JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 6:37 dk. • May 29th, 2025
Anestezi uygulanmış bir fareyi, motor korteksi üzerinde bir kraniyal pencere ile bir koşu bandına sabitleyin.
Fare, kortikal nöronlarda bir Protein Kinaz-A raportörünü eksprese eder.
Koşu bandını iki fotonlu bir FLIM objektifin altına yerleştirin.
Objektif ile kafatası penceresi arasına bir su damlası ekleyin.
Farenin uyanmasına ve koşu bandına alışmasına izin verin.
Parlak alan aydınlatmasını kullanarak görüntüleme bölgesini bulun. Harici ışığı engellemek için mikroskop muhafazasını kapatın.
Görüntüleme parametrelerini ayarlayın, hareketi teşvik etmek için koşu bandı dönüşünü başlatın ve görüntülemeye başlayın.
Zorlanmış hareket, muhabiri fosforile eden PKA'yı aktive ederek donör ve alıcı floroforlarını daha da yakınlaştırır.
Mikroskop, bir kızılötesi lazeri yönlendirerek, vericiyi alıcıya enerji aktarmaya teşvik eder ve vericinin floresan ömrünü azaltır.
Hareket durduğunda, PKA ve raportör aktif olmayan durumlarına geri döner, enerji transferini azaltır ve vericinin floresan ömrünü uzatır.
Dinlenme ve hareket sırasında kortikal PKA seviyelerini karşılaştırmak için görüntüleri analiz edin.
Kraniyal pencere kurulumundan en az iki hafta sonra, iki fotonlu uyarma lazer dalga boyunu 960 nanom
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin