Name: İzole Kan-perfüze Sıçan Akciğer Hazırlık Tek Mikrodamar Geçirgenliği miktarının (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 22 s
Description: Öğrenin, izole kan-perfüze sıçan akciğerlerinde tek mikrodamar geçirgenliğini floresan görüntüleme ile nasıl ölçebilirsiniz. Bu yöntem, damar biyolojisi ve akciğer fonksiyonu araştırmalarında değerli bilgiler sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Çalışmalar KP NIH HL75503 tarafından desteklenmiştir.

Tennessee Sağlık Bilimleri Merkezi Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmış hayvanlar üzerinde gerçekleştirilen tüm deneyler vardı. Perfüze Rat Akciğer Hazırlıkları 1. Boru <ol><li> Şekil 1 &#39;de gösterildiği gibi, basınç dönüştürücüleri (P23XL) takın. Kan akışı için Tygon boru (# 18) ile bir boru sistemi hazırlamak ve mikroskop sahnede boru yerleştirin. </li><li> 37 ° C su banyosu sıcaklığını ayarlama </li><li> Akciğer girişini bağlayın ve Tygon boru ile geçici çıkış. </li></ol><img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51552/51552fig1highres.jpg" width="500" /> Şekil 1.. Kan perfüzyon hortum. Şematik izole akciğer hazırlık aracılığıyla kan sirkülasyonu için kullanılan boru kurulumunu göstermektedir. Ayrıca, ilişkili bileşenleri gösterilen, üzerinden boru is yönlendirilir. Kalp ve akciğer şematik boru ve pulmoner arter (PA) arasındaki bağlantı siteleri göstermek için dahil, ve atriyal (LA) kanül (mavi kesik çizgiler) bırakılır. İzole Sıçan Akciğerler 2. Hazırlanması <ol><li> Ketamin (80-100 mg / kg) ve ksilazin (5-10 mg / kg) ile, sıçanlar (250-300 gr ağırlığında erkek Sprague-Davvley fareleri) anestezisi. Anestezi cerrahi bir uçak ettikten sonra, bir yatar pozisyonda hayvan. </li><li> Trakeostomi gerçekleştirin, bir trakeal kanül (PE-90) takın ve cerrahi sütür ile sabitleyin. </li><li> Kardiyak ponksiyon (21 G kelebek iğne) ile kalp içine heparin (100-200 U) demlendikten, 60 saniye ve asıl bulbus olfaktoryusları alındı ​​kan (~ 12-15 ml kan) için bekleyin. </li><li> İki kanüller (, 4 cm uzunluğunda, Tygon boru donanımı, 3 mm çap, bir ucunda genişleyen) hazırlamak ve tuzlu su ile doldurun. </li><li> Bir torakotomi gerçekleştirin. Sağ ventrikül üzerinde bir kesik (3 mm) yapın ve pulmoner doğru kesi bir kanül geniş uç slaytarter. Cerrahi sütür ile pulmoner arter kanül güvenli. </li><li> Sol ventrikül tepe (3 mm) ve İnsizyon kesi içine ikinci kanül geniş uç kaydırın. Sol atrium içine kanül yönlendirin. Göbek bandı (2 mm genişlik) ile sol ventrikül kanül güvenli. </li><li> Herhangi bir bağ dokusu disseke ve ekli kanüller ile birlikte akciğer ve kalp kaldırmak. Bir petri üzerinde akciğer ve kalp yerleştirin. Diyafragma yüzey üstüne böylece akciğeri yerleştirin. Üç kanüller aynı yöne bakmalıdır. </li><li> XY yönde manipüle edilebilir bir sahnede akciğer hazırlık yerleştirin. Bir mikroskop ile birlikte herhangi bir aşamada tüp veya gerekirse, yerleşik bir ısmarlama sahne tutmak için modifiye edilebilir. </li></ol> İzole Sıçan Akciğerler 3. Kan Perfüzyon <ol><li> Eşit hacimde albumin (% 5) çözeltisi ile kandan arındırıldı kan karıştırın ve hazneye ekleyin. Peristaltik pompayı akış r&#39;yi14 ml / dk &#39;ya yedi. Kan tüpünü doldurmak için izin. </li><li> Şant açıkken, geçici akciğer giriş-çıkış fişini çekin. Sırasıyla, akciğer giriş ve çıkışına pulmoner arter ve sol atriyal kanül takın. Boru içinde hiçbir hava kabarcığı olmadığından emin olun. </li><li> Üçüncü bir basınç transdüktörü (P23XL) için trakeal kanül bağlayın. Trakeal kanül yoluyla% 30 oksijen ile akciğerlerini şişirmek ve 5 cm H2O basıncı korumak </li><li> Akciğer perfüzyon başlamak için bir kelepçe ile şant kapatın. Pulmoner arter ve sırasıyla 10 ve 3 cm H 2 O ~ at sol atriyal basıncı koruyun. </li></ol> 4. Mikrovasküler İnfüzyonluk Akciğer hazırlanıyor <ol><li> Akciğer ve güvenli seviyesinden kateter için ek boru arka ucunu yukarı kaldırın. </li><li> A ~ 30 cm uzunluğunda PE90 boru içine 40 cm uzunluğunda PE10 boru, yaklaşık 30 cm sokulmasıyla bir enfüzyon kateterini hazırlayın. Bir iğne (30 g) at PE10 boru açıkta kalan ucunubir şırınga (1 cc) iliştirili. </li><li> Uzatma tüpünün yükseltilmiş arka ucuna kateter kombinasyonu yerleştirin. Dirençle karşılaşana kadar sol atrium ve akciğer içine kateter kombinasyonu yönlendirin. Dirençle karşılaşana kadar sonra, akciğer içine daha fazla yalnız PE10 kateter itin. Kateterin yerleştirilmesi sırasında aşırı kuvvet uygulayarak akciğer zarar unutmayın. </li><li> Ringer solüsyonu ile 1 cc şırınga doldurun ve bir şırınga pompasına ekleyin. 10 ul / dk infüzyon hızını ayarlayın. </li><li> İnfüzyon yeri akciğer kalanına kıyasla soluk olacak. </li><li> Tuzlu su ile ıslatın ve akciğer ortaya infüzyon siteyi terk yeterince büyük bir delik ile plastik wrap ile akciğer kapağı. </li><li> Bir O-ring (ısmarlama) altındaki bir musluk yağ çubukla ve O-ring altında bir cam lamel (# 1.5, 22 mm çap) yerleştirin. Yavaşça infüzyon sitede lamel ile O-halkasını yerleştirin. Standart tüp hol ile O-halkasını Güvenlider. Son zamanlarda 15 rapor lamel / O-ring kombinasyonu, bunun altında alveol yapılarını bozmaz. </li><li> O-halkası üzerinde bir floresan mikroskop bir objektif (20 X) yerleştirin ve akciğer yüzey üzerinde odaklanır. </li></ol> Mikrodamarlar sayesinde 5.. Görüntüleme Floresan Dekstran Transit <ol><li> Görüntüleme FITC çiçeklenme için mikroskop hazırlayın. </li><li> Yansıması için bir bölge seçin ve görüntü alma yazılımı kullanarak 1/minute hızında görüntü kazanır. </li><li> Şırınga pompası kullanılarak FITC-dekstran 20 kD (0.5 mg / ml) infüzyonu başlayın. Kan damarlarında floresan giderek artırmak ve maksimum ulaşacaktır. 60 dakika boyunca infüzyon devam edin. </li><li> Sonra lümen floresan yıkayın Ringer infüzyon geçmek. Üzerinde 10 dakika süreyle infüzyon koruyun. Yıkama-off sırasında 1/dk &#39;da görüntü alımı devam ediyor. </li></ol> 6.. Görüntü Analizi <ol><li> Görüntü elde etme dosyasını açın. </li><li> Yeri bölgelergörüntü karesi içinde mikrodamarlar fazla ilgi. </li><li> Görüntü dosyasını kare-kare oynamak ve tüm çerçeveler için ilgi her bölgede en floresan yoğunluğu kaydedin. </li><li> Zamanın bir fonksiyonu olarak her bir ilgi bölgesi için floresan yoğunluğundaki değişim çizilir. </li><li> Maksimum floresan yoğunluğu ve yıkanmasına 10 dakika sonra, artık floresan yoğunluğunu ölçmek. </li><li> Ilgi bu bölgeyle bir arada kılcal için geçirgenlik endeksi elde etmek için, ilgi konusu her bölgesinde artık floresan yoğunluğu en fazla oranını hesaplar. </li></ol>

<ol><li>Ware, L. B., Matthay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">The acute respiratory distress syndrome.</a> N Engl J Med. 342, 1334-1349 (2000).</li>
<li>Matthay, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+acute+respiratory+distress+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">The acute respiratory distress syndrome.</a> J Clin Invest. 122, 2731-2740 (2012).</li>
<li>Bhattacharya, J., Matthay, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+and+repair+of+the+alveolar-capillary+barrier+in+acute+lung+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regulation and repair of the alveolar-capillary barrier in acute lung injury.</a> Annu Rev Physiol. 75, 593-615 (2013).</li>
<li>Parthasarathi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Connexin+43+mediates+spread+of+Ca2%2B-dependent+proinflammatory+responses+in+lung+capillaries%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Connexin 43 mediates spread of Ca2+-dependent proinflammatory responses in lung capillaries.</a> J Clin Invest. 116, 2193-2200 (2006).</li>
<li>Parthasarathi, K., Bhattacharya, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Localized+Acid+instillation+by+a+wedged-catheter+method+reveals+a+role+for+vascular+gap+junctions+in+spatial+expansion+of+Acid+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec+%28Hoboken%29%22%5BJournal%5D)">Localized Acid instillation by a wedged-catheter method reveals a role for vascular gap junctions in spatial expansion of Acid injury.</a> Anat Rec (Hoboken). 294, 1585-1591 (2011).</li>
<li>Gorin, A. B., Stewart, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+permeability+of+endothelial+and+epithelial+barriers+to+albumin+flux%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol+Respir+Environ+Exerc+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential permeability of endothelial and epithelial barriers to albumin flux.</a> J Appl Physiol Respir Environ Exerc Physiol. 47, 1315-1324 (1979).</li>
<li>Boutoille, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FITC-albumin+as+a+marker+for+assessment+of+endothelial+permeability+in+mice%3A+comparison+with+125I-albumin%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Lung+Res%22%5BJournal%5D)">FITC-albumin as a marker for assessment of endothelial permeability in mice: comparison with 125I-albumin.</a> Exp Lung Res. 35, 263-271 (2009).</li>
<li>Thorball, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((FITC-dextran+tracers+in+microcirculatory+and+permeability+studies+using+combined+fluorescence+stereo+microscopy%2C+fluorescence+light+microscopy+and+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Histochemistry%22%5BJournal%5D)">FITC-dextran tracers in microcirculatory and permeability studies using combined fluorescence stereo microscopy, fluorescence light microscopy and electron microscopy.</a> Histochemistry. 71, 209-233 (1981).</li>
<li>Stevens, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+molecular+heterogeneity+of+pulmonary+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Am+Thorac+Soc%22%5BJournal%5D)">Functional and molecular heterogeneity of pulmonary endothelial cells.</a> Proc Am Thorac Soc. 8, 453-457 (2011).</li>
<li>Ofori-Acquah, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneity+of+barrier+function+in+the+lung+reflects+diversity+in+endothelial+cell+junctions%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">Heterogeneity of barrier function in the lung reflects diversity in endothelial cell junctions.</a> Microvasc Res. 75, 391-402 (2008).</li>
<li>Kandasamy, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+reveals+endothelium-mediated+leukocyte+retention+in+LPS-treated+lung+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging reveals endothelium-mediated leukocyte retention in LPS-treated lung microvessels.</a> Microvasc Res. 83, 323-331 (2012).</li>
<li>Kandasamy, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lipopolysaccharide+induces+endoplasmic+store+Ca2%2B-dependent+inflammatory+responses+in+lung+microvessels%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Lipopolysaccharide induces endoplasmic store Ca2+-dependent inflammatory responses in lung microvessels.</a> PloS One. 8, (2013).</li>
<li>Qiao, R. L., Bhattacharya, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segmental+barrier+properties+of+the+pulmonary+microvascular+bed%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Segmental barrier properties of the pulmonary microvascular bed.</a> J Appl Physiol. 71, 2152-2159 (1991).</li>
<li>Parthasarathi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+connexin43+mediates+acid-induced+increases+in+pulmonary+microvascular+permeability%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Endothelial connexin43 mediates acid-induced increases in pulmonary microvascular permeability.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 303, (2012).</li>
<li>Wu, Y., Perlman, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+methods+for+assessing+alveolar+mechanics%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol+1985%22%5BJournal%5D)">In situ methods for assessing alveolar mechanics.</a> J Appl Physiol 1985. 112, 519-526 (2012).</li>
<li>Kuebler, W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+signaling+mechanism+between+gas+and+blood+compartments+of+the+lung%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">A novel signaling mechanism between gas and blood compartments of the lung.</a> Journal Clin Invest. 105, 905-913 (2000).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Gerçek zamanlı görüntüleme ile birleştiğinde izole kan perfüze akciğer hazırlık tek akciğer kılcal geçirgenlik değişikliklerin belirlenmesi için basit bir araç sağlar. Bu LPS infüzyon tepki olarak geçirgenlik değişikliklerini belirlemek için bu yöntemi uygulanır. Bizim veri açıkça LPS infüzyon mikrovasküler geçirgenliği bir artışa neden olduğunu göstermektedir. Bundan başka, veriler aynı zamanda LPS ile uyarılan değişiklikler, geçirgenlik ve kılcal venüllerin hem de benzer olduğunu göstermektedir. Böylece, bu tekniğin ö...

Akciğerlerde artmış mikrovasküler geçirgenlik alveolar ödem ve bozulmuş gaz değişimi gelişimine yol açar ve akut akciğer hasarı (ALI) 1-3 önemli bir özelliğidir. Bu nedenle, vasküler geçirgenliğin tahminleri akciğer yaralanması ve önerilen terapötik müdahalelerin etkinlik derecesinin belirlenmesinde önemlidir. Bu tür kan serbest akciğer ıslak-kuru oranı ve mikrovasküler filtrasyon katsayısı olarak Gravimetrik analiz yaygın geçirgenliği, 4,5 tahmin yöntemleri kullanılır. Diğer yöntemler, akciğer dokusu, 6-8, radyoaktif ya da floresan probları miktarının tutulmasını içerir. Bununla birlikte, yukarıdaki yöntem geçirgenliği verileri açıklık doğru Akciğer doku örneklerinin postexperiment işlem gerektirir. Bir hayvan, tek bir tedavi protokolü sadece kullanılabilir Dahası, büyük hayvan sayısı tam bir çalışma için gerekli olabilir. Yukarıdaki yöntemlerin ortak bir özelliği, için ortalama damar geçirgenliğini belirler olmasıdırdoku numunesi içindeki tüm kan damarları. Ancak, iyi pulmoner mikro ve makro-gemiler 9 fenotipik farklı olduğu kurulmuştur. Bu nedenle, geçirgenlik yanıtları hem de 9,10 çeşitli damar kesimleri arasında heterojen olabilir. Böylece, bir doku örneğinin tüm pulmoner damarların geçirgenliği ortalama miktarının yeterince bu heterojenliğini yansıtmayabilir. İzole kan perfüze akciğer hazırlık, akciğer yüzeyinde kan damarları dik bir mikroskop 4,11,12 tarafından görüntülenmiştir olabilir. Bu tepkiler 13 herhangi bir heterojen ele böylece tek damarlarda karakterize yanıtları etkinleştirir. Buna ek olarak, mikrokapların flüoresan görüntüleme kullanılarak, floresans bazlı deneyler dahil edilebilir. Bundan başka, bir sol atriyum mikrokateter kan damarlarının 11,14 içine maddeleri ve floresan probları sunmak için de kullanılabilir. Mikrokateter küçük bir akciğer bölgeye teslim sınırlar, böylece eskiinfüzyon maddeler ve florofor için bölge içinde sadece kan damarları poz. Bu, aynı akciğer içinde birden fazla küçük bölgeler, çalışma için gerekli hayvan genel bir azalmaya yol açan, ayrı deneyler için kullanılmasına olanak verir. Gerçek zamanlı görüntüleme vasküler ve izole akciğer hazırlanması tek mikrodamarlar ekstravasküler floresan dinamik değişiklik yakalama sağlar. Bu nedenle, bir görüntü alanı içindeki her mikrodamar için, florofor ve yıkanmasına enfüzyonu esnasında floresanstaki değişimler kaydedilmiştir ve çevrimdışı 14 belirlenebilir. Maksimum ve kalıntı damar floresans değerleri kullanarak, görüntüleme alanı içinde her mikrodamar için bir geçirgenlik dizin belirlenebilir. Iltihaplı ya da zararlı ajanlara yanıt olarak geçirgenlik değişikliklerini belirlemek için, arzu edilen ajan ilk tatbik edilebilir ve daha sonra geçirgenliği indeksi belirlenir. Buna ek olarak, görüntü alanı ile aşılanmış akciğer bölgesi içinde herhangi bir değere ayarlanabilirmikrokateter, böylece istenen damar ağı seçiminde esneklik yüksek derecede olanak tanır. Dolayısıyla, gerçek zamanlı görüntüleme ile birlikte izole edilmiş kan perfüze akciğer preparat tek akciğer Mikro damarların içinde geçirgenliği ölçmek için çekici bir deneysel model sağlar.

<table><tbody><tr><td>Tygon Boru</td><td>Fisher Scientific</td><td></td> <td># 18</td></tr><tr><td>Basınç Dönüştürücü</td><td>Veri Bilimleri Uluslararası</td><td>P23XL</td><td>İhtiyaç miktarı 3</td></tr><tr><td>Kelebek İğne</td><td>Greiner Bio-One</td><td>450081</td><td>21 G</td></tr><tr><td>Peristaltik pompa</td><td>Cole Parmer</td><td>Masterflex L/S</td><td></td></tr><tr><td>PE-90 boru</td><td>Becton Dickinson</td><td>427421</td><td>30 cm gerekli</td></tr><tr><td>PE-10 boru</td><td>Becton Dickinson</td><td>427401</td><td>40 cm gerekli</td></tr><tr><td>Şırınga Pompası</td><td>Braintree Scientific</td><td>BS8000</td><td></td></tr><tr><td>O-ring</td><td></td><td></td><td>20 mm çap deliği ve O-ringi tutucuya sabitlemek için bir tutamak ile özel olarak üretilmiştir</td></tr><tr><td>Dik floresan mikroskobu</td><td>Olympus America</td><td>BX61WI</td><td></td></tr><tr><td>Görüntü Toplama Yazılımı</td><td>Moleküler Cihazlar</td><td>Metamorf</td><td></td></tr><tr><td>FITC Dextran 20KD</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td>0.5 mg/ml (Deneme deneyleri, hesaplanan geçirgenlik indeksi değerlerine dayanarak uygunluğunu gösteriyorsa, farklı moleküler boyutta bir dekstran seçilebilir)&nbsp;</td></tr><tr><td>Lipopolisakkarit</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td>Serotip 0111:B4</td></tr></tbody></table>

İzole kan-perfüze sıçan akciğer hazırlık tek mikrodamar geçirgenliği miktarının

Quantifying Single Microvessel Permeability in Isolated Blood-perfused Rat Lung Preparation

İzole edilmiş perfüze akciğer kan hazırlama yaygın görselleştirmek ve tek Mikro damarların içinde sinyal tanımlamak için kullanılır. Gerçek zamanlı görüntüleme ile bu hazırlık birleştirilmesi suretiyle, bireysel akciğer kılcal geçirgenlik değişiklikleri belirlemek için mümkün olur. Bu yazıda sıçan akciğerlerini yalıtmak ve otolog kan ile bunları serpmek için gereken adımları açıklar. Sonra, küçük bir akciğer bölgeye mikrokateter yoluyla florosforlar veya ajanlar demlenmeye adımları özetlemektedir. Bu tarif edilen prosedürler kullanılarak, bakteriyel lipopolisakkarid infüzyon tepki olarak sıçan akciğer kılcal geçirgenlik artışı tespit edilmiştir. Veri Lipopolisakkarit hem venüler ve kapiller mikrovasküler kesimleri arasında sıvı sızıntısı arttığını ortaya koydu. Bu yüzden, bu yöntem, bu mümkün damar kesimleri arasında geçirgenlik cevapları karşılaştırmak ve böylece, yanıt olarak bir heterojen tanımlamak için yapar. Akciğer geçirgenliğini tanımlamak için yaygın olarak kullanılan yöntemler akciğer doku örneklerinin postprocessing gerektiren ikengerçek zamanlı görüntüleme kullanımı, bu yöntem belirgin olarak, bu gereği ortadan kaldırır. Böylece, gerçek zamanlı görüntüleme ile birlikte izole akciğer hazırlık akciğer mikrovasküler geçirgenliği belirlemek için geleneksel yöntemler üzerinde çeşitli avantajlar sunuyor, henüz geliştirmek ve uygulamak için basit bir yöntemdir.

Perfüzyon tüpünün ve ilgili ekipmana bağlı bir izole edilmiş kan perfüze akciğer hazırlama Şekil 2 &#39;de gösterilmiştir., Burada tarif edilen prosedürlerin herhangi bir fare türleri ile kullanılabilir ancak gösteri amacıyla, biz bir Sprague Dawley sıçan kullanılır. Bir sol atriyum yoluyla mikrokateter Modül akciğerin sadece küçük bir bölge ulaşır. Infüzyon bölge infüzyon kaynaklı renk (Şekil 3) tarafından tespit edilebilir. Gerçek zamanlı görüntülenmesi için bir yer olarak akciğer <st...

İzole edilmiş perfüze akciğer kan hazırlama akciğer yüzeyindeki mikro damar ağları görselleştirmek için bu mümkün kılar. Burada, gerçek zamanlı flüoresan görüntüleme kullanılarak izole edilmiş akciğerlerde bir mikro damarların geçirgenliğini ölçmek için bir yaklaşımı tarif eder.

İzole Kan-perfüze Sıçan Akciğer Hazırlık Tek Mikrodamar Geçirgenliği miktarının

The isolated blood-perfused lung preparation is widely used to visualize and define signaling in single microvessels. By coupling this preparation with ...

Bu prosedürün genel amacı, floresan tabanlı bir yöntem kullanarak izole edilmiş sıçan akciğerlerindeki tekil mikro damarların geçirgenliğini nicelleştirmektir. Bu işlem, öncelikle sıçan akciğerlerinin izole edilmesi ve otolog kan ile perfüzyonlarının yapılmasıyla gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, floresan işaretli dekstrin infüze etmek için akciğerin küçük bir bölgesine sol atriyum mikrokateterinin yerleştirilmesidir.Ardından, işaretli dekstrin infüzyonu yapılırken akciğer mikro damarlarının görüntüleri toplanır. Son adım, yazılım kullanarak görüntülerden tekil mikrodamarların geçirgenliğini nicelleştirmektir. Nihayetinde sonuçlar, LPS tedavisi sonrası gibi farklı koşullar altında akciğer mikro damarlarının geçirgenlik derecesini gösterebilir.Bu prosedür, laboratuvarımdan doktora sonrası araştırmacı Dr. Kava Kasami tarafından gösterilecektir. Öncelikle, anestezi düzlemi doğrulanmış erkek bir sıçana trakeotomi uygulayarak başlayın. PE 90 trakeal kanül kullanın ve bunu sütürlerle sabitleyin. Ardından, 21 gauge kelebek iğne kullanarak kalbe 100 ila 200 ünite heparin infüze edin.Bir dakika bekleyin ve ardından kanı boşaltın. Kanı toplayın ve salin ile birlikte kenara ayırın. Üç milimetrelik tigon tüplerden yapılmış, dört santimetre uzunluğunda ve bir ucu genişletilmiş iki kanülü doldurun.Şimdi bir torakotomi gerçekleştirin. Sağ ventriküle kanülü yerleştirecek kadar küçük bir insizyon yapın ve bir kanülün genişletilmiş ucunu pulmoner artere doğru kaydırın. Kanülü sütürlerle sabitleyin.Diğer kanülü sol ventrikülün apeksinden sol atriyuma doğru yerleştirmek için aynı tekniği kullanın. Kanülü iki milimetre genişliğinde göbek kordonu şeridi ile sabitleyin. Şimdi engel olan bağ dokularını temizleyin ve akciğeri ve kalbi kanülleriyle birlikte çıkarın.Bunları, akciğerin diyafragmatik yüzeyi yukarı bakacak ve üç kanülün tamamı aynı hizada olacak şekilde bir Petri kabına aktarın. Diseksiyonu yapılmış preparatı, basınç dönüştürücülerine bağlı olan ve giriş-çıkış tüpleri görevi gören 18 numara tigon tüplerle donatılmış ayarlanabilir bir tablaya taşıyın. Şimdi, toplanan kanı eşit hacimde %5 albumin çözeltisi ile karıştırın.Bu karışımı yükleme haznesine ekleyin. Pompayı dakikada 14 mililitre hızda başlatın. Borularda hava kabarcığı olmadığından emin olun.Hazırlık aşamasında. Pulmoner arteri akciğer giriş tüpüne ve sol atriyum kanülünü çıkış tüpüne bağlayın. Tüplerde hava kalmadığından iki kez emin olun ve ayrıca şantın açık olduğunu kontrol edin.Trakeal kanülü üçüncü bir basınç dönüştürücüye bağlayın. Akciğerleri trakeal kanül aracılığıyla %30 oksijen ile şişirin. Akciğerleri beş santimetre su basıncında tutun.Şimdi şantı klempleyiniz ve pompayı dakikada 14 mililitre hızda çalıştırın. Perfüzyon sırasında akciğer perfüzyonuna başlamak için, pompa ayarını pulmoner basıncı yaklaşık 10 santimetre su seviyesinde ve sol atriyum basıncını üç santimetre su seviyesinde tutacak şekilde düzenleyin. Kan infüze edilmiş akciğeri hazırlayarak başlayın.Öncelikle, 30 santimetre uzunluğundaki bir PE 90 tüpün içine yerleştirilmiş 40 santimetre uzunluğundaki bir PE 10 tüp kullanarak bir infüzyon kateteri hazırlayın. PE 10 tüpün diğer ucunu, bir cc'lik bir şırıngaya takılı 30 gauge'lik bir iğneye bağlayın. Akciğere bağlı olan tüpün ucunu preparasyonun üzerine getirin ve infüzyon kateterini buraya takın.İnfüzyon kateterini sol atriyuma ve ardından dirençle karşılaşana kadar akciğere doğru yönlendirin. Aşırı kuvvet uygulamak akciğere zarar verecektir. Mikrokateterin uygun şekilde yerleştirilmesi kritiktir; çünkü mikrokateterin akciğere vereceği herhangi bir zarar protokolün başarısını azaltacaktır.Ardından, şırıngayı Ringer çözeltisi ile doldurun ve bir pompaya bağlayın. Çözeltiyi dakikada 10 µL hızla yavaşça infüze edin. Zamanla, infüzyon bölgesi akciğerin geri kalanına kıyasla soluklaşacaktır; infüzyon bölgesi hariç akciğer yüzeyini nemli tutmak için plastik içerisinde hızla muhafaza edin.Şimdi akciğeri görselleştirmek için, 22 milimetrelik bir lam üzerine bir O-ring takarak bir izleme penceresi oluşturun. Musluk gresi kullanarak O-ring'i bir deney tüpü tutucusuna sabitleyin. Ardından pencereyi infüzyon bölgesinin üzerine yerleştirin.20x objektifi lamelin üzerine getirerek ve akciğere odaklanarak kurulumu tamamlayın. Herhangi bir görsel bozulma beklenmez. Şimdi akciğere seçtiğiniz bir çözeltiyi infüze edin.Bu örnekte, serum fizyolojik uygulamasının ardından, şırınga pompası aracılığıyla 60 dakika boyunca akciğere bir mililitre ZI konjuge dekstrin infüze edilir. Görüntüleme yazılımını kullanarak bir saatlik infüzyon boyunca dakikada bir görüntü kaydedin ve sonraki yıkama adımı sırasında 10 dakika daha kayıt almaya devam edin. Fit dekstrin infüze edildikten sonra, akciğere aynı akış hızında en az 10 dakika daha Ringer solüsyonu infüze ederek yıkama işlemini gerçekleştirin. Daha sonra, elde edilen görüntüler analiz edilirken, fit e infüzyonu sırasında ilgi bölgesindeki maksimum floresan yoğunluğu puanlayın.Ardından, 10 dakikalık yıkama sonrası kalan floresan yoğunluğunun maksimum değerini belirleyin. Vasküler permeabilitedeki değişiklikler, LI'nin yaygın olarak kullanılan bir modeli olduğu için, bakteriyel lipopolisakkarit tedavisi sonrası fitzi dekstrin infüzyonu kullanılarak incelenmiştir. Ringer ile işlem görmüş mikrodamlarlarda kalan fit e floresansı düşükken, LPS ile işlem görmüş olanlarda yüksekti. Ayrıca, ringer infüzyonu ile karşılaştırıldığında, LPS infüzyonu permeabilite indeksinde anlamlı bir azalmaya neden olmuş ve bu durum görüntü alanı içindeki tüm damarlarda genel bir permeabilite artışına işaret etmiştir.Ayrıca, ringer infüzyonu ile karşılaştırıldığında, LPS infüzyonu geçirgenlik indeksinde anlamlı bir azalmaya neden olmuş ve bu durum, görüntü alanındaki tüm damarlarda genel bir geçirgenlik artışına işaret etmiştir. Bu videoyu izledikten sonra, izole kuş akciğerlerinin nasıl hazırlanacağı, sol kuyruk mikrokateterinin nasıl yerleştirileceği ve mikro düzeyde geçirgenliğin nasıl tanımlanacağı konusunda iyi bir anlayış geliştirmiş olmalısınız.

quantifying-single-microvessel-permeability-isolated-blood-perfused

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Aşağıdaki protokol tecrit, havalandırma ve sağ ventrikül afterload kan akımı, hava akımı, hava yolu değişiklikleri ve vasküler değişiklikler etkilerini ölçmek için sabit veya pulsatil pulmoner vasküler basınç-akım ilişkileri ölçmek için fare akciğerler instrumenting sürecini özetliyor.

İzole, Havalandırmalı ve Enstrumanlı Fare Akciğer Karakterizasyonu Pulsatif Akış ile perfüze

An<em&gt; In vivo</emKan Gemi Geçirgenlik Test&gt; Test

Hipoksik pulmoner vazokonstriksiyon (HPV), alveolar hipoksi akciğer perfüzyonunun ventilasyonla eşleştiği önemli bir fizyolojik olgudur. HPV'ye katkıda bulunan başlıca vasküler segment, intra-acinar arterdir. Burada, 20-100 μm çapındaki murine pulmoner damarların HPV analizi için protokolümüzü açıklıyoruz.

Murine Hassas Kesim Akciğer Dilimleri Kullanılarak Pulmoner Arterlerin Hipoksik Pulmoner Vazokonstriksiyonunun Videomorfometrik Analizi

Bu çalışmanın amacı, singeneik fare endotelial hücreler ve astrositlerin ortak-kültür içeren bir in vitro modelinin BBB tekrarlanabilirliğini doğrulamak için oldu. Endotel hücre tek yüksek Teer ve düşük LY geçirgenliği sundu. Belirli TJ proteinlerin ekspresyonu, enflamasyon ve taşıyıcı ve reseptörlerin işlevselliğine fonksiyonel tepkileri değerlendirildi.

Ayarlama-up bir<em&gt; In Vitro</emSıçan Kan-beyin bariyerinin&gt; Model (BBB): BBB geçirimsizliği ve Reseptör aracılı Ulaştırması Bir Odak

Sıçanlarda plevral yüzeyin akciğer kanseri metastazlarında mikrodolaşım kan akış hızını otomatik bir şekilde, kapalı göğüs pulmoner intravital mikroskopi kullanarak ölçmek için bir yöntem sunulmuştur. Bu model, kemirgenlerde pulmoner metastazlar üzerinde fizyolojik araştırmalar yapmak için yaygın bir araç olarak kullanılma potansiyeline sahiptir.

Sıçan Pulmoner METASTAZLARINDA Mikrosirkülasyonda Kan Akışı Hızının Otomatik Ölçüm

Ex-Vivo Akciğer Perfüzyon (EVLP) insanlarda akciğer transplantasyonu daha kolay kullanılabilir donör havuzu organları değerlendirmek ve genişletmek için yeteneği sağlayarak haline izin verdi. Burada, bir sıçan EVLP programı ve gelecekteki genişleme için bir tekrarlanabilir model izin ayrıntılandırmaları gelişimini açıklar.

İzole Yöntemi<em&gt; Ex vivo</emBir Rat Modelinde&gt; Akciğer Perfüzyon: Sıçan EVLP Programı Geliştirme Öğrenilmiş Dersler

Modifiye edilmiş Landis tekniği, mikroperfüzyon teknikleri kullanılarak kontrol ve test koşulları altında normal ve genetik olarak modifiye edilmiş sıçanların mezenterindeki tek tek mikro damarların hidrolik iletkenliğinin eşleştirilmiş ölçümünü sağlar. Fizyolojik koşullar altında mikrodamar geçirgenliğini ve transvasküler değişimi düzenleyen mekanizmaları değerlendirmek için uygun bir yöntem sağlar.

Şekilde, mikro Tekniği Sıçan mezenter mikrodamar geçirgenliği Yönetmelik Araştırma

Bu el yazması sıçan beyin direnç arterlerin vasküler işlevinde değerlendirilmesinde vitro video mikroskobu iletişim kurallarını açıklar. El yazması da microvessel yoğunluğu fluorescently etiketli lektin ve doku perfüzyon lazer Doppler Flowmetry kullanarak değerlendirmek için teknikler açıklanır.

Sıçan izole direnç arter Video mikroskobu kullanan vasküler kontrol mekanizmalarının değerlendirilmesi

İzole tavşan akciğer hazırlığı pulmoner araştırmalarda altın standart bir araçtır. Bu yayın, tekniğin hava yolu reaktivitesi, akciğerin korunması ve akciğer nakli ve pulmoner ödemde preklinik araştırmalarda yer alan fizyolojik ve patolojik mekanizmaların incelenmesi için geliştirilmiş olarak tanımlanmaktadır.

Tavşan Modelinde İzole Akciğer Perfüzyon Sistemi

Burada, İzolektin B4'ün tek boyamasını kullanarak tüm farelerin akciğer dokusu için pulmoner mikrovasküler yoğunluğun tarafsız bir şekilde ölçülmesini sağlamak için basit ve ekonomik bir protokol açıklıyoruz.

Lobüller Boyunca Farelerde Pulmoner Mikrovasküler Yoğunluğun Ölçülmesi

Öğrenin, izole kan-perfüze sıçan akciğerlerinde tek mikrodamar geçirgenliğini floresan görüntüleme ile nasıl ölçebilirsiniz. Bu yöntem, damar biyolojisi ve akciğer fonksiyonu araştırmalarında değerli bilgiler sunar.

İzole Kan-perfüze Sıçan Akciğer Hazırlık Tek Mikrodamar Geçirgenliği miktarının

Daha fazla video keşfet