desenleri oluşturan uygun bir vakum uygulayın.
Çalıştırmanın ardından, zarı sodyum sitrat tamponu ile yıkayın ve tahlil hassasiyetini artırmaya yardımcı olun. Kurutma sonrası, zarı ultraviyole ışığa maruz bırakın ve lekelenmiş DNA'yı zara çapraz bağlayın.
Membrana hibridizasyon tamponunda ısıyla denatüre edilmiş, heterolog olmayan bir DNA fragmanı ve viral genoma özgü radyoaktif fosfor etiketli DNA prob süspansiyonu ekleyin. İnkübe edin, hibridizasyonun kolaylaştırılması.
DNA fragmanları, kalan zar bölgelerine bağlanarak bloke edici ajanlar olarak işlev görür ve spesifik olmayan prob bağlanmasını en aza indirir. Radyoaktif prob,
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin