Caenorhabditis elegans Nöronlarında PolyQ Protein Agregasyonunun Floresan Ömür Boyu Görüntülenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 5:36 dk. • June 17th, 2025
Anestezi uygulanmış, yaşa uygun kontrol ve şaperon eksikliği olan Caenorhabditis elegans solucanları ile başlayın.
Her iki grup da nöronlarında yanlış katlanmaya eğilimli florofor etiketli poliQ proteinlerini eksprese eder.
Kontrol solucanlarında, şaperon proteinleri yanlış katlanmış poliQ agregasyonunu sınırlarken, şaperon eksikliği olan solucanlarda, yanlış katlanmış poliQ kolayca agregalar oluşturur.
Kontrol slaytını Floresan Ömür Boyu Görüntüleme Mikroskobu (FLIM) için konfokal bir mikroskop tablasına yerleştirin.
Darbeli bir lazer kullanarak solucanları aydınlatın.
Lazer, temel duruma dönerken bir foton yayan floroforu uyarır.
FLIM, floresan ömrünü ölçer - floroforun uyarılmış durumda kaldığı süre.
Şaperon eksikliği olan solucanlarda, polyQ agregasyonu floroforları kümeler, foton emisyonu yerine bitişik floroforlar arasında enerji transferini teşvik eder ve böylece floresan ömrünü azaltır.
FLIM yazılımı, renk kodlu haritalar oluşturmak için bu ömürleri işler ve toplama görselleştirmesini mümkün kılar.
Şaperon eksikliği olan solucanlarda kontrollere kıyasla azaltılmış floresan ömrü, poliQ agregasyonunun arttığını gösterir.
Nematodların tamamen hareketsiz olduğundan emin olun. FLI
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin