Mikroakışkan Bir Cihaz Kullanan Manyetik Nanopartikül Bazlı Bir İmmünoassay

Reaktifleri dağıtmak için bir giriş, sıvı akışı için birbirine bağlı kanallar ve sıvıları temizlemek için çıkışlar içeren bir mikroskop aşamasına yapıştırılmış bir mikroakışkan cihazı alın.

Ana kanal, sıkışmış toplanmış demir mikropartikülleri ile merkezi bir kademeli kısıtlama içerir.

Kanallar, spesifik olmayan antikor bağlanmasını önlemek için bir bloke edici çözelti ile inkübe edilir.

Fazla engelleme solüsyonunu çıkararak bir yıkama tamponu akıtın.

Tanımlanmış bir akış hızında bir immünokompleks süspansiyonu tanıtın. İmmünokompleks, peroksidaz konjuge ikincil antikorlara daha fazla bağlanan primer antikorlara bağlı antijenlerle kaplanmış manyetik nanopartiküllerden oluşur.

Harici bir manyetik alan uygulayın, toplanmış mikropartikülleri manyetize edin ve immünokompleksleri yakalamak için bunları manyetik bir tuzağa dönüştürün.

Peroksidaz tarafından floresan bir ürüne dönüştürülen ve tuzaktan akan florojenik bir substrat ekleyin.

Mikroskobu kullanarak, tuzaktan önceki ve sonraki floresansı karşılaştırın ve immünokomplekslerin yakalandığını doğrulayın.

Kanalları bir şırınga kullanarak damıtılmış suyla doldurun. Cihazı 10 dakika boyunca ultrasonik bir banyoya daldırın. Ardından, cihaz kanallarının içindeki suyu boşaltın ve% 5 BSA çözeltisi eklemek için bir şırınga kullanın.

% 5 BSA'da 7.5 mikrometre çapında bir demir mikropartikül süspansiyonu hazırlayın. Çipi ve mikropartikül süspansiyonunu bloke edici çözelti ile oda sıcaklığında en az 1 saat inkübe edin. Ardından, mikropartikülleri yan kanal çıkış hortumundan bir şırınga iğnesi ile çipe yerleştirin.

Çipi dikey olarak yerleştirin; daha sonra, çipi 90 derecelik iki adımda döndürün, böylece mikropartiküller 5 mikrometre kısıtlamasında hedeflenir ve sıkıştırılır. Akrilik cihazın tüm hortumlarını ısı ile kapatın. Giriş hortumunu sadece birkaç milimetre kalana kadar kesin.

Dağıtım iğnesini yıkama tamponu ile doldurun ve kesilen hortuma yerleştirin. Çözeltinin damlamasına izin verin ve ardından iğneyi cihaza bağlayın. Çıkış hortumunu yanal kanaldan kesin, ardından şırınga pompasına bağlayın. Ardından, ana kanal çıkış hortumu için aynı prosedürü tekrarlayın, ardından çipi mıknatısa takın.

İmmün tespit için, yıkama tamponunun saatte 50 mikrolitre hızında 10 dakika boyunca akmasını sağlayın. Kalan yıkama tamponunu bir mikropipet ile dağıtım iğnesinden çıkarın ve 50 mikrolitre nanopartikül süspansiyonu ekleyin. Nanopartikül süspansiyonunu saatte 100 mikrolitrelik bir akış hızında 7 dakika boyunca akıtın. Ardından akış hızını saatte 50 mikrolitre olarak değiştirin ve akışa 15 dakika daha devam edin.

Dağıtım iğnesini değiştirin ve yıkama tamponunu aynı oranda 10 dakika boyunca akıtın. Kalan yıkama tamponunu bir mikropipet ile dağıtım iğnesinden çıkarın ve 100 mikrolitre florojenik substrat ekleyin. Alt tabaka girişi, floresan ölçümü ve yıkama adımı için akış hızı ve zaman parametrelerini ayarlayın.

Florojenik substratın giriş akışını saatte 50 mikrolitre hızla 6 dakika boyunca etkinleştirin. Alt tabaka akışı durmadan 15 saniye önce mikroskobun floresansını açın. Alt tabaka durmadan 10 saniye önce mikroskop kamerasının yazılımıyla görüntü yakalamayı 1.000 milisaniyelik bir pozlama süresiyle başlatın.

Alt tabaka yıkama durduktan hemen sonra istenen akış hızı parametresinin başlat düğmesine tıklayın. Saniyede bir kare hızında 6 dakika boyunca görüntüleme gerçekleştirin. Seçilen ölçüm akışı durduktan hemen sonra yıkama akışının başlat düğmesine tıklayın.