Name: Tespiti için daha duyarlı ve özgül Chromogenic Agar Orta Gelişimi Vibrio parahaemolyticus Ve Diğer Vibrio Türler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 34 s
Description: Keşfedin, Vibrio parahaemolyticus ve diğer Vibrio türlerini tespit etmek için geliştirilen yeni kromojenik agar ortamının duyarlılık ve özgüllüğünü. Gıda güvenliği ve çevre mikrobiyolojisi alanında bu yöntem, konvansiyonel ortamlara göre üstün performans sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz proje üzerinde kendi yardım için M. Channey, E. Chau, ve K. Tomas teşekkür ederiz. Proje malzemeleri kısmen California Polytechnic State Üniversitesi tarafından finanse edilmiştir.

1. Medya ve Mikrobiyal Suşlarının Kültürleme NOT: Tüm deneylerde kullan aseptik teknikler. Steril malzemeler kullanıyoruz. Kullanmadan önce tüm kaplar, alet ve reaktifi sterilize edin. biyolojik tehlikeye kabul edilir çünkü atmadan önce tüm atık maddeleri otoklavlayın. aşağıdaki prosedürleri için otoklav sıcaklık ve zaman kombinasyonu ≥121 ° C x ≥15 dk. <ol><li> ~ 1-L triptik soya agar (TSA) yapmak için, önce bir manyetik karıştırma çubuğu içeren 2 L&#39;lik bir Erlenmeyer şişesi içinde deiyonize su 1 L ilave edin. nihai hacim daha az iki kat daha büyük olan bir şişeyi kullanarak. triptik soya suyu tozu 30 g ve şişeye granüller agar 20 g ekleyin. NOT:% 2 ağar yerine% 1.5 bazı Vibrio spp swarming sınırlamak için. <ol><li> karıştırıcı açarak iyice karıştırın. Karıştırılırken, karışımın kaynamasına ısı açın. Karışım kaynamaya başlar kısa sürede ısıtıcı şişeyi çıkarın. Gevşek inci kapakBir kalay folyo ile e şişesi. otoklav önce balona sabitlemek için folyoyu bantlayın. </li><li> triptik soya suyu (TSB) yapmak için, adım 1.1 tarifi agar atlayabilirsiniz. NOT: yerine Erlenmeyer şişesinde şişe kullanabilir miyim. </li><li> % 2 sodyum klorür ya da NaCI (TSA&#39;lar) ile desteklenmiş triptik soya agar yapmak için, önce, karıştırma ve ısıtma karışımın NaCl 20 g ekleyin. % 2 NaCI (TSBs) ile desteklenmiş triptik soya suyu yapmak için, agar ihmal önceden karıştırma ve ısıtma karışımın NaCl 20 g ekleyin. </li></ol></li><li> , Beyin kalp infüzyon (BHI) agarı hale BHI tozu 37 g saf su, 1 L 15 gr agar granüller askıya almak için. sık ajitasyon ile ısı tozu çözmek için. Otoklav. BHI suyu yapmak için agar atlayın. </li><li> , TCBS agar hale saf su, 1 L TCBS tozu 89 g askıya almak için. 1 dakika boyunca sık sık ajitasyon ve kaynatın ile ısı tamamen tozu çözmek için. otoklavlamayın. </li><li> Tüm ağar ortamlar için, 45-5 sıcak agar serinBir su banyosu içinde 0 ° C ile. beş-altı plakalar yığınlarının boş Petri plakaları düzenleyin. yığının altından başlayarak, yaklaşık yarım dolu ulaşmak için her Petri plakasına erimiş agar dökün. döküldükten sonra Petri plaka kapağını kapatın. agar plakaları oda sıcaklığında oturup izin vererek katılaşmaya izin verin. <ol><li> Agar plakaları ertesi gün ya da 12 saat sonra kullanın. iki haftaya kadar buzdolabında kullanılmayan tabak saklayın. Kullanımdan önce, buzdolabı plakaları kaldırmak ve en az 15 dakika boyunca oda ısısında dengeye. NOT: Bir litre agar ~ 45 agar plakaları yapar. Agar plakaları hazırlama gününde, yeterli miktarda kurumasına ve etkili bir şekilde koloni yayılmasını azaltmak için, soğuk depolamadan sonra, oda sıcaklığına kadar bunları dengelenmeye gelmeye bırakın. </li></ol></li><li> Çikolata ve kromojenik agar elde edilir ve her bir deney öncesi oda ısısında dengeye. </li><li> Tablo 1&#39;de her birkaç da gösterilen 54 mikrobiyal suşları altkültürüys. <ol><li> donmuş bir hisse senedi veya böyle BHI, TSB / TSA veya çikolata agar olarak seçici olmayan medya bir önceki partiden kültürleri aktarmak için steril bir aşılama döngü kullanın. Halofilik Vibrio spp büyütün. TSBs / TSA&#39;larm üzerinde. </li><li> kültür saflığını kontrol etmek için, çizgi izole kolonilerin gözlem için izin verecek bir desen tüm suşlar. Örneğin, en sonunda izole koloniler veren, daha az miktarda bakteri büyük miktarda seyreltik üç fazlı bir çizilme kalıbı kullanın. </li></ol></li><li> kadar 48 saat süreyle 35-37 ° C&#39;de plakalar baş aşağı inkübe edin. Campylobacter spp., Tüpler veya plakalar inkübe Bir gaz keseyi içeren bir kapalı kapak kavanoza bir mikroaerofilik bir ortam oluşturmak için. kuluçkadan sonra koloni morfolojisi gözlemleyin. Saf kültürler benzer koloni morfolojisi sergileyen koloniler boyun eğmek zorundadır. NOT: col üzerine düşen kapağın alt kısmında oluşan yoğunlaşmış su damlacıkları önlemek için tüm plakaları baş aşağı inkübeonies. </li></ol> PCR ile 2. Türler Belirlenmesi <ol><li> V. kimliğini doğrulamak için tlh -PCR Davranış parahaemolyticus suşları. Kullanım primerleri -F (5 &#39;AAA GCG GAT TAT GCA GAA GCA CTG 3&#39;) ve tlh-R (5 &#39;GTT ACT TTC TAG CAT TTT CTC TGC 3&#39;) termal olarak hemolisin geni 20 bir 450-bp fragmanı amplifiye etmek için tlh . <ol><li> Her V. birkaç izole koloniler aktarmak için steril bir aşılama döngü kullanın TSA&#39;lar ile ilgili TSBs 5 ml parahaemolyticus soyu. 16-24 saat boyunca 35-37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Santrifüj kültürleri 1 dakika için 14,000 x g&#39;de. Süpernatantı ve fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile iki kez pelet yıkayın. Hücre lizatı elde etmek için 3 dakika boyunca bir süspansiyon kaynatılır. NOT: V. parahaemolyticus lize edilmesi kolaydır. Bu nedenle, liziz reaktifi gerekli değildir. Şablon olarak doğrudan koloni biraz kullanmak da mümkündür. </li><li> 25-ul reaksiyon v PCR gerçekleştirinolume. 1x PCR tampon maddesi bir son konsantrasyon, 1.5 mM MgCl2, her dNTP, 100 uM, her bir primerden 1 uM, 1 U Taq polimeraz ve hücre lizatı 1 ul ihtiva eden bir reaksiyon karışımı hazırlandı. 30 saniye, 30 saniye için 58 ° C, 60 saniye 21 ° C 72 94 ° C&#39;de 35 amplifikasyon döngüleri çalıştırmak 5 dakika boyunca 94 ° C&#39;de ön-kuluçka sonrası. </li><li> % 1.5 agaroz jelleri içinde 5-il amplikon yük alikotları. elektroforez başlatmak için güç kaynağı açın. etidyum bromid boyama işlemi sonrası UV ışıması altında amplikonların varlığını ya da yokluğunu görselleştirme. </li></ol></li></ol> Seçici ve Diferansiyel Medya 3. Büyüme <ol><li> Iki ila dört gün önce deney, çizgi koloni izolasyonu için seçici olmayan ortam (TSA&#39;lar BHI veya çikolata agar) Tablo 1 &#39;de gösterilen tüm mikrobiyal soylar. 48 saat boyunca 35-37 ° C&#39;de inkübe edin. kuluçkadan sonra koloni morfolojisi gözlemleyerek kültürleri saflığını kontrol. Saf kültürler benzer koloni morfolojisi sergileyen koloniler boyun eğmek zorundadır. </li><li> suyu 5 ml Aşama 3.1 birkaç izole koloniler aktarın. 16-24 saat boyunca 35-37 ° C&#39;de inkübe edin. NOT: en az dört gün geçmiş kullanın genç koloniler, tüm deneylerde gecede kültürleri hazırlamak. </li><li> Streak koloni izolasyonu için seçici ve diferansiyel medya (TCBS ve kromojenik agar) gecede kültürlerin bir öze. 96 adete kadar saat 35-37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> plaka üzerinde kültür yoğunluğu ve izole kolonilerin boyutunu hem de inceleyerek tüm suşlar genel büyüme kaydetmesi. çevre sıcaklığı ve / veya UV ışığı altında Kolonilerin rengi kaydedin. Böyle yükseklik, kenar boşluğu ve form olarak izole koloninin diğer özelliklerini unutmayın. </li></ol> 4. Kurtarma Testi <ol><li> V. temsili bir alt kümesini seçin parahaemolyticus suşları farklı serotipler ve izolasyon kaynağını kapsamaktadır (n = 14) <s&gt; 22 kadar. TSBs 5 ml plakaları genç kültürlerin aşılanmasında. 16-24 saat boyunca 35-37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> aşağıda tarif edildiği gibi bir gecede kültürlerin bir standart Plaka Sayısı yöntemini yürütün. <ol><li> Vortex iyice gecede kültürleri karıştırın. 900 ul PBS içeren bir tüp içine gecelik kültüründen 100 ul aktarılarak 10 kat veya 10 -1 seyreltme sağlayın. Vortex iyice karıştırın. </li><li> 900 ul PBS içeren başka tüpe 10 -1 seyreltme tüpünden 100 ul aktarmak için yeni bir pipet ucu kullanın. Vortex iyice karıştırın. Bu 10 -2 seyreltme oluşturmaktadır. 10 -7 seyreltme elde etmek için işlem sırayla tekrarlayın. </li><li> 10 -4 -7 10 seyreltme tüpleri kullanarak, kromojenik, TCBS ve TSA&#39;larm agar plakaları üzerinde 100 ul her plaka. NOT: plaka üzerinde seyreltme faktörü (df) 10 -5 sırasıyla -8 ila 10 olur. </li><li> t eşit hacimde yaymakO yüzeye ağar. NOT: Bu en seyreltilmiş kısım ilk yayılır sürece, aynı ortamda suş başına aynı serpme kullanmak gayet (yani, 10 -8 -5 10 ila). Farklı ortamlar için aynı dağıtıcısı kullanmayın. </li><li> 96 adete kadar saat 35-37 ° C&#39;de inkübe edin. plakalar üzerinde koloniler sayın. çok saymak çok sayıda (TNTC) ya da / ml aşağıdakilere göre 25. hesaplayın CFU az olan koloniler taşıyan plakaları görmezden: <img alt="denklem 1" src="/files/ftp_upload/54493/54493eq1.jpg" /> Nerede N, seyreltilmemiş bir tüp içinde hücre sayısı = / g CFU / ml veya CFU olarak bahsedildi C 25-300 koloni taşıyan plakalar üzerinde sayılan koloni sayısını = n, 1 sayılan koloniler düşük df olan plaka (lar) sayısı = n, 2 sayılan koloniler daha sonra 10-kat seyreltme vardır plaka (lar) sayısı = df alt seyreltme faktörü = (yani, daha konsantre seyreltme) </li></ol></li><li> Farklı medya arasında CFU / ml karşılaştırın. % 100 olarak TSA&#39;larda CFU / ml kullanın V.% kurtarma hesaplamak parahaemolyticus Kromojenik ve TCBS-Agar kültür. </li></ol> 5. Rekabet Tahlili <ol><li> kromojenik ve TCBS agarda farklı koloni morfolojileri sergileyen soyların bir alt kümesini seçin. NOT: şekilde, koloniler V. kökenli saymak mümkün olacaktır aşı maddesi için başka türlerin mevcudiyetine rağmen, sadece parahaemolyticus. <ol><li> Bir V Seç sırasıyla, TCBS ve kromojenik agarda beklenen turkuaz ve mavi koloniler verir parahaemolyticus süzün. </li><li> Olmayan bir V seçin parahaemolyticus bu ortamın da büyür veya farklı koloni rengi sergilemeyen olmayan bir Vibrio türü. Not: Örneğin, V. metschnikovii o çok zayıf büyürn TCBS ve. kromojenik agarda büyümek değildi Shigella sonnei TCBS üzerinde büyüyecek ama kromojenik agarda kırmızı kolonileri verir vermez. </li></ol></li><li> Yukarıdaki suşların seçildikten sonra, seçici olmayan ortamda gelişen izole koloniler kullanarak bir gecede suyu kültürleri hazırlamak. <ol><li> V. gecelik kültürleri yapmak parahaemolyticus ve V. TSA&#39;lar ile ilgili TSBs 5 ml birkaç izole koloniler aktararak metschnikovii. 16-24 saat boyunca 35-37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> BHI suyu 5 ml BHI agar birkaç izole koloniler aktarılarak Shigella sonnei gecelik kültürleri yapmak. 16-24 saat boyunca 35-37 ° C&#39;de inkübe edin. </li></ol></li><li> her bir suş için Adımlar 4.2.1 ve 4.2.2 benzer bir seyreltme serisi yerine getirir. TSA&#39;larm veya BHI Plaka uygun dilüsyonları Adım 4.2.5 gösterilen denklem kullanılarak, gecede kültür CFU / ml belirlemek için. NOT: Genellikle, 10 -5 10 -7 seyreltme 100 ultüpler çoğu kültürler için çalışıyor. bir sonraki aşamada kullanılan hücreler tam miktarını hesaplamak geri CFU / ml değerleri kullanın. Aşağıdaki adımlar, Aşama 5.3 ile aynı tarihte gerçekleştirilir, ancak hesaplanan mi CFU / değerler, kuluçkadan sonra elde edilir. </li><li> Adım 5.2 ve 5.3 içinde gece boyunca kültürler ve seyreltme tüpleri kullanılarak, bir V farklı miktarlarda karıştırmak parahaemolyticus zorlanma ve olmayan bir V. parahaemolyticus türleri. Örneğin, V. 10 -5 seyreltme tüpünden 500 ul karışımı V. gece boyunca kültürler 500 ul parahaemolyticus metschnikovii. NOT: Bu karışım yüksek mikroflora arka plan taklit eder. Düşük mikroflora arka plan simüle iki türün 500 ul 10 -5 seyreltme tüpün her karıştırmak için. </li><li> kromojenik, TCBS ve TSA&#39;larm agar plakaları üzerinde karışımın 100 ul her yayıldı. </li><li> 35-37 ° C&#39;de inkübasyondan sonra 96 saat kadar V. kolonileri saymayın için parahaemolyticus ve olmayan V. kromojenik ve TCBS agarda büyüme ve koloni morfolojisi onların farkına dayalı parahaemolyticus türler. NOT: Örneğin, eğer olmayan V. parahaemolyticus türler tüm kolonileri V. olacak, kromojenik ve TCBS agarda büyümek değil parahaemolyticus. Olmayan V. ise parahaemolyticus türler hem medya yetişir, kromojenik agarda TCBS ve camgöbeği koloniler sadece turkuaz kolonileri V. olacak parahaemolyticus. Olmayan V. parahaemolyticus türler ya da V. benzer koloni morfolojisi sergilemek olmayabilir TSA&#39;larm üzerinde parahaemolyticus. <ol><li> Olmayan V. ise parahaemolyticus türleri V&#39;a Benzer büyür Bu seçici olmayan ortamda parahaemolyticus, V. numaralarını elde etmek için iki ile koloni sayısı bölmek Sadece parahaemolyticus. Adım 5.3 türetilen beklenen sayısı ile gerçek koloni sayısını karşılaştırın. </li></ol></li></ol> 6. Effİstiridye homojenatlarma ECTS <ol><li> et ve içki de dahil olmak üzere ≥12 mollusk kabuklu ≥50 g istiridye et tartılır. <ol><li> istiridye et ve içki PBS eşit miktarda ekleyin. 90 sn için yüksek hızda karışımı karıştırın. Bu 2 -1 seyreltilmiş istiridye Homojenat oluşturmaktadır. </li><li> PBS 400 g 2 -1 seyreltildi istiridye homojenat 100 g ekleyin. kilo değil, hacim ölçmek için bir ölçek kullanın. 1 dakika için yüksek hızda karışımı karıştırın. istiridye Homojenat Otoklav. NOT: Bu spiking için kullanılan istiridye Homojenat olacaktır. </li></ol></li><li> istiridye homojenat mevcudiyetinde kurtarma deneyi (Aşama 4) tekrar edin. <ol><li> 500 gr istiridye Homojenat soğuduktan sonra, V. 100 ul ekleyin buna TSBs yetiştirilen gecelik kültürler parahaemolyticus. V. gerçek miktarını belirlemek Adım 4.2 açıklanan Standart Plaka Sayısı prosedürleri yaparak inokulum olarak parahaemolyticus hücreleri. </li></ol></li><li> temsilciistiridye homojenat varlığında rekabet analizi (Aşama 5) yer. <ol><li> 500 gr istiridye Homojenat soğuduktan sonra, V. gecede kültürlerin her ul 100 eklemek parahaemolyticus ve olmayan V. buna parahaemolyticus. Bakteriyel gerçek miktarını belirlemek Standart Plaka Sayısı prosedürleri yaparak inokulum hücreler Adım 4.2 tarif </li></ol></li><li> iyi bir homojenleştirici kullanarak istiridye homojenat ile bakteri hücreleri karıştırın. NOT: karıştırıldıktan sonra, denir kasıtlı eklenen hücreleri içeren istiridye homojenat istiridye Homojenat çivili. </li><li> Çivili istiridye Homojenat seyreltileri Aşama 4.2.2&#39;de açıklanan prosedürlere göre 10 -1 -3 10 seyreltme tüpleri elde edilmesini mümkün kılar. Kromojenik, TCBS ve TSA&#39;lar agara her seyreltme oranından 100 ul yayıldı. 96 adete kadar saat 35-37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> eski ile kromojenik ve TCBS agarda gerçek koloni sayısını karşılaştırınbeklenmeyen koloni sayımı 6.2.1 ve 6.3.1 Adımlar çıkarılabilir. Not: Örneğin, V bir tüp parahaemolyticus Gece boyunca kültür 10 8 CFU / mL, 100 ul&#39;lik bir aşı 10 7 hücreleri 5 x 10 4 hücre / g, istiridye homojenat 500 g ilave edilir demektir içerir. Seyreltme ve sonra kaplama, plaka df sahip = 10 -2 500 koloniler vermelidir; Bu sahip df ise = 10 -3 50 koloniler boyun eğmek zorundadır. Bunlar beklenen koloni sayımı vardır. </li></ol>

<ol><li>Yeung, P. S., Boor, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology%2C+pathogenesis%2C+and+prevention+of+foodborne+Vibrio+parahaemolyticus+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Foodborne+Pathog.+Dis%22%5BJournal%5D)">Epidemiology, pathogenesis, and prevention of foodborne Vibrio parahaemolyticus infections.</a> Foodborne Pathog. Dis. 1 (2), 74-88 (2004).</li>
<li>Yeung, P. S. M., Boor, K. J. Epidemiology, molecular biology, and detection of foodborne Vibrio parahaemolyticus infections. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYeung%2C+PSM+%22Foodborne+and+Waterborne+Bacterial+pathogens%3A+Epidemiology%2C+Evolution+and+Molecular+Biology%22">Foodborne and Waterborne Bacterial pathogens: Epidemiology, Evolution and Molecular Biology</a>. Faruque, S. M. , Caister Academic Press. 153-184 (2012).</li>
<li>Centers for Disease Control and Prevention. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vital+Signs%3A+Incidence+and+Trends+of+Infection+with+Pathogens+Transmitted+Commonly+Through+Food+-+Foodborne+Diseases+Active+Surveillance+Network%2C+10+U.S.+Sites%2C+1996-2010%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Vital Signs: Incidence and Trends of Infection with Pathogens Transmitted Commonly Through Food - Foodborne Diseases Active Surveillance Network, 10 U.S. Sites, 1996-2010.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 10, 1996-2010 (2011).</li>
<li>Centers for Disease Control and Prevention. Summary of human Vibrio cases reported to CDC, 2008. , Available from:
 <a target="_blank" href="https://stacks.cdc.gov/view/cdc/21591">https://stacks.cdc.gov/view/cdc/21591</a> (2008).</li>
<li>Scallan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Foodborne+illness+acquired+in+the+United+States+-+major+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Foodborne illness acquired in the United States - major pathogens.</a> Emerg. Infect. Dis. 17 (1), 7-15 (2011).</li>
<li>Baross, J., Liston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Occurrence+of+Vibrio+parahaemolyticus+and+related+hemolytic+vibrios+in+marine+environments+of+Washington+State%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Occurrence of Vibrio parahaemolyticus and related hemolytic vibrios in marine environments of Washington State.</a> Appl. Microbiol. 20 (2), 179-186 (1970).</li>
<li>Baross, J., Liston, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Vibrio+parahaemolyticus+from+the+Northwest+Pacific%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Isolation of Vibrio parahaemolyticus from the Northwest Pacific.</a> Nature. 217 (5135), 1263-1264 (1968).</li>
<li>Kueh, C. S., Chan, K. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacteria+in+bivalve+shellfish+with+special+reference+to+the+oyster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">Bacteria in bivalve shellfish with special reference to the oyster.</a> J. Appl. Bacteriol. 59 (1), 41-47 (1985).</li>
<li>Food and Drug Administration. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Bad+Bug+Book%2C+Foodborne+Pathogenic+Microorganisms+and+Natural+Toxins%22">Bad Bug Book, Foodborne Pathogenic Microorganisms and Natural Toxins</a>. , Second Edition, (2012).</li>
<li>Qadri, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptive+and+inflammatory+immune+responses+in+patients+infected+with+strains+of+Vibrio+parahaemolyticus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Adaptive and inflammatory immune responses in patients infected with strains of Vibrio parahaemolyticus.</a> J. Infect. Dis. 187 (7), 1085-1096 (2003).</li>
<li>Food and Drug Administration. Quantitative risk assessment on the public health impact of Vibrio parahaemolyticus in raw oysters. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/ResearchAreas/RiskAssessmentSafetyAssessment/ucm050421.htm">http://www.fda.gov/Food/ScienceResearch/ResearchAreas/RiskAssessmentSafetyAssessment/ucm050421.htm</a> (2005).</li>
<li>Food and Drug Administration. Bacteriological analytical manual online. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm070830.htm">http://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch/LaboratoryMethods/ucm070830.htm</a> (2004).</li>
<li>MacFaddin, J. F. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMacFaddin%2C+JF+%22Media+for+isolation-cultivation-identification-maintenance+of+medical+bacteria%22">Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria</a>. 1, Williams & Wilkins. Baltimore, Md. (1985).</li>
<li>Bottone, E. J., Robin, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vibrio+parahaemolyticus%3A+suspicion+of+presence+based+on+aberrant+biochemical+and+morphological+features%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Vibrio parahaemolyticus: suspicion of presence based on aberrant biochemical and morphological features.</a> J. Clin. Microbiol. 8 (6), 760-763 (1978).</li>
<li>Lotz, M. J., Tamplin, M. L., Rodrick, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thiosulfate-citrate-bile+salts-sucrose+agar+and+its+selectivity+for+clinical+and+marine+vibrio+organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Clin.+Lab.+Sci%22%5BJournal%5D)">Thiosulfate-citrate-bile salts-sucrose agar and its selectivity for clinical and marine vibrio organisms.</a> Ann. Clin. Lab. Sci. 13 (1), 45-48 (1983).</li>
<li>Hara-Kudo, Y., Nishina, T., Nakagawa, H., Konuma, H., Hasegawa, J., Kumagai, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+method+for+detection+of+Vibrio+parahaemolyticus+in+seafood%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Improved method for detection of Vibrio parahaemolyticus in seafood.</a> Appl. Environ. Microbiol. 67 (12), 5819-5823 (2001).</li>
<li>Eddabra, R., Piemont, Y., Scheftel, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+new+chromogenic+medium%2C+chromID+Vibrio%2C+for+the+isolation+and+presumptive+identification+of+Vibrio+choleare+and+Vibrio+parahaemolyticus+from+human+clinical+specimens%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Clin.+Microbiol.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a new chromogenic medium, chromID Vibrio, for the isolation and presumptive identification of Vibrio choleare and Vibrio parahaemolyticus from human clinical specimens.</a> Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 30 (6), 733-737 (2011).</li>
<li>Kodaka, H., Teramura, H., Mizuochi, S., Saito, M., Matsuoka, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+Compact+Dry+VP+method+for+screening+raw+seafood+for+total+Vibrio+parahaemolyticus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food.+Prot%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the Compact Dry VP method for screening raw seafood for total Vibrio parahaemolyticus.</a> J. Food. Prot. 72 (1), 169-173 (2009).</li>
<li>Su, Y. C., Duan, J., Wu, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selectivity+and+specificity+of+a+chromogenic+medium+for+detecting+Vibrio+parahaemolyticus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Prot%22%5BJournal%5D)">Selectivity and specificity of a chromogenic medium for detecting Vibrio parahaemolyticus.</a> J. Food Prot. 68 (7), 1454-1456 (2005).</li>
<li>Bej, A. K., Patterson, D. P., Brasher, C. W., Vickery, M. C., Jones, D. D., Kaysner, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+total+and+hemolysin-producing+Vibrio+parahaemolyticus+in+shellfish+using+multiplex+PCR+amplification+of+tl%2C+tdh+and+trh%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Microbiol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Detection of total and hemolysin-producing Vibrio parahaemolyticus in shellfish using multiplex PCR amplification of tl, tdh and trh.</a> J. Microbiol. Methods. 36 (3), 215-225 (1999).</li>
<li>Yeung, P. S. M., DePaola, A., Kaysner, C. A., Boor, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+PCR+assay+for+specific+detection+of+the+pandemic+Vibrio+parahaemolyticus+O3%3AK6+clone+from+shellfish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Sci%22%5BJournal%5D)">A PCR assay for specific detection of the pandemic Vibrio parahaemolyticus O3:K6 clone from shellfish.</a> J. Food Sci. 68 (4), 1459-1466 (2003).</li>
<li>Yeung, P. S. M., Hayes, M. C., DePaola, A., Kaysner, C. A., Kornstein, L., Boor, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+phenotypic%2C+molecular%2C+and+virulence+characterization+of+Vibrio+parahaemolyticus+O3%3AK6+isolates%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparative phenotypic, molecular, and virulence characterization of Vibrio parahaemolyticus O3:K6 isolates.</a> Appl. Environ. Microbiol. 68 (6), 2901-2909 (2002).</li>
<li>Duan, J., Su, Y. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+a+chromogenic+medium+with+thiosulfate-citrate-bile+salts-sucrose+agar+for+detecting+Vibrio+parahaemolyticus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Food+Sci%22%5BJournal%5D)">Comparison of a chromogenic medium with thiosulfate-citrate-bile salts-sucrose agar for detecting Vibrio parahaemolyticus.</a> J. Food Sci. 70, M125-M128 (2005).</li>
<li>Pinto, A. D., Terio, V., Novello, L., Tantillo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+between+thiosulphate-citrate-bile+salt+sucrose+%28TCBS%29+agar+and+CHROMagar+Vibrio+for+isolating+Vibrio+parahaemolyticus%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Control%22%5BJournal%5D)">Comparison between thiosulphate-citrate-bile salt sucrose (TCBS) agar and CHROMagar Vibrio for isolating Vibrio parahaemolyticus.</a> Food Control. 22 (1), 124-127 (2011).</li>
<li>Canizalez-Roman, A., Flores-Villaseñor, H., Zazueta-Beltran, J., Muro-Amador, S., Leòn-Sicairos, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+evaluation+of+a+chromogenic+agar+medium-PCR+protocol+with+a+conventional+method+for+isolation+of+Vibrio+parahaemolyticus+strains+from+environmental+and+clinical+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Can+J+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparative evaluation of a chromogenic agar medium-PCR protocol with a conventional method for isolation of Vibrio parahaemolyticus strains from environmental and clinical samples.</a> Can J Microbiol. 57 (2), 136-142 (2011).</li>
<li>Kriem, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+Vibrio+spp.+in+raw+shrimps+%28Parapenaeus+longirostris%29+and+performance+of+a+chromogenic+medium+for+the+isolation+of+Vibrio+strains%5BTitle%5D)+AND+%22Lett+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Prevalence of Vibrio spp. in raw shrimps (Parapenaeus longirostris) and performance of a chromogenic medium for the isolation of Vibrio strains.</a> Lett Appl Microbiol. 61 (3), 224-230 (2015).</li>
<li>Food Drug Administration. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statistical+guidance+on+reporting+results+from+studies+evaluating+diagnostic+tests%5BTitle%5D)+AND+%22http%3A%2F%2Fwww.fda.gov%2FRegulatoryInformation%2FGuidances%2Fucm071148.htm%22%5BJournal%5D)">Statistical guidance on reporting results from studies evaluating diagnostic tests.</a> http://www.fda.gov/RegulatoryInformation/Guidances/ucm071148.htm. , (2007).</li>
<li>Burd, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+laboratory-developed+molecular+assays+for+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Microbiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Validation of laboratory-developed molecular assays for infectious diseases.</a> Clin Microbiol Rev. 23 (3), 550-576 (2010).</li>
<li>World Organisation for Animal Health. Principles and methods of validation of diagnostic assays for infectious diseases. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/1.01.05_VALIDATION.pdf">http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/tahm/1.01.05_VALIDATION.pdf</a> (2013).</li>
</ol>

Bazı medyalar Hardy Diagnostics, Santa Maria, CA tarafından cömertçe sağlandı. Thorsen bu çalışmayı California Polytechnic Eyalet Üniversitesi'nde öğrenciyken yürüttü. Şu anda Hardy Diagnostics'in bir çalışanıdır.

Bu çalışma kültür ortamı geliştirilmesi ve değerlendirilmesi üzerinde duruluyor. Geleneksel olarak, TCBS olan seçici ve orta V izole ve tespit etmek için kullanılan diferansiyel parahaemolyticus, V. cholerae ve V. vulnificus 12. Ancak, kısıtlamalar gibi V. ayrım yapamama olarak, bu ortam için rapor edilmiştir Diğer Vibrio cholerae türlerden. Sakaroz ve pH göstergesi TCBS farklılaşması maddelerdir. Böylece, sukroz fermentasyon cihazı tarafından asit üretimi...

Vibrio cinsi, V. bir üyesi olarak parahaemolyticus Gram negatif, spor oluşturan eğik, çubuk şeklinde bir bakteridir. Sıvı ve yarı-katı ortamları yüksek hareketliliğini göstermektedir. Çoğu V. parahaemolyticus suşları insanlara patojenik olmayan, henüz patojen alt tipi bir çok ülkede 1,2 dolayısıyla bu türün önemli gıda kaynaklı patojen olarak kabul edilir salgınlara, yol açmıştır. ABD&#39;de Vibrio enfeksiyon insidansı 2000 3 itibaren artış eğilimi göstermiştir. Vibrio spp arasında., V. parahaemolyticus ABD 4,5 yılında hastalıklara neden olan en sık bildirilen türdür. Diğer klinik olarak anlamlı türler V. dahil alginolyticus&#39;un, V. vulnificus, V. cholerae vb hastalıkların küçük bir yüzdesi, aynı anda birden fazla türün neden olur. V. parahaemolyticus doğal iDeniz suyu nhabitant ve bu nedenle yaygın olarak haliç dahil olmak üzere dünya çapında deniz sularında dağıttı. türler Japonya&#39;da gıda zehirlenmesi salgını aşağıdaki 1950 yılında keşfedildi. ABD&#39;de, türler ilk Puget Sound bölgesinde 6,7 deniz suyu, sediment, ve kabuklu deniz ürünleri izole edildi. Böyle çift kabuklu kabuklu deniz ürünleri gibi deniz habitatlarının, Filtre besleyiciler, V. liman olabilir doğal floranın 8 parçası olarak parahaemolyticus. Bu, V. olarak İnsanda parahaemolyticus enfeksiyonları genellikle kontamine deniz ürünleri, özellikle çiğ veya az pişmiş kabuklu deniz ürünleri tüketimi ile bağlantılıdır. açık yara cilt enfeksiyona yol açan, deniz suyuna maruz kaldığında giriş Daha az yaygın yol meydana gelir. Çoğu V. parahaemolyticus suşları insan hastalığına neden olmaz, henüz böyle termostabil doğrudan hemolizin (TDH) olarak virülans faktörleri barındıran bazı alt tipler patojenik bulunmaktadır. Gıda kaynaklı V. en yaygın belirtileri parahaemolyticus enfeksiyonubulantı, kusma ve ateş takip ishal ve karın ağrısı. Baş ağrısı ve titreme de bildirilmiştir. Medyan kuluçka süresi 15 saat, ama patojenik 9 yeterli miktarda tüketiminden sonra 96 saat olabilir. hastalık iki üç gün sürer. V. neden gastroenterit belirtileri parahaemolyticus büyük ölçüde kendi kendini sınırlayıcı değildir ve bu yüzden, özel bir tedavi gerekli değildir. gastroenterit Hafif vakalarda etkin bir ağızdan rehidrasyon ile tedavi edilebilir. Daha ağır hastalıklar tetrasiklin veya siprofloksasin 10 antibiyotikler ile tedavi edilebilir. Ölüm oranı gastroenterit vakaların yaklaşık% 2, ancak kan dolaşımı enfeksiyonu veya septisemi geliştirmek isteyenler için% 29 gibi yüksek olabilir. Deniz suyuna maruz kalan açık yara deniz tüketir veya sahip herhangi bir kişi V. riski altındadır parahaemolyticus enfeksiyon. hastalıklar, yaşamı tehdit eden septisemi daha şiddetli formu, altta yatan tıbbi işbirliği ile bir alt grubunda daha sık görülüralkolizm, karaciğer hastalığı, diyabet, böbrek hastalığı, malignansi ve zayıflamış bağışıklık tepkisi veren diğer sağlık durumları arasında olan şulları 11. Özellikle, bireylerin bu grup V. neden ağır hastalıklara yakalanma için daha yüksek risk altındadır da V. benzer doğal habitatların bulunabilir vulnificus, parahaemolyticus. V. parahaemolyticus rutin seçici ve ayırıcı araç olarak tiyosülfat-sitrat safra tuzları sakaroz (TCBS) agarı kullanılarak izole edilir. Alkali pepton suda zenginleştirilmesi TCBS agarda izolasyon önce ortaya çıkabilir. TCBS ilgili olası koloniler daha sonra türe özgü genlerin varlığı hedefleme biyokimyasal testler ve / veya moleküler yöntemler bir dizi test edilir. PCR bazlı yöntemler genellikle V kimliklerini teyit etmek için kullanılan 12 tlh, termal olarak hemolisin geni yükselterek parahaemolyticus. Ne olursa olsun chOnay yöntemlerinin Ses Bildirim, o V. izole etmek ve ayırt etmek için etkili bir ortam olması önemlidir ilk etapta diğer deniz vibrios gelen parahaemolyticus. TCBS rutin sakaroz 12 mayalanmaya kendi yeteneklerine göre Vibrio cinsi içinde türlerin ayırt etmek için kullanılır olmuştur. Pozitif fermantasyon reaksiyon pH indikatör bromtimol mavi bir renk değişikliği ile eşlik ediyor. V. parahaemolyticus koloniler yeşil renk mavi sergileyen TCBS üzerinde oldukça belirgindir. Ancak, bu orta kolaylıkla V. ayırt edemez alginolyticus&#39;un ve V. cholerae. Sakkaroz fermente Proteus türleri V. benzeyen sarı koloniler oluşturabilir cholerae veya V&#39;dir alginolyticus&#39;un 13. TCBS, V. başlangıç izolasyon üzerine parahaemolyticus da Aeromonas hydrophila, Plesiomonas shigelloides, ve Pseudomonas spp 14 olarak misidentified olabilir. gecikmiş sakaroz halden ile suşlarıentation V. dahil Vibrio 13 fermente diğer sakaroz ile karışabilir parahaemolyticus. TCBS diğerleri arasında Escherichia coli, Pseudomonas putrefaciens&#39;in karşı değil, duyarlı olduğu tespit edilmiştir. Birkaç diğer türler potansiyel V ile karıştırılmamalıdır gri koloniler yeşil verim parahaemolyticus ya da V. vulnificus 15. Bunun bir sonucu olarak, tespit ve V izole karşı daha iyi hassasiyet ve özgüllük ile alternatif bir kültür ortamı geliştirilmesi arzu edilmektedir parahaemolyticus ve diğerlerinin yanında yakın ilişkili tür. Çeşitli medya alternatifleri son zamanlarda geliştirilmiştir. Seçici maddelerin dahil edilmesi ek olarak, en ayırıcı enzimsel faaliyetlerin göre türlerin ayırt etmek için kromojenik substratlar içermektedir. Örneğin, indoksil-β-glukozit ve indoksil-β-galaktozid V ayırt etmek için kromojenik substratlar olarak kullanılmaktadır paragrafV. olanlardan (mavimsi-yeşil görünür) haemolyticus kolonileri nedeniyle diferansiyel yetenekleri (mor) cholerae β-glukozidaz ve β-galaktosidaz 16 üretmek. Çeşitli gruplar tarafından geliştirilen kromojenik agar Farklı formülasyonları değerlendirilmiştir ve nispeten veya TCBS 17,18,19 daha iyi performans bildirilmiştir. kromojenik ortam kullanmanın bir avantajı, çevreleyen ortamın renk ve böylece belirli bir koloni izolasyonu kolaylaştırmak az olmasıdır. Bu çalışmada, V tespit etmek ve izole etmek için yeni formüle kromojenik ortamın yeteneği değerlendirildi cholerae, V. parahaemolyticus ve V. vulnificus; V. ayırt etme yeteneği üzerine özel bir odaklanma ile Diğer türlerden parahaemolyticus.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Reaktif / Ekipman< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Agar</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0140-15-4</td><td>diğer markaları kullanabilir</td></tr><tr><td>Otoklav</td><td>Herhangi bir</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BHI tozu</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0418-17-7</td><td>,</td></tr><tr><td>istiridye etini karıştırmak için</td>diğer markaları<td>Blender</td><td>Any</td><td></td></tr> kullanabilir <tr><td>CampyGen gazı jeneratör</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>CN035A</td><td>mikroaerofilik bir atmosfer sağlamak için; diğer markaları kullanabilir</td></tr><tr><td>Çikolatalı agar plakaları</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>E14</td><td>diğer markaları kullanabilir</td></tr><tr><td>Yaygın PCR reaktifleri (dNTP'ler, MgCl2, Taq Polimeraz)</td><td>Herhangi biri</td><td></td><td>veya PCR boncukları kullanın (Fisher Sci 46-001-014)</td></tr><tr><td>Kültür tüpleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>S50712</td><td>diğer markaları kullanabilir</td></tr><tr><td>Eppendorf tüpleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>S348903</td><td>diğer markaları kullanabilir</td></tr><tr><td>Jel doc</td><td>Herhangi bir</td><td></td><td></td></tr><tr><td>HardyChrom Vibrio agar plakası</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>G319</td><td>Bu çalışma bu ortamı değerlendirmektedir</td></tr><tr><td>İnkübatör</td><td>Herhangi bir</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aşılama döngüsü</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-363-606</td><td>Bu çalışmada 10 mikrolitre boyutunda</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>kullanılmıştır Fisher Scientific</td><td>BP358-212</td><td>diğer markaları kullanabilir</td></tr><tr><td>İstiridye</td><td>Herhangi bir</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>R23701</td><td>diğer markaları kullanabilir</td></tr><tr><td>Petri kabı</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875713</td><td>diğer markaları kullanabilir</td></tr><tr><td>Pipet ve uçlar</td><td>Herhangi bir</td><td></td><td>Sterilize edilmiş uç</td></tr><tr><td>tlh</td><td>IDT DNA</td><td></td><td></td>Ölçeği için astarlar</tr><tr><td></td><td>Herhangi bir</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Yayıcı</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-100-11</td><td>Boncuklar yerine kullanılabilir</td></tr><tr><td>Mide blenderi</td><td>Mide</td><td>400</td><td>Numuneler 200 rpm'de 30 saniye boyunca homojenize edildi. Diğer homojenizatörler kullanılabilir.</td></tr><tr><td>Karıştırıcılar için steril filtre torbaları</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-812-5</td><td></td></tr><tr><td>TCBS tozu</td><td>Hardy Diagnostics</td><td>265020</td><td>Bu çalışma bu ortamı değerlendirir</td></tr><tr><td>Thermocycler</td><td>Herhangi bir</td><td></td><td></td></tr><tr><td>TSB tozu</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0370-07-5</td><td>diğer markaları kullanabilir</td></tr><tr><td>UV görüntüleme kabini</td><td>Herhangi bir</td><td></td><td>Yayan uzun dalga UV ışığı</td></tr><tr><td>Su banyosu</td><td>Herhangi</td><td></td><td>&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>Name</td><td>Sources</td><td>Katalog Numarası</td><td>Comments</strong</td></tr><tr><td>>Bakteri türleri ve suşları</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aeromonas hydrophila</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Candida albicans</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Campylobacter jejuni</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Escherichia coli</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Proteus mirabilis</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Pseudomonas aeruginosa</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Staphylococcus aureus</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Salmonella Choleraesuis</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Shigella boydii</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Shigella flexneri</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Shigella sonnei</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>Vibrio alginolyticus</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. cholerae (serotipler arasında O139, O1, non O1, El Tor biovars)</td><td>FDA, ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>V. damsela</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. fisheri</td><td>Environment</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. fluvialis</td><td>CDC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. furnissii </td><td>CDC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. hollisae</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. metschnikovii</td><td>ATCC</td><td></td><td></td></tr><<tr><td>em>V. mimicus</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. parahaemolyticus (serotipler arasında O3:K6, O1:K56, O4:K8, O5:K15, O8, etc.)</td><td>ATCC, FDA, CDC, Environment</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. proteolyticus</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>V. vulnificus</td><td>FDA</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

tespiti için daha duyarlı ve özgül chromogenic agar orta gelişimi<em&gt; vibrio parahaemolyticus</em&gt; ve diğer<em&gt; vibrio</em&gt; türler

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

Vibrio türlerinin neden olduğu ABD&#39;de Gıda kaynaklı enfeksiyonlar artış eğilimine göstermiştir. Cins Vibrio, V. parahaemolyticus Vibrio -associated enfeksiyonların çoğunluğu sorumludur. Böylece, Vibrio türleri arasında doğru farklılaşma. ve V. algılama parahaemolyticus gıda arzının güvenliğini sağlamak için büyük önem taşımaktadır. moleküler teknikler giderek daha yaygın olmakla birlikte, kültür-bağlı yöntemleri hala rutin yapılır ve bunlar bazı durumlarda standart yöntemler olarak kabul edilir. Bu nedenle, yeni bir kromojenik agar ortamı izolasyon ve klinik olarak anlamlı Vibrio spp farklılaşması için daha iyi bir yöntem sağlamak amacı ile test edilmiştir. Protokol V. tespiti için duyarlılık, özgüllük ve algılama limitini karşılaştırıldı Yeni kromojenik orta ve geleneksel bir ortam arasında parahaemolyticus. Çeşitli V. parahaemolyticus suşları (n = 22), yenidenfarklı serotipleri ve kökenlerden kaynağını sunan kullanılmıştır. Daha önce Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) ve Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezleri (CDC) tarafından tanımlanan ve ayrıca tlh -PCR tarafından laboratuvarda doğrulanmıştır. En az dört ayrı deneylerde, bu suşlara 24 için 35-37 ° C &#39;de inkübasyon takip kromojenik agar tiyosülfat-sitrat safra tuzları sakaroz, bu tür kültürlenmesi için tavsiye edilen orta (TCBS) ağar, üzerine aşılanmıştır -96 saat. Üç V. Büyüme varsa parahaemolyticus suşları (% 13.6) yine, TCBS üzerinde optimum büyümek yeşil koloniler sergiledi vermedi. İki suş (% 9.1) kromojenik agar üzerinde beklenen camgöbeği kolonileri vermemiştir. Olmayan V. parahaemolyticus suşları (n = 32), aynı zamanda kromojenik agar özgünlüğünü belirlemek için test edildi. Bu suşların arasında, 31 büyüyecek ya da diğer koloni morfolojileri sergilenmektedir vermedi. V. ortalama geri chromoge üzerinde parahaemolyticusnic Agar ~% 2 NaCl ile desteklenmiş triptik soya agar% 96.4 akrabasıydı. Sonuç olarak, yeni kromojenik ağar V. algılamak için etkili bir orta parahaemolyticus ve vibrios ayırmak için.

Bu çalışmada, 54 mikrobiyal soylar V olan 22 suşu olan monte edilmiştir parahaemolyticus türleri, diğer 19 Vibrio türü, 13 dışı Vibrio türü (Tablo 1). Çoğu V. parahaemolyticus suşları ya FDA, CDC ya da diğer devlet sağlık birimlerinden gelen bulundu. Onlar farklı serotipleri ve izolasyon kaynaklarını temsil etmektedir. Bu suşlar, daha önce düzenleyici kurumlar tarafından tespit edilmiştir. Biz ayrıca bu V. kimliklerin...

Klinik olarak anlamlı Vibrio türlerinin tespiti ve izolasyonu, seçici ve diferansiyel kültür ortamı gerektirir. Bu çalışma, yeni bir kromojenik ortamın V. parahaemolyticus ve diğer ilgili türleri tespit etme ve tanımlama yeteneğini değerlendirdi. Yeni ortamın geleneksel ortamdan daha iyi duyarlılığa ve özgüllüğe sahip olduğu bulundu.

Tespiti için daha duyarlı ve özgül Chromogenic Agar Orta Gelişimi<em&gt; Vibrio parahaemolyticus</em&gt; Ve Diğer<em&gt; Vibrio</em&gt; Türler

Foodborne infections in the US caused by Vibrio species have shown an upward trend. In the genus Vibrio, V. parahaemolyticus is responsible for the ...

Bu prosedürün genel amacı, yeni bir kromojenik besiyerinin Vibrio parahaemolyticus'u tespit etme ve izole etme yeteneğinin, geleneksel besiyerleri ile karşılaştırılarak duyarlılık ve özgüllüğünün değerlendirilmesidir. Bu yöntem, gıda ve çevresel mikrobiyoloji alanındaki "gıda ve hasat ortamlarında Vibrio türlerinin yaygınlığı nedir?" gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Prosedürümüzün temel avantajı, gıda matrisi varlığındakiler de dahil olmak üzere birçok bakteriyel izolatın kullanılabilmesidir.Bakterileri kültüre etmeden önce, tüm agar medyalarını otoklavlayın. Ardından agarı bir su banyosunda 45 ila 50 °C'ye soğutun. Agar hazır olduğunda, boş petri plaklarını beşli veya altılı yığınlar halinde düzenleyin.Ardından, yığının altından başlayarak, eritilmiş agarı her bir plak yaklaşık yarıya dolana kadar dökün ve dökme işleminden sonra kapakları kapatın. Agarın oda sıcaklığında en az 12 saat boyunca katılaşmasını bekleyin. Mikrobiyal suş kültürlerini hazırlamak için, agar hazır olduğunda, kültürleri uygun seçici olmayan agar plakalara aktarmak üzere steril bir ekim özesi kullanın ve bakterileri izole kolonilerin gözlemlenmesine izin verecek bir düzenle çizin.Tüm koloniler ekildikten sonra, mikroaerofilik bir ortam oluşturmak için gaz paketi içeren kapalı kapaklı bir kavanozda inkübe edilmesi gereken Campylobacter türleri hariç, kültürleri 35 ila 37 °C'de baş aşağı şekilde 48 saate kadar inkübe edin. İnkübasyon sonunda koloni morfolojisini gözlemleyin. Saf kültürler, benzer koloni morfolojisi sergileyen koloniler vermelidir.İlgilenilen kolonileri seçici ve ayırıcı besiyerlerinde büyütmek için, birkaç izole koloniyi beş mililitre uygun besiyerine aktarın ve kültürleri 35 ila 37 °C'de 16 ila 24 saat boyunca yeniden inkübe edin. Ertesi gün, gece boyu büyütülen kültürlerden bir öze yardımıyla alınan örneği, en az bir Thiosulfate-Citrate-Bile-Salts-Sucrose (TCBS) agar plakasına ve en az bir kromojenik agar plakasına ekerek 35 ila 37 °C'de 96 saate kadar inkübe edin. İnkübasyon sonunda, suşların genel büyümesini belirlemek için plaktaki kültür yoğunluğunu ve izole kolonilerin boyutunu inceleyin; kolonilerin rengini duruma göre ortam ışığı veya UV ışığı altında kaydedin ve kolonilerin diğer önemli özelliklerini not edin.Bir geri kazanım testi gerçekleştirmek için, Vibrio parahaemolyticus'un genç kültürlerini, yüzde iki sodyum klorür ile desteklenmiş beş mililitre triptik soya brotu (TSBS) içine inoküle edin ve tüpleri 35 ila 37 °C'de 16 ila 24 saat boyunca bekletin. Ertesi gün, gece boyunca inkübe edilen kültürleri vorteksleyin ve bakterilerin PBS içinde 1 × 10⁻¹ ile 1 × 10⁻⁷ arasındaki dilüsyonalarını hazırlayın. 1 × 10⁻⁴ ile 1 × 10⁻⁷ arasındaki dilüsyonları kullanarak, her bir dilüsyondan 100 µL'yi sırasıyla ayrı kromojenik, TCBS ve yüzde iki sodyum klorür ile desteklenmiş triptik soya agar (TSAS) plaklarına eşit şekilde ekleyin.Tüm plakaları 35 ila 37 °C'de 96 saate kadar inkübe edin. Ardından, sayılamayacak kadar çok koloni içeren veya 25'ten az koloni barındıran plakaları dikkate almadan kolonileri sayın. Bir rekabet analizi gerçekleştirmek için, TCBS'de beklenen turkuaz kolonileri ve kromojenik agarda siyan kolonileri veren bir V.Parahaemolyticus suşu ve bir V. dışıHer iki besiyerinde de büyümeyen veya farklı koloni rengi sergileyen Parahaemolytius türleri. İzole edilmiş birkaç V.Parahaemolyticus ve V.Metschnikovii kolonisini TSAS agarından, 35 ila 37 °C'de 16 ila 24 saatlik inkübasyon için beş mililitre TSBS'ye aktarın. İzole edilmiş birkaç Shigella sonnei kolonisini Brain Heart Infusion veya BHI agarından, 35 ila 37 °C'de 16 ila 24 saat boyunca beş mililitre BHI broth'a aktarın.Ertesi gün, gece boyu inkübe edilen kültürlerin mililitre başına koloni oluşturan birimlerini belirlemek için her suş için seri dilüsyon uygulayın ve dilüsyonları seçici olmayan agar plaklarına ekin. Ardından, bir V.Parahaemolyticus suşu ile V. Parahaemolyticus olmayan bir türün farklı hacimlerini karıştırmak için gece boyu inkübe edilen kültürleri ve dilüsyon tüplerini kullanın ve bakteri karışımının 100 µL'sini ayrı kromojenik, TCBS ve TSAS agar plaklarına yayın.35 ila 37 derece Celsius'ta 96 saate kadar bekledikten sonra, kromojenik ve TCBS plakalarındaki büyüme ve morfoloji farklılıklarına göre kolonileri sayın. İstiridye homojenatlarının seçici ve ayırıcı besiyerlerinde bakteriyel büyüme üzerindeki etkilerini değerlendirmek için, önce et ve sıvısı dahil olmak üzere en az 12 molluska kabuklu deniz canlısından en az 50 gram istiridye eti tartın. Ardından, istiridye dokularına eşit kütlede PBS ekleyin ve karışımı 90 saniye boyunca yüksek hızda karıştırın.Ardından, seyreltilmiş istiridye homojenatının 100 gramını 400 gram PBS'ye ekleyin ve karışımı bir dakika boyunca yüksek hızda karıştırın. Daha sonra homojenatı otoklavlayın. Soğuduktan sonra, gece boyunca inkübe edilmiş her bir V.Parahaemolyticus ve non-V örneğinden 100 mikrolitre ekleyin.Parahaemolyticus kültürünü istiridye bulamacına ekleyin ve bakteri hücrelerini istiridye homojenatıyla karıştırmak için bir homojenizatör kullanın. Gösterildiği gibi, PBS içerisinde ekleme yapılmış istiridye homojenatının 1x10⁻¹ ile 1x10⁻³ arası dilüsyonlarını hazırlayın ve her dilüsyondan 100 µL'yi ayrı kromojenik, TCBS ve TSAS plaklarına yayın. 35 ila 37 °C'de 96 saat beklettikten sonra, kromojenik ve TCBS agarları üzerindeki gerçek koloni sayılarını, gece boyu inkübe edilen kültürlerde gerçekleştirilen standart plak sayımından elde edilen beklenen koloni sayılarıyla karşılaştırın.Bu çalışmada kullanılan suşların büyümesini ve koloni morfolojisini belirlemek için bakteriler seçici ve ayırıcı besiyerlerinde büyütülmüştür. TCBS, turkuaz renkli V.Parahaemolyticus ve sarı renkli V.Cholerae dahil olmak üzere bazı Vibrio türlerinin izolasyonu için kullanılan geleneksel besiyeridir. Gıda ve çevre örneklerinden klinik olarak ilgili Vibrio türlerini seçmek için kromojenik besiyeri kullanımı, siyan renkli V.Parahaemolyticus ve magenta renkli V.Cholerae oluşumuyla sonuçlanır.İstiridye homogenatı varlığında kromojenik agar plaklarında büyütülen V.Parahaemolyticus kolonileri, seçici olmayan besiyerlerindekiyle benzer sayılarda gözlemlenmiştir; bu durum, kromojenik besiyerinin saptama sınırının, gıda matriksi varlığında bile seçici olmayan besiyerlerininkine benzer olduğunu göstermektedir. Ayrıca, V.Parahaemolyticus'un büyümesi ve geri kazanımı, V. Parahaemolyticus dışındaki türlerin varlığından etkilenmemektedir; bu durum, özellikle bir zenginleştirme prosedüründen sonra çevresel örneklerin yüksek sayılarda çeşitli Vibrio türleri içermesi nedeniyle, ayırıcı ve seçici besiyerleri için temel bir özelliktir.Ayrıca, TCBS ve kromojenik agarların termolabil hemolizin PCR ile karşılaştırılması, kromojenik agar için daha yüksek bir hassasiyet ve özgünlük ortaya koymakta; bu durum, V.Parahaemolyticus'un saptanması ve tanımlanması için bu diferansiyel ve selektif besiyerinin genel olarak daha iyi bir performans sergilediğini göstermektedir. Uzmanlaşıldığında, yaklaşık 50 suşun test ve inkübasyon süreleri dahil olmak üzere tüm prosedürü, uygun şekilde yürütüldüğünde 30 gün içinde tamamlanabilir. Bu prosedür uygulanırken, tüm kültürlerin titizlikle etiketlendiğini hatırlamak ve her zaman aseptik teknik kullanmak önemlidir.Bu prosedürü takiben, "Bu spesifik izolat bir virülans geni taşıyor mu?" gibi ek soruları yanıtlamak için koloni PCR gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Geliştirilmesinin ardından bu teknik, gıda güvenliği ve halk sağlığı alanındaki araştırmacıların kabuklu deniz ürünlerinde ve haliç ortamında Vibrio türlerinin tespitini araştirmalarının önünü açmıştır. Bu videoyu izledikten sonra, standart bir plak sayımının nasıl yapılacağı ile bir besiyerinin hassasiyetinin, özgüllüğünün ve tespit limitinin nasıl değerlendirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.Patojenlerle ve sıcak besiyeriyle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini; bu prosedürü gerçekleştirirken koruyucu kıyafet giymek, açık yaraları kapatmak ve biyotehlikeli atıkları ayırmak gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

development-more-sensitive-specific-chromogenic-agar-medium-for

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Biz son zamanlarda basit bir bakteriyel tespiti için floresan assay "mix-ve-okuma" kurmak için uygulanabilir Flourogenik DNAzyme probları üretmek için yeni bir yaklaşım bildirdin. Bu özel DNA sondaları böylece floresans sinyali kuşağa bakteriyel algılama çevirme belirli bakteri tarafından üretilen ham hücre dışı karışımı (CEM) varlığında, bir kromofor-değiştirilmiş-DNA RNA kimerik substratın bölünme katalize. Bu yazıda, "RFD-EC1" ifade belirli bir DNAzyme prob modeli bakterinin tespiti için...

Flourogenik DNAzymes kullanarak Bakterilerin Tespiti

Kaynak: Heering, J., ve diğerleri. Hücresel Farklılaşmanın İndüksiyonu ve Vibrio parahaemolyticus Yüzücü ve Sürü Hücrelerinin Tek Hücre Görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2017)Bu video, özel olarak hazırlanmış bir agar ortamı kullanılarak Vibrio parahaemolyticus'ta sürü hücre farklılaşmasının indüklenmesini göstermektedir. Demir tükenmesi, kalsiyum takviyesi ve yüzey teması gibi çevresel ipuçlarını manipüle ederek, bakteriler yüzücü formlarından lateral flagellalı uzun sürü hücrelerine geçiş için...

Vibrio parahaemolyticus'un Sürü Hücrelerine Farklılaşmasının İndüksiyonu

Kaynak: Heering, J., ve diğerleri., Hücresel Farklılaşmanın İndüksiyonu ve Vibrio parahaemolyticus Yüzücü ve Sürü Hücrelerinin Tek Hücre Görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2017).Bu video, floresan görüntüleme için bir Vibrio parahaemolyticus kolonisinden sürü hücrelerinin hazırlanmasını göstermektedir. Bakteriler, yüzücü hücrelerde tek kutuplu ve uzun sürü hücrelerinde iki kutuplu olarak lokalize olan ve görsel farklılaşmalarına izin veren florofor etiketli bir proteini eksprese etmek için genetik...

Vibrio parahaemolyticus Swarmer Hücrelerinin Görüntüleme İçin Hazırlanması

Kaynak: Yeung, M., ve diğerleri. Vibrio parahaemolyticus ve diğer vibrio türlerinin tespiti için daha hassas ve spesifik bir kromojenik agar ortamının geliştirilmesi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, Vibrio türlerini tanımlamak için kültüre dayalı bir yöntemi göstermekte ve kromojenik agarın yaygın olarak kullanılan tiyosülfat-sitrat-safra tuzları-sakaroz veya TCBS agar'a daha doğru bir alternatif olduğunu vurgulamaktadır. Kromojenik agar, türe özgü enzimatik aktiviteleri tespit ederek Vibrio...

Vibrio Türlerinin Hızlı Tespiti için Yeni Bir Kromojenik Ortam

Kaynak: Brumfield, K. D. ve diğerleri, Vibrio cholerae Klinik ve Çevresel İzolatlarının Biyotiplerini Korumak ve Ayırt Etmek İçin Laboratuvar Teknikleri. J. Vis. Exp. (2017).Bu video, Vibrio cholerae'nin üç biyotipini ayırt etmek için yapılan Voges-Proskauer (VP) testini gösteriyor: klasik, vahşi tip El Tor ve El Tor varyantı. Her kültür, glikoz içeren bir ortama aşılanır, inkubasyon edilir ve asetoin varlığını tespit etmek için α-naftal ve potasyum hidroksit ile muamele edilir.

Vibrio cholerae'nin Biyotiplerini Ayırt Etmek İçin Voges-Proskauer Testi

Büyük hacimli tarımsal sularda gıda kaynaklı patojenlerin entegre konsantrasyon, zenginleştirme ve son nokta kolorimetrik tespitini içeren bir protokol burada sunulmaktadır.  Su, seçici veya seçici olmayan ortamlarla zenginleştirilmiş Modifiye Moore Swablarından (MMS) süzülür ve algılama, bakteriyel-gösterge kolorimetrik substratlarla gömülü kağıt bazlı analitik cihazlar (μPAD) kullanılarak gerçekleştirilir.

Kolorimetrik Algılama Paper-based<em&gt; Escherichia coli</em&gt;<em&gt; Salmonella</em&gt; Spp. Ve<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Tarım Su geniş hacimli

Bu el yazması, klinik ve çevresel V arasındaki hızlı ve güvenilir diferansiyasyon için topluca kullanılan bir dizi biyokimyasal tahlilin yanı sıra, uygun Vibrio kolera bakımı tekniklerini tanımlamaktadır. Bir laboratuar ortamında kolera biyotipleri.

Biyotiplerin Bakımında ve Türevinde Kullanılan Laboratuvar Teknikleri<emVibrio cholerae</em&gt; Klinik ve Çevresel İzolatlar

Bu protokol, farklı olarak farklı Vibrio parahaemolyticus yüzücü ve swarmer hücrelerinin tek hücreli mikroskobu sağlar. Yöntem, tek hücreli analiz için kolayca bulunabilen bir swarmer hücreleri popülasyonu üretir ve hücre kültürlerinin hazırlanmasını, swarmer farklılaşmasının indüksiyonunu, numunenin hazırlanmasını ve görüntü analizini kapsar.

Hücresel Farklılaşma ve Tek Hücreli Görüntüleme İndüksiyonu<emVibrio parahaemolyticus</em&gt; Yüzücü ve Swarmer Hücreleri

Vibrio parahaemolyticus algılamak için polylactic asit-sağlamlık, altın nano tanecikleri değiştirilme tarihi, Serigrafi karbon elektrot oluşan bir elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı geliştirilmesi için bir protokol sunulmuştur.

Gıda kaynaklı patojen tespit etmek için bir elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı gelişimi

Burada akıllı, yüksek verimli antimikrobiyal duyarlılık testi/faj tarama sisteminin prensibini, yapısını ve talimatını tanıtıyoruz. Uygulaması, örnek olarak Çin'in Shandong kentindeki kümes hayvanlarından izole edilen Salmonella kullanılarak gösterilmiştir. Lar indeksi hesaplanır ve antimikrobiyal direncin değerlendirilmesindeki önemi kapsamlı bir şekilde tartışılır.

Akıllı Yüksek Verimli Antimikrobiyal Duyarlılık Testi / Faj Tarama Sistemi ve Lar Antimikrobiyal Direnç İndeksinin Uygulanması

Keşfedin, Vibrio parahaemolyticus ve diğer Vibrio türlerini tespit etmek için geliştirilen yeni kromojenik agar ortamının duyarlılık ve özgüllüğünü. Gıda güvenliği ve çevre mikrobiyolojisi alanında bu yöntem, konvansiyonel ortamlara göre üstün performans sunar.

Tespiti için daha duyarlı ve özgül Chromogenic Agar Orta Gelişimi

Daha fazla video keşfet