Kişiye özel Prekürsorler tarafından Modifikasyon ve Guanidin Grubu işlevselleştirilmesi

Bu prosedürün genel amacı, guanidin işlevselleştirilmiş peptitlere uygun bir sentetik erişim sağlamaktır. Bu yöntem, integrin ligandlarının veya GPCR ligandlarının geliştirilmesi gibi kas peptit kimyası alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, SPPS ile tamamen uyumlu, işlevselleştirilmiş guanidinlere kolay, sentetik bir erişim sağlamasıdır.

Teknoloji, dokunsal moleküller için özellikle değerli olacaktır, çünkü modifiye edilen fonksiyonel gruplar tipik olarak bozulan biyomoleküllerdir. Olgumuzda, bireysel kanserlerin farklı özelliklerinin fpr moleküler görüntülemesi ve spesifik tedavisi için kullanılabilecek molekülleri hedefliyoruz; Kişiselleştirilmiş tıp için önemli bir konu. Bu özel prosedüre başlamak için, 50 mililitrelik yuvarlak tabanlı bir şişeye bir gram boc-pirazol karboksamaidin ve bir gram PPh3 ekleyin.

Daha sonra, kauçuk bir septum yoluyla inert bir atmosferde 50 mililitrelik yuvarlak tabanlı bir şişeye 10 mililitre kurutulmuş THF ekleyin. Bir şırınga kullanarak 194 mikrolitre kuru metanol ekleyin. Çözeltiyi oda sıcaklığında karıştırın.

Bir şırınga kullanarak, THF içinde 15 dakika boyunca damla damla hazırlanmış bir diizopropil azodikarboksilat çözeltisi ekleyin. Ardından, çözeltinin oda sıcaklığında iki saat karışmasına izin verin. Döner bir evaporatör kullanarak, çözücüyü düşük basınç altında çıkarın.

Bundan sonra, ham ürünü bir mililitre DCM'de çözün. Daha sonra, bir pentan çözeltisi içinde% 10 etil asetat içinde 100 gram silika içeren bir flaş sütununa izin verin. Çözünmüş ham ürünü kolona yükleyin ve çözücüyü basınç altında ekleyin.

Metin protokolünde belirtildiği gibi kesirleri toplayın, tanımlayın ve birleştirin. Daha sonra, döner bir buharlaştırıcı kullanarak, istenen bileşiği sarı, viskoz bir yağ olarak elde etmek için çözücüyü düşük basınç altında buharlaştırın. İlk olarak, 50 mililitrelik yuvarlak tabanlı bir şişeye bir gram boc-pirazol karboksamidin, bir gram PPH3 ve 0.9 gram Dde-6-Aminoheksanol ekleyin.

Ardından, kauçuk bir septum kullanarak inert bir atmosferde 10 mililitre kuru THF ekleyin. Daha sonra başlangıç malzemelerini oda sıcaklığında çözün. Bir şırınga kullanarak, THF içinde 15 dakika boyunca damla damla hazırlanmış bir diizopropil azodikarboksilat çözeltisi ekleyin.

Çözeltiyi oda sıcaklığında iki saat karıştırın. Bundan sonra, çözücüyü düşük basınç altında çıkarmak için döner bir buharlaştırıcı kullanın. Ham ürünü 1 mililitre DCM'de çözün.

Daha sonra, iki ila bir pentan ve etil asetat çözeltisinde 100 gram silika içeren bir flaş sütunu yükleyin. Çözünmüş ham ürünü kolona yükleyin ve çözücüyü basınç altında ekleyin. Metin protokolünde belirtildiği gibi kesirleri toplayın, tanımlayın ve birleştirin.

Döner bir evaporatör kullanarak, istenen ürünü elde etmek için çözücüyü düşük basınç altında buharlaştırın. Başlamak için, 1.4 gram S-metilizotioüre ve 2.2 gram boc-anhidriti, kuvvetlice karıştırılan bir bifazik DCM ve doymuş sulu sodyum bikarbonat çözeltisi içinde çözün. Karışımı oda sıcaklığında 24 saat karıştırın.

Bundan sonra, karışımı bir ayırma hunisine dökün. Katmanları ayırın ve sulu fazı DCM ile üç kez çıkarın. Ardından organik fazları birleştirin.

Kombine organik fazları sodyum sülfat ile kurutun. Çözücüyü döner bir buharlaştırıcı kullanarak çıkardıktan sonra, ham ürünü 2 mililitre heksan içinde çözün. Dörde bir heksan ve etil asetat çözeltisine 100 gram silika içeren bir flaş sütunu yükleyin.

Bundan sonra, çözünmüş ham ürünü kolona yükleyin ve çözücüyü basınç altında ekleyin. Kesirleri toplayıp tanımladıktan sonra, istenen kesirleri birleştirin. Döner bir evaporatör kullanarak, 1.1 gram Boc-S-metilizotiyoüre elde etmek için çözücüyü düşük basınç altında buharlaştırın.

Toplanan Boc-S-metilizotioürenin 250 miligramını 10 mililitre kurutulmuş DMF içinde 50 mililitrelik yuvarlak tabanlı bir şişede oda sıcaklığında inert bir atmosferde çözün. 440 mikrolitre DIPEA eklemek için bir şırınga kullanın. Bir şırınga kullanarak, karıştırırken damla damla 245 mikrolitre asetik anhidrit ekleyin.

Karışımı oda sıcaklığında bir saat karıştırın. Ardından, iki mililitre metanol eklemek için bir şırınga kullanın ve 15 dakika karıştırın. Çözücüyü düşük basınç altında çıkardıktan sonra, döner bir buharlaştırıcı kullanarak, ham ürünü bir mililitre DCM'de çözün.

Üçe bir heksan ve etil asetat çözeltisine 60 gram silika içeren bir flaş sütunu yükleyin. Ardından, çözünmüş ham ürünü yükleyin ve çözücüyü basınç altında ekleyin. Metin protokolünde belirtildiği gibi kesirleri toplayın, tanımlayın ve birleştirin.

Döner bir buharlaştırıcı kullanarak, istenen üründen 210 miligramını beyaz bir katı olarak elde etmek için çözücüyü düşük basınç altında buharlaştırın. Başlamak için, ortogonal olarak korunmamış siklik peptidin küçük bir miktarını küçük bir hacimde DMF içinde çözün. DIPEA'nın iki eşdeğerini ekleyin.

Ve guanidinilasyon öncüsünün iki eşdeğeri. Ardından, çözeltinin oda sıcaklığında iki saat karışmasına izin verin. Reaksiyon tamamlandığında, çözücüyü çıkarın.

guanidinile edilmiş siklik peptidi asetil nitril içinde yeniden çözün ve metin protokolünde belirtildiği gibi yarı hazırlayıcı HPLC saflaştırması gerçekleştirin. Bundan sonra, küçük bir cam aşağılıkta, saflaştırılmış ürüne hazırlanmış bir trifloroasetik asit, su ve triizopropilsilan çözeltisi ekleyin. Bu karışımı oda sıcaklığında bir saat boyunca karıştırın ve ardından ESIMS ile korumanın tamamen kaldırıldığını gözlemleyin.

50 mililitrelik bir santrifüj tüpüne 10 mililitre buz gibi soğuk eter ekleyin. Bir Pasteur pipeti kullanarak, koruması kaldırılmış peptidi etere damla damla ekleyin. Süspansiyonu beş dakika boyunca 5.000 kez g'de santrifüjleyin.

Bundan sonra, peleti buz gibi soğuk eterle yıkayın. Beş dakika boyunca 5.000 kez g'de santrifüjde. Bu yıkama ve santrifüjleme işlemini bir kez daha tekrarlayın.

Daha sonra, ürünü 2 mililitre HBLC dereceli su içinde çözün ve metin protokolünde belirtildiği gibi yarı hazırlayıcı HPLC kullanarak ürünü saflaştırın. Bu çalışmada, peptidik gliginlerde guanidin grubunun modifikasyonunda kolay bir yöntem sunulmuştur. Reaksiyonların ilerlemesi, yüksek basınçlı sıvı kromatografisi kullanılarak izlenir.

Guanidin grubundaki daha büyük kalıntılar için, reaksiyonun tamamlanması için iki saat genellikle yeterli bir süre değildir. Böylece reaksiyona devam edilir ve bileşikler yarı hazırlayıcı HPLC ile saflaştırılır. Daha sonra, al-ee-so benzeri bir katı faz bağlama testinde biyolojik değerlendirme için bir kök çözeltisi elde etmek için küçük bir miktar DMSO ile seyreltilir.

Analiz edilen tüm bileşikler, integrant alt tip alfa v beta üç'ün nispeten yüksek bir afinitesini ve integrant alt tip alfa beş beta bir'e karşı yüksek seçiciliği göstermektedir. Bu yöntem için ilk olarak SPPS sırasında guanidinilasyon için standart bir yöntem ararken aklımıza geldi. Bu videoyu izledikten sonra, hedef peptidinizin guanidin grubunu değiştirmek veya işlevsel hale getirmek için özel yapım guanidinilasyon öncülerinin nasıl hazırlanacağını iyi anlamalısınız.