Name: Bağıntılı Işık ve Elektron Mikroskobu β-amiloid plaklarının ile Mikroglial Etkileşimleri Eğitim için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-06-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 52 s
Description: Öğrenin, methoxy-X04 kullanarak Alzheimer fare modellerinde β-amiloid plaklarını görüntüleme yöntemini. Bu teknik, immün boyama ve elektron mikroskobu için doku işlemeden önce plak içeren bölgeleri ön tarama yapmanızı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Centre de recherche du CHU de Québec'in Biyogörüntüleme Platformu'ndan Dr. Sachiko Sato ve Julie-Christine Lévesque'ye teknik yardımları için minnettarız. Kanada Doğa Bilimleri ve Mühendislik Araştırma Konseyi (NSERC) RGPIN-2014-05308, Banting Araştırma Vakfı ve Kanada İskoç Riti Yardım Vakfı'ndan M.E.T'ye verilen hibeler bu çalışmayı destekledi.
H.E.H., Lübnan Eğitim ve Yüksek Öğrenim Bakanlığı'ndan ve K.B. Université Laval Faculté de médecine'den burs aldı.

Not: Université Laval Hayvan Bakım Komitesi tarafından yönetilen gibi tüm deneyler onaylanmış ve Hayvan Bakımı yönergelere Kanada Konseyi ile uyumlu, Kurumsal hayvan etik komitenin kurallarına altında yapıldı. yaş 4 ile 21 ay arasında, APP-PS1 erkek fareler kullanılmıştır. yiyecek ve suya serbest erişim ile 25 ° C - Bu hayvanlar, 22, 12 saat ışık-karanlık çevrimi altında muhafaza edilmiştir. 1. Metoksi-x04 Çözeltisinin Hazırlanması <ol><li> % 10 dimetil sülfoksit (DMSO),% 45 propilen glikol ve% 45 sodyum fosfat tamponlu tuzlu su (100 mM fosfat tampon maddesi içinde% 0.9 NaCl ihtiva eden bir çözelti içine metoksi-x04 çözülmesiyle metoksi-x04 9 bir 5 mg / mL çözelti , pH 7.4). <ol><li> bir mikro kullanarak, metoksi-x04 bileşikten 5 mg ağırlığında. davlumbaz altında DMSO içinde metoksi-x04 çözülür ve berrak yeşil bir çözelti elde edilene kadar karıştırılır. Arda propilen glikol ve ph ekleyinHer bir ek ile birlikte karıştırılarak bir solüsyon üzerine durdurulmuştur osphate. </li><li> çevirici O / N 4 ° C&#39;da, çözelti karıştırılır. sarımsı yeşil emülsiyon elde. Çözelti bir bozulma olmadan en fazla iki ay boyunca 4 ° C &#39;de muhafaza edilebilir. </li></ol></li></ol> 2. Metoksi-x04 Çözelti Enjeksiyon <ol><li> önceden perfüzyon 24 saat, fareler tartılır ve 27 ½ G iğne kullanılarak vücut ağırlığı için 10 mg / kg&#39;lık bir dozda, her bir fare metoksi-x04 intraperitoneal verir. </li></ol> Enjekte edilen farelerin 3. transcardial perfüzyon <ol><li> Perfüzyon bir gün önce, fosfat tamponlu tuzlu su (PBS),% 3.5 akrolein ve% 4 paraformaldehid (PFA) Çözeltilerin 13 uygun hacimleri hazırlamak ve 4 ° CO / N saklayın. Not: Bu çözeltiler perfüzyon ve her iki immünohistokimya önceden yerleştirilmesi için kullanılacaktır. akrolein çalışırken hem aşındırıcı ve toksik olduğu gibi özel dikkatAraştırmacılar ve çevre. akrolein plastik aşındırıcı Ek olarak, her zaman akrolein çözeltilerin hazırlanması için uygun bir cam kullanın. </li><li> perfüzyon gününde, 25 um partikül tutma kaba filtre kağıdı kullanılarak, PFA ve akrolein filtre. </li><li> perfüzyon sırasında 25 ml / dakika bir akış hızında, 15 ml PBS, akrolein 75 mi, ve sırasıyla fare dolaşıma PFA 150 ml sunmak için bir peristaltik pompa gibi çalışır. Dikkatli kullanın. PFA ve akrolein zararlı dumanlar önlemek için bir davlumbaz içine kesinlikle perfüzyon gerçekleştirin. <ol><li> Pompayı kurmak PBS çözeltisi içine bir ucunu, PBS (yaklaşık 15 ml tutarak) boru doldurun ve diğer ucunu bir 25 G kanatlı kan toplama iğne düzeltmek için. Her zaman, tüp sıkışmış hava kabarcıkları serbest olduğundan emin olun. </li><li> PBS ile doldurulmuş boru ile perfüzyon pompası ayarlandıktan sonra akrolein şişesi doğrudan tüp yerleştirin. </li></ol></li><li> birintraperitonal 27 ½ G iğne ile, sodyum pentobarbital vücut ağırlığı doz 90 mg / kg olan bir seferde bir fare aesthetize. Kuyruk / ayak tutam yanıtları değerlendirin. Fare gibi caydırıcı, ağrılı uyaranlara tepkisiz olması durumunda devam edin. </li><li> çalışma yüzeyine forepaws ve pençelerin bantla tarafından (yukarı yüz sırt üstü yatarken) yatar pozisyonda fare sabitleyin ve dikkatle diğer organlara zarar vermeden kalp maruz. diyaframı delen sonra hızlı çalışması için emin olun. <ol><li> göğüs kafesi ile kaudal başlayan göğüs orta hat boyunca cerrahi makas ile deri yoluyla bir kesi gerçekleştirmek ve klavikula rostral geçin. </li><li> ventral göğüs kafesi tabanı boyunca iki ek yanal kesiler olun. Yavaşça hareket ve tüm göğüs boşluğu maruz emin olun, cildin iki flep pin. </li><li> göğüs boşluğu maruz künt forseps ile kılıç şeklinde sürecini tutun ve sivri makas sakinleştirmeyes. , Diyafram ve göğüs kafesi kesti akciğerleri delinmesiyle önlemek için dikkatli olmak ve clavicles için kesi rostral devam ediyor. diyaframı delen sonra hızlı çalışması için emin olun. </li></ol></li><li> Yavaşça künt forseps ile perikard kesesi gözyaşı. Künt forseps ile sabit kalbi tutun sağ atrium kesti ve PBS infüzyon başlar. Hemen sol ventrikül içine kan toplama iğne takın. </li><li> Daha sonra, (150 ml karşılık gelen) 6 dakika boyunca PFA geçiş (75 mi tekabül eden) 3 dakika boyunca akrolein, ardından PBS ile fare (hortumda) serpmek. tüp girmesini kabarcıklarını engellemek için çözüm geçmeden önce, pompa akışını duraklatmak emin olun. </li><li> Fare başını kesmek ve tespit edilmiş olan beyin özü ve 4 ° C&#39;de en az 2 saat boyunca% 4 PFA ihtiva eden bir cam şişeye doğrudan yerleştirin. <ol><li> beyin ayıklamak için, kafatası maruz deri yoluyla kesmek için makas ve cımbız kullanın. Dikkatle kafatası op kırmakgözlerinin arasındaki en, ve bunun küçük parçalar halinde kapalı çip yatan beyin ortaya çıkarmak. </li><li> Dikkatle vibratome kesit için devam etmeden önce ek 2 saat süreyle% 4 PFA ile maruz beyin ve yazı Fix çıkarın. </li></ol></li></ol> Bir vibratome kullanarak 4. Beyin Kesit <ol><li> soğutulmuş PBS ile sabit beynini 3 kere yıkayın. Keskin bir jilet kullanarak, (bu bölge soruşturma altında olmadığı sürece) koku Ampulü çıkarmak ve 2 içine enine beyin kesti - prosedürünü hızlandırmak amacıyla eş zamanlı olarak kesitli olabilir bütün bunlar yaklaşık olarak eşit yükseklikte 3 adet. </li><li> dikey tepsiye güvenli numune plakası üzerine beyin dokusu parçaları Tutkal. Düzgün kesme yüzeyi numune plakasına sıkıca yapışır ve kesit işlemi sırasında yerinden almaz emin olun. tüm beyin yüzeyi tamamen batık dek tepsinin içine yeterli PBS çözüm ekleyin. Inci tutmak önemlidirE beyin parçaları ve sonraki bölümlerde tam bu aşamada boyunca PBS dalmış. </li><li> , Vibratome tepsiyi yerleştirin 0.5 mm / sn, 90 Hz kesit frekans ve 50 um kalınlığında kesitler elde etmek amacıyla 50 um besleme kalınlığına kesit hızını ayarlar. Sonra ince bir fırça kullanılarak, dondurarak saklama çözeltisi (% 40 PBS,% 30 etilen glikol ve% 30 gliserol) ihtiva eden 20 ml&#39;lik bir cam şişe içine bölümleri aktarın. sonraki kullanıma kadar -20 ° C &#39;de şişeleri saklayın. aşağıdaki adımlarda tarif edildiği gibi alternatif olarak, yakın taranması için PBS bölümleri tutun. </li></ol> Metoksi-x04-lekeli Plaketlerinin Varlığının 5. Bölüm Taraması <ol><li> Stereotaksik fare beyninin yardımı örneği için ilgili bölgeyi ihtiva eden 14 seçeneğini beyin bölümleri, bu örnekte kullanılan hipokampüs CA1 Atlas. Yeterince, dondurarak saklama çözeltisi ihtiva eden 24 oyuklu bir kültür plakasına olan bir kuyuya her bir bölümü yerleştirinböylece kurumasını bölümleri önlemek için. </li><li> , Bölümleri kuruma aşağıdaki prosedürü kullanarak önlemek için, arka arkaya her bir bölümü inceleyin: <ol><li> tek kullanımlık bir pipet ile bir mikroskop lamı PBS bir damlacık ekleyin ve damlacık bölümü yerleştirin. </li><li> metoksi-x04 etiketli Aβ plaklar içeren bölgelerinin belirlenmesi için bir floresan mikroskobu altında bölümü inceleyiniz. Not: metoksi-x04 kolayca flüoresans ultraviyole (UV) filtre (eksitasyon 340-380 nm) kullanılarak görüntülenebilir. </li></ol></li><li> yapısal bölgeye doğrudan plakların varlığını ilişkilendirmek için her görüntü her iki alanda da aynı bölgeyi göstermek gerekir, çünkü mikroskop sahne hareket ettirmeden parlak alanda ilgi alanları (ROI) bölgelerinin görüntülerin yanı sıra floresan modunda Yakalama doku kesiti. </li><li> Kaydet ve hayvan sayısına göre çekilen görüntüleri adlandırın. Ayrıca plaka iyi numarası ve resim alanını ta kayıtken. Örneğin, Örn: 9978A1B; Hayvan sayısı: 9978; Peki sayısı: A1; Alan: Parlak. Görüntüleme tamamlandıktan sonra geri onun iyi belirlenmiş bölümüne yerleştirin. Not: Sonunda, incelenen her bir bölüm için, iki resim, parlak alanda bir ve UV alanında başka elde edilir. </li><li> kuyu sayısına göre Görüntü J aynı ROI iki görüntü (parlak alanında tek ve UV alanında diğer) açın ve MosaicJ eklentisi kullanarak, iki görüntü kenarlarını hizalayın ve hizalanmış ve kombine görüntüyü kaydetmek o geldi. </li><li> Özellikle hayvan sayısı ile ayrı bir klasörde resmi kaydedin. belirlemek ve doku bölümünde plaklar lokalize ve iki farklı alanda (parlak ve UV) bütün bölümün tam bir görünümü var görüntüleri birleştirin. </li><li> Tarama işlemi tamamlandıktan sonra immün ya da daha fazla işlemci, CA kadar, kriyoprotektan ihtiva eden bir 24-çukurlu kültür plakasına -20 ° C&#39;de incelendi bölümleri depolamakdışarı rried. </li></ol> 6. IBA1 için immün Ön gömme Not: oda sıcaklığında yavaş hareket eden rocker plaka koyarak seçilmiş serbestçe yüzen bölümlerde IBA1 için immün gerçekleştirin. <ol><li> İyice yaklaşık 1 ml PBS, 10 dakika boyunca sürekli olarak, her bir yıkama ile bölümleri 3 kez yıkayın. </li><li> 10 dakika boyunca PBS çözeltisi içinde% 0.3 hidrojen peroksit ile endojen peroksidazlar söndürün. Bu adım, bir arka plan boyama önlemek için önemlidir spesifik olmayan peroksidaz aktivitesi, önler. </li><li> 10 dakika her biri için PBS içinde 3 kez doku yıkayın. </li><li> 30 dakika boyunca PBS çözeltisi içinde% 0.1 sodyum borohidrid bölümleri inkübe edin. Bu adım, sabitleme adımından kalan aldehitleri azaltmak için çok önemlidir, ve akrolein doku fiksasyon kullanıldığında özellikle önemlidir. </li><li> 10 dakika her zaman için PBS 3 kez doku yıkayın ve tüm kabarcıklarını çıkarmak için emin olun. </li><li> 1 saat bölümleri engelleyin.Farklı antikorlar farklı engelleme süreleri ve çözümler gerekebilir. (PH 7.4 TBS) IBA1 için,% 10 cenin sığır serumu,% 3 sığır serum albümini ve% 0.01 Triton X-100, 50 mM Tris-tamponlu tuzlu su içinde ihtiva eden bloklama tamponu hazırlayın. Not: bloke etme adımı, birincil antikorun özel olmayan bağlanmasını önlemek içindir. Triton X-100 ve düşük konsantrasyonda daha iyi bir boyama için membran az geçirgenliği sağlar ve EM altındaki dokuların en ultrastrüktürel özellikleri korumak için yeterince düşüktür. </li><li> 4 ° CO / N olarak: dokusundan Bloklama tamponunu çıkarın ve birincil antikor çözeltisi içinde inkübe (bloke tamponu içinde [1000 1] seyreltilmiş tavşan anti-IBA1). </li><li> 10 dakika her zaman için TBS içinde 3 kere yıkayın. </li><li> 90 dakika 0.05 M TBS: ikincil antikor (biyotin konjuge edilmiş keçi anti-tavşan) [200 1] inkübe edin. </li><li> 5 dakika her zaman için TBS içinde 5 kez yıkayın. </li><li> TBS içinde avidin-biotin kompleksi çözeltisi (: [100 1], Biyotin, avidine [100: 1]) inkübe1 saat süre ile çözelti. </li><li> 5 dakika her zaman için TBS içinde 5 kez yıkayın. </li><li> % 0.05 diaminobenzidin (DAB) ve 8 dakika için TBS içinde% 0.015 hidrojen peroksit ile IBA1 boyama Ortaya. Not: DAB gelişme zamanlama protokolü protokolü değişebilir ve hızlı bir şekilde ışık mikroskobu altında lekeli bölümleri incelenerek tespit edilmelidir. Not: IBA1, bir (temsilci örneğin Şekil 2) açıkça 20X de IBA1 lekeli mikroglia hücre gövdeleri ve süreçleri görselleştirmek mümkün olmalıdır. bilinen bir kanserojen olarak, DAB kullanılarak dikkatli olun. </li><li> (Yukarıda anlatıldığı gibi) dikkatli bir şekilde, bu aşama sırasında bölümler izleyerek aşırı geliştirilmesi kaçının. 5 dakika, her seferinde soğutulmuş PB 5 kez bölümleri yıkayarak reaksiyonu durdurun. </li></ol> Elektron Mikroskopi 7. İşleme <ol><li> bir cam şişede PBS içinde% 1 ozmiyum tetroksit çözeltisi hazırlayın. Osmiyum tetroksit ışığa olduğu; g kapağıAlüminyum folyo ile lass şişe ışıktan çözelti korumak için. çok tehlikeli kimyasal olarak, osmiyum tetroksit kullanılarak dikkatli olun. Bu ve bir davlumbaz içine aşağıdaki adımları uygulayın. </li><li> bölümler PBS çıkarın ve düz ince bir fırça kullanarak onları yayıldı. kurumasını bölümleri tutmak için bir defada bu adımı bir kuyu gerçekleştirin. derhal bölümlerde herhangi kıvrımlar kalıcı hale gelecektir olarak, osmiyum tetroksit ekleme ve sadece bölümleri kıracak doku sonrası osmiyum tespit düzleştirmek için denemeden önce bölümleri düzleştirmek için emin olun. </li><li> katlama bölümleri önlemek için, bir transfer pipeti ile bir seferde ozmiyum tetroksit bir damla ekleme, oda sıcaklığında 30 dakika boyunca ozmiyum tetroksit bölümleri bırakın. ışıktan bölümleri korumak için alüminyum folyo ile kuyu örtün. Not: Bu adım bölümlerinde lipidler giderir. Doku osmiyum sonrası tespit sonrasında çok koyu görünür. </li><li> Bölümler ozmiyum tetro içinde ikenXide, 20 g komponent A karıştırılarak bir tek beher içinde plastik reçine hazırlanması 20 gr bileşen B, 0.6 g bileşen C, ve 0.4 gr bileşen D üzerinde sırayla bileşenlerin birlikte birleştirin ve de 10 mi serolojik bir pipet kullanarak karıştırın kadar homojen bir renk elde edilir. </li><li> alüminyum tartı yemekleri hazırlanan karışımı aktarın. onlar susuz edildikten sonra onlar doku kesitlerinde alacaksınız. </li><li> % 35,% 35,% 50,% 70,% 80,% 90,% 100,% 100,% 100: aşağıdaki sırayla 2 dakika süreyle etanol artan konsantrasyonlarda bölümleri kurutmak. </li><li> 2 dakika her zaman için 3 kez, kalan etanol kaldırmak propilen oksit bölümleri batırmak için. 20 ml&#39;lik bir cam şişe içine 24 oyuklu bir kültür plakasına gelen susuz kesitleri çıkarın. Her zaman plastik erir propilen oksit ile çalışırken cam şişeleri kullanın ve tehlikeli olduğu gibi, dikkatli korumak. </li><li> propilen oksit soluti bölümler aktarmak için bir bombeli cam pipet veya ince bir fırça kullanınreçine içine ve üzerine oda sıcaklığında infiltrasyon için O / N bırakın. propilen oksit ile reçine sulandırmak için dikkatli olun. </li><li> poli-kloro-tri-floro-etilen (PCTFE) filmsheets üzerine reçine ile bölümü yerleştirme: <ol><li> PCTFE filmsheets ilgili bölümler gömme önce 15 dakika - 10 60 ° C fırında - 50 içine örnekleri içeren alüminyum tartı yemekleri yerleştirin. </li><li> bölümleri gömerken, bir alüminyum bir defada çanak tartı ile çalışır. ince bir fırça kullanılarak, tek bir PCTFE film tabakasının üzerine reçinenin ince bir tabaka boya. </li><li> PCTFE film tabakasının çanak ağırlığında alüminyumdan bir defada dokusunun bir bölümünü hareket ettirin. onu rahatsız etmemek için dikkatli olmak, doku etrafında aşırı reçine çıkarmak. </li><li> PCTFE film tabakasının çanak ağırlığında birinden tüm bölümleri taşıdıktan sonra, doku sandviç yaratarak, birinci üzerinden ikinci PCTFE yaprak yerleştirin ve 2 yaprak arasında reçine. </li></ol></li><li> 5 ° C&#39;de 3 gün boyunca bir kuluçka makinesi içinde reçine polimerize5-60 ° C. </li><li> malzeme artık ultra ince kesit ve ultrastrüktürel inceleme, genellikle EM çekirdek tesisleri tarafından gerçekleştirilen özel teknikler için hazırdır. ultrastrüktürel bozulma olmadan oda sıcaklığında güvenle PCTFE ince levhalar arasındaki örnekleri saklamak. Not: Kesit çok ince ve transmisyon elektron mikroskobu incelemesi için sonraki adımlar ayrı bir protokole 13 açıklanmıştır. </li></ol>

<ol><li>Heneka, M. T., Carson, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroinflammation+in+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuroinflammation in Alzheimer's disease.</a> The Lancet Neurol. 14 (4), 388-405 (2015).</li>
<li>Herrup, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+case+for+rejecting+the+amyloid+cascade+hypothesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The case for rejecting the amyloid cascade hypothesis.</a> Nat. Neurosci. 18 (6), 794-799 (2015).</li>
<li>Heppner, F. L., Ransohoff, R. M., Becher, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+attack%3A+the+role+of+inflammation+in+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Immune attack: the role of inflammation in Alzheimer disease.</a> Nat. Rev. Neurosci. 16 (6), 358-372 (2015).</li>
<li>Klunk, W. E., Bacskai, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Abeta+plaques+in+living+transgenic+mice+with+multiphoton+microscopy+and+methoxy-X04%2C+a+systemically+administered+Congo+red+derivative%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuropathol.+Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Imaging Abeta plaques in living transgenic mice with multiphoton microscopy and methoxy-X04, a systemically administered Congo red derivative.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 61 (9), 797-805 (2002).</li>
<li>Liebscher, S., Meyer-Luehmann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+peephole+into+the+brain%3A+Neuropathological+features+of+Alzheimer%27s+disease+revealed+by+in+vivo+two-photon+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">A peephole into the brain: Neuropathological features of Alzheimer's disease revealed by in vivo two-photon imaging.</a> Front Psychiatry. 3, 26(2012).</li>
<li>Fuhrmann, M., Bittner, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+Cx3cr1+knockout+prevents+neuron+loss+in+a+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglial Cx3cr1 knockout prevents neuron loss in a mouse model of Alzheimer's disease.</a> Nat. Neurosci. 13 (4), 411-413 (2010).</li>
<li>Borchelt, D. R., Ratovitski, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+amyloid+deposition+in+the+brains+of+transgenic+mice+coexpressing+mutant+presenilin+1+and+amyloid+precursor+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Accelerated amyloid deposition in the brains of transgenic mice coexpressing mutant presenilin 1 and amyloid precursor proteins.</a> Neuron. 19 (4), 939-945 (1997).</li>
<li>Ly, P. T. T., Cai, F., Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+neuritic+plaques+in+Alzheimer%27s+disease+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Detection of neuritic plaques in Alzheimer's disease mouse model.</a> J Vis Exp. (53), (2011).</li>
<li>Sadowski, M., Pankiewicz, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+prion+amyloid+deposits+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuropathol.+Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Targeting prion amyloid deposits in vivo.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 63 (7), 775-784 (2004).</li>
<li>Bussière, T., Bard, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphological+characterization+of+Thioflavin-S-positive+amyloid+plaques+in+transgenic+Alzheimer+mice+and+effect+of+passive+Abeta+immunotherapy+on+their+clearance%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Morphological characterization of Thioflavin-S-positive amyloid plaques in transgenic Alzheimer mice and effect of passive Abeta immunotherapy on their clearance.</a> Am. J. Pathol. 165 (3), 987-995 (2004).</li>
<li>Rajamohamedsait, H. B., Sigurdsson, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+staining+of+amyloid+and+pre-amyloid+peptides+and+proteins+in+mouse+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Histological staining of amyloid and pre-amyloid peptides and proteins in mouse tissue.</a> Methods Mol. Biol. 849, 411-424 (2012).</li>
<li>Afkhami, A., Moosavi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adsorptive+removal+of+Congo+red%2C+a+carcinogenic+textile+dye%2C+from+aqueous+solutions+by+maghemite+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Hazard.+Mater%22%5BJournal%5D)">Adsorptive removal of Congo red, a carcinogenic textile dye, from aqueous solutions by maghemite nanoparticles.</a> J. Hazard. Mater. (1-3), 398-403 (2010).</li>
<li>Tremblay, M. -E., Riad, M., Majewska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+mouse+brain+tissue+for+immunoelectron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of mouse brain tissue for immunoelectron microscopy.</a> J Vis Exp. (41), (2010).</li>
<li>Konsman, J. -P. The mouse brain in stereotaxic coordinates. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKonsman%2C+J-P+%22Psychoneuroendocrinology%22">Psychoneuroendocrinology</a>. 28 (6), Academic Press. New York. (2003).</li>
<li>Norden, D. M., Muccigrosso, M. M., Godbout, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+priming+and+enhanced+reactivity+to+secondary+insult+in+aging%2C+and+traumatic+CNS+injury%2C+and+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropharmacology%22%5BJournal%5D)">Microglial priming and enhanced reactivity to secondary insult in aging, and traumatic CNS injury, and neurodegenerative disease.</a> Neuropharmacology. 96 ((Pt A)), 29-41 (2014).</li>
<li>Tremblay, M. -E., Stevens, B., Sierra, A., Wake, H., Bessis, A., Nimmerjahn, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+microglia+in+the+healthy+brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The role of microglia in the healthy brain.</a> J. Neurosci. 31 (45), 16064-16069 (2011).</li>
<li>Šišková, Z., Tremblay, M. è <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+and+synapse%3A+Interactions+in+health+and+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Plast%22%5BJournal%5D)">Microglia and synapse: Interactions in health and neurodegeneration.</a> Neural Plast. 2013, 425845(2013).</li>
<li>DeKosky, S. T., Scheff, S. W., Styren, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+correlates+of+cognition+in+dementia%3A+quantification+and+assessment+of+synapse+change%5BTitle%5D)+AND+%22Neurodegeneration%22%5BJournal%5D)">Structural correlates of cognition in dementia: quantification and assessment of synapse change.</a> Neurodegeneration. 5 (4), 417-421 (1996).</li>
<li>Terry, R. D., Masliah, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physical+basis+of+cognitive+alterations+in+Alzheimer%27s+disease%3A+Synapse+loss+is+the+major+correlate+of+cognitive+impairment%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Physical basis of cognitive alterations in Alzheimer's disease: Synapse loss is the major correlate of cognitive impairment.</a> Ann. Neurol. 30 (4), 572-580 (1991).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Bu protokol EM ile yoğun çekirdek Aβ plaklar hedefleyen bir bağlaşık bir yaklaşım açıklar. In vivo enjeksiyon metoksi-x04 Örneğin, hipokampus CA1, tabakalar radiatum ve lacunosum-moleculare Aβ belirli bölgeler içinde plaket ve ilgi katmanları ihtiva beyin bölümlerinin hızlı seçilmesini sağlar. Bu örnekte, metoksi-x04 Ön görüntüleme mikroglial fenotipleri yoğun ana Aβ plaklar mevcudiyetinde ultra-yapı seviyesinde sinaps etkileşime kadar farklı çalışma IBA1 için immün öncesi gömme ile bir araya getirilmiştir. </p...

Amiloid Aβ plak oluşumu, Alzheimer hastalığı (AD), ana nöropatolojik özelliğidir. Ancak artan kanıtlar hastalığın ilerlemesi 1,2 bağışıklık sisteminin önemli roller önerir. Özellikle, klinik öncesi ve klinik çalışmalardan elde edilen yeni veriler AD patolojiye ana sürücü ve katılımcı olarak bağışıklık disfonksiyonu kurdu. Bu bulgularla, santral ve periferik bağışıklık hücreleri AD 3 olarak umut verici terapötik hedefler ortaya çıkmıştır. Aşağıdaki protokol Aβ plak birikimi ve AD mikroglial fenotipik değişiklikler arasındaki ilişki yeni bir bakış açısı oluşturmak için ışık ve elektron mikroskobu (EM) birleştirir. Bu protokol, floresan boya metoksi-x04 in vivo enjeksiyonu kullanılan AD fare modellerinde Aβ plakların etiketleme sağlar. Metoksi-x04 kolayca beyin dokusundan girmek için kan-beyin bariyerini ve yüksek a ile β-kıvrımlı yaprak bağlanabilen bir Kongo Kırmızı türeviffinity. Boya flüoresan olduğu için, iki foton mikroskopi 4 Aβ Leke birikmesinin, in vivo tespiti için de kullanılabilir. Bir kez Aβ bağlı metoksi-x04 ayırmak veya plaklar uzak yeniden dağıtma ve flüoresanını fazla muhafaza etmez. Genellikle beyin dinamiği 5 non-invaziv görüntüleme için izin periferik uygulanır. Floresan da karşılıklı otopsi Aβ plaklar 6 civarında nöron ölümünün araştırılması dahil olmak üzere, analiz için izin, aldehit tespit sonucu kalır. Aβ gösteren 7 (APP genindeki Lys670Asn / Met671Leu bir çift mutasyonunu coexpressing ve insan presenilin PS1-A264E varyantı APP-PS1) Bu protokol, APPswe / PS1A 246E farelerinin beyin bölümleri seçmek metoksi-x04 özelliklerinin avantajını özel ilgi bölgelerinde (hipokampus CA1, tabakalar radiatum ve lacunosum-moleculare plaklar) Mikroglial hücre gövdeleri ve EM ile süreçlerini görselleştirmek için) mikroglial işaretleyici iyonize kalsiyum-bağlayıcı adaptörü molekülü 1 (IBA1 karşı immün gömme öncesi önce. fareler transcardial perfüzyon yoluyla 24 saat önce beyin fiksasyon metoksi-x04 çözümü intraperitoneal verilir. Koronal beyin kesitleri bir vibratome kullanılarak elde edilir. hipokampus CA1 içeren bölümler tabakalar radiatum ve lacunosum-moleculare bölgesindeki Aβ plaklarının varlığı için bir flüoresan mikroskobu altında elenir. IBA1 için immün ozmiyum tetroksit sonrası sabitleme ve plastik reçine gömme seçilen beyin kesitleri üzerinde gerçekleştirilir. Bu protokolün sonunda bölümler ultra ince kesit ve ultrastrüktürel inceleme için hazır, daha fazla ultrastrüktürel bozulma olmadan arşivlenebilir. Önemlisi, plaklar hala mevcut protokolde olduğu gibi, örneğin IBA1 için, farklı antikorlarla immün sonra floresan edilir. Onlar koyu t halinehan osmiyum tetroksit sonrası fiksasyon takiben çevreleyen neuropil, bağımsız doğru, birkaç milimetre karelik genellikle aşağı, ilgi alanları belirlemeye yardımcı olur metoksi-x04 boyaması, transmisyon elektron mikroskobu ile incelenmesi gereken. Bu karşılıklı yaklaşım ultrastrüktürel düzeyde incelemek için spesifik beyin bölümlerini tanımlamak için etkili bir yol sunar. sadece doku bölümlerinin sadece küçük bir kısmını da mevcut birkaç Aβ plaklar içerebilir spesifik beyin bölgelerinde veya tabakaların içinde erken AD patolojisinden okuyan bu özellikle yararlıdır. Özellikle bu zamanlarda, sadece doğru yerde Aβ plaklar içeren küçük bir bölümünü elde etmek için çeşitli beyin kesitlerinde (örneğin IBA1 gibi diğer hücresel belirteçleri ve çift etiketleme) Aβ için immün kullanmak verimsiz olacaktır. metoksi-x04 canlı farelerin ek olarak, enjeksiyon feda ve doku işleme Compromis does not öncesindeultrastrüktürel korunması e. Böyle sabit doku kesitlerinde Kongo Kırmızısı, Thioflavin S, Thioflavin T veya metoksi-x04 ile postmortem boyanması gibi alternatif yöntemler etanol boyama farklılaşma, ozmotik strese neden olur ve ultrastrüktür bozan 8-11 gerektirir. Kongo Kırmızı da bilinen insan kanserojen 12&#39;dir.

<table><tbody><tr><td>Metoksi-X04</td><td>Tocris Bioscience</td><td>4920</td><td>tablet başına 10 mg substrat</td></tr><tr><td>Propilen glikol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>W294004&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td> <td>Fisher BioReagents</td><td>BP231-1</td><td>Dikkat: toksik</td></tr><tr><td>Sodyum Klorür NaCl</td><td>Sigma</td><td>S9625</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum fosfat monobazik monohidrat</td><td>Sigma</td><td>S9638</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum fosfat dibazik</td><td>Sigma</td><td>S0876</td><td></td></tr><tr><td>Tris Hidroklorür</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP153500</td><td></td></tr><tr><td>Akrolein</td><td>Sigma</td><td>110221</td><td>Dikkat: Toksik</td></tr><tr><td>Paraformaldehit Granül</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>19210</td><td>Dikkat: Toksik</td></tr><tr><td>Filtre kağıdı</td><td>Fisher</td><td>09-790-14F</td><td></td></tr><tr><td>Borulu Peristaltik Pompa</td><td>ColeParmer</td><td>cp.78023-00</td><td></td></tr><tr><td>Excel Kanatlı kan Alma Seti İğneler 25&nbsp; G</td><td>Becton Dickinson</td><td>367341</td><td></td></tr><tr><td>Ekstra İnce Forseps</td><td>FST</td><td>11152-10</td><td>Uç şekli: kavisli</td></tr><tr><td>Makas</td><td>FST</td><td>14090-09</td><td>Uç şekli: düz</td></tr><tr><td>Hartman Kanama Durdurucular</td><td>FST</td><td>13003-10</td><td>Uç şekli: kavisli</td></tr><tr><td>Cerrahi Makas</td><td>FST</td><td>14004-16</td><td>Uç şekli: düz</td></tr><tr><td>Mikro Diseksiyon Makası</td><td>ROBOZ cerrahi mağaza</td><td>5818</td><td></td></tr><tr><td>Cam sintilasyon şişeleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>74515-20</td><td></td></tr><tr><td>Titreşimli Bıçak Mikrotom Leica VT1000 S</td><td>Leica Biosystems&nbsp;</td><td></td><td></td>14047235612</tr><tr><td>Vibratom bıçakları</td><td>Elektron mikroskobu Bilimleri</td><td>71990</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop Slaytları</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-15</td><td></td></tr><tr><td>24 kuyulu Doku Kültürü Plakaları</td><td>Fisher Scientific</td><td>353047</td><td></td></tr><tr><td>Etilen Glikol</td><td>Fisher BioReaktifler</td><td>BP230-4</td><td></td></tr><tr><td>Gliserol</td><td>Fisher BiyoReaktifleri</td><td>BP229-4</td><td></td></tr><tr><td>Hidrojen Peroksit, %30</td> <td>J.T.BAKER</td><td>kedi: 2186-01</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum borhidrür</td><td>Sigma</td><td>480886</td><td></td></tr><tr><td>Tris HCl</td><td>Fisher</td><td>BP153-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Fetal sığır Serumu (FBS)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>F1051</td><td></td></tr><tr><td>Sığır serum albümini (BSA), fraksiyon V</td><td>Thomas Scientific</td><td>C001H24</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>Anti IBA1, Tavşan&nbsp;</td><td>WAKO</td><td>019-19741</td><td></td></tr><tr><td>Keçi Anti-Tavşan IgG</td><td>Jackson İmmünoresearch</td><td>111066046</td><td></td></tr><tr><td>VECTASTAIN Elite ABC Kiti (Standart)</td><td>Vector Labs</td><td>PK-6100</td><td></td></tr><tr><td>3.3'-Diaminobenzidin tetra-hidroklorür (DAB)</td><td>Sigma</td><td>D5905-50TAB</td><td>Dikkat: toksik</td></tr><tr><td>Osmiyum tetroksit,% 4 çözelti</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>19150</td><td>Dikkat: toksik</td></tr><tr><td>Durcupan ve ticaret; ACM tek bileşenli A</td><td>Sigma</td><td>44611</td><td>Reçine Dikkat: Toksik</td></tr><tr><td>Durcupan ve ticaret; ACM tek bileşenli B</td><td>Sigma</td><td>44612</td><td>Sertleştirici Dikkat: Toksik</td></tr><tr><td>Durcupan ve ticaret; ACM tek bileşenli C</td><td>Sigma</td><td>44613</td><td>Plastikleştirici Dikkat: Toksik</td></tr><tr><td>Durcupan ve ticaret; ACM tek bileşenli D</td><td>Sigma</td><td>44614</td><td>Hızlandırıcı Dikkat:</td></tr><tr><td>Toksik Etanol</td><td>LesAlcoolsdeComerce</td><td>151-01-15N</td><td></td></tr><tr><td>Propilen oksit</td><td>Sigma</td><td>110205</td><td>Dikkat: aşındırıcı</td></tr><tr><td>Alüminyum tabakları tartı Elektron</td><td>Mikroskobu Bilimleri</td><td>70048-01</td><td></td></tr><tr><td>ACLAR&reg; &ndash; Floropolimer Filmler Elektron</td><td>Mikroskobu Bilimleri</td><td>50425</td><td></td></tr><tr><td>Fırın/İnkübatör</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bağıntılı işık ve elektron mikroskobu β-amiloid plaklarının ile mikroglial etkileşimleri eğitim için

Correlative Light and Electron Microscopy to Study Microglial Interactions with &#946;-Amyloid Plaques

Ayrıntılı bir protokolünü Alzheimer hastalığı fare modellerinde beyin kesitlerinde amiloid Aβ plaklar tespit etmek için ön-işlemden geçirilmesi gömme immün ve doku işleme (özellikle iyonize kalsiyum bağlayıcı adaptör molekülü 1 (IBA1), mikroglia tarafından ifade edilen bir kalsiyum bağlama proteini) elektron mikroskobu (EM). Metoksi-x04 yoğun çekirdekli Aβ plaklarda bulunan p-kıvrımh bir yaprak bağlanan seçici, kan-beyin bariyerini geçer ve bir flüoresan boya olan. metoksi-x04 hayvanların enjeksiyon öncesinde kurban ve beyin sabitleme öncesi tarama ve zaman alıcı manipülasyonlar ile daha fazla işlem için plaka ihtiva eden beyin bölümlerinin seçimi olanak sağlar. bölümlerin sadece küçük bir fraksiyonu mevcut çok az plaklar içerebilir spesifik beyin bölgelerinde veya tabakaların içinde erken AD patolojisinden okuyan bu özellikle yararlıdır. Kongo Kırmızısı, Tioflavin S ve Thiofl doku bölümleri ölüm sonrası işlemleravin T (hatta metoksi-x04) ile β-pilili yaprak etiket, ancak aşırı boya kaldırmak için etanol ile kapsamlı takas gerektirir ve bu işlemlerin ultrastrüktürel korunması ile uyumsuz olabilir. Aynı zamanda sadece doğru yerde Aβ plaklar içeren küçük bir bölümünü elde etmek için, Aβ (ve IBA1 gibi diğer hücresel belirteçleri) ilgi bölgelerinden tüm beyin kesitlerinde için etiketleme yapmak verimsiz olacaktır. Önemlisi, Aβ plaklar elektron mikroskobu ile incelenmesi alanlarında kesin kimlik (genellikle birkaç milimetre karelik kadar) sağlayan, EM için doku işlendikten sonra hala görebilir.

Bu bölüm, protokol farklı kritik aşamada elde edilebilir sonuçları göstermektedir. hipokampus CA1, tabakalar radiatum ve lacunosum-moleculare: Özellikle sonuçları beyin metoksi-x04 lekeli belirli bir bölgedeki plaklar ve ilgi katmanları içeren bölümlerinin örneklerini göstermektedir. Plaklar ve hipokampus lamelli / bölgesel örgüt gittikçe UV ve parlak bir alan filtreleri (Şekil 1) bir kombinasyonu kullanılarak görüntülenmiştir. Seçilen beyin bölümleri sonradan boyanmış v...

Bu makalede, kan-beyin bariyerini geçer ve seçici olarak p-kıvrımh için yoğun bir çekirdek Aβ plaklarda bulunan yaprak bağlanan metoksi-x04 kullanarak Alzheimer hastalığı fare modellerinde amiloid Aβ plaklar görselleştirmek için bir protokol açıklamaktadır. Bu elektron mikroskobu için immün ve işleme öncesinde plak içeren doku kesitlerinde önceden tarama sağlar.

Bağıntılı Işık ve Elektron Mikroskobu β-amiloid plaklarının ile Mikroglial Etkileşimleri Eğitim için

A detailed protocol is provided here to identify amyloid A&#946; plaques in brain sections from Alzheimer&#39;s disease mouse models before pre-embedding ...

Bu prosedürün genel amacı, elektron mikroskobu için ön gömme immünboyama ve doku işlemeye başlamadan önce, Alzheimer hastalığı fare modellerinden alınan beyin kesitlerindeki beta-amiloid plaklarını belirlemektir. Bu yöntem, nöroimmünoloji alanındaki amiloid beta plaklarının yakınındaki sinaps ile mikroglial hücre etkileşimi gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, ilgi duyulan bölge ve katmanlarda amiloid beta plakları içeren beyin doku kesitlerinin ön taramasının yapılmasına olanak tanımasıdır.Bu yöntem Alzheimer hastalığına uygulanabilse de, amiloidozun mevcut olduğu diğer tüm hastalıklara veya dokulara da uygulanabilir. İlk olarak, 5 mg/mL konsantrasyonunda bir methoxy X04 bileşiği çözeltisi hazırlayın. Bir mikro terazi kullanarak 5 mg methoxy X04 tartın.Bir çeker ocak altında, metoksi X04'ü 100 µL DMSO içinde çözün ve berrak, yeşilimsi bir çözelti elde edene kadar karıştırın. Karıştırmaya devam ederken sırasıyla 450 µL propilen glikol ve 450 µL fosfat tamponlu salin ekleyin. Çözeltiyi gece boyunca 4 °C'de karıştırmaya devam edin.Ertesi gün, sarımsı-yeşil bir emülsiyon görülmelidir. Methoxy X04 enjeksiyonu yapıldıktan sonra, vücut ağırlı

correlative-light-electron-microscopy-to-study-microglial

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Kaynak: Bisht, K., et. al. β-Amiloid Plaklarla Mikroglial Etkileşimleri İncelemek için İlişkili Işık ve Elektron Mikroskobu. J. Vis. Uzm.  (2016) Bu video, Alzheimer hastalığı fare beynindeki Metoksi-X04 etiketli amiloid plaklarının görselleştirilmesini ve haritalanmasını göstermektedir. Alzheimer patolojisini incelemek için plakların anatomik yapılarla hassas korelasyonunu sağlayan floresan ve parlak alan mikroskobu kullanan bölümler.

Alzheimer Hastalığı Fare Beyni Bölümünde Metoksi-X04 İşaretli Amiloid Plaklarının Görselleştirilmesi ve Haritalanması

Mikroglia aktivasyonu ve mikroglioz kronik nörodejenerasyona önemli tepkilerdir. Burada, in vivo, konfokal oftalmoskopi retinal CX3CR1-GFP + mikroglial hücreleri uzun süreli görselleştirme için yöntemler sunmak ve eşik ve morfometrik için belirlemek ve aktivasyonunu ölçmek için analiz eder. Biz yaşa bağlı glokomun erken evrelerinde mikrogliyal değişiklikleri takip.

Fare Glokomda Konfokal Oftalmoskopik Görüntüleme ve Hücre morfometrisi: Nörodejenerasyonda sırasında Retina Mikroglial Aktivasyonu Vivo Dynamics

Kuantum nokta (QD) nanopartiküllerinin epoksi gömülü insan patoloji dokusunun korelasyon immünositokimyasal çalışmaları için kullanılabileceği bir yöntem tanımlanmıştır. Geniş alan floresan ışık mikroskobu ve transmisyon elektron mikroskobu ile görselleştirilen ticari antikor fragmanı konjuge QD'ler kullanıyoruz.

Kuantum Nokta Nanopartiküller kullanma Korelatif Işık- ve Elektron Mikroskobu

Bu yazının uzunlamasına iki foton mikroskopi kullanılarak in vivo amiloid plak birikimi sırasında cerebrovasculature bir biçimlenme izlemek için bir yordam açıklanır. Incelmiş kafatası preparat, Alzheimer hastalığının bir fare modelinde serebrovasküler hasara ilerlemesini değerlendirmek için floresan boyalar görselleştirme sağlar.

uzunlamasına<em&gt; İn Vivo</em&gt; Cerebrovasculature Görüntüleme: MSS Hastalıkları uygunluk

Alzheimer hastalığı, kemirgen modellerinde mononükleer fagositler tarafından serebral amiloid-β (Aβ) fagositoz silikon modelleme (q3DISM) nicel 3D için bir yöntem geliştirdi. Bu yöntem, in vivo olarak hemen her fagositik olayın kantitatif için genelleştirilebilir.

kantitatif 3D Siliko Modelleme (q3DISM)

Amiloid birikimi farklı hastalıklar özelliğidir ve birçok farklı organları afflicts. Bu kağıt Işıksaçan konjuge oligothiophene floresan Floresans mikroskobu teknikleri ile birlikte boyama uygulaması açıklanır. Bu boyama yöntemi algılama ve klinik ve bilimsel kurulumları protein toplamları keşfi için güçlü bir araç temsil eder.

Amiloid doku Imaging ile Işıksaçan konjuge Oligothiophenes Hyperspectral tarafından Confocal mikroskobu ve floresan ömür boyu görüntüleme lekeli

Moleküler görüntüleme matris yardımlı lazer desorpsiyon/iyonlaşma tabanlı görüntüleme kütle spektrometresi (maldı-IMS) ile birden çok analitler eş zamanlı haritalama biyolojik örnekleri sağlar. Burada, Alzheimer hastalığı ve serebral amiloid angiopathy örnekleri maldı-IMS kullanarak beyin dokuları algılama ve görselleştirme amiloid β protein için bir iletişim kuralı mevcut.

Amiloid β mevduat matris yardımlı lazer desorpsiyon/iyonlaşma kütle spektrometresi Imaging ile insan beynindeki görselleştirme

Bu iletişim kuralı, Alfa-synuclein oluşumu çoğaltır hücre tabanlı bir sistem içinde vivoagrega sağlamak için hedeftir. Hücre içi Alfa-synuclein kapanımlar birincil nöronlarda tarafından içselleştirilmesi numaralı seribaşı ve eksojen yayılması hastalıklı Alfa-synuclein transgenik fareler izole yerli microsomes ilişkili Alfa-synuclein toplamları yönetilen.

Microsomes ilişkili Alpha-synuclein toplamları için birincil nöronlar eksojen yönetim olarak güçlü hücre modeli liflerinde oluşumu

Burada, hSOD1G93A sıçan modelinde amiyotrofik lateral sklerozun patofizyolojisi üzerine araştırmalar için hücre içi Ca2+'nın hızlandırılmış video görüntülemesi için sıçan kortekslerinden glial hücrelerin, astrositlerin ve mikrogliaların primer kültürlerinin nasıl hazırlanacağına dair bir protokol sunuyoruz.

Sıçan Astrositleri ve Mikroglia'nın Birincil Kültürleri ve Amiyotrofik Lateral Skleroz Çalışmalarında Kullanımları

Bu makale, retinadaki postsinaptik nokta ve mikroglia hareketliliğini görselleştirme ve nicelleştirme yöntemini spinning disk konfokal mikroskopisi kullanarak göstermektedir.

Hasta Sare Retinasında Mikroglia Dinamikleri ve Sinapslarla Etkileşimlerin Canlı Görüntülemesi ve Karakterizasyonu

Öğrenin, methoxy-X04 kullanarak Alzheimer fare modellerinde β-amiloid plaklarını görüntüleme yöntemini. Bu teknik, immün boyama ve elektron mikroskobu için doku işlemeden önce plak içeren bölgeleri ön tarama yapmanızı sağlar.

Bağıntılı Işık ve Elektron Mikroskobu β-amiloid plaklarının ile Mikroglial Etkileşimleri Eğitim için

Daha fazla video keşfet