Konakçı sivrisinek türevli sporozoitler kullanılarak deneysel serebral sıtmanın bir fare modelinin oluşturulması

Sıtmaya neden olan bir parazit olan Plasmodium berghei ile enfekte olmuş dişi sivrisineklerden tükürük bezleri içeren bir tüple başlayın.

Bezleri mekanik olarak bozar, sporozoitleri serbest bırakır - parazitin enfektif bir şekli ortama.

Bez fraksiyonlarını ve kalıntıları peletleyin. Sporozoit içeren süpernatanı toplayın ve bunları kısıtlanmış bir farenin kuyruk damarına enjekte edin.

Enjekte edilen sporozoitler kan dolaşımından geçer ve karaciğere ulaşır, burada hepatositleri enfekte eder ve çoğalır, parazitin istilacı bir formu olan merozoitleri oluşturur.

Zamanla, hepatositler merozoitleri kan dolaşımına salarak kırmızı kan hücrelerini veya RBC'leri istila eder.

RBC'lerin içinde, merozoitler aseksüel olarak çoğalır, olgun forma dönüşür ve RBC'lerin yüzeyinde parazit türevi antijenleri eksprese eder.

Bu antijenler, beyin kan damarlarındakiler de dahil olmak üzere endotel reseptörlerine bağlanır ve enfekte olmuş ve enfekte olmayan RBC'lerin sekestrasyonuna yol açar.

Bu anormal RBC birikimi kan-beyin bariyerini bozarak beynin parankiminde sıvı birikmesine ve farede serebral sıtma gelişmesine neden olur.

Kan yemeğinden 17 ila 22 gün sonra dişi sivrisinekleri kafeslerinden toplayarak başlayın. Bir damla soğuk RPMI ortamı ile kaplı bir cam slayt üzerine 3 ila 4 sivrisinek yerleştirmek için forseps kullanın. Ardından, slaydı mikroskop altına yerleştirin.

Sivrisinekleri forseps ile baş ve vücut arasına dikkatlice gerin ve tükürük bezini izole etmek için bir şırınga ve iğne kullanın. Daha sonra, tükürük bezlerini bir cam pipetle emerek ve 1.5 mililitrelik bir santrifüj tüpüne aktararak cam slayttan toplayın. Ardından, sporozoitleri tükürük bezi dokusundan izole etmek için santrifüj tüpü içindeki izole tükürük bezlerini üç dakika boyunca parçalamak için küçük bir plastik çubuk kullanın.

Sporozoitleri kalan dokudan arındırmak için 4 santigrat derecede 1.000 kez g'de üç dakika santrifüjleyin. Sporozoitleri içeren süpernatanı yeni bir santrifüj tüpüne pipetleyin ve saflaştırılmış sporozoitleri bir Neubauer hemositometresinde sayın. Sporozoitler tipik bir saat yönünün tersine hareket gösterir.

Daha sonra, fosfat tamponlu salin ekleyerek saflaştırılmış sporozoitlerin konsantrasyonunu mililitre başına 10.000'e ayarlayın. Son olarak, bir C57BL6 fareyi bir süzgecin içine yerleştirin ve kuyruk damarını daha iyi görselleştirmek için kuyruğunu ılık suya koyun. Ardından, enfeksiyonu başlatmak için kuyruk damarına toplam 1.000 sporozoit veya 0.1 mililitre enjekte edin.