Çok Elektrotlu Bir Dizi Üzerinde Desenli Nöronal Devreler Oluşturma

Nöral sinyalleri elde etmek ve iletmek için temizlenmiş ve sterilize edilmiş bir çoklu elektrot dizisi veya mikroelektrotlar içeren bir cihaz olan MEA'yı alın.

Bir mikromanipülatöre desenli bir polimerik şablon takın ve MEA yüzeyine yerleştirin.

Mikroskop altında, desenli şablonu MEA'nın elektrotlarıyla hizalayın ve modüller oluşturmak için takın.

Mikromanipülatörü çıkarın.

MEA'yı bir vakum odasına aktarın. Şablona bir matris çözeltisi ekleyin ve eşit bir matris kaplaması sağlamak için bir vakum uygulayın.

Matrisin kurumasını bekleyin.

Şablonu çıkarın ve MEA'yı ultraviyole ışığa maruz bırakarak sterilize edin.

MEA'nın merkezine nöronal hücreler ekleyin ve hücrelerin matris katmanına yapışmasına izin verin.

Ardından, büyüme ortamı ekleyin ve inkübe edin.

Ortamdan ve hücre dışı matristen gelen besinler, hücrelerin büyümesini ve projeksiyonları genişletmesini sağlayarak, sinyalleri MEA kullanılarak kaydedilebilen birbirine bağlı desenli nöronal devreler oluşturur.

İlk olarak, multielektrot dizisini musluk suyu altında yıkayarak temizleyin ve ardından konsantre bir enzimatik deterjanla sonikleştirin. Bu adımları üç kez tekrarlayın. Ardından, MEA'yı saf damıtılmış suda üç kez sonikleştirin. Bundan sonra, bir kaputun altında, MEA'yı 30 dakika boyunca UV ışığı ile sterilize etmeden önce damıtılmış suyla yıkayın.

Şimdi, hazırlanmış bir mikromanipülatöre bir şablon ekleyin. Ters çevrilmiş bir mikroskop altında, desenli yapıyı MEA'nın elektrotlarına uyacak şekilde inceleyin ve hizalayın. Ardından, şablonu MEA yüzeyine indirmek için mikromanipülatörü kullanın. Takıldıktan sonra mikromanipülatörü kaldırın. Şimdi, MEA'yı 15 dakika boyunca vakum odasına aktarın. Ardından, şablona 1 mililitrelik bir damla PDL uygulayın ve 20 dakikalık 2 döngü boyunca vakum odasına geri koyun.

PDL'yi gece boyunca kurumaya bırakın. Ertesi gün, PDMS şablonlarını cımbız kullanarak MEA'lardan çıkarın. Son olarak, MEA'ları 7 dakika UV ile sterilize edin. Daha sonra hücreler için hazırdırlar. Hazırlıkta, hücreleri kültürleyin ve metin protokolünde olduğu gibi süspansiyonları hazırlayın. Gerekli sayıda hücreyi yeniden askıya aldıktan sonra, bunları MEA veya lamel üzerindeki desenli alanın ortasına yerleştirin ve MEA'ya 100 mikrolitrelik hacimler yüklenmeli ve bir lamel 1.000 mikrolitre barındırmalıdır. Kaplanmış hücreleri 40 dakika inkübe edin. Ardından, kaplama ortamını ekleyin.

Hücreleri her 4 günde bir korumak için, taze takviye edilmiş büyüme ortamını geri ekleyin. Altıncı veya yedinci günlerden sonra, modüller arasındaki nöronal bağlantılar oluşmaya başlamalıdır.