RESEARCH
Peer reviewed scientific video journal
Video encyclopedia of advanced research methods
Visualizing science through experiment videos
EDUCATION
Video textbooks for undergraduate courses
Visual demonstrations of key scientific experiments
BUSINESS
Video textbooks for business education
OTHERS
Interactive video based quizzes for formative assessments
Products
RESEARCH
JoVE Journal
Peer reviewed scientific video journal
JoVE Encyclopedia of Experiments
Video encyclopedia of advanced research methods
EDUCATION
JoVE Core
Video textbooks for undergraduates
JoVE Science Education
Visual demonstrations of key scientific experiments
JoVE Lab Manual
Videos of experiments for undergraduate lab courses
BUSINESS
JoVE Business
Video textbooks for business education
Solutions
Language
tr_TR
Menu
Menu
Menu
Menu
DOI: 10.3791/53296-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a novel strategy to isolate viral replication compartments from adenovirus-infected human cells. The method establishes a cell-free system that aids in understanding the molecular mechanisms of viral genome replication and host interactions.
Adenovirüs (Ad) ile enfekte olmuş insan hücrelerinden viral replikasyon kompartmanlarını (RC) izole etmek için yeni bir strateji sunuyoruz. Bu yaklaşım, viral genom replikasyonunu ve ekspresyonunu düzenleyen moleküler mekanizmaların yanı sıra RC'de kurulan viral-konak etkileşimlerinin düzenlenmesine yardımcı olabilecek hücresiz bir sistemi temsil eder.
Bu prosedürün genel amacı, adenovirüs ile enfekte olmuş hücrelerde oluşan replikasyon bölmeleri ile zenginleştirilmiş, bileşimlerinin, ultra yapılarının ve ilgili aktivitelerinin ayrıntılı olarak incelenmesi için nükleer olmayan bir fraksiyon elde etmektir. Bu yöntem, DNA virolojisi alanında, viral genom replikasyonunu kontrol eden moleküler mekanizmaların ve virüsün konak hücre etkileşimlerinin düzenlenmesi için replikasyon bölmelerine bağlı olan ekspresyonun incelenmesi gibi temel soruların ele alınmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, nükleer replikasyon yapan DNA virüslerinin enfekte hücreyi kontrol altına almasına izin veren mekanizmaların incelenmesine uygun hücresiz bir sistem kurmak için hız gradyanına dayalı basit bir prosedür olmasıdır.
Bu testi gerçekleştirmek için, ilk olarak, bir mililitre 85 ve DMM'yi 100 milimetre doku kültürü kaplarında enfekte etmeye başlamak için ekteki metin protokolünde açıklandığı gibi adenovirüs tip beş veya D beş ve insan sünnet derisi fibroblastlarını veya HFF'yi hazırlayın, hücre başına 30 odak oluşturan birim veya FFU'luk bir MOI'de hücreleri nemlendirilmiş bir hücre kültürü inkübatöründe iki saat inkübe edin 37 santigrat derece ve% 5 karbondioksitte. Virüs aşısının hücreler üzerinde homojen dağılımını sağlamak için bulaşıkları her 15 dakikada bir dikkatlice sallayın. İnkübasyondan sonra, ortamı çıkarın ve taze dmem ekleyin.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Related Videos
09:35
Related Videos
13.5K Views
12:15
Related Videos
15.1K Views
12:45
Related Videos
21.7K Views
11:20
Related Videos
13.5K Views
15:33
Related Videos
16.5K Views
13:17
Related Videos
15.2K Views
12:34
Related Videos
8.1K Views
10:06
Related Videos
15.4K Views
03:52
Related Videos
4.1K Views
09:12
Related Videos
4.7K Views