Çoklu Foton Zaman Atlamalı Görüntüleme Kullanarak Bir Zebra Balığı Embriyosunda Nöral Krest Hücre Göçünü Görselleştirme

Düşük erime noktalı agaroza gömülü ve embriyo ortamıyla dolu bir odaya yerleştirilmiş canlı, dekoryonlu bir transgenik zebra balığı embriyosu ile başlayın.

Embriyo, gelişmiş yeşil floresan protein (EGFP) işaretli nöral krest hücrelerini ifade eder.

Odayı mikroskop tablasına yerleştirin. Parlak alan aydınlatmasını kullanarak, embriyoyu görüş alanına odaklamak ve ortalamak için hedefi ayarlayın.

Suya daldırma hedefine geçin ve embriyoya yeniden odaklanın.

Gözün genişliğini yakalayarak lateral kenardan medial kenara kadar Z yığını görüntüleri elde etmek için görüntüleme parametrelerini ayarlayın.

Parlak alan aydınlatmasını kapatın, sahneyi kapatın ve zaman atlamalı görüntülemeyi başlatın.

Görüntüleme sırasında hazneyi gerektiği gibi ortamla yeniden doldurun.

Lazer aydınlatması altında, nöral krest hücreleri floresan olur.

Bu hücrelerin nöral tüpten kraniyofasiyal bölgelere, perioküler mezenşim ve frontonazal süreci doldurmak için gelişmekte olan gözün çevresine ve faringeal kemerleri oluşturmak için ventral olarak göçünü görselleştirin.

Tüm kurulumu mikroskobun sahnesine yerleştirdikten sonra, metin protokolüne göre, embriyoyu bulmak için beş kez objektifi kullanın. Daha sonra sahneyi manuel