Toplam İç Yansıma Floresan Mikroskobu Kullanılarak Hücre Görüntüleme

Bir tampon içinde yapışmış insan nöroblastom hücreleri ile cam lamel içeren kapalı bir görüntüleme odası ile toplam iç yansıma floresan (TIRF) mikroskobu kurulumu ile başlayın.

Bu hücreler sinaptik vezikül zarlarına özgü floroforları eksprese eder.

Epifloresan modunda, görüntüleme için bir hücre seçin.

TIRF modunda, objektif aracılığıyla, kapak üzerinde bir nokta olarak görünen numuneye bir lazer yönlendirin.

Açıyı, yüksek kırılma indeksli cam lamel ile düşük kırılma indeksli numune arasındaki arayüzdeki kritik açıyı aşacak şekilde ayarlayın, bu da ince bir çizgi olarak görülen toplam iç yansımaya (TIR) neden olur.

TIR, en yakın membran üzerindeki floroforları uyaran bir buharlaşma dalgası üretir.

Yayılan floresan objektif tarafından toplanır ve bir kamera tarafından yakalanır.

Lamelin yakınındaki hücre zarının yüksek kontrastlı bir görüntüsü için ince ayar yapın.

Foto ağartmayı en aza indirmek ve örnekleme frekansını ayarlamak için çekim ayarlarını optimize edin.

Kaynaşmış sinaptik vezikülleri görselleştirmek için TIRF görüntülemeye başlayın.

Epifloresan modunda, lamel üzerine odaklanın ve oda merkezine yerleştirilen transfekte edilmiş hücreleri seçin. Yazılım kontrolü altında, canlı modda