Optimize Sentetik Yüzeyler Hepatosellüler Fenotip kullanma Stabilize

Bu prosedürün genel amacı, kök hücreden türetilmiş insan hepatositlerinin uzun vadeli stabil kültürünü korumak için polimer kaplı yüzeyleri optimize etmektir. Bu, önce poliüretan 1 3 4 veya PU 1 3 4'ün sentezlenmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, PU 1 34'ü çözündürmek için doğru çözücüyü seçmektir.

Daha sonra, cam kapak kızağı üzerindeki PU 1 3 4 ile sıkma kaplama işlemi optimize edilir. Son adım, polimer P 1 34 kaplı cam kapak kaymalarının sterilizasyon prosedürünün optimizasyonudur ve sonuçta elektron mikroskobu, atomik kuvvet mikroskobu ve ilaç metabolizmasını tarar. Tahliller, PU 1 34 polimer kaplamanın kök hücre türevli hepatositlerin işlevindeki etkisini göstermek için kullanılır.

Bu tekniğin, hepatositlere sahip URI potent kök hücrelerin korunmasında kültürde al Metrices'in kullanılması gibi mevcut yöntemlere göre ana avantajı, bu sentetik materyallerin amaca göre ince ayarlanabilmesi ve kalite güvence standartlarına göre bir ölçek oluşturulabilmesidir. Ek olarak, toplu iki veri yolu tutarlılığını gösterirler. Bu tekniğin etkileri, karaciğer hastalıklarının tedavisine kadar uzanır, çünkü sentetik bir polimerin yüzeyinin hücre fenotipini korumak için nasıl optimize edilebileceğinin bir örneğini temsil eder.

Prosedürü göstermek, bu prosedüre başlamadan önce laboratuvarımdan bir doktora sonrası araştırmacı olan Dr.Jeffrey Walton olacaktır. Mono'nun bir altı hekzan kadranlı di etilen glikol ve neo PenTile glikolüne 40 santigrat derecede 48 saat boyunca vakumlu fırında ısıl işlem uygulayın. Kalan suyu çıkarmak için, her bir monomerden 22 milimol ve 55 milimol dpic asit, bir dean stark aparatına bağlı ve manyetik bir karıştırma çubuğu ile donatılmış iki boyunlu yuvarlak tabanlı bir şişeye ekleyin.

Bunu takiben, kimyasalın şişeye eklenmesi sırasında herhangi bir nem emilimini önlemek için tüm düzeneği bir vakum altına yerleştirin ve cam eşyayı altı saat boyunca 40 santigrat derecede hafifçe ısıtın. Düzeneği fırından çıkardıktan ve sistemi nitrojen altına yerleştirdikten sonra, 0.0055 mol katalizör titanyum dört, ancak şişeye bir şırınga ile damla damla oksit ekleyin. Reaksiyon karışımını 24 saat boyunca 180 santigrat derecede karıştırın ve kalan suyu dean stark tuzağında toplayın.

Ürünün oda sıcaklığına soğumasını bekleyin. Daha sonra, 3.2 milimol veya poliol P-H-N-G-A-G'nin bir eşdeğeri 6.4 mili mol veya iki eşdeğer dört dört metil ve bir bisfenol izosiyanat ile karıştırın. 12 mililitre susuz DML'de, bir dean stark aparatına bağlı ve manyetik bir yıldız çubuğu ile donatılmış iki boyunlu yuvarlak tabanlı bir şişeye.

Reaksiyon karışımını bir nitrojen atmosferi altında 70 santigrat derecede karıştırın. Daha sonra katalizör titanyum dört oksidi şırınga yoluyla damla damla %0.8'lik bir nihai konsantrasyona ekleyin. Bir saat sonra, kopolimer ürünü vermek için zincir genişleticinin bir eşdeğeri olan dört bütan kadranı ekleyin. Sıcaklığı 90 santigrat dereceye yükseltin ve nitrojen atmosferi altında 24 saat aç kalın.

Reaksiyon karışımı oda sıcaklığına çağrıldığında, poliüretan ürünün çökelmesi gözlenene kadar reaksiyon karışımına damla damla bir dal eter koyun. Reaksiyon karışımını bir santrifüj tüpüne aktardıktan sonra, çözeltiyi beş dakika boyunca 5, 300 kez G'de santrifüjleyin. Boşaltma işleminden sonra supinat, çözücü buharlaşana kadar oda sıcaklığında kurur.

Daha sonra 200 miligram PU 1 34'ü bir cam şişeye tartar. Numuneyi, bire bir oranında kloroform veya kloroform ve toluen içinde %2'lik bir nihai konsantrasyona veya tetra roran veya tetra roran anti kloro metan kombinasyonuna seyreltin. Bire bir oranında, çözelti homojen hale gelene ve çökelti gözlenmeyene kadar dakikada 200 hareket hızında bir çalkalayıcı kullanarak çözeltiyi oda sıcaklığında 20 dakika kuvvetlice çalkalayın.

Bittiğinde, döndürme coter'ın üzerine yaklaşık 15 milimetre kare cam kapak fişi yerleştirin. Kapak fişine 50 mikrolitre PU bir ila dört solüsyon uygulayın, bir pipet kullanarak her bir kapak fişini 23 kez G'de yedi saniye döndürün, ardından sterilizasyondan önce kapak fişini oda sıcaklığında en az 24 saat havayla kurutun. Bu noktada, gama, bir laboratuvar radyatörü kullanarak 12 dakika boyunca 10 grilik bir doz uygulayarak her bir polimer kaplı örtü kızağını ışınlar.

Alternatif olarak, her bir polimer kaplı kapak kızağını her iki tarafta 16 dakika boyunca 30 watt'lık bir UV ampulü kullanarak UV ışınlayın. Bittiğinde, polimer kaplı örtü astarını, örtü astarı boyutuna göre uygun bir doku kültürü plakasına yerleştirin. İnsan embriyonik kök hücresinin kültürlenmesi ve farklılaştırılmasından sonra, hücreler ayrışma reaktifi kullanılarak ayrıldı ve bunları, serum serbest ortam taramalı elektron mikroskobu varlığında farklılaşma işleminin dokuzuncu gününde PU 1 34 kaplı kapak fişlerine tekrar oynatın.

Farklı kaplanmış cam kapak fişlerinin görüntüleri, toluen veya kloroform ile kaplamanın homojen olmadığını ve PE 1 34 çökeltme ile düzensiz bir kaplama olduğunu göstermektedir. Buna karşılık, tetrahedran çok daha düzgün bir yüzeyin spin kaplamasına izin verdi. Ek olarak, farklı polimer kaplamaların atomik kuvvet mikroskobu analizi, tetra hidro furin içinde çözünen P 1 34'ün pürüzlülüğünde, daha homojen bir PU 1 34 kaplama gösteren diğer çözücülere kıyasla %40'lık bir azalma gösterir, biyolojik bir uygulama hepatik endoderm farklılaşması indüklendi ve dokuzuncu günde, sitokeratin 19 alfa beyaz proteini ve alfa için hepatosit nükleer faktörünü eksprese eden hücrelerin çoğunluğu ile hepato blastları benzeri hücreler belirgindi. metabolik fonksiyonun bir ölçüsü olarak düşük albümin seviyeleri.

Sitokrom P four 50 fonksiyonu, farklı polimer kaplı yüzeyler üzerine yeniden kaplamadan dört gün sonra değerlendirildi. tetra hydro fure mpu 1 3 4 kaplı yüzeyler üzerinde yeniden kaplanan hücrelerde metabolik aktivitede iki kat artış gözlendi. Bu sonuçlar, insan embriyonik kök hücre türevli hepatosit metabolik aktivitesinin daha düzgün bir P 1 34 kaplama yüzü ile iyileştirildiğini göstermektedir Kontrast görüntüleme, UV veya gama ışınlamasından sonra büyük bir fark göstermedi, bu da taramalı elektron mikroskobu analizi ile daha da doğrulandı.

İnsan embriyonik kök hücre türevli hepatositler, gama ışınımlı PU 1 34 kaplamalı cam örtü astarları üzerinde yeniden kaplanmış, UV ışınımlı PU 1 34 kaplamalı cam örtü astarları üzerinde yeniden kaplanmış hücrelere göre CYP'de üç kat bir aktivite göstermiştir. Bu gözlemler, gama radyasyonunun en uygun sterilizasyon tekniği olduğunu göstermektedir. Bu prosedürü denerken, farklı spin kaplama CLO'ları arasındaki kaplamanın homojenliğini kontrol etmeyi unutmamak önemlidir ve kimyasal çözücü enstrümantasyonu ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın.

Bu işlem yapılırken mutlaka koruyucu gözlük takılması gibi uygulamalar yapılmalıdır.