Name: Aseptik Laboratuvar Teknikleri: Kaplama Yöntemleri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-11T12:00:00.000+00:00
Duration: 18 min
Description: Keşfedin mikrobiyolojide aseptik kaplama yöntemlerini: sürme, dökme ve yayma teknikleriyle bakteri ve faj izolasyonu, sayımı ve saf kültür elde etme. Mikrobiyal araştırmalar için temel laboratuvar becerileri.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Örnek kültürleri kurma ve rakamlar ile yardım için illüstrasyonlar hazırlamak ve Kris Reddi ve UCLA Bhairav ​​Şah için IROC Designs Cori Sanders özel teşekkürler. Bu proje için Harçlar HHMI (HHMI Hibe No 52006944) tarafından sağlandı.

<ol><li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarker%2C+K+%22At+the+Bench%3A+A+Laboratory+Navigator%22">At the Bench: A Laboratory Navigator</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, New York. (1998).</li>
<li>US Department of Health and Human Services (DHHS). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biosafety+in+Microbiological+And+Biomedical+Laboratories+%28BMBL%29%22">Biosafety in Microbiological And Biomedical Laboratories (BMBL)</a>. , 5th, U.S. Government Printing Office. Washington DC. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/index.htm">http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/index.htm</a> (2009).</li>
<li>Dulbecco, R., Vogt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+problems+of+animal+virology+as+studied+by+the+plaque+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harbor+Symp.+Quant.+Biol%22%5BJournal%5D)">Some problems of animal virology as studied by the plaque technique.</a> Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 18, 273-279 (1953).</li>
<li>Fields, B. N., Knipe, D. M., Chanock, R. M., Hirsch, M. S., Melnick, J. L., Monath, T. P., Roizman, B. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFields%2C+BN+%22Fields+Virology%22">Fields Virology</a>. 1, 2nd, Raven Press. New York, NY. (1991).</li>
<li>Gilbert, R. A., Ouwerkerk, D., Zhang, L. H., Klieve, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+Research+Center+for+Beef+Genetic+Technologies.+In+vitro+detection+and+primary+cultivation+of+bacteria+producing+materials+inhibitory+to+ruminal+methanogens%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microbiological+Methods%22%5BJournal%5D)">Cooperative Research Center for Beef Genetic Technologies. In vitro detection and primary cultivation of bacteria producing materials inhibitory to ruminal methanogens.</a> Journal of Microbiological Methods. 80, 217-218 (2010).</li>
<li>Jett, B. D., Hatter, K. L., Huycke, M. M., Gilmore, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+agar+plate+method+for+quantifying+viable+bacteria%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Simplified agar plate method for quantifying viable bacteria.</a> BioTechniques. 23, 648-650 (1997).</li>
<li>Karam, J. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKaram%2C+JD+%22Molecular+Biology+of+Bacteriophage+T4%22">Molecular Biology of Bacteriophage T4</a>. , ASM Press. Washington, DC. (1994).</li>
<li>Knipe, D. M., Howley, P. M., Griffin, D. E., Lamb, R. A., Martin, M. A., Roizman, B., Straus, S. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKnipe%2C+DM+%22Fundamental+Virology%22">Fundamental Virology</a>. , 4th, Lippincott, Williams, and Wilkins. Philadelphia, PA. (2001).</li>
<li>Lederberg, J., Lederberg, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replica+plating+and+indirect+selection+of+bacterial+mutants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Replica plating and indirect selection of bacterial mutants.</a> J. Bacteriol. 63, 399-406 (1952).</li>
<li>Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMiller%2C+JH+%22A+Short+Course+in+Bacterial+Genetics%3A+A+Laboratory+Manual+and+Handbook+for+Escherichia+coli+and+related+bacteria%22">A Short Course in Bacterial Genetics: A Laboratory Manual and Handbook for Escherichia coli and related bacteria</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. Plainview, NY. (1992).</li>
<li>Mills, K. V., Gareau, J. R., Garcia, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-cost+modification+to+the+Copacabana+method+for+spreading+transformation+mixtures%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Low-cost modification to the Copacabana method for spreading transformation mixtures.</a> BioTechniques. 39, 188(2005).</li>
<li>Jordan, T., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJordan%2C+T+%22RESEARCH%3A+National+Genomics+Research+Initiative+Phage+Resource+Laboratory+Manual%22">RESEARCH: National Genomics Research Initiative Phage Resource Laboratory Manual</a>. , Howard Hughes Medical Institute. (2008).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+Cloning+-+A+Laboratory+Manual%22">Molecular Cloning - A Laboratory Manual</a>. , 3rd, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, New York. (2001).</li>
<li>Sanders, E. R., Miller, J. H. I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSanders%2C+ER+%22Microbiologist%3A+A+Discovery-based+Course+in+Microbial+Ecology+and+Molecular+Evolution%22">Microbiologist: A Discovery-based Course in Microbial Ecology and Molecular Evolution</a>. , ASM Press. Washington, DC. (2010).</li>
<li>Slonczewski, J. L., Foster, J. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSlonczewski%2C+JL+%22Microbiology+-+An+Evolving+Science%22">Microbiology - An Evolving Science</a>. , 2nd, W.W. Norton & Co., Inc. New York, NY. (2011).</li>
<li>Teather, R. M., Wood, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Congo+Red-Polysaccharide+Interactions+in+Enumeration+and+Characterization+of+Cellulolytic+Bacteria+from+the+Bovine+Rumen%5BTitle%5D)+AND+%22Applied+and+Environmental+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Use of Congo Red-Polysaccharide Interactions in Enumeration and Characterization of Cellulolytic Bacteria from the Bovine Rumen.</a> Applied and Environmental Microbiology. 43, 777-780 (1982).</li>
<li>Wise, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWise%2C+K+%22Preparing+Spread+Plates+Protocols%22">Preparing Spread Plates Protocols</a>. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.microbelibrary.org/index.php/component/resource/laboratory-test/3085-preparing-spread-plates-protocols">http://www.microbelibrary.org/index.php/component/resource/laboratory-test/3085-preparing-spread-plates-protocols</a> (2006).</li>
<li>Worthington, M., Luo, R. Q., Pelo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Copacabana+method+for+spreading+E.+coli+and+yeast+colonies%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Copacabana method for spreading E. coli and yeast colonies.</a> BioTechniques. 30, 738-742 (2001).</li>
<li>American Type Culture Collection (ATCC). , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.atcc.org/">http://www.atcc.org/</a> (2012).</li>
<li>EPA Microbiology Home Page. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.epa.gov/nerlcwww/index.html">http://www.epa.gov/nerlcwww/index.html</a> (2012).</li>
<li>The GENE Project: Laboratory Methods and Materials. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.phys.ksu.edu/gene/g1.html">http://www.phys.ksu.edu/gene/g1.html</a> (2012).</li>
<li>Joint Genome Institute (JGI) Genome Sequencing Protocols: Library Plating Protocol. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.jgi.doe.gov/sequencing/protocols/prots_production.html">http://www.jgi.doe.gov/sequencing/protocols/prots_production.html</a> (2012).</li>
<li>Microbial Genetics (maintained by Stanley Maloy at UCSD). , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.sci.sdsu.edu/~smaloy/MicrobialGenetics">http://www.sci.sdsu.edu/~smaloy/MicrobialGenetics</a> (2012).</li>
<li>Organization of American States (OAS) Department of Sustainable Development (DSD). , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.oas.org/DSD/publications/Unit/oea59e/ch26.htm">http://www.oas.org/DSD/publications/Unit/oea59e/ch26.htm</a> (2012).</li>
<li>Public Health Agency of Canada: Material Safety Data Sheets (MSDS) for Infectious Substances. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.phac-aspc.gc.ca/msds-ftss">http://www.phac-aspc.gc.ca/msds-ftss</a> (2012).</li>
<li>United States Environmental Protection Agency (EPA) Office of Water. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://water.epa.gov">http://water.epa.gov</a> (2012).</li>
<li>American Society for Microbiology (ASM)'s Curriculum Recommendations Microbiology Majors Program. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.asm.org/asm/index.php/unknown/asm-s-curriculum-recommendations-microbiology-majors-program.html">http://www.asm.org/asm/index.php/unknown/asm-s-curriculum-recommendations-microbiology-majors-program.html</a> (2012).</li>
<li>Introductory Course in Microbiology. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.asm.org/asm/index.php/unknown/asm-s-curriculum-recommendations-introductory-course-in-microbiology.html">http://www.asm.org/asm/index.php/unknown/asm-s-curriculum-recommendations-introductory-course-in-microbiology.html</a> (2012).</li>
</ol>

Ben ifşa etmek başka bir şey var.

Mikroorganizmalar aseptik teknik hücreleri ve medya manipülasyonu boyunca muhafaza gerektirir her hangi kaplama yöntemleri, bir dizi içerir. Beş farklı prosedürler bu protokolü açıklanan edildi. Bu kaplama teknikleri rutin bakteri ve faj işlemek için kullanılıyor olsa da, onlar da (yaygın, maya (yani, Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans, Schizosaccharomyces pombe), yosun gibi moleküler genetik biliminde kullanılan ve protozoa memeli hücre kültürü ve ökaryotik mikroorganizmalar için uygulanabilir yani, Volvox, Chlamydomonas, Amoeba, Paramecium) ve nematod (yani, Caenorhabditis elegans). Ayrıca çalışma kapsamında deneysel hedef veya organizmaya bağlı olarak her bir kaplama metodu çok sayıda (ve hatta daha sofistike) varyasyonları vardır. Bu nedenle, yalnızca metodoloji, t, belirli bir deney ya da hedef mikroorganizma için en uygun yöntem seçmek için değil, aynı zamanda özel olarak değil önemlidirşapka deney sonuçları uygun araştırma sorusu veya sorunu çözmek. Bu protokolde ele kaplama tekniklerinin en güncel uygulamaların bazıları tarama ve ilaç keşfi deneyler için high-throughput sonuçlar teknolojik gelişmeler içerir. Örneğin, genom dizileme merkezleri E. olan, yayılma kaplama klon kütüphaneler için &quot;Copacabana Yöntemi&quot; kullanmak coli hücreleri, bir mikroorganizma genomu elde edilen DNA fragmanları içeren plazmidler ile transforme. Büyük plaka onlarca (bioassay tepsiler olarak da adlandırılır) aynı anda hazırlanır, çünkü otomatik bir plaka çalkalayıcısı tepsilerin bütün parti için cam boncuklar çalkalamak için kullanılır. Ayrıca, inkübasyon sonrasında, bu plakalar koloniler seçerken, robotik bir koloni toplayıcı 384-kuyucuklu mikroplaklar LB et suyu için aşı malzemesi olarak uygun kolonilerden gelen hücreler toplamak için kullanılır. Bu yüksek hacimli tarama testi, yayılma-p usul ilkeleri içinGeç yöntem uygulanır, ancak farklı teknoloji adımlar otomatik olarak gerçekleşir ve aynı anda ve kısa bir zaman dilimi içerisinde analiz edilecek numuneler çok sayıda izin şekilde ölçeklendirilir izin verir. Biyoteknoloji ve ilaç firmaları mikrobiyoloji ve moleküler genetik alanında en temel teknikleri için high-throughput teknolojisinin geliştirilmesinde önemli kaynaklar yatırım. Örneğin, Bir seferde 8 veya 12 örnek için ses transferleri gerçekleştirmek için çok kanallı Mikropipetler vardır. Hatta robotik iş istasyonları manevrası 96-kanallı pipet kafa vardır! Bu çabalar deneyler ile ilişkili mekanik işlemleri gerçekleştirmek için gerekli enstrümantasyon gelişebilir mühendisler ve bilgisayar programcıları ile metodolojik uzmanlığa sahip biyologlar eşleştirme, bilim adamlarının çok disiplinli takımlarda içerir. Ne olursa olsun araştırma uygulama, bu teknolojilerin gelişmekte şirketleri tarafından paylaşılan hedefi aynıdır - Laboratories&#39;in otomatikleştirmek içinry süreçleri, araçları, sistemleri ve araçları, bunları yoğun az emek ve daha verimli hale getirmek.

<table><tbody><tr><td colspan="4">1. Maya Tripton Agar (YTA)
<tablo kenarlığı="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Maya özü</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tripton</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			< td>Damıtılmış su</td>
			<td>1000,0 ml</td'ye kadar>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>pH 7.0</td>
		</tr>
	</tbody>
</masa>
121&deg'de otoklav; Sterilize etmek için 20 dakika C. 4 derece C.</p'de saklayın>
Dökme plakası prosedürü için tüpler hazırlıyorsanız, agarın ~ 55 ° C'ye kadar soğumasını bekleyin; C daha sonra 2.0 ml 50 mg / ml sikloheksimid ekleyin. Aseptik olarak 18 mm'lik tüp başına 18.0 ml erimiş agar dağıtın, ardından 4 ° C'de saklayın. Agar katılaşacak ve kullanımdan önce bir buharlı pişiricide veya mikrodalgada eritilmesi gerekecektir.</s>
2. Minimal Tuzlar Agar (MSA) +% 0.1 (a / h) karbon kaynağı
<tablo kenarlığı="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>NH4Cl</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH2HPO4&boğa; 2H<alt>2</alt>O</td>
			<td>2.14 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>1.09 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4&bull; 7H2O</td>
			<td>0.2 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Karbon kaynağı*</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>İz tuz çözeltisi**</td>
			< td>10.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			< td>Damıtılmış su</td>
			<td>1000,0 ml</td'ye kadar>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>pH 7.0</td>
		</tr>
	</tbody>
</masa>
121&deg'de otoklav; Sterilize etmek için 20 dakika C. 4 derece C.</p'de saklayın>
* Şekil 13'te sunulan deneyler için kullanılan karbon kaynakları arasında asetamid, laktoz ve glisin bulunur.
** İz tuzlar çözeltisi 0.1 N HCl'de aşağıdaki gibi hazırlanır. Sterilizasyondan önce tabana eklenir (121 ° C'de otoklav; 20 dakika C).</s>
<tablo kenarlığı="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>FeSO4&bull; 7H2O</td>
			< td>300.0 mg< / td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl2&bull; 4H<alt>2</alt>O</td>
			< td>180.0 mg< / td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Co (NO3)2&boğa; 6H<alt>2</alt>O</td>
			<td>130.0 mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO4.7H2O</td>
			< td>40.0 mg< / td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2MoO4</td>
			< td>20.0 mg< / td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO4&bull; 5H<alt>2</alt>O</td>
			< td>1.0 mg< / td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			< td>1000.0 mg< / td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl (0.1 N)</td>
			<td>1000,0 ml</td'ye kadar>
		</tr>
	</tbody>
</masa>
3. EHA yumuşak agar (%0,65 a/h)
<tablo kenarlığı="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>6.5 g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Tripton</td>
			<td>13.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>NaCl</td>
			<td>8.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Na Sitrat ve boğa; 2H<alt>2</alt>O</td>
			<td>2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Glikoz</td>
			<td>3.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			< td>Damıtılmış su</td>
			<td>1000,0 ml</td'ye kadar>
		</tr>
	</tbody>
</masa>
121&deg'de otoklav; Sterilize etmek için 20 dakika C. 4 derece C.</p'de saklayın>
4. EHA sert agar (%1,2 a/h)
<tablo kenarlığı="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>12.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tripton</td>
			<td>13.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td> 8.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na Sitrat ve boğa; 2H<alt>2</alt>O</td>
			<td> 2.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glikoz</td>
			<TD> 3.0 g</TD>
		</tr>
		<tr>
			< td>Damıtılmış su</td>
			<td>1000,0 ml</td'ye kadar>
		</tr>
	</tbody>
</masa>
121&deg'de otoklav; Sterilize etmek için 20 dakika C. 4 derece C.</p'de saklayın>
5. 1X Middlebrook Top Agar (MBTA yumuşak agar, %0,5 a/h)
<tablo kenarlığı="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100 mM CaCl2 stok*</td>
			< td> 1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H9 sıvı ortam: Temiz **</td>
			< td>50 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2XTA ***</td>
			< td>50 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</masa>
50 ml 2XTA'yı eritin ve ~ 55 ° C'ye soğumaya bırakın. Aseptik tekniği kullanarak, erimiş agar'a CaCl2 ve 7H9 et suyunu ekleyin. 13 mm'lik tüp başına 4,5 ml karışımı aseptik olarak dağıtın ve 55 ° C'de saklayın; C kuluçka makinesi &#8804; 7 gün. MBTA'yı oda sıcaklığına veya 4 ° C'ye soğutma; C, CaCl2'un çözeltiden çökelmesine neden olur.
* 100 mM CaCl2. CaCl2 çözeltiden çökelmesini önlemek için stok oda sıcaklığında saklanmalıdır.
** 7H9 sıvı ortam: Düzgün
<tablo kenarlığı="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>7H9 et suyu tabanı</td>
			<td>4.7 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<TD>%40 gliserol stoğu</TD>
			< td>5 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			< td>Damıtılmış su</td>
			<td>900,0 ml</td'ye kadar>
		</tr>
	</tbody>
</masa>
Tabanı suyla karıştırın ve karıştırırken gliserolü ekleyin. 121 ° C'de otoklav; Sterilize etmek için 20 dakika C. 4 derece C.</p'de saklayın>
*** 2X Middlebrook Top Agar (2XTA, %1.0 w/v)
<tablo kenarlığı="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>7H9 et suyu tabanı</td>
			<td>4.7 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>1.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			< td>Damıtılmış su</td>
			<td>1000,0 ml </td'ye kadar>
		</tr>
	</tbody>
</masa>
121&deg'de otoklav; Sterilize etmek için 20 dakika C. 50 ml'lik alikotları 100 ml'lik şişelere dağıtın ve 4 ° C'de saklayın. 
6. Middlebrook 7H10 Agar Plakaları (MHA sert agar, %1,9 w/h)
<tablo kenarlığı="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>7H10 agar tabanı</td>
			<td>19.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<TD>%40 gliserol stoğu</TD>
			< td>12.5 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			< td>Damıtılmış su</td>
			< td>887.5 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</masa>
Agar bazını suyla karıştırın ve karıştırırken gliserolü ekleyin. Çözeltiyi kaynama noktasına kadar ısıtın, ardından baz tozu tamamen çözmek için bir dakika karıştırın. 121 ° C'de otoklav; Sterilize etmek için 20 dakika C. Agarın ~ 55 ° C'ye soğumasına izin verin; C daha sonra aseptik olarak aşağıdaki reaktifleri ekleyin: 
<tablo kenarlığı="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AD takviyesi (önceden 37 ° C'ye ısıtılmış; C)*</td>
			< td>100 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mg / ml Karbenisilin **< / td>
			< td>1.0 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			< td>10 mg / ml Sikloheksimid ** < / td>
			< td>1.0 ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</masa>
* AD eki</s>
<tablo kenarlığı="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>NaCl > </td>
			<td>17 g > </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albümin (Kesir V)> </td>
			< >100 g> </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dekstroz (D-Glikoz)> </td>
			<td>40 g> </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Damıtılmış su> </td>
			<td>2000,0 ml'ye kadar> </td>
		</tr>
	</tbody>
</masa>
Bu çözeltiyi filtreyle sterilize edin; otoklav yapmayın. 4 derece C.</p'de saklayın>
** Bu solüsyonları filtreyle sterilize edin ve 4 derecede saklayın; &le için C; 60 gün.</s>
7. LB agar (a/h% 1,5) + X-Gal (60 &mu; g/ml)
<tablo kenarlığı="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tripton</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maya özü</td>
			<td>5.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>10.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>15.0 g</td>
		</tr>
		<tr>
			< td>Damıtılmış su</td>
			<td>1000,0 ml</td'ye kadar>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>pH 7.5 25 ° C'de; C</td>
		</tr>
	</tbody>
</masa>
121&deg'de otoklav; Sterilize etmek için 20 dakika C. Agarın ~ 55 ° C'ye soğumasına izin verin; C daha sonra aseptik olarak 3.0 ml 20 mg / ml X-Gal çözeltisi ekleyin. 400 mg X-Gal'i 20 ml dimetilformamid (DMF) içinde çözerek X-gal stoğunu taze hazırlayın. </s>
Belirli reaktifler tablosu:
<tablo kenarlığı="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reaktifin adı</td>
			<td>Company</td>
			<td>Katalog numarası</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maya özü</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>212750</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tripton</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>211705</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Becton Dickenson</td>
			<td>214030</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH4Cl</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>123340010</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH2HPO4&boğa; 2H<alt>2</alt>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>30435</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			< >BP 303-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4&bull; 7H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230391 </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Asetamid</td>
			<td>Sigma-Aldrich </td>
			<td>A-0500</td>
		</tr>
		<tr>
			< td > Laktoz< / td>
			<td>Fisher Bilimsel </td>
			<td>L6-500 </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glisin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G-7126</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FeSO4&bull; 7H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F8048</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MnCl2&bull; 4H<alt>2</alt>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M-3634</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Co (NO3)2&boğa; 6H<alt>2</alt>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230375</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZnSO4.7H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z4750</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2MoO4</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>213621000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CuSO4&bull; 5H<alt>2</alt>O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>209198 </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1016 </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A144-212</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sikloheksimid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>038K1561</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Karbenisilin</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>46-100-RG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S271-1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na Sitrat ve boğa; 2H<alt>2</alt>O</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S279-500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glikoz (Dekstroz)</td>
			<td>BD</td>
			<td>215530</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H9 et suyu tabanı</td>
			<td>BD</td>
			<td>271310</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7H10 agar tabanı</td>
			<td>BD</td>
			<td>262710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gliserol</td>
			<td>Shelton</td>
			<td>IB15760</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Albümin (Fraksiyon V)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>S71907</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-Gal (5-bromo-4-kloro-3-indolil-&#946;-D-galaktopiranosid) </td>
			<td>Teknova</td>
			<td>X1205</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimetilformamid (DMF)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4551</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Etanol</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>CDA19</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Klorlu Ağartıcı</td>
			<td>Kloroks</td>
			<td>02490/06644884</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CiDecon (dezenfektan)</td>
			<td>Decon Laboratuvarları A.Ş.</td>
			<td>8504</td>
		</tr>
	</tbody>
</masa>
Belirli ekipman tablosu:
<tablo kenarlığı="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ekipmanın adı</td>
			<td>Company</td>
			<td>Katalog numarası</td>
			<td>Experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal halkalar</td>
			<td>Amerikan Eğitim Ürünleri</td>
			<td>S17352</td>
			<td>Çizgi kaplama</td>
		</tr>
		<tr>
			< td > Tek kullanımlık plastik halkalar < / td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-363-602</td>
			<td>Çizgi kaplama</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tahta çubuklar</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>23-400-104</td>
			<td>Çizgi kaplama</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Düz Kürdan</td>
			<td>Amerikan Eğitim Ürünleri</td>
			<td>S67859</td>
			<td>Çizgi kaplama</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masaları çevirin</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08-758Q</td>
			<td>Yayılmış kaplama</td>
		</tr>
		<tr>
			< td > Cam çubuklar< / td>
			<td>Bellco Cam</td>
			<td>NC9004380</td>
			<td>Yayılmış kaplama</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4 mm cam boncuklar</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>11-312B</td>
			<td>Yayılmış kaplama</td>
		</tr>
		<tr>
			< td> Kadifemen kumaş</td>
			<td>Bel-Art Ürünleri</td>
			<td>09-718-2</td>
			<td>Replika kaplama</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silindirik blok</td>
			<td>Bel-Art Ürünleri</td>
			<td>09-718-1</td>
			<td>Replika kaplama</td>
		</tr>
	</tbody>
</tablo></td></tr></tbody></table>

aseptik laboratuvar teknikleri: kaplama yöntemleri

Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods

Mikroorganizmalar laboratuarda olası kirlenme kaynağı oluşturmak her yerde bulunan bir cansız yüzeyler üzerinde mevcut bulunmaktadır. Deneysel başarı çalışma yüzeyleri ve ekipmanları sterilize yanı sıra steril olmayan yüzeylere sahip steril aletler ve çözüm temasını önlemek için bir bilim yatmaktadır. Burada rutin, izole yaymak veya bu tür bakteri ve faj gibi mikroorganizmaların numaralandırmak için laboratuarda kullanılan çeşitli kaplama yöntemleri için adımları sunuyoruz. Tüm beş yöntemleri aseptik teknik veya deneysel malzemelerin steril muhafaza işlemleri dahil. Açıklanan prosedürler tek koloniler izole etmek (1) çizgi kaplama bakteri kültürleri, (2) dökün-kaplama ve (3) yayılma kaplama canlı bakteri kolonilerinin numaralandırmak için, faj ve enumerate plaklar izole etmek (4) yumuşak agar bindirmeleri ve include ( 5) kopya kaplama tabaktan özdeş bir mekansal desen başka hücrelere aktarmak için. Bu prosedürler, t yapılabilmektedirO laboratuar tezgah, onlar mikroorganizmaların patojenik olmayan suşlar (Biyogüvenlik Seviye 1, BSL-1) dahil sağladı. BSL-2 organizmalar ile çalışan, daha sonra bu manipülasyonlar bir biyogüvenlik kabini yer almalıdır. Biohazard sınıflandırma yanı sıra, söz konusu mikroorganizma için gerekli güvenlik önlemleri ve muhafaza tesisleri belirlemek Bulaşıcı maddeler için en güncel Mikrobiyolojik ve Biyomedikal Laboratuvarlarda Biyogüvenlik edition (BMBL) yanı sıra Malzeme Güvenlik Bilgi Formları (MSDS) danışın. Bakteriyel suşları ve faj stokları gibi Amerikan Tip Kültür Koleksiyonundan (ATCC) gibi belirli kuruluşlar tarafından yapılmaktadır araştırma araştırmacılar, şirketler ve koleksiyonları elde edilebilir. Bu çeşitli kaplama yöntemleri öğrenme zaman non-patojen suşları kullanılması tavsiye edilir. Bu protokolü açıklanan prosedürleri takip ederek, öğrenciler olmalıdır: <ul><li> Contaminati olmadan kaplama işlemleri gerçekleştirinng medya. </li><li> Streak kaplama yöntemi ile tek bakteri kolonisi izole edin. </li><li> Bakteri konsantrasyonunu belirlemek için dökün-kaplama ve yayılmasını kaplama yöntemlerini kullanın. </li><li> Faj çalışırken yumuşak agar bindirmeleri gerçekleştirin. </li><li> Aynı tabaktan kopya kaplama prosedürü kullanarak başka bakteri hücrelerinin aktarın. </li><li> Deneysel bir görev verildiğinde, uygun kaplama yöntemi seçin. </li></ul>

Kültür mikroorganizmalar için kullanılan medya ve reaktifler ile çalışırken, aseptik tekniği kontaminasyonu minimize edilmiştir sağlamak için uygulanan olmalıdır. Kaplama yöntemleri çeşitli rutin bir şekilde, izole yaymak veya numaralandırma bakteri ve faj, deney malzemelerinin steriliteyi korumaya işlemleri dahil, her biri için kullanılır.

Aseptik Laboratuvar Teknikleri: Kaplama Yöntemleri

Microorganisms are present on all inanimate surfaces creating ubiquitous sources of possible contamination in the laboratory. Experimental success relies ...

[Anlatıcı] Bu protokol; bakteri ve faj gibi mikroorganizmaları izole etmek, çoğaltmak veya saymak için kullanılan ekim yöntemlerinde aseptik tekniği kapsamaktadır. Prosedürler arasında tekil kolonileri izole etmek için bakteri kültürlerinin çizgi ekimi, bakteri konsantrasyonunu belirlemek için dökme plak yöntemi ve canlı bakteri kolonilerini saymak için yayma plak yöntemi yer almaktadır. Fajları izole etmek ve plakları saymak için yumuşak agar kaplamaları kullanılırken, replika ekim ile hücreler bir plakdan diğerine aynı uzamsal düzende aktarılır. Nihayetinde, mikroorganizmaları kültürleme için bu tekniklerin pratik uygulamaları, çevredeki bakterilerin tanımlanmasından moleküler genetikteki teknolojik gelişmelere ve yüksek kapasiteli biyolojik analizlere kadar geniş bir yelpazeye yayılmaktadır.- Genel olarak, bu ekim yöntemlerinde yeni olan kişiler, manipülasyonların steril olmayan yüzeylerle temastan kaçınan dikkatli ve koordineli hareketler gerektirmesi nedeniyle zorlanabilirler. Bu rutin prosedürlerin öğrenilmesi eğitim ve pratik gerektirir. Prosedürleri laboratuvar koordinatörüm Dr. Kris Reddi uygulamalı olarak gösterecektir.- [Anlatıcı] Mikroorganizmalarla çalışmaya, biyotehlike sınıflandırması, atık dekontaminasyonu ve bertarafı dahil olmak üzere laboratuvar kurallarını ve güvenlik önlemlerini bilerek başlayın. Ekime yönelik tüm aletlerin, solüsyonların ve besiyerlerinin steril olduğunu onaylayın. Ayrıca temiz bir çalışma alanı oluşturun. Burayı dezenfektan ile temizleyin. Gaz hattına bağlı bir tüp ile bir Bunsen beki kurun, gerekli malzemeleri uygun şekilde etiketlenmiş olarak düzenleyin. Ardından elleri antiseptik sabun ve ılık suyla iyice yıkayın. Önce elleri ılık, akan suyla ıslatın, ardından sabunu uygulayın ve iyice yayın. Başparmaklar, parmak arkaları, el sırtları ve tırnak altları dahil tüm yüzeylerde sürtünme oluşturarak elleri kuvvetlice ovun. Ardından kalıntı sabunu gidermek için iyice durulayın ve bir tutucudan alınan kağıt havlularla kurulayın. Son olarak, temiz bir kağıt havlu ile musluğu kapatın. Çizgi ekim prosedürü, karışık popülasyonlardan bakteri saf kültürlerini veya kolonilerini basit mekanik ayırma yoluyla izole etmek için tasarlanmıştır. Bir agar plakayı 4 °C'lik soğuk kutudan çıkarın ve oda sıcaklığına kadar ön ısıtmaya bırakın. Plakayı çizmek için mevcut aletler arasından bir araç seçin. Plakanın kuru olduğundan ve kapakta yoğuşma olmadığından emin olun. Bir agar plakanın alt kısmını kenar boyunca etiketleyin. Yetkinleştiğinizde, birden fazla örnek için tek bir plaka kullanın. Ardından, metal özi kararını yakmak için bir Bunsen beki ateşleyin. Teli, Bunsen beki alevinin en sıcak kısmı olan mavi koninin ucunda tutarak, metal öze ile arasında üç ila dört inç mesafe bırakarak başlayın. Metal kızardığında, alevin öze yaklaştığı şekilde teli hareket ettirin. Özi soğutmak için, cızırtı sesi oluşturacak şekilde agar besiyerinin kenarına dokunun. Öze ile inokülumu almaya devam edin. Plakanın alt yarısını kaldırın. Plakanın birinci kuadrantında, özi kenardan merkeze doğru ileri geri hareket ettirin. Ters çevrilmiş plakayı tekrar kapağının üzerine koyun. Metal özi tekrar yakın. Petri kabını 90 derece döndürün. Özi, ileri geri desenini kullanarak son çizginin sonuna yakın bir yere dokundurun, birinci kuadranttaki çizgilerin son yarısının üzerinden geçin, ardından boş olan ikinci kuadranta geçin. İkinci kuadrant dolduğunda plakayı yere koyun. Birinci kuadrantla temastan kaçınarak üçüncü ve dördüncü kuadrantlar için ekim prosedürünü tekrarlayın. Steril, düz bir kürdanla ekim yapmak için, kürdanın ince ucunu başparmak ve yüzük parmağı arasında besiyerine 10 ila 20 derecelik bir açıyla nazikçe tutun, kuadrantları çizmek için geniş ucu kullanın. Kuadrantlar arasında plakayı tekrar kapağının üzerine ters çevirin ve kürdanı uygun şekilde bertaraf edin. Ekilen plakaları ters şekilde inkübe edin. Dökme plaka prosedürü, tek bir plakanın agar yüzeyindeki ve içindeki toplam koloni oluşturan birim sayısını belirler. 10 dakikalık bir zamanlayıcı ayarlayın, ardından 55 °C'lik su banyosundaki 18 mL eritilmiş agar besiyerini 48 °C'lik bir ısıtma bloğuna aktarın ve 10 dakika boyunca dengeleyin. Steril bir petri kabının altını etiketleyin. Varsa, dilüsyon faktörünü ekleyin. Şimdi, petri kabının ortasına bir mL örnek dağıtın. Kapağı kapatın. Eritilmiş agar tüpünün kapağını çıkarın ve açık tüpün ağzını alevden geçirin. Agarı dikkatlice petri kabına dökün. Kapağı kapatın, ardından plakayı nazikçe dairesel hareketlerle sallayarak örneği agar ile karıştırın. Agarın katılaşması için 30 dakika bekleyin. Agar katılaştıktan sonra, plakayı ters çevirip sıcak bir odaya yerleştirin. Yayma plaka yöntemi, küçük bir örnek hacminde bulunan mikroorganizmaları ayırmayı ve ortaya çıkan kolonileri agar yüzeyine eşit şekilde dağıtmayı amaçlar. Bir plakayı oda sıcaklığında dengeleyin ve uygun şekilde etiketleyin. Plakayı döner tablaya yerleştirin. Agarın merkezine 0.1 mL örnek pipetleyin ve kapağı kapatın. Pipet ucunu bir atık konteynerine atın. Metal çubuğu, yayıcının tüm alt kısmını ve sapın ilk bir inçlik bölümünü kaplayacak şekilde %70'lik etanol içeren bir behere daldırın ve ardından süzün. Fazla etanolü bir Bunsen beki alevinden geçirerek yakın. Ardından, agar plakanın kapağını açın ve yayıcıyı, kenara yakın agar kısmına dokundurarak soğutun. Döner tabloyu yavaşça döndürün. Yayıcıyı agar yüzeyinde nazikçe tutarak, döner tabla dönerken örneği ileri geri hareketlerle tüm plaka üzerine kademeli ve eşit şekilde yayın. Kapağı kapatın ve örneğin tamamen emilmesi için en az beş dakika bekleyin. Ardından, ters çevrilmiş plakayı inkübe edin. Önce, agar plakayı uygun şekilde etiketleyin. Agar plakanın kapağını açın. Ardından önceden sterilize edilmiş cam boncuklar kabını açın ve ağzını yakın. Agar plaka üzerine dikkatlice 10 ila 12 adet steril cam boncuk yerleştirin. Plakanın kapağını kapatın ve kapağı geri takmadan önce cam boncuk kabının ağzını yakın. Şimdi, örneği agarın merkezine pipetleyin. Yatay bir hareketle, boncukları agar yüzeyinde yedi kez nazikçe sallayın. Doğru yapıldığında, prosedür marakas sallama sesine benzer. Plakayı 60 derece döndürün ve tekrar yatay olarak yedi kez sallayın. Tekrar plakayı 60 derece döndürün ve sallama işlemini tekrarlayın. Örneğin emildiğini doğrulayın. Ardından, kontamine olmuş boncukları %10'luk klorlu çamaşır suyu içeren işaretlenmiş bir toplama beherine boşaltın. Ters çevrilmiş plakayı inkübe edin. Plak assay, genellikle bakteriyofajları tespit etmek ve miktarını belirlemek için kullanılır. İndikatör bakterileri eksponansiyel faza kadar kültüre edin ve buz üzerinde saklayın. Ardından, iki steril mikrosantrifüj tüpünü faj ve kontrol olarak etiketleyin ve her birine sırasıyla 50 µL faj örneği veya tampon ekleyin. Sonra, flasktaki bakteri kültürünü çalkalayın, ardından bir miktar bakteriyi steril bir tüpe aktarın ve indikatör bakterileri nazikçe vorteksleyin, sonra her absorbsiyon tüpüne 500 µL bakteri ekleyin. Tüpleri nazikçe tıklatarak karıştırın. Faj örneklerini asla vortekslemeyin veya kuvvetlice pipetlemeyin. Faj-bakteri karışımını, indikatör suşu için uygun bir sıcaklıkta 20 dakika inkübe edin. Bu sırada, iki yumuşak agar tüpünü 55 °C'lik su banyosundan 48 °C'lik ısıtma bloğuna aktarın. 10 dakika boyunca dengeleyin. Oda sıcaklığında önceden dengelenmiş, yoğuşmasız iki besiyerli sert agar plakayı etiketleyin. Yumuşak agar tüpünü ısıtma bloğundan çıkarın ve içeriğin dokunulmayacak kadar sıcak olmadığını kontrol edin. Ardından, faj absorbsiyon tüpündeki karışımı aseptik olarak yumuşak agar tüpüne aktarın. Sonra, içeriği karıştırmak için avuç içleri arasında hızla döndürün. Tüp bir elinizdeyken, diğer elinizle sert agar plakanın kapağını açın. Tüpün tüm içeriğini hemen sert agar plakanın yüzeyine dökün. Plakayı hızla ve nazikçe sallayın. Kapağı kapatın ve yumuşak agar katılaşana kadar plakayı 30 dakika boyunca düz bir zemine yerleştirin. Ardından, kontrol karışımını yumuşak agar tüpüne aktararak, karıştırarak, içeriği sert agar plakaya dökerek, sallayarak ve yumuşak agarın 30 dakika katılaşmasını sağlayarak prosedürü kontrol absorbsiyon tüpü için tekrarlayın. Plakaların plak oluşumu açısından incelemesi yapın. Heterojen bir karışımdan bir plağı izole etmek için, merkezini steril bir kürdanla dikkatlice delin ve inokülumu 100 µL faj tamponu içeren steril bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın. Gerektiğinde seri dilüsyonlar yaparak plak assay'ini üç ila altı kez tekrarlayarak bu lizatı saflaştırmaya devam edin. Replika plakalama, hücre büyümesinin bir primer plaka ile sekonder plakalar arasında karşılaştırılmasına izin vererek seçilebilir bir fenotipten yararlanır. Plakanın altına bir ızgara çizin, primer plakayı etiketleyin ve ortaya çıkan kareleri numaralandırın. Şimdi, aseptik teknik kullanarak beherden önceden sterilize edilmiş bir kürdan çıkarın, her karenin merkezine bir hücre örneğiyle dokunun ve kürdanı uygun bir atık kutusuna atın. Primer plakayı inkübe edin. Primer plakayı ve tüm sekonder plakaları üst üste dizin. Plakaların alt yarısının yan tarafına bir yönlendirme işareti koyun. Şimdi, steril bir kadife kumaşı ambalajından çıkarın ve silindirik blok üzerine yerleştirin. Ardından, tutucuyu, üzerindeki işaretleri bloktaki işaretlerle hizalayacak şekilde yerleştirin. Blok ve tutucu üzerindeki yönlendirme işaretini not edin. Ardından, primer plakanın kapağını çıkarın. Plaka ve blok üzerindeki yönlendirme işaretlerini hizalayın. Plakayı, agar yüzeyi kadife kumaşa temas edecek şekilde indirin. Parmak uçlarınıyla primer plakanın arkasına hafifçe ancak eşit şekilde bastırın ve ardından plakayı dikkatlice bloktan kaldırın. Hücrelerin izinin kadife üzerinde görülebildiğini onaylayın. Plakanın kapağını tekrar kapatın. Şimdi, kadife kumaş üzerindeki protokolü her bir sekonder plaka ile sırayla tekrarlayın. Primer plakadan gelen hücrelerin kadife izini, en az uygundan en uygun substrata doğru sıralanmış sekemize kadar sekiz sekonder plakaya inoküle etmek için kullanın. Son olarak, pozitif kontrol olarak, serideki son plaka için, test edilen tüm suşların büyümesi gereken agar besiyerini kullanın. Ters çevrilmiş plakaları birlikte bantlayın ve inkübe edin. Sekonder plakaları büyüme açısından inceleyin. Bunsen beki kapatın ve ardından tüm malzemeleri kaldırın. Kontamine laboratuvar ekipmanlarını, cam eşyaları ve tehlikeli atıkları uygun bertaraf kabına yerleştirin. Çalışma alanını dezenfektan ile temizleyin. Son olarak, elleri antiseptik sabun ve ılık suyla iyice yıkayın. Serratia Marcescens, prodigiosin adı verilen kırmızımsı bir pigment üreten, gram negatif, çubuk şeklinde bir proteobakteridir. Genellikle banyolarda ve duş perdelerinde büyürken bulunur. Bu örnekte, çizgi ekim tekniği dördüncü kuadrantta tekil koloniler oluşturur. Bir halka içme çeşmesinden toplanan su örneğinde bulunan bakterilerin bu analizi, Dökme Plaka tekniğini kullanır. Kolonilerin görünümündeki farka dikkat edin. Yüzey kolonileri büyük ve dairesel şekilliyken, bazı yüzey kolonileri çok küçük ve düzensiz şekillidir. Yayma Plaka tekniği, zenginleştirme, seçme ve tarama deneylerinin önemli bir bileşenidir. Örneğin, copacabana yöntemi, rekombinant DNA teknolojisindeki klasik mavi-beyaz taramada ayırt edici bir araçtır. Faj T4, konakçısı olan Escherichia coli'yi enfekte ederek lizis yapan ve yavru fajları salan virulent, çift sarmallı bir DNA fajıdır. EHA agar üzerindeki bu plak assay, yaklaşık bir milimetre çapındaki berraklaşma bölgelerinde fajları gösterir. Enfekte eden faj partikülleri yokluğunda, bakteriyel büyüme, belirgin kolonilerin görünmediği, yumuşak agarda bulanık bir hücre süspansiyonu ile sonuçlanır. Yumuşak agar kaplama tekniğinde, plak morfolojileri farklılık gösterir. Örneğin, burada aynı mycobacterium konak suşu, microbacteria faj imha edicilerinin varlığında mycobacteria faj MSSS'ye kıyasla farklı plak morfolojileri üretir. Replika plakalama yöntemi, çok sayıda mikroorganizmanın eş zamanlı taranmasında güçlüdür. Bu durumda, dört pseudomonas suşu, üç farklı karbon kaynağı üzerinde büyüme açısından çift olarak test edilmiştir: Asetamid, laktoz ve glisin. Burada primer plaka, belirtildiği gibi dört suş ile inoküle edilmiş tam bir YTA besiyeridir. Suşlar, tek bir karbon kaynağı (asetamid, laktoz veya glisin) ile takviye edilmiş minimal MSA besiyeri replika plakalarında değişken büyüme modelleri göstermektedir. Tüm suşlar son pozitif kontrol plakasında büyümekte olup, bu durum hücrelerin bu serideki tüm sekonder plakalara aktarıldığını onaylamaktadır. Bu replika plaka sonuçlarının tablolaştırılması, farklı vahşi tip suşların karakteristik büyüme gereksinimleri için eş zamanlı taramasını detaylandırmaktadır.- Bu videoyu izledikten sonra, besiyerlerini veya kültürleri kontamine etmeden ekim prosedürlerini nasıl gerçekleştireceğiniz ve laboratuvardaki herhangi bir deneysel görev için uygun ekim yöntemini nasıl kullanacağınız konusunda iyi bir anlayış kazanmış olmalısınız. Bu tekniklerde yetkinleşmek pratik gerektirir. Ancak, uygun eğitimle, bu videoda açıklanan ekim prosedürleri laboratuvar tezgahında çalışırken sizin için doğal bir alışkanlık haline gelecektir.

aseptic-laboratory-techniques-plating-methods

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bir laboratuarda çalışırken, bulaşma kaynakları en aza indirmek için şarttır. Aseptik teknik Steril olmayan yüzeyler ile temas kaçınarak kültürler ve reaktifler transferi izin prosedürleri ifade eder. Serolojik pipet ile micropipettors Deneylerde kullanılan çözeltilerin sterilite bozmadan hassas cilt ölçmek için kullanılır.

Aseptik Laboratuvar Teknikleri: Serolojik Pipetler ve Micropipettors ile Cilt Transferler

Bu el yazması, klinik ve çevresel V arasındaki hızlı ve güvenilir diferansiyasyon için topluca kullanılan bir dizi biyokimyasal tahlilin yanı sıra, uygun Vibrio kolera bakımı tekniklerini tanımlamaktadır. Bir laboratuar ortamında kolera biyotipleri.

Biyotiplerin Bakımında ve Türevinde Kullanılan Laboratuvar Teknikleri<emVibrio cholerae</em&gt; Klinik ve Çevresel İzolatlar

Bu iletişim kuralı safra tuzu kaynaklı biyofilm oluşumu enterik patojenler bağlılık, hücre dışı polimer madde matris oluşumu değerlendirmek tarafından bakteriyel biyofilmler dinamik doğası yakalamak için çok yönlü bir yaklaşım kullanarak analiz okuyucu sağlar, ve dağılım.

Enterik patojenler safra tuzu kaynaklı biyofilm oluşumu: kimlik ve miktar teknikleri

Antimikrobiyal sinerji test birlikte kullanılan iki veya daha fazla antibiyotik etkisini değerlendirmek için kullanılır ve genellikle iki yöntemden birini kullanarak gerçekleştirilir: Dama Tahtası dizi ya da zaman-kill tahlil. Burada, otomatik bir, mürekkep püskürtmeli yazıcı destekli Dama Tahtası dizi sinerji teknik ve bir klasik saat-kill sinerji çalışma mevcut.

Antimikrobiyal sinerji mürekkep püskürtmeli yazıcı yoluyla tarafından test otomatik Dama Tahtası dizi ve el ile zaman-kill yöntem

Doğa ve Laboratuvar Mikrobiyal Toplulukları - Röportaj

Immün hücre fonksiyonu ve proliferasyonu izlemek için hücre izleme boyalar başarıyla kullanımı pek çok kritik adımlar içerir. Biz yöntemleri açıklanmaktadır: 1) membran boyalarla parlak, homojen, tekrarlanabilir etiket-ing almak; 2) florokromlar ve veri toplama şartlarının belirlenmesi ve 3) boya seyreltme esas hücre çoğalması ölçmek için bir model seçerek.

Cep Takip Boyalar kullanarak Hücre Bölünmesi İzleme için optimize Boyama ve Çoğalma Modelleme Yöntemleri

Pek çok farklı yöntem akış sitometrik (FCM) ile hücre dışı veziküller (EVS) ölçülmesi için vardır. Kullanmak için en uygun yöntemi belirlerken çeşitli yönleri dikkate alınmalıdır. Ölçüm EVs için iki protokoller bireysel algılama veya boncuk esaslı yaklaşım kullanılarak sunulmuştur.

Akım Sitometri Kullanımı Ekstrasellüler Veziküller Analizi Teknikleri

Bir tüp kurdunun, Hydroides elegans'ın kalsifikasyonunu gözlemlemenin yanı sıra ilk kalsifiye materyalin yerini belirlemede ve karakterize etmede yararlı olan çeşitli mikroskopi yöntemlerinin kullanımını gösteriyoruz. Canlı mikroskopi ve elektron mikroskobu, biyomineralizasyonun incelenmesinde önemli olan fonksiyonel ve materyal bilgileri sağlamak için birlikte kullanılır.

Bir Deniz Tubeworm Canlı Optik ve Elektron Mikroskobu Teknikleri Kullanılarak kalsifikasyon Olaylar Karakterizasyonu

Hücresel yaşlanma, hücre döngüsü tutuklama tersinmez durum, çeşitli hücresel stresler tarafından indüklenebilir. Burada, yaşlanmanın işaretlerini değerlendirmek için hücre yaşlanmasının ve yöntemleri ikna etmek protokolleri açıklar.

Teknikler İndüklemek ve Ölçmek Hücresel Yaşlılık etmek

Burada, beyaz sinek Bemisia tabaci'den endosimiviyonları diseksiyon ve filtrasyon yoluyla izole etmek için bir protokol sunuyoruz. Büyütmeden sonra DNA örnekleri, endosimbiyonlar ile beyaz sinek arasındaki karşılıklı etkileşimin izlenmesi ve izlenmesi için uygundur.

Beyaz sinekten Endosimbonların Çıkarılması İçin Yöntemler<em&gt; Bemisia tabaci</em

Keşfedin mikrobiyolojide aseptik kaplama yöntemlerini: sürme, dökme ve yayma teknikleriyle bakteri ve faj izolasyonu, sayımı ve saf kültür elde etme. Mikrobiyal araştırmalar için temel laboratuvar becerileri.

Aseptik Laboratuvar Teknikleri: Kaplama Yöntemleri

Daha fazla video keşfet