Name: Optimize Sentetik Yüzeyler Hepatosellüler Fenotip kullanma Stabilize (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 50 s
Description: Öğrenin polimer kaplı yüzeylerin sentezi ve spin kaplama ile kök hücre kaynaklı hepatositlerin uzun süreli kültürünü optimize etme yöntemlerini. Bu teknik karaciğer hastalıkları tedavisi için önemli uygulamalar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

YSS, MB ve FK Fonuna ilişkin EPSRC Takip tarafından desteklenmiştir. BL-V ve DS her MRC Doktora Studentships tarafından desteklenmiştir. KC İngiltere Rejeneratif Tıp Platformu fon tarafından desteklenmiştir.

PHNGAD (poli [1,6-hexanodiol / neopentil glikol / di (etilen glikol) -Alt-adipik asit] dio) 1. sentezi <img alt="Şema 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51723/51723scheme1.jpg" width="500" /> Şema 1: PHNAGD sentezi PHNAGD sentezinin şematik gösterimi.. PHNAGD 1,6-Hexanodiol reaksiyonu, dietilen glikol, neoppentyl glikol ve adipik asit ile hazırlandı. PHNAGD, poli [1,6-hexanodiol / neopentil glikol / di (etilen glikol) -Alt-adipik asit] dio. <ol><li> Herhangi bir artık suyun ayrılması için bir vakumlu fırın içinde 48 saat boyunca 40 ° C &#39;de monomerler 1,6-heksandiol, di (etilen glikol) ve neopentil glikol için ısıl işlem uygulanır. Vakum altında oda sıcaklığına soğumuş izin verin. </li><li> Bir Dean-Stark aparatı ile karıştırıldı çubuğu ile donatılmış ve bağlı olan, bir iki-boyunlu yuvarlak tabanlı bir şişeye, her monomer ve adipik asit (55 mmol), 22 mmol ekleyin. </li><li> Bir vakum altında bütün tertibatım yerleştirin, yavaşça GLA ısıtmakşişe içine kimyasal maddenin ilave edilmesi sırasında nem emilmesini önlemek için, 6 saat boyunca 40 ° C, ssware. </li><li> Damla katalizör titanyum (IV) butoksit 0.0055 mol damla şırınga ile ilave edin. </li><li> 24 saat boyunca, bir N2 atmosferi altında 180 ° C&#39;de, reaksiyon karışımı, karıştırın ve Dean-Stark tuzağı içinde kalan suyun toplanması. Ürün oda sıcaklığına soğumaya bırakın. </li></ol> PU134 2. sentezi <img alt="Şema 2" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51723/51723scheme2.jpg" width="500" /> Şema 2: PU134 sentezi PU134 bir 4,4 &#39;-metilenbis (fenil izosiyanat) 2.0 eşdeğer bir PHNGAD 1.0 eşd reaksiyonu ile hazırlandı poliüretan 134. sentezinin şematik temsili, 1.0 ilave edildi. bir 1,4-bütandiol zincir uzatıcının eşdeğer. <ol><li> 4, iki eşdeğeri ile poliol PHNGAD bir eşdeğeri (Mn ~ 1800 Da, 3.2 mmol) karıştırınSusuz N &#39;4-metilenbis (fenil izosiyanat) (6.4 mmol) N, N-dimetilformamid (12 mi). </li><li> Bir N2 atmosferi altında 70 ° C de, reaksiyon karışımı, ilave edin. </li><li> , Şırınga ile, katalizör ekleme damla damla titanyum (IV) butoksit (0.8% wt). </li><li> 1 saat sonra, zincir uzatıcı 1,4-bütandiol (3.2 mmol) bir eşdeğeri ilave edin. 90 ° C de sıcaklığı artar ve bir N2 atmosferi altında 24 saat için karıştırın. </li><li> Reaksiyonu takiben, çökelti oluşacak kadar reaksiyon çözelti içine damla damla (de kullanılabilir heksan ya da su), dietil eter ilave edilerek çökeltme poliüretan toplar. </li><li> 5 dakika boyunca 5,300 x g&#39;de çözümü santrifüj. </li><li> Süpernatant süzün ve çözücü buharlaşana kadar bir vakum fırınında 40 ° C&#39;de kurutunuz. Not: amacıyla reaksiyonun nihai ürünün molekül ağırlığı dağılımına ilişkin parametreler doğru sahip olduğundan emin olmak için işlevsel Groupolimer ve ergitme ve cam geçiş sıcaklıklarının PS, çeşitli analitik teknikler ve yöntemler, jel geçirgenlik kromatografisi veya Ramazan spektroskopi gibi, kullanılabilir. </li></ol> PU134 Çözümleri 3. hazırlanması <ol><li> Bir cam şişe içine 200 mg PU134 tartılır. </li><li> Kloroform, 1 kloroform ve toluen bir kombinasyonu: a çözücüler sayısındaki% 2&#39;lik bir nihai konsantrasyona kadar seyreltilir PU134 1 oranında, tetrahidrofuran, ve kombinasyon 1 tetrahidrofuran ve diklorometan arasında: 1 oranında. Not: Sağ çözücünün seçimi, kullanımı polimere bağlı olarak değişir. Değişik çözücüler polimerin çözünürlüğünü etkiler farklı kaynama noktalarına sahiptir. </li><li> Çözelti homojen hale gelir ve çökelti gözleninceye kadar, 200 mot / dakika hızda bir çalkalayıcı kullanılarak, oda sıcaklığında kuvvetli bir şekilde 20 dakika süre ile çözelti çalkalayın. </li></ol> PU134 Cam Slaytlar 4. Kaplama <ol><li> Bir rou yerleştirinSpin lak nd 15 mm 2 lamel. </li><li> Bir pipet kullanılarak her PU134 solüsyonu 50 ul uygulayın. Oranı ile orantılı yüzeye hacim tutarak gerekli lamel boyutu için buna PU134 çözümün ses seviyesini ayarlayın. </li><li> 23 x g 7 saniye boyunca her lamel Spin. </li><li> Sterilizasyondan önce en az 24 saat boyunca oda sıcaklığında kuru hava lamel. </li></ol> Lamel 5. Işınlama <ol><li> 12 dakika süre ile, laboratuar ışınlama kullanılarak 10 Grays bir dozunun uygulanmasıyla polimer kaplı lamel Gama-ışın tedavisi. </li><li> 16 dakika her iki taraf için bir 30 W, UV ampulü kullanarak polimer kaplı lamel ışın UV. </li><li> Slayt boyutuna uygun olarak uygun bir doku kültürü plakasında, polimer kaplı lamel yerleştirin. </li></ol> 6. Taramalı Elektron Mikroskobu <ol><li> Basınç 5 x 10 milibar -1 atmosferinde 200 saniye boyunca püskürtme ile altın kaplama polimer lamel. </li><li> Microg yakalayınİkincil elektron görüntüleme modunda 20 kV bir hızlandırma voltajı bir tarama elektron mikroskobu kullanılarak polimer ile kaplanmış lamel raphs. </li></ol> 7. Atomik Kuvvet Mikroskobu Gözlemler <ol><li> Polimer yüzeyin 20 x 20 um tarama alanı içinde, bir. </li><li> 1.32 Hz 1.60 Hz tarama hızı ayarlayın. </li><li> Taranan bölgede 512 x 512 piksel çözünürlüğe ayarlayın. </li><li> Kök ortalama resim veri düzleminden alınan yükseklik sapmalarının ortalaması kullanılarak kaplamanın karesi (RMS veya Rq) hesaplayın ortalama olarak ifade edilen: <img fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/51723/51723eq1.jpg" width="123" /> Nerede Zi akım Z değeri ve N belirli bir alanda nokta sayısıdır. </li><li> Kullanarak görüntünün 7,5 sapmasını hesaplayın ve ortalama yüzey pürüzlülüğüne (Ra), <img fo:content-width="1.5in" src="/files/ftp_upload/51723/51723eq2.jpg" width="154" /> Burada Z (X) t tarif fonksiyonuduro yükseklikte (Z) ve değerlendirme uzunluğu &quot;L&quot; üzerinden örnek konumuna (x) cinsinden analiz yüzey profili. Ra orta düzlemine yüzey nisbetle ortalama değeri temsil eder. </li></ol> 8. Hücre Kültürü ve Farklılaşma <ol><li> Kültür ve Hay 17&#39;de tarif edildiği gibi, insan embriyonik kök hücre çizgisi (HESC) H9 ayırt eder. </li><li> Bir ayırma reaktifi kullanılarak hücreleri ayırmak ve Szkolnicka 18,19 &#39;de anlatıldığı gibi bir serumsuz ortam varlığında, farklılaşma gün, 9 ile kaplanmış dilimlerin üzerine PU134 bunları Replate. Not: Enzimatik Çözülme fiziksel hücre ayrılması için tercih edilir. </li></ol> 9. Sitokrom P450 üzerinde fonksiyonel denemeler <ol><li> Üreticinin talimatlarına CYP3 aktivitesini ölçmek. </li><li> Hücreler olmaksızın HESC türetilmiş Gün 13 ve Gün 19 hepatositleri ve ortam inkübe - negatif kontrol olarak, uygun olan substr37 ° C&#39;de 5 saat boyunca yedi. </li><li> , Hücreler ve ortamdan süpernatantlar toplamak üreticinin talimatlarına göre analizini gerçekleştirmek. </li><li> Yüzey alanı (cm2) için CYP aktivite ve normalize seviyesini ölçer. </li></ol> 10. immün <ol><li> Yıkama HESC 1 dakika boyunca PBS ile hepatositleri türetilmiş, iki kez tekrarlanır. </li><li> 10 dakika boyunca -20 ° C&#39;de buz soğukluğunda% 100 hücreleri düzeltmek için, metanol, yer ekleyin. </li><li> 5 dakika boyunca PBS ile yıkayın ve hücreler iki kez tekrarlayın. </li><li> PBS / T (% 0.1 Tween), oda sıcaklığında 1 saat boyunca /% 10 BSA ile hücreleri inkübe edin. </li><li> PBST solüsyonu aspire ve PBS / T (% 0.1 Tween) /% 1 BSA içinde seyreltilmiştir ve uygun bir primer antikor ekleyin, hafif çalkalama O / N 4 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> 5 dakika boyunca PBS / T (% 0.1 Tween) /% 1 BSA hücreleri yıkayın ve üç kez tekrarlayın. </li><li> PBS / T (% 0.1 Tween) /% 1 BSA içinde, uygun bir antikor seyreltik hücrelere eklenir ve hafif çalkalanarak 1 saat boyunca oda sıcaklığında karanlıkta inkübe. </li><li> 5 dakika boyunca PBS ile hücreleri yıkayın ve üç kez tekrarlayın. </li><li> Her bir oyuğa hava kabarcıkları sayısını azaltmak için hafifçe bir lamel ekleyin: (1000 DAPI içeren 1) Mowiol 488 ekleyin. Mağaza karanlıkta 4 ° C&#39;de duran hücrelerin. Uygun bir filtre ve floresan lambası ile bir mikroskop kullanılarak boyama dikkate alınmalıdır. Optimize edilmiş birincil ve ikincil antikorlar, Tablo 1 &#39;de listelenmiştir. </li></ol>

<ol><li>Zhou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SUMOylation+of+HNF4%CE%B1+regulates+protein+stability+and+hepatocyte+function%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">SUMOylation of HNF4α regulates protein stability and hepatocyte function.</a> J Cell Sci. 125 (15), 3630-3635 (2012).</li>
<li>Banerjee, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+hydrogel+modulus+on+the+proliferation+and+differentiation+of+encapsulated+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The influence of hydrogel modulus on the proliferation and differentiation of encapsulated neural stem cells.</a> Biomaterials. 30 (27), 4695-4699 (2009).</li>
<li>Shanbhag, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+Progenitor+Cells+Grown+on+Hydrogel+Surfaces+Respond+to+the+Product+of+the+Transgene+of+Encapsulated+Genetically+Engineered+Fibroblasts%5BTitle%5D)+AND+%22Biomacromolecules%22%5BJournal%5D)">Neural Progenitor Cells Grown on Hydrogel Surfaces Respond to the Product of the Transgene of Encapsulated Genetically Engineered Fibroblasts.</a> Biomacromolecules. 11 (11), 2936-2943 (2010).</li>
<li>Battista, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+matrix+composition+of+3D+constructs+on+embryonic+stem+cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The effect of matrix composition of 3D constructs on embryonic stem cell differentiation.</a> Biomaterials. 26 (31), 6194-6207 (2005).</li>
<li>Tian, W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyaluronic+acid+hydrogel+as+Nogo-66+receptor+antibody+delivery+system+for+the+repairing+of+injured+rat+brain%3A+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Hyaluronic acid hydrogel as Nogo-66 receptor antibody delivery system for the repairing of injured rat brain: in vitro.</a> Journal of Controlled Release. 102 (1), 13-22 (2005).</li>
<li>Keshaw, H., Forbes, A., Day, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Release+of+angiogenic+growth+factors+from+cells+encapsulated+in+alginate+beads+with+bioactive+glass%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Release of angiogenic growth factors from cells encapsulated in alginate beads with bioactive glass.</a> Biomaterials. 26 (19), 4171-4179 (2005).</li>
<li>Baharvand, H., Hashemi, S. M., Kazemi Ashtiani, S., Farrokhi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+hepatocytes+in+2D+and+3D+culture+systems+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22The+International+Journal+of+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Differentiation of human embryonic stem cells into hepatocytes in 2D and 3D culture systems in vitro.</a> The International Journal of Developmental Biology. 50 (7), 645-652 (2006).</li>
<li>Cameron, K., Travers, P., Chander, C., Buckland, T., Campion, C., Noble, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+osteogenic+differentiation+of+human+mesenchymal+stem%2Fprecursor+cells+on+silicate+substituted+calcium+phosphate%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research+Part+A%22%5BJournal%5D)">Directed osteogenic differentiation of human mesenchymal stem/precursor cells on silicate substituted calcium phosphate.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 101 (1), 13-22 (2013).</li>
<li>Pernagallo, S., Unciti-Broceta, A., Diaz-Mochon, J. J., Bradley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deciphering+cellular+morphology+and+biocompatibility+using+polymer+microarrays%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Materials%22%5BJournal%5D)">Deciphering cellular morphology and biocompatibility using polymer microarrays.</a> Biomedical Materials. 3 (3), 034112(2008).</li>
<li>Li, Z., Guo, X., Matsushita, S., Guan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+cardiosphere-derived+cells+into+a+mature+cardiac+lineage+using+biodegradable+poly%28N-isopropylacrylamide%29+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Differentiation of cardiosphere-derived cells into a mature cardiac lineage using biodegradable poly(N-isopropylacrylamide) hydrogels.</a> Biomaterials. 32 (12), 3220-3232 (2011).</li>
<li>Tare, R. S., Khan, F., Tourniaire, G., Morgan, S. M., Bradley, M., Oreffo, R. O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microarray+approach+to+the+identification+of+polyurethanes+for+the+isolation+of+human+skeletal+progenitor+cells+and+augmentation+of+skeletal+cell+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">A microarray approach to the identification of polyurethanes for the isolation of human skeletal progenitor cells and augmentation of skeletal cell growth.</a> Biomaterials. 30 (6), 1045-1055 (2009).</li>
<li>Khan, F., Tare, R. S., Kanczler, J. M., Oreffo, R. O. C., Bradley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strategies+for+cell+manipulation+and+skeletal+tissue+engineering+using+high-throughput+polymer+blend+formulation+and+microarray+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">Strategies for cell manipulation and skeletal tissue engineering using high-throughput polymer blend formulation and microarray techniques.</a> Biomaterials. 31 (8), 2216-2228 (2010).</li>
<li>Zhang, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+thermoresponsive+and+chemically+defined+hydrogel+for+long-term+culture+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">A thermoresponsive and chemically defined hydrogel for long-term culture of human embryonic stem cells.</a> Nature Communications. 4 (1335), (2013).</li>
<li>Medine, C. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developing+high-fidelity+hepatotoxicity+models+from+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Developing high-fidelity hepatotoxicity models from pluripotent stem cells.</a> Stem Cells Translational Medicine. 2 (7), 505-509 (2013).</li>
<li>Hay, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unbiased+screening+of+polymer+libraries+to+define+novel+substrates+for+functional+hepatocytes+with+inducible+drug+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Unbiased screening of polymer libraries to define novel substrates for functional hepatocytes with inducible drug metabolism.</a> Stem Cell Research. 6 (2), 92-102 (2011).</li>
<li>Lucendo-Villarin, B., Khan, F., Pernagallo, S., Bradley, M., Iredale, J. P., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintaining+hepatic+stem+cell+gene+expression+on+biological+and+synthetic+substrata%5BTitle%5D)+AND+%22BioResearch+Open+Access%22%5BJournal%5D)">Maintaining hepatic stem cell gene expression on biological and synthetic substrata.</a> BioResearch Open Access. 1 (1), 50-53 (2012).</li>
<li>Hay, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+differentiation+of+hESCs+to+functional+hepatic+endoderm+requires+ActivinA+and+Wnt3a+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Highly efficient differentiation of hESCs to functional hepatic endoderm requires ActivinA and Wnt3a signaling.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 105 (34), 12301-12306 (2008).</li>
<li>Szkolnicka, D., Zhou, W., Lucendo-Villarin, B., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pluripotent+Stem+Cell%E2%80%93Derived+Hepatocytes%3A+Potential+and+Challenges+in+Pharmacology%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pharmecol+Toxicol%22%5BJournal%5D)">Pluripotent Stem Cell–Derived Hepatocytes: Potential and Challenges in Pharmacology.</a> Annu Rev Pharmecol Toxicol. 53, 147-149 (2013).</li>
<li>Szkolnicka, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+prediction+of+drug-induced+liver+injury+using+stem+cell-derived+populations%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Accurate prediction of drug-induced liver injury using stem cell-derived populations.</a> Stem Cells Translational Medicine. 3 (2), 141-148 (2014).</li>
<li>Medine, C. N., Lucendo-Villarin, B., Zhou, W., West, C. C., Hay, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robust+Generation+of+Hepatocyte-like+Cells+from+Human+Embryonic+Stem+Cell+Populations%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Robust Generation of Hepatocyte-like Cells from Human Embryonic Stem Cell Populations.</a> Journal of Visualized Experiments. (56), (2011).</li>
<li>Freed, L. E., Vunjak-Novakovic, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Culture+of+organized+cell+communities%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Drug+Delivery+Reviews%22%5BJournal%5D)">Culture of organized cell communities.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 33 (1-2), 15-30 (1998).</li>
<li>Braam, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+Vitronectin+Is+a+Functionally+Defined+Substrate+That+Supports+Human+Embryonic+Stem+Cell+Self-Renewal+via+%CE%B1V%CE%B25+Integrin%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Recombinant Vitronectin Is a Functionally Defined Substrate That Supports Human Embryonic Stem Cell Self-Renewal via αVβ5 Integrin.</a> Stem Cells. 26 (9), 2257-2265 (2008).</li>
<li>Rodin, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonal+culturing+of+human+embryonic+stem+cells+on+laminin-521%2FE-cadherin+matrix+in+defined+and+xeno-free+environment%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Clonal culturing of human embryonic stem cells on laminin-521/E-cadherin matrix in defined and xeno-free environment.</a> Nature Communications. 5 (3195), (2014).</li>
<li>Thaburet, J. -F. O., Mizomoto, H., Bradley, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Throughput+Evaluation+of+the+Wettability+of+Polymer+Libraries%5BTitle%5D)+AND+%22Macromolecular+Rapid+Communication%22%5BJournal%5D)">High-Throughput Evaluation of the Wettability of Polymer Libraries.</a> Macromolecular Rapid Communication. 25 (1), 336-370 (2003).</li>
<li>Lim, J. Y., Donahue, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Sensing+and+Response+to+Micro-+and+Nanostructured+Surfaces+Produced+by+Chemical+and+Topographic+Patterning%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue+Engineering%22%5BJournal%5D)">Cell Sensing and Response to Micro- and Nanostructured Surfaces Produced by Chemical and Topographic Patterning.</a> Tissue Engineering. 13 (8), 1879-1891 (2007).</li>
<li>Teixeira, A. I., Abrams, G. A., Bertics, P. J., Murphy, C. J., Nealey, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+contact+guidance+on+well-defined+micro-+and+nanostructured+substrates%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cell+Science%22%5BJournal%5D)">Epithelial contact guidance on well-defined micro- and nanostructured substrates.</a> Journal of Cell Science. 116 (10), 1881-1892 (2003).</li>
<li>Biggs, M. J. P., Richards, R. G., Wilkinson, C. D. W., Dalby, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+adhesion+interactions+with+topographical+structures%3A+a+novel+method+for+immuno-SEM+labelling+of+focal+adhesions+in+S-phase+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microscopy%22%5BJournal%5D)">Focal adhesion interactions with topographical structures: a novel method for immuno-SEM labelling of focal adhesions in S-phase cells.</a> Journal of Microscopy. 231 (1), 28-37 (2008).</li>
<li>Karuri, N. W., Porri, T. J., Albrecht, R. M., Murphy, C. J., Nealey, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nano-+and+microscale+holes+modulate+cell-substrate+adhesion%2C+cytoskeletal+organization%2C+and+-beta1+integrin+localization+in+SV40+human+corneal+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Transactions+on+Nanobioscience%22%5BJournal%5D)">Nano- and microscale holes modulate cell-substrate adhesion, cytoskeletal organization, and -beta1 integrin localization in SV40 human corneal epithelial cells.</a> IEEE Transactions on Nanobioscience. 5 (4), 273-280 (2006).</li>
<li>Hamilton, D. W., Brunette, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+substratum+topography+on+osteoblast+adhesion+mediated+signal+transduction+and+phosphorylation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The effect of substratum topography on osteoblast adhesion mediated signal transduction and phosphorylation.</a> Biomaterials. 28 (1), 1806-1819 (2007).</li>
<li>Engler, A. J., Sen, S., Sweeney, H. L., Discher, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix+elasticity+directs+stem+cell+lineage+specification%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Matrix elasticity directs stem cell lineage specification.</a> Cell. 126 (4), 677-689 (2006).</li>
<li>Dang, J. M., Leong, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myogenic+Induction+of+Aligned+Mesenchymal+Stem+Cell+Sheets+by+Culture+on+Thermally+Responsive+Electrospun+Nanofibers%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">Myogenic Induction of Aligned Mesenchymal Stem Cell Sheets by Culture on Thermally Responsive Electrospun Nanofibers.</a> Advanced Materials. 19 (19), 2775-2779 (2007).</li>
<li>Azevedo, E. C., Nascimento, E. M., Chierice, G. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((UV+and+gamma+irradiation+effects+on+surface+properties+of+polyurethane+derivate+from+castor+oil%5BTitle%5D)+AND+%22Pol%C3%ADmeros%22%5BJournal%5D)">UV and gamma irradiation effects on surface properties of polyurethane derivate from castor oil.</a> Polímeros. 23 (3), 305-311 (2013).</li>
<li>Rosu, L., Cascaval, C. N., Ciobanu, C., Rosu, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+UV+radiation+on+the+semi-interpenetrating+polymer+networks+based+on+polyurethane+and+epoxy+maleate+of+bisphenol+A%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Photochemistry+and+Photobilogy+A%3A+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Effect of UV radiation on the semi-interpenetrating polymer networks based on polyurethane and epoxy maleate of bisphenol A.</a> Journal of Photochemistry and Photobilogy A: Chemistry. 169 (2), 177-185 (2005).</li>
<li>Yang, X. F., Tallman, D. E., Bierwagen, G. P., Croll, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blistering+and+degradation+of+polyurethane+coatings+under+different+accelerated+weathering+tests%5BTitle%5D)+AND+%22Polymer+Degradation+and+Stability%22%5BJournal%5D)">Blistering and degradation of polyurethane coatings under different accelerated weathering tests.</a> Polymer Degradation and Stability. 77 (1), 103-109 (2002).</li>
</ol>

YSS STK, FibromEd Ürünler Ltd Direktörü, kurucusu ve FibromEd Ürünleri Ltd MB ve JPI bir hissedar olan kurucu ortaklar olduğunu

Kök hücrelerden hepatositleri üretmek için kullanılan mevcut yöntemlerin çoğu hayvan menşeli tanımlanmamış matrisler dayanır. Bu alt-tabakalar uygulama için önemli bir engel temsil eden hücre fonksiyonu ve stabilitesini etkileyen, pahalı ve son derece değişken olabilir. Bu nedenle, kök hücre elde edilen hepatositlerin kültürünü destekleyen sentetik malzemeler için bir ekran ısırttı. Biz belirledik, sağlam bir hepatosit farklılaşma yaklaşımı ile kombinasyon halinde PHNGAD, MDI ve bir genişletici, bu polimerleştirilmesiyl...

Biyolojik maddeler, yaygın olarak, pluripotent kök hücreleri 1 bakım ve farklılaşması kullanılmıştır. Sağlarken, bu biyolojik substratların tanımlanmamış bileşenlerin sayısız içerir. Matrigel kök hücre kültürü ve farklılaşması için yaygın olarak kullanılan bir alt-tabakadır. Ne yazık ki, değişken bileşim hücre fonksiyonu fenotipi etkiler. Alternatif, daha tanımlı biyolojik matris çeşitli 2-7 kullanılıyor olsa, onların hayvansal kökenli veya kötü ölçeklenebilirlik onlara endüstriyel üretimi için uygun bir aday haline getiriyor. Bu nedenle, kök hücre araştırmalarında önemli hedefler tanımlanır kompozisyon ve güvenilir performansı ile sentetik alternatifleri, kimlik vardır. Tanımsız hücre kültürü yüzeylerin sınırlamaları aşmak için bir girişim, kimya ve biyoloji arasında disiplinler arası işbirliği hücre fenotipi desteklemek için kapasite ile sentetik malzemeler tespit ettik. Synthetik yüzeyler, etkili ölçeklenebilir maliyet ve in vivo ortamda taklit, karmaşık 3D yapılarına imal edilebilir. Bu özelliklere bağlı olarak, sentetik alt-tabakalar, çoğu hücre tipinde yaygın olarak 8-10 farklılaşmasını desteklemek ve sürmek için kullanılmıştır. Gelişmiş ve yüksek kapasiteli testler büyük kütüphanelerinden, sentetik malzemelerin hızlı tarama kolaylaştırdı ve biyomedikal araştırma ve geliştirme 11-13 geniş uygulamaları ile esnek özelliklere sahip yeni malzemeler teslim ettik. Yüksek verim, polimer mikro-dizi tarama teknolojisini kullanarak, hızla insan kök hücresi elde edilen hepatositlerin bakımı için uygun olan basit bir poliüretan (PU134), tespit. Bu polimer, hepatosit farklılaşımı ve fonksiyon 14-16 ile ilgili olarak, hayvan kaynaklı alt tabakalara üstün olduğu bulunmuştur. Biz sonradan etkilerini erişmek için kaplama koşulları, topografya ve sterilizasyon işlemini optimizehepatosit fonksiyonları ve ömrünü stabilize polimer performansı. Bu hücre tabanlı modelleme ve rejeneratif tıp uygulamalarında hepatosit biyolojinin temel anlayış açısından önemli etkileri vardır. Burada anlatılan teknoloji sentetik bir polimerin yüzey hücre fenotipi korumak için optimize edilebilir nasıl bir örneğini temsil eder. Verimli bir serumsuz hepatosit farklılaşma protokol ile bu teknolojinin kombinasyonu in vitro olarak modelleme ve rejeneratif tıpta kullanım için hepatosit ölçeklenebilir üretim sağlamak için bir potansiyele sahip olduğuna inanıyoruz.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Polimer PU134 kaplı lamellerin sentezi, hazırlanması, kaplanması ve karakterizasyonu</td></tr><tr><td>Shaker</td><td>Edmun B&uuml; hler</td><td>KS-15</td><td></td></tr><tr><td>Işınlayıcı</td><td>BDT Biointernational</td><td>IBL 637&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Spin kaplayıcı</td><td>Özel Kaplama Sistemi</td><td>P-6708</td><td></td></tr><tr><td>Taramalı Elektron Mikroskobu&nbsp;</td><td>Philips</td><td>XL30CPSEM</td><td></td></tr><tr><td>Atomik Kuvvet Mikroskobu</td><td>DimensionV Nanoscope, VEECO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>p4-GLO CYP3A4</td><td>Promega</td><td>V8902</td><td></td></tr><tr><td>UV ampul</td><td>ESCO</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NanoScope analiz yazılımı</td><td>VEECO</td><td></td><td>sürüm 1.20</td></tr><tr><td>Floresan mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>TH45200</td><td>Volocity 4 Yazılımını Kullanın</td></tr><tr><td>Doku kültürü plakaları</td><td>Corning, İngiltere&nbsp;</td><td>3527</td><td></td></tr><tr><td>cam slaytlar</td><td></td><td>Dietilen</td> glikol Sigma MIC3308 <td></td>Bilimsel Laboratuvar</tr><tr><td></td><td>Malzemeleri; Aldrich</td><td>93171</td><td></td></tr><tr><td>1,6-heksandiol</td><td>Sigma&ndash; Aldrich</td><td>240117</td><td></td></tr><tr><td>Neopentil glikol</td><td>Sigma&ndash; Aldrich</td><td>408255</td><td></td></tr><tr><td>Adipik asit</td><td>Sigma&ndash; Aldrich</td><td>9582</td><td></td></tr><tr><td>susuz N,N-Dimetilformamid</td><td>Sigma&ndash; Aldrich</td><td>227056</td><td></td></tr><tr><td>Dietil eter</td><td>Sigma&ndash; Aldrich</td><td>676845</td><td></td></tr><tr><td>titanyum (IV) butoksit&nbsp;</td><td>Sigma&ndash; Aldrich</td><td>244112</td><td></td></tr><tr><td>1,4-bütandiol&nbsp;</td><td>Sigma&ndash; Aldrich</td><td>493732</td><td></td></tr><tr><td>Vakumlu fırın</td><td>Termobilimsel</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4,4'-Metilenbis (fenil izosiyanat)</td> <td>Sigma&ndash; Aldrich</td><td>101688</td><td></td></tr><tr><td>Tetrahidrofuran</td><td>Sigma&ndash; Aldrich</td><td>401757</td><td></td></tr><tr><td>Sputter kaplayıcı</td><td>Bal-Tec SCD 050</td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Inmunostaining</td></tr><tr><td>Fosfat tampon salin (-MgCl2, -CaCl2)</td><td>Gibco</td><td>10010031</td><td>Oda sıcaklığında saklayın</td></tr><tr><td>PBST, PBS %0.1 TWEEN 20&nbsp;</td><td>&nbsp; Bilimsel Laboratuvar Malzemeleri Ltd</td><td>EC607&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td> <td>ve nbsp; Bilimsel Laboratuvar Malzemeleri Ltd</td><td>CHE5010</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serum Albümini</td><td>Sigma-Aldrich, İngiltere</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>MOWIOL 488 DAPI</td><td>Calbiochem</td><td>475904</td><td>Üreticilerin talimatlarına göre Tris HCl ve gliserolden yapılmıştır</td></tr><td colspan = "4 ">< güçlü > Hücre kültürü ve Fonksiyonel tahlil< / güçlü > CYP3A aktivitesi pGLO kiti Promega V8902 <tr></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hepatozim</td><td>Gibco</td><td>17705021</td><td></td></tr><tr><td>TryLE express</td><td>Life Technologies</td><td><a href="http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/12604013">12604013</a></td><td></td></tr></tbody></table>

optimize sentetik yüzeyler hepatosellüler fenotip kullanma stabilize

Stabilizing Hepatocellular Phenotype Using Optimized Synthetic Surfaces

Şu anda, hücre biyolojisindeki en büyük sınırlamalardan biri farklılaşmış hücre fenotipini korumaktır. Biyolojik matrisler, primer ve pluripotent kök hücre türevi hepatositlerin kültürlenmesi ve bakımı için yaygın olarak kullanılır. Biyolojik matrisler yararlı olsa da, kısa süreli hepatosit kültürüne izin vererek yaygın uygulamalarını sınırlarlar. Sentetik bir polimer kaplama kullanarak sınırlamaların üstesinden gelmeye çalıştık. Polimerler, en geniş biyomalzeme sınıflarından birini temsil eder ve amaca göre ince ayar yapılabilen çok çeşitli mekanik, fiziksel ve kimyasal özelliklere sahiptir. Daha da önemlisi, bu tür malzemeler kalite güvenceli standartlara göre ölçeklendirilebilir ve partiden partiye tutarlılık gösterebilir. Bu, farmasötik test endüstrisinde yüksek verimli tarama veya hücresel bazlı tedavi için hücrelerin genişletilmesi gerekiyorsa çok önemlidir. Poliüretanlar (PU'lar), hücre kültüründe umut vaat eden bir malzeme grubudur. Stabil fenotip sergileyen insan hepatositlerinin uzun süreli kültürü için poliüretan kaplı bir yüzeyin optimize edilmesindeki son ilerlememiz sunulmakta ve tartışılmaktadır.

Polimer çözücü polimer kaplanmış bir yüzey topografisi etkiler Poliüretan 134 tek başına ya da toluen ya da tetrahidrofuran ya da diklorometan ve cam slaytlar farklı formülasyonlar ile kaplı dönüşü ile kombinasyon halinde, kloroform içinde çözüldü. Tarama elektron mikroskopi (SEM) ve atomik kuvvet mikroskopisi (AFM) (Şekil 1) polimer kaplamaların fiziksel özelliklerini karakterize etmek için kullanıldı. Toluen veya kloroform kullanılarak elde edilen kaplama ...

Bu makalede, uzun vadede polimer kaplı yüzeylere geliştirilmesi üzerinde durulacak, kök hücre istikrarlı kültür, insan hepatositleri türetilmiş.

Optimize Sentetik Yüzeyler Hepatosellüler Fenotip kullanma Stabilize

Currently, one of the major limitations in cell biology is maintaining differentiated cell phenotype. Biological matrices are commonly used for culturing ...

Bu prosedürün genel amacı, kök hücre kaynaklı insan hepatositlerinin uzun süreli stabil kültürünü korumak için polimer kaplı yüzeyleri optimize etmektir. Bu, öncelikle poliüretan 1 3 4 veya PU 1 3 4 sentezlenerek gerçekleştirilir. İkinci adım ise PU 1 3 4'ü çözmek için uygun çözücüyü seçmektir.Ardından, cam lam üzerindeki PU 1 3 4 ile spin kaplama işlemi optimize edilir. Son adım, PU 1 34 kaplı cam lamların sterilizasyon prosedürünün optimizasyonudur; nihayetinde taramalı elektron mikroskobu, atomik kuvvet mikroskobu ve ilaç metabolizması analizleri kullanılarak PU 1 34 polimer kaplamanın kök hücre türevli hepatositlerin fonksiyonu üzerindeki etkisi gösterilir.Bu tekniğin, hepatosit içeren URI potansiyel kök hücrelerin kültürde korunmasında kullanılan al Metrices gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, bu sentetik malzemelerin amaca uygun olarak hassas bir şekilde ayarlanabilmesi ve kalite güvence standartlarında ölçeklendirilebilmesidir. Ayrıca, bu malzemeler partiler arası tutarlılık sergiler. Bu tekniğin doğurduğu sonuçlar, sentetik bir polimer yüzeyinin hücre fenotipini korumak için nasıl optimize edilebileceğine dair bir örnek teşkil ettiği için karaciğer hastalıklarının t

stabilizing-hepatocellular-phenotype-using-optimized-synthetic

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Bu makale, insan embriyonik kök hücre popülasyonlarının insan hepatik endoderm üretimi üzerinde durulacaktır.

İnsan Embriyonik Kök Hücre Popülasyonlar Hepatosit gibi Hücreleri Sağlam Nesil

İnsan hepatositlerini ve parankimal olmayan karaciğer hücrelerini aynı donörden izole etmek için bir teknik tanımlanmıştır. Farklı karaciğer hücresi tipleri, fonksiyonel karaciğer modelleri ve doku mühendisliği için temel oluşturur. Bu yeni yöntem, karaciğer hücrelerini yüksek verim ve canlılıkta izole etmeyi amaçlamaktadır.

İlköğretim İnsan Hepatositlerin İzolasyonu ve Non-parankimal karaciğer hücrelerinin Binbaşı popülasyonları İlgili Protokolü

Burada sunulan yöntem, pluripotent kök hücrelerinden insan hepatosit benzeri hücreler üretmek için ölçeklenebilir ve iyi üretim uygulamaları (GMP) 'ya hazır farklılaşma sistemini anlatmaktadır. Temel ve Uygulamalı İnsan karaciğer araştırma için insan hepatosit benzeri hücrelerin oluşturmak için bir düşük maliyetli ve standart bir sistem olarak hizmet vermektedir.

Tanımlı ve hepatosit benzeri Hücrelerinin Ölçeklenebilir Nesil insan pluripotent kök hücreleri gelen

Burada sunulan Protokolü küçük moleküller karaciğer hastalığının tedavisi için tanımlamak için bir platform açıklar. Adım adım açıklamasını nasıl iPSCs hücrelere 96-şey plakaları hepatosit özellikleri ile ayırt etmek ve küçük moleküller için potansiyel terapötik etkinlik ile ekran için hücreleri kullanmak için ayrıntılı sunulmaktadır.

İnsan kullanarak Pluripotent kök hücre kaynaklı hepatosit benzeri hücreler indüklenen ilaç bulma için

Bu iletişim kuralı insan pluripotent kök hücreler 96 iyi plaka kartvizitlere hepatosit benzeri hücreleri üretmek için yarı otomatik bir yaklaşımı açıklar. Bu hızlı ve uygun maliyetli, hepatosit benzeri hücreler temel ve uygulamalı insan araştırma için toplu halde üretim kalite güvence sağlayan işlemdir.

Hepatosit Pluripotent kök hücreler hücreleri gibi yarı otomatik üretimi

Bu protokol, insan pluripotent kök hücrelerden tanımlanan kültür sistemi ve hücre kendi kendine montaj kullanarak hepatospheres üretmek için bir yaklaşım açıklanmaktadır. Bu protokol, hücre çizgilerinin bir dizi tekrarlanabilir, maliyet etkili ve Biyomedikal uygulama için istikrarlı insan hepatospheres üretimi sağlar.

Pluripotent kök hücrelerinden üç boyutlu ınsan Hepatokürlerin serum ücretsiz üretimi

Bu makalenin amacı, insan hepatik progenitörlerin pluripotent kök hücrelerden farklılaşmasına neden olmak için standartlaştırılmış bir yaklaşım sağlamaktır. Bu prosedürün kullanıma hazır ortam formülasyonları ile geliştirilmesi, kullanıcıya biyomedikal araştırma ve çeviri için insan karaciğer hücreleri üretmek için bir facile sistemi sunmaktadır.

Tanımlanmış Bir Farklılaşma Sistemi Kullanarak Pluripotent Kök Hücrelerden Hepatik Progenitör Spesifikasyonu

Fare hepatatitlerinden uzun süreli ek vitro 3D organoid kültür sistemi kuruldu. Bu organoidler shRNA/ektopik yapı, siRNA transfeksiyonu ve CRISPR-Cas9 mühendisliğinin lentivirüs enfeksiyonu ile geçiş ve genetik olarak manipüle edilebilir.

Murine Hepatosit Organoidlerinin Kurulması ve Genetik Manipülasyonu

Bu protokol, hızlı ve tekrarlanabilir endodermal hepatik organoidlerin (eHEPO'lar) oluşumunu tanımlar. Bu protokol ile eHEPO'lar 2 hafta içinde üretilebilmekte ve farklılaşma ve işlevselliklerini kaybetmeden uzun vadede (1 yıldan fazla) genişleyebilmektedir.

Fonksiyonel Endodermal Hepatik Organoidlerin Üretimi

Son teknik gelişmeler, ilaç metabolizması ve toksisite uygulamaları için bir in vitro platformun ölçekli üretimini mümkün kılmıştır. Tamamen insanlardan oluşan bir 2D+ hepatik sistem (TV2D+), geleneksel iki boyutlu kültür yöntemlerini kullanarak fizyolojik olarak ilgili sonuçlar sağlar. Bu protokol, sistemin kurulumu, bakımı ve uygulanmasında son kullanıcıları destekleyecektir.

İlaç Geliştirme Uygulamaları için Tüm İnsanlardan Oluşan Bir Hepatik Kültür Sistemi

Öğrenin polimer kaplı yüzeylerin sentezi ve spin kaplama ile kök hücre kaynaklı hepatositlerin uzun süreli kültürünü optimize etme yöntemlerini. Bu teknik karaciğer hastalıkları tedavisi için önemli uygulamalar sunar.

Optimize Sentetik Yüzeyler Hepatosellüler Fenotip kullanma Stabilize

Daha fazla video keşfet