Aynı Konak Türlerden Primer Antikorların Kullanıldığı Bir Multipleks İmmün Boyama Yöntemi

Bir korteks ve bir medulla içeren sabit ve geçirgen bir adrenal bölüm alın. Antijenin maskelenmesinin kaldırılması için fiksasyonun neden olduğu çapraz bağları kırarak kaynar asidik bir tampon ile muamele edin.

Spesifik olmayan bağlanma bölgelerini bloke edin ve kortekse özgü belirteçlere bağlanan primer antikorları tanıtın.

Primer antikorları hedefleyen biyotinile ikincil antikorları ve biotine bağlanan streptavidin konjuge peroksidazları ekleyin.

Florofor etiketli bir tiramid ve hidrojen peroksit tanıtın.

İmmobilize peroksidazlar, yakındaki proteinlere bağlanan ve korteksi etiketleyen tiramidi aktive etmek için hidrojen peroksit kullanır.

Daha sonra, bağlı antikorları çıkarmak için bölümü kaynatma tamponu ile muamele edin.

Medullaya özgü belirteçleri ve biyotinile edilmiş ikincil antikorları hedefleyen aynı konakçı tür tarafından oluşturulan birincil antikorları tanıtın.

Medullayı etiketlemek için streptavidin ile konjuge peroksidazları ve farklı bir florofor konjuge tiramid ekleyin.

Kortekse özgü primer antikorların sıyrılması, onları bağlayan yeniden sokulan sekonder antikorun inhibe edilerek çapraz reaktiviteyi önler.

Nükleer bir leke uygulayın ve belirgin şekilde boyanmış kor