Monositlerin Lökosit Proliferasyonu Üzerindeki İmmünomodülatör Etkisini Değerlendirmek İçin Bir İn Vitro Test
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 2:46 dk. • July 8th, 2025
Yapışık mezenkimal kök hücre veya MSC kültürü ile çok kuyulu bir plaka alın.
Periferik kan mononükleer hücreleri veya PBMC'leri ekleyin ve inkübe edin.
MSC'ler hepatosit büyüme faktörü salgılar, monositlerin immünomodülatör bir fenotip kazanmasına neden olur ve interlökin-10 veya IL-10 üretir.
PBMC içeren süpernatanı bir tüpe aktarın.
Monosit yüzey işaretleyicisi CD14'e bağlanan antikor kaplı manyetik boncuklar ekleyin.
CD14+ monositlerini izole etmek için manyetik bir ayırıcı kullanın ve bunları artan konsantrasyonlarda çok kuyulu plaka kuyularına ekleyin.
Floresan boya CFSE etiketli efektör CD4 + T hücrelerini tanıtın.
Hücreleri aktive ederek özellikle T hücresi yüzey belirteçleri CD3 ve CD28'e bağlanan antikor konjuge mikro boncuklar ekleyin.
Kontrol kuyusu eksik monositlerde, aktive edilmiş T hücreleri çoğalır ve her hücre bölünmesi yavru hücrelerde CFSE floresan yoğunluğunu azaltır.
Bununla birlikte, ko-kültürlerde, MSC ile indüklenen monositler, efektör T hücresi proliferasyonunu baskılayarak IL-10 salgılar.
Akış sitometrisi kullanarak, artan monosit konsantrasyonları ile azalmış CFSE floresan yoğunlukları sergileyen daha az T hücresi gözlemleyin, bu da MSC'nin neden olduğu m
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin