Name: İnsan Hücrelerden salgılanan Proteinlerin Üretimi için Kullanışlı ve Genel Anlatım Platformu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-31T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 9 s
Description: Öğrenin, insan embriyonik böbrek 293T hücreleri kullanarak salgılanan proteinlerin zaman ve maliyet açısından verimli ekspresyon yöntemini. Bu platform, rekombinant protein üretimi için ölçeklenebilir bir çözüm sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma HA, FCA ve JDC bir Ontario HIV Tedavi Araştırma Ağı İşletim Grant (ROG-G645) ve Sağlık Araştırması Yeni Araştırmacı Ödülü (MSH-113.554) Kanada Enstitüleri JEL, ve Toronto Bursu Üniversitesi tarafından desteklenmiştir. Yazarlar sağlayan hücreler, ebolavirus GP ekspresyon vektörü ve genel danışma için Scripps Araştırma Enstitüsü (La Jolla, CA) Marnie Fusco, Dafna Abelson ve Dr Erica Ollmann Saphire teşekkür etmek istiyorum.

<ol><li>Celik, E., Calik, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+recombinant+proteins+by+yeast+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Adv%22%5BJournal%5D)">Production of recombinant proteins by yeast cells.</a> Biotechnol. Adv. , (2011).</li>
<li>Yokoyama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+expression+systems+for+structural+genomics+and+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Chem.+Biol%22%5BJournal%5D)">Protein expression systems for structural genomics and proteomics.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 7, 39-43 (2003).</li>
<li>Nettleship, J. E., Assenberg, R., Diprose, J. M., Rahman-Huq, N., Owens, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+the+production+of+proteins+in+insect+and+mammalian+cells+for+structural+biology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Struct.+Biol%22%5BJournal%5D)">Recent advances in the production of proteins in insect and mammalian cells for structural biology.</a> J. Struct. Biol. 172, 55-65 (2010).</li>
<li>Carlson, E. D., Gan, R., Hodgman, C. E., Jewett, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-free+protein+synthesis%3A+Applications+come+of+age%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Adv%22%5BJournal%5D)">Cell-free protein synthesis: Applications come of age.</a> Biotechnol. Adv. , (2011).</li>
<li>Lee, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+the+Ebola+virus+glycoprotein+bound+to+an+antibody+from+a+human+survivor%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structure of the Ebola virus glycoprotein bound to an antibody from a human survivor.</a> Nature. 454, 177-182 (2008).</li>
<li>Bowden, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+basis+of+Nipah+and+Hendra+virus+attachment+to+their+cell-surface+receptor+ephrin-B2%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Struct.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Structural basis of Nipah and Hendra virus attachment to their cell-surface receptor ephrin-B2.</a> Nat. Struct. Mol. Biol. 15, 567-572 (2008).</li>
<li>Evans, M. J., Hartman, S. L., Wolff, D. W., Rollins, S. A., Squinto, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+expression+of+an+anti-human+C5+chimeric+Fab+utilizing+a+vector+that+replicates+in+COS+and+293+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Rapid expression of an anti-human C5 chimeric Fab utilizing a vector that replicates in COS and 293 cells.</a> J. Immunol. Methods. 184, 123-138 (1995).</li>
<li>Ye, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-level+protein+expression+in+scalable+CHO+transient+transfection%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Bioeng%22%5BJournal%5D)">High-level protein expression in scalable CHO transient transfection.</a> Biotechnol. Bioeng. 103, 542-551 (2009).</li>
<li>Wurm, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+recombinant+protein+therapeutics+in+cultivated+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Production of recombinant protein therapeutics in cultivated mammalian cells.</a> Nat Biotechnol. 22, 1393-1398 (2004).</li>
<li>Lee, J. E., Fusco, M. H., Hessell, A. J., Burton, D. R., Saphire, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+and+tactics+used+in+determining+the+structure+of+trimeric%2C+prefusion+Ebola+virus+GP%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cryst%22%5BJournal%5D)">Techniques and tactics used in determining the structure of trimeric, prefusion Ebola virus GP.</a> Acta Cryst. 65, 1162-1180 (2009).</li>
<li>Aricescu, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eukaryotic+expression%3A+developments+for+structural+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Crystallogr.+D+Biol.+Crystallogr%22%5BJournal%5D)">Eukaryotic expression: developments for structural proteomics.</a> Acta. Crystallogr. D Biol. Crystallogr. 62, 1114-1124 (2006).</li>
<li>Aricescu, A. R., Lu, W., Jones, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+time-+and+cost-efficient+system+for+high-level+protein+production+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Acta.+Crystallogr.+D+Biol.+Crystallogr%22%5BJournal%5D)">A time- and cost-efficient system for high-level protein production in mammalian cells.</a> Acta. Crystallogr. D Biol. Crystallogr. D62, 1243-1250 (2006).</li>
<li>Chang, V. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycoprotein+structural+genomics%3A+solving+the+glycosylation+problem%5BTitle%5D)+AND+%22Structure%22%5BJournal%5D)">Glycoprotein structural genomics: solving the glycosylation problem.</a> Structure. 15, 267-273 (2007).</li>
<li>Lee, J. E., Fusco, M. H., Saphire, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+efficient+platform+for+screening+expression+and+crystallization+of+glycoproteins+produced+in+human+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">An efficient platform for screening expression and crystallization of glycoproteins produced in human cells.</a> Nature Protocols. 4, 592-604 (2009).</li>
<li>Nettleship, J. E., Rahman-Huq, N., Owens, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+production+of+glycoproteins+by+transient+expression+in+Mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">The production of glycoproteins by transient expression in Mammalian cells.</a> Methods Mol. Biol. 498, 245-263 (2009).</li>
<li>Neil, S. J., Zang, T., Bieniasz, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tetherin+inhibits+retrovirus+release+and+is+antagonized+by+HIV-1+Vpu%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Tetherin inhibits retrovirus release and is antagonized by HIV-1 Vpu.</a> Nature. 451, 425-430 (2008).</li>
<li>Nakamura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterodimerization+of+the+IL-2+receptor+beta-+and+gamma-chain+cytoplasmic+domains+is+required+for+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Heterodimerization of the IL-2 receptor beta- and gamma-chain cytoplasmic domains is required for signalling.</a> Nature. 369, 330-333 (1994).</li>
<li>Wang, X., Rickert, M., Garcia, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+the+quaternary+complex+of+interleukin-2+with+its+alpha%2C+beta%2C+and+gammac+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Structure of the quaternary complex of interleukin-2 with its alpha, beta, and gammac receptors.</a> Science. 310, 1159-1163 (2005).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

10 katmanı hücre fabrikalarda protein miligram miktarlarda üretilmesi için etkili bir kap olup. Bu tür roller şişeleri, erlenlere veya spinner matara gibi diğer geleneksel gemiler, üzerinde hücre fabrika kullanarak önemli bir avantajı da herhangi bir ek laboratuar ekipman alımı gerekmez olmasıdır. Standart bir CO 2 inkübatör (~ 6.0 cu. Ft) kolayca dört adet 10-katmanlı hücre fabrikalar (Şekil 2) uygun olacaktır. Buna ek olarak, bu kapların tabaklar, şişeler ya hücreleri ve proteinleri üretmek...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktifi Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Alkalen fosfataz (BCIP / NBT) sıvı substrat çözeltisi </td><td> Sigma </td><td> B6404 </td><td></td></tr><tr><td> Antimikotik / Antibiyotik, 100X </td><td> Invitrogen </td><td> 15240062 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-HA afinite matriks, klon 3F10 </td><td> Roche </td><td> 1815016 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-HA fare mAb, klon 16B12 </td><td> Covance </td><td> MMS-101P </td><td></td></tr><tr><td> Hücre kültürü şişesi, T75 cm 2 doku kültürü tedavi </td><td> Corning </td><td> 430641 </td><td></td></tr><tr><td> Hücre kültürü şişesi, T225 cm 2 doku kültürü tedavi </td><td> Corning </td><td> 431082 </td><td></td></tr><tr><td>Hücre kültürü plakaları ,6-de doku kültürü tedavi </td><td> Corning </td><td> 3516 </td><td></td></tr><tr><td> Hücre fabrikası, 10 katmanlı CellSTACK </td><td> Corning </td><td> 3312 </td><td></td></tr><tr><td> Centramate Omega 5K Kaset </td><td> Bıktırmak </td><td> OS005C12 </td><td></td></tr><tr><td> Centramate Omega 30K Kaset </td><td> Bıktırmak </td><td> OS030C12 </td><td></td></tr><tr><td> Kromatografi cam kolon, 1.0x10 cm </td><td> Kontes </td><td> 4204001010 </td><td></td></tr><tr><td> Siprofloksasin </td><td> Sigma </td><td> 17850 </td><td></td></tr><tr><td> CO 2 </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco&#39;nun değiştirilmiş Eagle ortamı (DMEM) </td><td> Sigma </td><td> D5796 </td><td></td></tr><tr><td> Fetal bovin serumu (FBS), aktifliği giderilmiş ısıya </td><td> Invitrogen </td><td> 12484-028 </td><td></td></tr><tr><td> FuGENE HD transfeksiyon reaktif </td><td> Promega </td><td> 4709691001 </td><td></td></tr><tr><td> GeneJuice transfeksiyon reaktif </td><td> EMD / Merck </td><td> 70967-6 </td><td></td></tr><tr><td> Glisin </td><td> Sigma </td><td> G8898 </td><td></td></tr><tr><td> Alkali keçi anti-fare IgG F (ab &#39;) 2 </td><td> Thermo Scientific </td><td> 31324 </td><td></td></tr><tr><td> fosfataz bağlı antikor </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Hemagglutinin (HA) peptid, 100 mg </td><td> Genscript </td><td> özel sentezi </td><td></td></tr><tr><td> (Sırası: YPYDVPDYA,% 95 saflıkta) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> HEK 293T hücreleri </td><td> ATCC </td><td> CRL-11268 </td><td></td></tr><tr><td> Household ağartıcı (4% w / v sodyum hipoklorit) </td><td> çeşitli markalarda mevcuttur </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Immobilon-P PVDF zarı </td><td> Millipore </td><td> IPVH07850 </td><td></td></tr><tr><td> MiniPrep plazmid saflaştırma kiti, PureLink Hızlı </td><td> Invitrogen </td><td> K2100-11 </td><td></td></tr><tr><td> MaxiPrep plazmid saflaştırma kiti, PureLink HiPure </td><td> Invitrogen </td><td> K2100-07 </td><td></td></tr><tr><td> NaH3 </td><td> Sigma </td><td> S8032 </td><td></td></tr><tr><td> pDISPLAY ekspresyon vektörü </td><td> Invitrogen </td><td> V660-20 </td><td></td></tr><tr><td> 100X penisilin / streptomisin (pen / strep), </td><td> Invitrogen </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfat tamponlu tuz (PBS), steril 1X </td><td> Sigma </td><td> D8537 </td><td></td></tr><tr><td> Polietilenimin (PEI), lineer 25 kDa </td><td> Polyscience </td><td> 23966 </td><td></td></tr><tr><td> Süt yağsız kuru toz </td><td> Karanfil </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Stericup-GP PES vakum filtrasyon ünitesi, </td><td> Millipore </td><td> SCGPU05RE </td><td></td></tr><tr><td> 0.22 mikron, 500 ml kapasiteli </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tripan mavisi </td><td> Invitrogen </td><td> 15250061 </td><td></td></tr><tr><td> Tripsin-EDTA,% 0.05 (a / h) </td><td> Invitrogen </td><td> 25300-054 </td><td></td></tr><tr><td> Tween-20 </td><td> Sigma </td><td> P7949 </td><td></td></tr><tr><td> Valproik asit </td><td> Sigma </td><td> P4543 </td><td></td></tr><tr><td> Teğetsel akış sistemi Centramate </td><td> Bıktırmak </td><td></td><td></td></tr><tr><td> CO 2 nemlendirilmiş inkübatör, standart 6.0 cu. ft </td><td> çeşitli markalarda mevcuttur </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Elektroforez ve transfer ünitesi </td><td> çeşitli markalarda mevcuttur </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Inkübatöründe, 37 ° C </td><td> çeşitli markalarda mevcuttur </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

İnsan hücrelerden salgılanan proteinlerin Üretimi için kullanışlı ve genel anlatım platformu

A Convenient and General Expression Platform for the Production of Secreted Proteins from Human Cells

Bakterilerde rekombinant protein ekspresyonu, tipik E. coli, proteinlerin miligram miktarı ifadesi için en başarılı bir strateji olmuştur. Bununla birlikte, çoğu zaman prokaryotik hosts bakteriler, özellikle co-veya post-translasyon modifikasyonların eksikliğinden kaynaklanan, insan, viral veya ökaryotik yabancı makromolekülün toksisite bağlı proteinler, protein katlama makine farklılıklar, ya da ifade için uygun değildir. Maya (P. pastoris ya S. cerevisiae), 1,2,-bakülovirüs bulaştırılmış böcek (S. frugiperda veya T. ni) hücreler 3, in vitro ve in sistemleri için hücre içermeyen temel ekspresyon sistemleri 2,4 başarıyla için kullanılmıştır memeli proteinleri üretmek. Muhtemelen iyi eşleşme post-translasyon uygun değişiklikler içeren rekombinant proteinlerin üretimini sağlamak için bir memeli konak kullanmaktır. Memeli hücre çizgileri (insan embriyonik Çocuk bir diziney (HEK) 293, S V40 larget T-antijen (COS), Çin Hamsteri Över (CHO), ve diğerleri taşıyan O rigin C V-1 hücreleri) başarılı bir şekilde insan proteinleri bir dizi miligram miktarlarda olarak artmış için kullanılmıştır 5-9. Ancak, memeli hücrelerinde kullanmanın avantajları genellikle istikrarlı ifade hücre hatları geliştirmek için yüksek maliyetleri, özel laboratuvar ekipman ihtiyacı, düşük protein verimi ve uzun zamanlar göre karşılık. Maliyetleri düşük tutarken, daha hızlı verim ve üretim protein artırılması, pek çok akademik ve ticari laboratuarlar için önemli faktörlerdir. Burada, bir zaman ve yapışık HEK 293T hücrelerinden salgılanan insan proteinlerinin ifadesi için maliyet-etkin, iki bölümlü bir prosedür tanımlamaktır. Bu sistem, yapısal biyofiziksel ve biyokimyasal çalışmalar için işlevsel proteinin miligram miktarda mikrogram üretme kapasitesine sahiptir. İlk bölümde, ilgi genin birden yapıları üretmek vardırparalel ve geçici olarak küçük ölçekli yapışık HEK 293T hücrelerine transfekte d. Hücre kültürü aracı maddesine salgılandı rekombinant protein saptama ve analiz Bir vektör olarak kodlanmış proteine ​​karşı yöneltilmiş saflaştırma etiketi ticari olarak mevcut antikorlar kullanılarak Western blot analizi ile gerçekleştirilir. Daha sonra, büyük ölçekli bir protein üretime uygun yapıları geçici 10-tabaka hücre fabrikalarda polietilenimin (PEI) ile transfekte edilir. Şartlandırılmış orta litrelik-hacim içine salgılanan proteinler, anti-HA afinite kromatografisi ile saflaştırma, ardından teğet akış filtrasyonu kullanılarak kontrol edilebilir miktarlar halinde konsantre edilmiştir. Bu platformun programı sitokinler, sitokin reseptörleri, hücre yüzey reseptörleri, içsel kısıtlama faktörler ve viral glikoproteinler miligram miktarlarda ifade yeteneğini kanıtladı. Bu yöntem de başarılı bir şekilde trimeric ebolavirus glikoprotein 5,10 yapısal tayini kullanılmıştır. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Sonuç olarak, bu platform protein kalitesi ve işlevsellik maksimize ederken kullanımı, hız ve ölçeklenebilirlik kolaylığı sunuyor. Dahası, bir standart nemlendirilmiş CO2 inkübatöründe haricinde hiçbir ilave ekipman, gereklidir. Bu prosedür, hızlı protein kompleksleri, antijenler ve antikorlar, aşılar için üretim virüse benzer parçacıklar, ya da zor bir hücre hatları transdüksiyonu için adenovirüsler ya Lentivirüs üretimi müşterek ifadesinden olarak daha büyük bir karmaşıklık sistemleri için genişletilebilir.

Post-insan genomik dönemde, yerli konformasyonlar rekombinant protein durumu, yapısal, işlevsel ve tedavi araştırma ve geliştirme için çok önemlidir. Burada, bir test-ve rekombinant proteinlerin çeşitli üretmek için kullanılan insan embriyonik böbrek hücreleri 293T büyük ölçekli proteini ifade sistemi açıklamaktadır.

İnsan Hücrelerden salgılanan Proteinlerin Üretimi için Kullanışlı ve Genel Anlatım Platformu

Genellikle E. coli kullanılan bakterilerde rekombinant protein ekspresyonu, miligram miktarda protein ekspresyonu için en başarılı strateji olmuştur. ...

Bu videoda, modifiye edilmiş HEK 293 T hücrelerinden salgılanan proteinlerin ekspresyonu için zaman ve maliyet açısından verimli bir prosedürü tanımlıyoruz. Başlangıçta, altı kuyucuklu bir plakada %40 konfluensli bir HEK 293 T hücre kültürü hazırlanır. Ardından, önce gene juice, ardından test plazmidleri serumsuz medyada seyreltilerek bir transfeksiyon karışımı hazırlanır.Transfeksiyon karışımı hücrelerin üzerine eklenir ve protein ekspresyonunun gerçekleşmesi için hücreler 37 °C'de inkübe edilir. Süpernatanttaki proteinin tespiti western blot ile gerçekleştirilebilir. Uygun bir konstrükt belirlendikten sonra, prosedür 10 katmanlı hücre fabrikaları kullanılarak ölçeklendirilebilir.Hücreler, transfeksiyon ajanı olarak PEI kullanılarak transfekte edilir. Protein, kültür süpernatanlarından önce tanjansiyel akış filtrasyonu ve ardından afinite kromatografisi kullanılarak hasat edilebilir. Nihayetinde bu platform, geniş bir makromolekül yelpazesinin miligram miktarlarda ekspresyonuna olanak tanır.Bu tekniğin, baculovirüs tabanlı böcek hücresi ekspresyonu gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, çok sayıda konstrüktün taranabilmesi ve ekspresyon için ölçeklendirilebilmesi ve sonuçları

a-convenient-general-expression-platform-for-production-secreted

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Protein terapötikler üretmek için hücre hattı geliştirme, üretim, yüksek verimlilik, otomatik bir platform açıklanmıştır. Uygulama, BD FACS Aria Hücre Sıralayıcısı CloneSelect Imager ve Tecan Özgürlük EVO sıvı taşıma sistemi, gelişmiş hücre hattı kalite ve yüksek tekrarlanabilirlik hücre hattı geliştirme işleme kapasitesi önemli ölçüde artış göstermiştir.

Protein Therapeutics İmalat Hücre Hatları Kalkınma Yüksek throughput Otomatik Platformu

Bu beş günlük protokolü bütün adımlar, ekipman, ve esaslı etkili endojen Escherichia coli sıfırdan TX-TL hücre serbest ifade sistemi oluşturmak ve çalıştırmak için gerekli ek yazılım özetliyor. Reaktif ile protokol 8 kurulumu için saat veya daha az bir tepki toplamak ve işlem verileri alır.

Bir uygulama için Protokoller Escherichia coli Tabanlı TX-TL Hücre-Özgür İfade Sistemi

Biyotinile füzyon proteinleri geliştirerek araştırma çeşitli alanlarda birçok potansiyel uygulamalar vardır. Yeniden birleştirici protein mühendisliği özel olarak tasarlanmış proteinlerin yüksek verim sağlayan, düşük maliyetli olan bir düz ön işlemdir.

Sinir doku rejenerasyonu için Çözünür ve Çözünmeyen Biyotinile Proteinlerin ifade, izolasyon ve saflaştırılması

Memeli sistemleri tarafından rekombinant proteinlerin ekspresyonu, yapısal biyoloji için protein kompleksleri üretmek için çekici bir yöntem haline geliyor. Burada, yapısal çalışmalar için protein komplekslerini saflaştırmak için süspansiyonda yetiştirilen memeli hücrelerini kullanan basit ama oldukça verimli bir ekspresyon sistemi sunuyoruz.

Bir Roman ve Erişilebilir Yaklaşım: Yapısal HEK 293F Askı Hücreleri Biyoloji Rekombinant Protein

Burada, yüksek verimde saf, tamamen glikosile edilmiş ve enzimatik olarak aktif proteaz üreten HEK293T hücreleri kullanan uygun maliyetli bir granzim ekspresyon sistemini açıklıyoruz.

Memeli hücrelerinde İnsan Granzymes bir Yüksek Verimli ve Maliyet-etkin İfade Sistemi

Bu, salgılanan, glikosile edilmiş memeli proteinlerinin üretimi ve ardından X-ışını kristalografisi ve diğer biyofiziksel çalışmalar için yeterli homojen protein verimi ile tek aşamalı saflaştırma için hızlı, uygun maliyetli bir protokoldür.

Verimli memeli hücre ekspresyon ve Kristalizasyon için hücre dışı Glikoproteinlerin Tek aşamalı saflaştırma

Ökaryotik proteinlerin uygun translasyon sonrası modifikasyonla laboratuvar ölçeğinde üretimi önemli bir engel teşkil etmektedir. İşte bir memeli ekspresyon sistemi kullanarak protein ekspresyonu için hızlı kuruluş ve geri dönüşe sahip sağlam bir protokol. Bu sistem, seçici amino asidi, proteinlerin seçici etiketlenmesini ve glikan bileşiminin küçük molekül modülatörlerini destekler.

Süspansiyon HEK293 hücrelerinin kısa süreli transfection ile Rekombinant İnsan Proteinlerinin Yüksek Verimli İfadesi

Burada, bitki salgılanan proteinler için protein kristalizasyon büyük miktarlarda üretmek için böcek hücre ve baculovirus protein ifade sistemi kullanan iletişim kurallarını mevcut. Bir baculovirus ifade vektör GP67 ya da böcek hemolin sinyal peptid bitki protein salgılanması ifade böcek hücrelerinde ile değiştirildi.

Bitki proteinleri böcek hücrelerinde salgılanan Baculovirus ifade vektörel çizimler oluşturmak için değiştirme

Bu iletişim kuralı adımları, maliyetleri ve ekipman E. colioluşturmak için gerekli ayrıntıları-hücre özleri dayalı ve 4 gün içinde veya daha az vitro protein sentez reaksiyonları uygulamak. Bu platformun geniş uygulamalar için esnek yapısı kullanabilmeniz için biz uyarlanmış ve en iyi duruma getirilmiş reaksiyon koşulları tartışıyorlar.

Escherichia coli-boş hücre Protein sentezi dayalı: sağlam, esnek ve erişilebilir platform teknolojisi için iletişim kuralları

İnsan zarı taşıyıcılarının yapısal ve biyokimyasal çalışmaları, miligram miktarlarda kararlı, sağlam ve homojen protein gerektirir. Burada, kodon için optimize edilmiş genleri kullanarak insan çözünen taşıyıcı taşıyıcıları taramak, eksprese etmek ve saflaştırmak için ölçeklenebilir yöntemleri açıklıyoruz.

Yapısal ve biyokimyasal çalışmalar için insan çözünen taşıyıcılarının yüksek verimli ekspresyonu ve saflaştırılması

Bu protokol, sentetik hücrelerin yapımında kullanılan Hücresiz Protein Sentezi (CFPS) sistemini tanımlar. Farklı mikro bölmelerde temsili sonuçlarla temel aşamaları ana hatlarıyla belirtir. Protokol, sentetik hücre topluluğundaki çeşitli laboratuvarlar için en iyi uygulamaları oluşturmayı ve sentetik hücre gelişiminde ilerlemeyi ilerletmeyi amaçlamaktadır.

Sentetik hücreler oluşturmak için hücresiz protein sentez sistemi

Öğrenin, insan embriyonik böbrek 293T hücreleri kullanarak salgılanan proteinlerin zaman ve maliyet açısından verimli ekspresyon yöntemini. Bu platform, rekombinant protein üretimi için ölçeklenebilir bir çözüm sunar.

İnsan Hücrelerden salgılanan Proteinlerin Üretimi için Kullanışlı ve Genel Anlatım Platformu

Daha fazla video keşfet