İzole Kan-perfüze Sıçan Akciğer Hazırlık Tek Mikrodamar Geçirgenliği miktarının

Bu prosedürün genel amacı, floresan tabanlı bir yöntem kullanarak izole edilmiş sıçan akciğerlerindeki tekil mikro damarların geçirgenliğini nicelleştirmektir. Bu işlem, öncelikle sıçan akciğerlerinin izole edilmesi ve otolog kan ile perfüzyonlarının yapılmasıyla gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, floresan işaretli dekstrin infüze etmek için akciğerin küçük bir bölgesine sol atriyum mikrokateterinin yerleştirilmesidir.

Ardından, işaretli dekstrin infüzyonu yapılırken akciğer mikro damarlarının görüntüleri toplanır. Son adım, yazılım kullanarak görüntülerden tekil mikrodamarların geçirgenliğini nicelleştirmektir. Nihayetinde sonuçlar, LPS tedavisi sonrası gibi farklı koşullar altında akciğer mikro damarlarının geçirgenlik derecesini gösterebilir.

Bu prosedür, laboratuvarımdan doktora sonrası araştırmacı Dr. Kava Kasami tarafından gösterilecektir. Öncelikle, anestezi düzlemi doğrulanmış erkek bir sıçana trakeotomi uygulayarak başlayın. PE 90 trakeal kanül kullanın ve bunu sütürlerle sabitleyin. Ardından, 21 gauge kelebek iğne kullanarak kalbe 100 ila 200 ünite heparin infüze edin.

Bir dakika bekleyin ve ardından kanı boşaltın. Kanı toplayın ve salin ile birlikte kenara ayırın. Üç milimetrelik tigon tüplerden yapılmış, dört santimetre uzunluğunda ve bir ucu genişletilmiş iki kanülü doldurun.

Şimdi bir torakotomi gerçekleştirin. Sağ ventriküle kanülü yerleştirecek kadar küçük bir insizyon yapın ve bir kanülün genişletilmiş ucunu pulmoner artere doğru kaydırın. Kanülü sütürlerle sabitleyin.

Diğer kanülü sol ventrikülün apeksinden sol atriyuma doğru yerleştirmek için aynı tekniği kullanın. Kanülü iki milimetre genişliğinde göbek kordonu şeridi ile sabitleyin. Şimdi engel olan bağ dokularını temizleyin ve akciğeri ve kalbi kanülleriyle birlikte çıkarın.

Bunları, akciğerin diyafragmatik yüzeyi yukarı bakacak ve üç kanülün tamamı aynı hizada olacak şekilde bir Petri kabına aktarın. Diseksiyonu yapılmış preparatı, basınç dönüştürücülerine bağlı olan ve giriş-çıkış tüpleri görevi gören 18 numara tigon tüplerle donatılmış ayarlanabilir bir tablaya taşıyın. Şimdi, toplanan kanı eşit hacimde %5 albumin çözeltisi ile karıştırın.

Bu karışımı yükleme haznesine ekleyin. Pompayı dakikada 14 mililitre hızda başlatın. Borularda hava kabarcığı olmadığından emin olun.

Hazırlık aşamasında. Pulmoner arteri akciğer giriş tüpüne ve sol atriyum kanülünü çıkış tüpüne bağlayın. Tüplerde hava kalmadığından iki kez emin olun ve ayrıca şantın açık olduğunu kontrol edin.

Trakeal kanülü üçüncü bir basınç dönüştürücüye bağlayın. Akciğerleri trakeal kanül aracılığıyla %30 oksijen ile şişirin. Akciğerleri beş santimetre su basıncında tutun.

Şimdi şantı klempleyiniz ve pompayı dakikada 14 mililitre hızda çalıştırın. Perfüzyon sırasında akciğer perfüzyonuna başlamak için, pompa ayarını pulmoner basıncı yaklaşık 10 santimetre su seviyesinde ve sol atriyum basıncını üç santimetre su seviyesinde tutacak şekilde düzenleyin. Kan infüze edilmiş akciğeri hazırlayarak başlayın.

Öncelikle, 30 santimetre uzunluğundaki bir PE 90 tüpün içine yerleştirilmiş 40 santimetre uzunluğundaki bir PE 10 tüp kullanarak bir infüzyon kateteri hazırlayın. PE 10 tüpün diğer ucunu, bir cc'lik bir şırıngaya takılı 30 gauge'lik bir iğneye bağlayın. Akciğere bağlı olan tüpün ucunu preparasyonun üzerine getirin ve infüzyon kateterini buraya takın.

İnfüzyon kateterini sol atriyuma ve ardından dirençle karşılaşana kadar akciğere doğru yönlendirin. Aşırı kuvvet uygulamak akciğere zarar verecektir. Mikrokateterin uygun şekilde yerleştirilmesi kritiktir; çünkü mikrokateterin akciğere vereceği herhangi bir zarar protokolün başarısını azaltacaktır.

Ardından, şırıngayı Ringer çözeltisi ile doldurun ve bir pompaya bağlayın. Çözeltiyi dakikada 10 µL hızla yavaşça infüze edin. Zamanla, infüzyon bölgesi akciğerin geri kalanına kıyasla soluklaşacaktır; infüzyon bölgesi hariç akciğer yüzeyini nemli tutmak için plastik içerisinde hızla muhafaza edin.

Şimdi akciğeri görselleştirmek için, 22 milimetrelik bir lam üzerine bir O-ring takarak bir izleme penceresi oluşturun. Musluk gresi kullanarak O-ring'i bir deney tüpü tutucusuna sabitleyin. Ardından pencereyi infüzyon bölgesinin üzerine yerleştirin.

20x objektifi lamelin üzerine getirerek ve akciğere odaklanarak kurulumu tamamlayın. Herhangi bir görsel bozulma beklenmez. Şimdi akciğere seçtiğiniz bir çözeltiyi infüze edin.

Bu örnekte, serum fizyolojik uygulamasının ardından, şırınga pompası aracılığıyla 60 dakika boyunca akciğere bir mililitre ZI konjuge dekstrin infüze edilir. Görüntüleme yazılımını kullanarak bir saatlik infüzyon boyunca dakikada bir görüntü kaydedin ve sonraki yıkama adımı sırasında 10 dakika daha kayıt almaya devam edin. Fit dekstrin infüze edildikten sonra, akciğere aynı akış hızında en az 10 dakika daha Ringer solüsyonu infüze ederek yıkama işlemini gerçekleştirin. Daha sonra, elde edilen görüntüler analiz edilirken, fit e infüzyonu sırasında ilgi bölgesindeki maksimum floresan yoğunluğu puanlayın.

Ardından, 10 dakikalık yıkama sonrası kalan floresan yoğunluğunun maksimum değerini belirleyin. Vasküler permeabilitedeki değişiklikler, LI'nin yaygın olarak kullanılan bir modeli olduğu için, bakteriyel lipopolisakkarit tedavisi sonrası fitzi dekstrin infüzyonu kullanılarak incelenmiştir. Ringer ile işlem görmüş mikrodamlarlarda kalan fit e floresansı düşükken, LPS ile işlem görmüş olanlarda yüksekti. Ayrıca, ringer infüzyonu ile karşılaştırıldığında, LPS infüzyonu permeabilite indeksinde anlamlı bir azalmaya neden olmuş ve bu durum görüntü alanı içindeki tüm damarlarda genel bir permeabilite artışına işaret etmiştir.

Ayrıca, ringer infüzyonu ile karşılaştırıldığında, LPS infüzyonu geçirgenlik indeksinde anlamlı bir azalmaya neden olmuş ve bu durum, görüntü alanındaki tüm damarlarda genel bir geçirgenlik artışına işaret etmiştir. Bu videoyu izledikten sonra, izole kuş akciğerlerinin nasıl hazırlanacağı, sol kuyruk mikrokateterinin nasıl yerleştirileceği ve mikro düzeyde geçirgenliğin nasıl tanımlanacağı konusunda iyi bir anlayış geliştirmiş olmalısınız.