Drosophila'da Embriyonik Motor Nöronların Aksonal Projeksiyon Modellerinin Görselleştirilmesi

Bir montaj ortamında geç evre 16 Drosophila embriyoları içeren bir tüp ile başlayın.

Drosophila'nın motor nöronları immün etiketlidir.

Bir embriyoyu bir cam slayta aktarın ve montaj ortamından çıkarın.

Ardından, embriyoyu ventral tarafı yukarı gelecek şekilde yerleştirin ve inceleyin.

Motor nöronları içeren ön bölümü sırt tarafı yukarı bakacak şekilde yönlendirin.

Bir tungsten iğnesi kullanarak, dorsal orta hat boyunca kesin ve vücut duvarını yayın. Embriyoyu montaj ortamına taşıyın. Ardından, etiketli nöronları ortaya çıkarmak için iç organları çıkarın

.

Embriyoyu yeni bir slayta aktarın, ardından monte edin ve kapatın.

Işık embriyodan geçerken diferansiyel girişim kontrast mikroskobu altında gözlemleyin ve yüksek çözünürlüklü bir görüntü oluşturun.

Aksonal projeksiyon desenlerine sahip etiketli nöronlar, açık renkli bir arka plan üzerinde koyu kahverengi görünür.

Motor nöronlar iki ana sinire ayrılır: segmentler arası ve segmental sinirler ve kasları innerve eden küçük bir dal olan enine sinir.

Embriyoları fileto yapmak için, onları bir cam slayt üzerinde hazırlayın

İlk olarak, onları ventral tarafı yukarı bakacak şekilde bir damla gliserol içine taşıyın. Daha sonra, bir diseksiyon mikroskobu altında, ön kısmı vücut uzunluğunun 1 dörtte birinde kesin. Ve motor aksonları içermeyen en arka bölgeyi çıkarın.

Şimdi, bir iğne probu kullanarak, preparatı sırt tarafı yukarı bakacak şekilde gliserolden çıkarın ve görüş alanında yatay olarak konumlandırın. Bir sonraki adım, bir iğne probunun içi boş bölgesine yerleştirilmiş ve daha sonra sonunda bükülmüş ince bir tungsten iğnesi gerektirir. Tungsten iğnesini kullanarak, embriyonun arka ucunda küçük bir kesi yapın ve dorsal orta hattı kesmeye devam edin.

Diseksiyon sırasında tungsten iğnesinin ucunun cam sürgünün yüzeyine temas etmediğinden emin olun, çünkü iğne cama kolayca bükülecektir.

Daha sonra prob ile preparasyonu gliserol damlasına geri getirin ve sırt tarafı yukarı gelecek şekilde konumlandırın. Orada, her vücut duvarını ventral lateral yönde açarak bağırsağı vücut duvarından ayırın. İki vücut duvarı birbirinden ayrılmalıdır. Şimdi probu kullanarak, gövde duvarı kanatlarını dikkatlice bir cam kızak üzerine hareket ettirin. Slaytta, iç organları yanlamasına iterek çıkarmak için bir tungsten iğnesi kullanın.

Tungsten iğnesini stabilize etmek ve hasar görmesini önlemek için, tungsten iğnesini manipüle ederken tungsten iğnesini cam sürgünün yüzeyine karşı tutan içi boş iğne problarını tutun.

Şimdi hazırlıkları ve 8 mikrolitre montaj solüsyonunu yeni bir cam slayt üzerine monte edin. Bir lamel takın ve kenarlarını normal oje ile kapatın. Ardından, DIC optiklerini kullanarak yüksek çözünürlükte görüntüler yakalayın.