Name: Aerosolize Lipopolisakarid kullanma Yaratma Pulmoner nötrofilisi için bir yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-15T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 33 s
Description: Öğrenin aerosolize LPS kullanarak farelerde akciğer nötrofilisi oluşturma yöntemini. Bu teknik bronkoalveoler lavaj ve immünohistokimyasal analiz ile tutarlı iltihaplanma modelleri sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz usta yardım için Kerstin Thim (AstraZeneca&#39;yı, Lund, İsveç), Benita Dahlberg ve Dr. Anders Eklund (Karolinska Enstitüsünde, Stockholm, İsveç) yanı sıra Dr. Martin STAMPFLI (McMaster Üniversitesi, Hamilton, ON, Kanada) teşekkür etmek istiyorum ve uzman tavsiyesi.

Hayvan çalışmaları Kuzey Stockholm hayvan refahı etik kurulu tarafından onaylandı. Deneysel işlemler İsveç hukuka uygun olarak yapılmıştır. 1. Bir LPS aerosol üretimi <ol><li> S. saflaştırılarak 0.5 g çözülür Hafifçe çalkalama ile 50 ml steril tuzlu su içinde aeruginosa LPS ve çözünme edin. 1 mg / ml&#39;lik nihai bir konsantrasyona kadar, 9 ml steril tuzlu su içinde LPS çözülmüş 1 ml seyreltin. -20 ° C&#39;de alüminyum folyo ve mağaza ile ışıktan koruyun. </li><li> Oda sıcaklığında, karanlıkta, çözünür LPS çözülme ve kullanım öncesinde de hemen karıştırın. </li><li> Bir havalandırılmış seviye II biohazard kaput, bir püskürtücü içine kırmızı bir giriş eklemek, ve üretici (Şekil 1 deneysel cihazlar sunan yorum şeması) tarafından sağlanan boru aracılığıyla basınçlı oda havasına nebulizeri bağlayın. DİKKAT: Uygun kişisel koruyucu ekipman, yarım yüz parça yeniden Respirat dahilveya partikül filtreleri, gözlük, eldiven ve koruyucu giysiler ile maruz kalma sırasında kullanılmalıdır. </li></ol><img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/51470/51470fig1highres.jpg" /> Şekil 1:. Bir aerosolün üretilmesi için kullanılan deneysel cihazların şematik sunumu püskürtücü giriş hava kaynağına bağlanır. nebulizer çıkış önce 15,9 mm boru ve bir hava filtresi ve hava beslemesi ile bir akış ölçere bağlı olan 2 kbar basınçta 5.0 L / m ayarlanır. çıkış çıkarılabilir kapakları ve basınç birikmesini önlemek için 5 mm&#39;lik delikleri ile donatılmış bir pleksiglas kutu bağlı yanındadır. <ol start="4"><li> Bir hava filtresi aracılığıyla bir kitle debi ölçer için nebulizatör çıkışını bağlayın. Bir elektrik kaynağına kitle debi ölçer bağlayın. </li><li> 1.0-2.0 barda kalan basınç, 5 L / dk hava kaynağını ayarlayın. </li><li> Kitle debimetre çıkarın veHava kaynağını ayırın. </li><li> 150 x 163 x 205 mm, çıkarılabilir kapak ile donatılmış: ikiye bölen ve boyutları ile iki pleksiglas kutular bağlanan bir 15,9 mm tüp için nebulizatör çıkışını bağlayın. Her kutu basınç birikmesini önlemek için giriş karşı tarafında bulunan 5 mm&#39;lik bir delik, olmalıdır. </li><li> Her pleksiglas kutuya 5 fareler kadar yerleştirin ve kapaklarını kapatın. </li><li> Nebülizatör açın ve sadece steril tuzlu su ya da aracı madde içinde eritilebilir, en az 4 mi LPS ile ekleme doldurun (steril tuzlu su, cilt 8 ml geçmemelidir). Hava kaynağına giriş yeniden bağlayın. </li><li> Aerosol 10 dakika kapalı pleksiglas kutulara akmasına izin verin. Sürekli hayvanları izleyin. Emin hava besleme nebulizatör girişine sıkıca güvenli kalır emin olun. </li><li> Hava kaynağını ayırın. Kapakları kapalı, hayvanlar 2 dakika pleksiglas kutulara kalsın. </li><li> Kapaklarını açın ve aerosol dağıtmak için izin ve t hayvanların dönmekO kafesleri. Hayvanlar ıslak görünüyorsa, hipotermi önlemek için, düşük ısı ayarlı bir ısıtma yastığı kafesleri yerleştirin. </li><li> İlk 30 dakika boyunca sürekli hayvanları izlemek, ve ilk 6 saat sonra her 2 saatte. Hayvanlar sırasında ve nebulization prosedürü sonra normal solunum paterni ve aktivite göstermelidir. </li></ol> 2. Bronkoalveoler Lavaj (BAL) <ol><li> Kurumunuzun veteriner personeli tarafından tavsiye edilen deneysel uç noktasında, derin etkisi izofluran ile hayvanları uyutmak. Majör cerrahi yapmak için anestezi yeterli derinlik sağlamak için bir geri çekilme refleksi kontrol etmek için arka pençe sıkıştırın. % 70 etanol ile hayvanların kürk aşağı püskürtün. </li><li> Makas kullanırken karın açın ve hayvan asıl bulbus olfaktoryusları için aort sever. Kan emmek için karın üzerine doku parçası yerleştirin. </li><li> Ötenazi follwing, makas tek ön-arka kesim kullanıntoraks maruz. Sternum ön ucu ile göğüs kafesi yukarı kaldırın ve herhangi bir akciğer lobunun içine kesmeden, en ventral noktada diyaframı delmek için makas kullanın. Ön-arka yönde iki kesim (çene altındaki toplantı) yaparak göğüs kafesi açın. </li><li> Yavaşça forseps kullanarak göğüs kafesi dışında çekin ve gırtlak altında trakea kesti. </li><li> Forseps ile trakea yukarı kaldırın ve göğüs boşluğuna lobu bağlayan ligament kesme ve hafifçe adipoz ve kardiyak doku tarafından çekerek akciğerleri kaldırmak. </li><li> Bir polietilen tüp (: 0.58 mm; dış çap: iç çapı 0.965 mm) takın trakea içine ve ipek iplik bir dize ile tüp sabitleyin. </li><li> Ipek iplik ile multilobe (sağ akciğerin dört lobu) kapalı kravat. </li><li> Polietilen boru içine bir 23 gog iğne yerleştirin ve yavaşça 1 ml şırınga ile bir lob içine buz soğukluğunda steril PBS 250 ul enjekte edilir. </li><li> Dikkatle akciğerleri dokunun30 kat ve şırınga yoluyla sıvının toplanması. 200 ul PBS ile işlemi tekrarlayın (yaklaşık 300 ul PBS 450 ul toplam enjekte birimden tek lob kurtarıldı olmalıdır). </li><li> Buz üzerinde BAL sıvısında (BAL) tutun, ya da hemen BAL hücreleri numaralandırmak. Hücreleri 11 leke Türk çözümünü kullanarak, bir heamocytometer hücreleri sayın. Boyama çözeltisi seyreltme faktörü ve heamocytometer ve sayılan alanında hacmi ile hücrelerin sayısı çarpılarak toplam hücre sayısını hesaplayın. </li><li> Başka bir yerde 11 açıklandığı gibi sitosantrifüjden geçirilidi hücrelerden farklı hücre sayımları hazırlayın. </li></ol> Histolojik Değerlendirme Akciğer Doku 3. Formol Fixation <ol><li> Multilobe çıkarın ve ek-freeze kuru buz üzerinde. -80 ° C&#39;de saklayın. </li><li> Bir metal destek standı kaldırıldı piston ile 60 ml şırınga monte edin. % 10 formalin şırınga doldurunSabit basınç 20 cm temsil laboratuvar tezgah üstünde 20 cm, yüksekliği. </li><li> Formalin akışını kontrol etmek için bir valf ile bir plastik tüp ile 60 ml şırınga trakea sabitlenmiş 23 gauge iğne bağlayın. </li><li> 5 dakika boyunca formalin ile akciğer lobunun insuflasyon. İğneyi çıkarın ve ipek iplik çekerek trakea kapatmak ve akciğer basıncı korumak için ise trakea polietilen tüp ile birlikte çıkarın. </li><li> Formalin akciğer lobu Batmak ve 4 ° C&#39;de 24 saat saptamak. </li><li> % 70 etanol ile en az 20 dakika boyunca sabit bir dokuya üç kez yıkayın ve aşağıdaki rejimi (1 saat her biri) ile ksilen dihidrat: <ul><li> 3x% 70 etanol </li><li> 3x% 95 etanol </li><li> 3x% 100 etanol </li><li> 3x ksilen </li><li> 1x (sıvı) parafin </li></ul></li><li> Hematoksilin ve eosin ile Embed susuz 4-5 mikron bölümleri kesilmiş parafin doku, ve leke histolojik değerlendirme için izin verir.</li>
</ol>

<ol><li>King, J. D., Kocincova, D., Westman, E. L., Lam, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+Lipopolysaccharide+biosynthesis+in+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immun%22%5BJournal%5D)">Review: Lipopolysaccharide biosynthesis in Pseudomonas aeruginosa.</a> Innate Immun. 15, 261-312 (2009).</li>
<li>Grommes, J., Soehnlein, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contribution+of+neutrophils+to+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Contribution of neutrophils to acute lung injury.</a> Mol Med. 17, 293-307 (2011).</li>
<li>Pesci, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflammatory+cells+and+mediators+in+bronchial+lavage+of+patients+with+chronic+obstructive+pulmonary+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Inflammatory cells and mediators in bronchial lavage of patients with chronic obstructive pulmonary disease.</a> Eur Respir J. 12, 380-386 (1998).</li>
<li>Hoogerwerf, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+Inflammation+Induced+by+Lipoteichoic+Acid+or+Lipopolysaccharide+in+Humans%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Lung Inflammation Induced by Lipoteichoic Acid or Lipopolysaccharide in Humans.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 178, 34-41 (2008).</li>
<li>Scheuchenzuber, W. J., Eskew, M. L., Zarkower, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+humoral+responses+to+Escherichia+coli+and+sheep+red+blood+cell+antigens+introduced+via+the+respiratory+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Lung+Res%22%5BJournal%5D)">Comparative humoral responses to Escherichia coli and sheep red blood cell antigens introduced via the respiratory tract.</a> Exp Lung Res. 13, 97-112 (1987).</li>
<li>Asti, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide-induced+lung+injury+in+mice.+I.+Concomitant+evaluation+of+inflammatory+cells+and+haemorrhagic+lung+damage%5BTitle%5D)+AND+%22Pulm+Pharmacol+Ther%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide-induced lung injury in mice. I. Concomitant evaluation of inflammatory cells and haemorrhagic lung damage.</a> Pulm Pharmacol Ther. 13, 61-69 (2000).</li>
<li>Brand, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Total+deposition+of+therapeutic+particles+during+spontaneous+and+controlled+inhalations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+pharmaceutical+sciences%22%5BJournal%5D)">Total deposition of therapeutic particles during spontaneous and controlled inhalations.</a> Journal of pharmaceutical sciences. 89, 724-731 (2000).</li>
<li>Liu, F., Li, W., Pauluhn, J., Trubel, H., Wang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide-induced+acute+lung+injury+in+rats%3A+comparative+assessment+of+intratracheal+instillation+and+aerosol+inhalation%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide-induced acute lung injury in rats: comparative assessment of intratracheal instillation and aerosol inhalation.</a> Toxicology. 304, 158-166 (2013).</li>
<li>Skerrett, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+type+1+TNF+receptor+in+lung+inflammation+after+inhalation+of+endotoxin+or+Pseudomonas+aeruginosa%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+-+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Role of the type 1 TNF receptor in lung inflammation after inhalation of endotoxin or Pseudomonas aeruginosa.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 276, L715-L727 (1999).</li>
<li>Roos, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+epithelial-C%2FEBPbeta+contributes+to+LPS-induced+inflammation+and+its+suppression+by+formoterol%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Lung epithelial-C/EBPbeta contributes to LPS-induced inflammation and its suppression by formoterol.</a> Biochem Biophys Res Commun. 423, 134-139 (2012).</li>
<li>Didon, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lung+epithelial+CCAAT%2Fenhancer-binding+protein-beta+is+necessary+for+the+integrity+of+inflammatory+responses+to+cigarette+smoke%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Lung epithelial CCAAT/enhancer-binding protein-beta is necessary for the integrity of inflammatory responses to cigarette smoke.</a> Am J Respir Crit Care Med. 184, 233-242 (2011).</li>
<li>Silverpil, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Negative+feedback+on+IL-23+exerted+by+IL-17A+during+pulmonary+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Innate+Immunity%22%5BJournal%5D)">Negative feedback on IL-23 exerted by IL-17A during pulmonary inflammation.</a> Innate Immunity. 19, 479-492 (2013).</li>
<li>Mercer, P. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteinase-Activated+Receptor-1%2C+CCL2+and+CCL7+Regulate+Acute+Neutrophilic+Lung+Inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+Cell+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Proteinase-Activated Receptor-1, CCL2 and CCL7 Regulate Acute Neutrophilic Lung Inflammation.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. , (2013).</li>
<li>Korkmaz, B., Horwitz, M. S., Jenne, D. E., Gauthier, F. Neutrophil Elastase, Proteinase 3, and Cathepsin G as Therapeutic Targets in Human Diseases. Pharmacological Reviews. 62, 726-759 (2010).</li>
<li>Bafadhel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Exacerbations+of+COPD%3A+Identification+of+Biological+Clusters+and+Their+Biomarkers%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Acute Exacerbations of COPD: Identification of Biological Clusters and Their Biomarkers.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. , 201104-200597 (2011).</li>
<li>Hurst, J. R., Perera, W. R., Wilkinson, T. M. A., Donaldson, G. C., Donaldson, G. C., Wedzicha, G. C. Systemic and Upper and Lower Airway Inflammation at Exacerbation of Chronic Obstructive Pulmonary. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHurst%2C+JR+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22">Am. J. Respir. Crit. Care Med</a>. 173, 71-78 (2006).</li>
<li>Rabe, K. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Strategy+for+the+Diagnosis%2C+Management%2C+and+Prevention+of+Chronic+Obstructive+Pulmonary+Disease%3A+GOLD+Executive+Summary%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Global Strategy for the Diagnosis, Management, and Prevention of Chronic Obstructive Pulmonary Disease: GOLD Executive Summary.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 176, 532-555 (2007).</li>
</ol>

İbrahim Roos Boehringer Ingelheim, AstraZeneca Ar-Ge ve AstraZeneca Ar-Ge bir araştırma bursu seyahat hibelerinden öğretim ücreti aldı. Magnus Nord AstraZeneca Ar-Ge tam zamanlı çalışan ve AstraZeneca Ar-Ge araştırma hibe aldı. Johan Grunewald ve Tove Berg AstraZeneca Ar-Ge tarafından finanse alakasız bir araştırma projesi üzerinde birlikte araştırmacılar vardır.

Aerosol haline LPS epitel alt mukozada nötrofiller tarafından karakterize edilen solunum yolları enflamatuar bir tepki üretir, iletken hava yolları, hem de alveoler boşluk çevreleyen alanlarda. Bu arada plazma sızıntı, akut akciğer hasarı patoloji temsilcisi göstergesidir BAL&#39;da artan toplam protein içeriği ile vardır. LPS steril iltihabı teşvik olarak, reaksiyon adaptif bağışıklık tepkisinin bağımsızdır ve bakteriyel enfeksiyonlara karşı ilgisi sınırlamalar vardır. teknik, bununla birlikte, adaptif bağışıklık tepki...

Lipopolisakarid (LPS), gram negatif bakterilerin 1 &#39;in bir hücre duvarı bileşeni. LPS meydan akut akciğer hasarı, akut nötrofilik inflamasyon ve ödem 2 ile karakterize bir sendrom iyi belgelenmiş bir modeldir. Buna ek olarak, pulmoner nötrofilinin da KOAH alevlenme 4 modellemek için kullanılır olmuştur kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH) 3, ve insanlarda LPS bir özelliğidir. Böylece, LPS maruz deneysel modeller klinik insan patoloji anlamak için ilgili ve değerli araçlardır. Burada tarif edilen aerosol haline LPS&#39;nin pulmoner yoldan amacı, sistemik katılımı olmadan iletken ve solunum yollarının bir nötrofilik inflamatuar yanıtı elde etmektir. LPS meydan okumasının çeşitli teknikleri, daha önce tarif edilmiştir. LPS&#39;nin damardan zerk edilerek verilme yolu, en yaygın olarak kullanılan bir yoldur. Bu teknik, kolayca erişilebilir, ancak, tO birincil hasar akciğere nötrofil göç aşağıdaki pulmoner epitel ikincil yıkımı ile, endotel olduğunu. İçi venöz yönetimi de hayvan modellerinde klinik tabloyu komplike edebilir sistemik inflamasyon 2, uyarmaktadır. Sistemik inflamasyon içi trakeal için elde edilmemiştir tersidir. Bu teknik, bununla birlikte, emek yoğun ve anestezi hem de önemli bir eğitim 5, 6 gerektirir. Bundan başka, bu uygulama yoluyla pulmoner birikimi nefes 7 bağlıdır. Bu nedenle, pulmoner birikimi solunum yollarında içi trakeal yönetim ve değişken yerleştirme gözlenebilir için gerekli anestezinin derinliği ile etkilenir. Bunun aksine, aerosol haline getirilmiş LPS ile pulmoner uygulama minimum eğitim gerektirir ve kolayca küçük hayvanların çok sayıda ya da bireyler 5, 8 arasında bir varyasyon gerçekleştirilebilir.Yeni bir çalışmada, solunum hacmi birikimi ile ilgili içi trakeal yönlendirmek için üstün olduğunu, ve LPS&#39;nin daha fazla dozları bu modele 8 nötrofilik enflamasyonu doğrulamaktadır. Aerosol Pseudomonas aeruginosa LPS alveoller 9, 10 de dahil olmak üzere solunum yolu lümeni ve akciğer parankimi, belirgin bir inflamatuar yanıt oluşturur Önceki çalışmalar meydan göstermiştir. inflamasyon nötrofil ve pulmoner ödem varlığı, bir üstünlük kurmasıyla karakterize edilir ve bu nedenle, akut akciğer hasarı patogenezini ele almak ve hastalık patolojisine katkıda mekanizmaların daha ayrıntılı bilgi edinmek için kullanılabilir.

<table><tbody><tr><td>Saflaştırılmış &lt;em&gt;Pseudomonas aeruginosa&lt;/em&gt; LPS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>Zararlı. Saflaştırma önerilir. Diğer bakterilerden saflaştırılmış LPS kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Pari LC sprint star nebulizatör</td><td>PARI Respiratory Equipment Inc.</td><td>023G1250</td><td></td></tr><tr><td>TSI kütle akış ölçer 4040</td><td>TSI</td><td>4040</td><td>Tedarikçiden alternatif ürün kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Saint-Gobain 15.9 mm Tygon tüp</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z685704</td><td>Önerilen marka.</td></tr><tr><td>Çıkarılabilir kapaklı Pleksiglas kutular</td><td>Özel yapım</td><td>N/A</td><td>150 x 163 x 205 mm (yan tarafta 2 mm'lik bir delik).&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>3M Yarım Yüz Reusable Respiratör</td><td>3M</td><td>7503</td><td>Önerilen marka.</td></tr><tr><td>3M Gelişmiş Partikül Filtreleri (P100)&amp;nbsp;</td><td>3M</td><td>2291</td><td>Önerilen marka.</td></tr><tr><td>Makas</td><td>VWR</td><td>233-1104</td><td>Tercih edilen makaslar kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Pens</td><td>VWR</td><td>232-1313</td><td>Tercih edilen pensler kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Intramedic PE50 polietilen tüp</td><td>BD</td><td>427411</td><td>Önerilen marka.</td></tr><tr><td>Ethicon 2-0 Perma-hand ipek iplik</td><td>VWR</td><td>95056-992</td><td>Önerilen marka.</td></tr><tr><td>26 &amp;frac12; gauge iğne</td><td></td><td></td><td>Alternatif tedarikçiler mevcuttur.</td></tr><tr><td>1 ml BD slip-tip şırınga, steril değil</td><td><a href="http://catalog.bd.com/bdCat/viewProduct.doCustomer?productNumber=301025" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BD</a></td><td>301205</td><td>Alternatif tedarikçiler mevcuttur.</td></tr><tr><td>60 ml BD Luer-Lok şırınga, steril değil, polipropilen</td><td>BD</td><td>301035</td><td>Alternatif tedarikçiler mevcuttur.</td></tr><tr><td>Fluka Hematoksilen-Eozin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>3972</td><td>Alternatif tedarikçiler mevcuttur.</td></tr><tr><td>T&amp;uuml;rk çözeltisi</td><td>Merck Millipore</td><td>109277</td><td></td></tr><tr><td>Masaüstü santrifüj</td><td></td><td></td><td>Alternatif üreticiler mevcuttur.</td></tr><tr><td>Cytospin 4 sitosantrifüj</td><td>Thermo Scientific</td><td>A78300003</td><td>Alternatif santrifüj kullanılabilir.</td></tr><tr><td>HEMA-3 stat paket</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-123-869</td><td>Alternatif boyama kitleri mevcuttur.</td></tr><tr><td>Formalin çözeltisi, nötr tamponlu, %10</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td>Alternatif tedarikçiler mevcuttur.</td></tr></tbody></table>

aerosolize lipopolisakarid kullanma yaratma pulmoner nötrofilisi için bir yöntem

A Method for Generating Pulmonary Neutrophilia Using Aerosolized Lipopolysaccharide

Akut akciğer hasarı (ALI) tedavi seçenekleri kısıtlı ve yüksek mortalite ile alveol nötrofilisi ile karakterize ciddi bir hastalıktır. ALI Deneysel modeller hastalığın patogenezinde anlayışımızı arttırmak anahtardır. Gram pozitif bakterilere türetilen Lipopolisakarid (LPS) nötrofilik hava yollarında inflamasyon ve farelerin akciğer parankimi neden olur. LPS gibi bileşiklerin etkin pulmoner şevki, Bununla birlikte, elde etmek zordur. Burada tarif edilen bir yaklaşımda, fareler pulmoner uygulama, aerosol, Pseudomonas aeruginosa, LPS meydan okumasının elde edilir. Çözünmüş LPS basınçlı hava bağlı bir püskürtücü ile aerosol edildi. Fareler, aerosol kesildikten sonra 2 dakika havalandırma ve ardından, 10 dakika boyunca bir pleksiglas kutuya LPS aerosol sürekli bir akışına maruz bırakılmıştır. Formalin perfüzyon ardından entübasyon ve sonraki bronkoalveoler lavaj, sonraki steril p karakterizasyonu için olanak sağlayan, yapıldıulmonary inflamasyon. Aerosolize LPS bronkoal- lavaj ve histolojik değerlendirilmesi ile tespit alveol nötrofilisi ile karakterize bir akciğer iltihabı, üretir. Bu teknik birkaç aletleri ile küçük bir maliyetle kurmak ve minimal eğitim ve uzmanlık gerektirir. pozlama sistemi böylece rutin akciğer patolojisi anlayışımızı geliştirmek için potansiyele sahip, herhangi bir laboratuvarda yapılabilir.

Aerosollaştınlmış P. Mücadelesi aeruginosa LPS genellikle erken ve geç zaman noktalarında hem de nötrofillerin bir üstünlüğü ile karakterize solunum yolu lümeni ve alveollerde, belirgin bir inflamatuar yanıt verir. Aerosol haline LPS pulmoner nötrofiliyi indükler C57BL / 6BY ve BALB / c fareleri, aerosol P. maruz bırakıldı aeruginosa LPS veya tek başına araç ve nötrofiller BAL&#39;da sayıldı. C57BL taşıyıcı ile oluşturulan bir aer...

Biz akut akciğer hasarı modeli, nebülizasyonu tarafından aerosolleşmiş lipopolisakkaride meydan tarafından nötrofilik akciğer inflamasyonu uyarılması için bir yöntem açıklanmaktadır. Buna ek olarak, akciğer izolasyonu, entübasyon ve bronkoalveoler lavaj temel cerrahi teknikler de tarif edilmiştir.

Aerosolize Lipopolisakarid kullanma Yaratma Pulmoner nötrofilisi için bir yöntem

Acute lung injury (ALI) is a severe disease characterized by alveolar neutrophilia, with limited treatment options and high mortality. Experimental models ...

Bu prosedürün genel amacı, aerosolize LPS maruziyeti yoluyla tutarlı ve tekrarlanabilir havayolu nötrofilisi oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle salin içinde süspande edilmiş LPS'nin bir maruziyet odasına bağlı nebülizöre doldürülmesiyle gerçekleştirilir. Ardından fareler aerosolize LPS'ye maruz bırakılır, sonrasında bronkoalveoler lavaj toplanır ve lavajdaki inflamatuar hücreler sayılır.Son olarak, akciğer dokusu, gömme, kesit alma ve immünohistokimyasal analiz için formalinde fikse edilir. Nihayetinde, bronkoalveoler lavajın toplam ve diferansiyel hücre sayımları, akciğerlere nötrofil göçünü değerlendirmek için kullanılabilir. Bu tekniğin, intratrakeal LPS uygulaması gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajları; aerosolize LPS'nin akciğerler boyunca eşit dağılımı, uygulama kolaylığı ve başarılı uygulama için gereken eğitimin minimum düzeyde olmasıdır. Uygun KKD kullanarak ve havalandırmalı seviye iki biyotehlike kabini içerisinde bir LPS aerosolu oluşturmak için, önce nebulizöre kırmızı bir giriş takarak başlayın ve ardından nebulizörü, üretici tarafından sağlanan borularla basınçlı oda havasına bağlayın.Ardından, nebülizör çıkışını bir hava filtresi kullanarak bir kütle akış ölç

a-method-for-generating-pulmonary-neutrophilia-using-aerosolized

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Biz patojenleri fagosite veya nötrofil ekstrasellüler tuzakları (NET) üretirken enfekte akciğerlerde nötrofil granülositler dinamiklerinin gözlem için 2-foton mikroskopi nasıl kullanılacağını göstermektedir.

2-foton Mikroskop kullanarak Enfekte Akciğerler Nötrofiller Fagositoz ve NET-oluşumu Doğrudan Gözlem

Source: Yuan, Z., et al. Bronchoalveolar Lavage Exosomes in Lipopolysaccharide-induced Septic Lung Injury. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates an in vivo mouse model for inducing and analyzing acute lung injury (ALI) using intraperitoneal administration of bacterial lipopolysaccharide. The inflammatory cascade triggered by alveolar macrophages and neutrophils leads to epithelial and endothelial barrier disruption, allowing fluid and immune cells to accumulate in the alveoli. Alveolar...

Lipopolysaccharide-Induced Acute Lung Injury in Mice for Exosome and Immune Analysis

Bu videoda, farelerin deri altı dokusunda bir hava torbası oluşturma ve in vivo  lipopolisakkarit uygulamasına yanıt olarak inflamatuar eksüdaları toplama prosedürü açıklanmaktadır.Bu video aynı zamanda hava torbasındaki nötrofil infiltrasyonunun analizini de kapsar.

Lipopolisakkarit ile İndüklenen İnflamatuar Eksüda Toplama için Bir Hava Torbası Fare Modeli

Patojen enfeksiyonuna karşı konak bağışıklık tepkisi sıkı bir şekilde düzenlenmiş bir süreçtir. Farelerde bir lipopolisakarit akciğer maruz modeli kullanarak, bu hastalığın patojenezi ile ilgili kompleks mekanizmalar yüksek çözünürlüklü değerlendirme yapmak mümkündür.

Farelerde Host immün yanıtı değerlendirmek için Orofarengeal intratrakeal PAMP İdaresi ve Bronchoalveolar Lavage Kullanımı

Bu çalışma, farelerde akut pnömokok pnömonisine karşı koruma sağlamak için akciğerlerde doğuştan gelen bağışıklık tepkisini artırmak için dil altı immünoterapisinin kullanılmasının rahatlığını göstermektedir.

Alternatifi olarak dilaltı immünoterapi Akut Solunum Enfeksiyonları Karşı Koruma tetikleyebilecek

Çeşitli yöntemler, farelerde bakteriyel pnömoni modelleme için literatürde tarif edilmiştir. Bu yazıda, orofarinksin pipetle bakteriyel inokulum aspirasyonu (yani, inhalasyon) yoluyla zatürree uyarılması için bir non-invaziv, ucuz, hızlı bir yöntem açıklanmaktadır. akciğer doğal bağışıklık yanıtının değerlendirilmesi için aşağı akış yöntemleri de ayrıntılı olarak açıklanmıştır.

Farelerde Deneysel Bakteriyel Pnömoni İndüksiyonunun ve fenotipleme bir Non-invaziv ve Teknik Olmayan yoğun Yöntem

Fareler için mayi LPS maruz miRNAs ile paketlenmiş exosomes solunum-alveoler lavaj (BAL) sıvı salgılar. Ortak kültür sistemiyle, biz BAL sıvısı serbest exosomes ifade bronş epitel hücrelerdeki sıkı kavşak proteinlerin bozabilir ve akciğer hasarı vurgulamak pro-inflamatuar sitokinlerin ifade artış gösteriyor.

Bronchoalveolar lavaj Exosomes septik akciğer Lipopolysaccharide kaynaklı yaralanmalarında

Burada sunulan bir adım-adım prosedür doğrudan intratrakeal lipopolisakkarid instilasyon tarafından fareler akut akciğer hasarı neden ve kan örnekleri, Bronkoalveoler Lavaj sıvısı ve akciğer dokusu FACS analizi gerçekleştirmek için. Minimal invasiveness, basit kullanım, iyi reproducibility, ve hastalık şiddeti titrasyon bu yaklaşımın avantajlarıdır.

Doğrudan Intratracheal Lipopolysaccharide Instilasyon ile farelerde akut akciğer hasarının İndükleme

Kombine ozon ve bakteriyel endotoksin maruz fareler nötrofiller de dahil olmak üzere geniş yayılmış hücre ölümü gösterir. Sitoskeletal lamellipodia'nın bozulması, karmaşık V ATP sintaz alt β birliğinin hücresel ekspresyonunun artması ve bronko-alveoler lavajda anjiyostatin, akciğer immün yanıtının baskılanması ve nötrofil alımının gecikmesi gibi hücresel adaptasyonları gözlemledik.

Kombine Ozon ve LPS kaynaklı Murine Akut Akciğer Hasarı Sırasında Akciğer Hücresel Adaptasyonlarının Görselleştirilmesi

Burada, noninvaziv orofaringeal endotrakeal entübasyon yoluyla intratrakeal lipopolisakkarit (LPS) doğumu için bir protokol öneriyoruz. Bu yöntem, hayvan için cerrahi prosedürün travmasını en aza indirir ve LPS'yi trakeaya ve daha sonra akciğerlere doğru bir şekilde iletir.

Farelerde Noninvaziv İntratrakeal Lipopolisakkarit Damlatma

Bu çalışmada, invaziv olmayan endotrakeal instillasyon tekniğinin, akciğerlere hassas LPS iletimi sağlamak için temel bir laringoskop kullanılarak sıçanlarda ALI geliştirdiği gösterilmiştir. LPS, laringoskop kullanılarak endotrakeal tüp aracılığıyla yerleştirilir. Akciğer yaralanmasının büyüklüğü birden fazla zaman noktasında değerlendirilir.

Kemirgenlerde akut akciğer hasarını indüklemek için lipopolisakkaridin invaziv olmayan endotrakeal uygulaması

Öğrenin aerosolize LPS kullanarak farelerde akciğer nötrofilisi oluşturma yöntemini. Bu teknik bronkoalveoler lavaj ve immünohistokimyasal analiz ile tutarlı iltihaplanma modelleri sağlar.

Aerosolize Lipopolisakarid kullanma Yaratma Pulmoner nötrofilisi için bir yöntem

Daha fazla video keşfet