Sıçan Beyninin Farklı Hücre Altı Bölmelerinde Proteazom Aktivitesinin Ölçülmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 4:10 dk. • July 8th, 2025
Hem kontrol hem de korku şartlandırılmış sıçanların beyinlerinin lateral amigdalasından toplanan hücre altı nükleer ve sinaptik fraksiyonlarla başlayın.
Her hücre altı fraksiyon, istenmeyen hücresel proteinleri parçalamaktan sorumlu proteazom kompleksinin katalitik çekirdeği olan 20S proteazomlarının değişen konsantrasyonlarını içerir.
Numunelere ATP ve florojenik bir peptit substratı içeren bir tahlil tamponu ekleyin ve inkübe edin.
ATP'nin varlığında, proteazom florojenik peptidi parçalayarak serbest florojenik molekülleri serbest bırakır.
Bir plaka okuyucu kullanarak, floresan yoğunluğunu düzenli aralıklarla ölçün.
Floresansı, florojenik molekülün bilinen standart konsantrasyonlarıyla karşılaştırarak ölçün.
Floresan yoğunluğu, numunedeki proteazom aktivitesi ile orantılıdır.
Korkuya bağlı sıçanların nükleer fraksiyonunda artan proteazom aktivitesi, hafıza ile ilgili gen ekspresyonundaki değişiklikleri gösterirken, sinaptik fraksiyondaki azalmış aktivite, uzun süreli hafıza bakımı için gerekli olan sinaptik protein ekspresyonundaki değişiklikleri gösterir.
Tahlili ayarlamak için, plaka okuyucuyu önceden 37 santigrat dereceye ısıtın ve çalışma boyunca tutun. Uyarımı 360 nanometrey
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin