Name: Örnek çıkarma ve eşzamanlı Kromatografik Nefelometri doksorubisin ve ilaç kombinasyonu dağıtımında nano tanecikleri tümörü taşıyan fareler takip Mitomycin C (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: Keşfedin, Doxorubicin, Mitomycin C ve Doxorubicinol'ün ters faz yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile biyolojik örneklerden eşzamanlı ekstraksiyon ve kantitasyon yöntemini. Nanotıp alanında ilaç kombinasyonlarının nanofarmakokinetiğini incelemek için etkili bir analitik teknik sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, minnetle Doğa Bilimleri ve mühendislik araştırma (NSERC) Kanada Konseyi ekipman hibe HPLC, Kanada Enstitüsü Sağlık Araştırma (CIHR) ve Kanada meme kanseri araştırma (CBCR) çalışma hibe için kabul İttifak X.Y Wu ve Toronto Üniversitesi Burs R.X. Zhang ve T. Zhang.

tüm hayvan deneyleri hayvan bakım komitesi, üniversite sağlık ağı Ontario Kanser Enstitüsü tarafından onaylanmış ve hayvan bakım kuralları Kanada Konseyi uyarınca yürütülen.
 1. biyolojik örnek hazırlık <ol><li>tam kan, büyük organları toplamak ve önceden belirlenmiş zaman-Puan Intravenous (IV) yönetim uyuşturucu içeren sonra meme tümör (örneğin, formülasyonları DMPLN, liposomal DOX) <ol><li>meme tümörü taşıyan fare damardan uyuşturucu içeren hazır formülasyonu ile enjekte.</li>
		<li>İnhalable % 2 isoflurane mühürlü bir odasında vererek belirlenen zaman-noktalarda (örneğin, 15dk) fare anestezi.</li>
		<li>Sırtında imzalat fare yatıyordu ve burnunu sürekli % 2 isoflurane sağlayan bir yangın gövdeler koymak. 
		Not: fare uğrar derin anestezi emin olmak için yavaşça çimdik fare ve tat herhangi bir hareket için bir görünüm ön bacaklarda.</li>
		<li>% 70 etanol kullanarak göğüs ve karın bölgeleri iyice temizleyin ve sonra heparinized 1 mL şırınga ve 23 G iğne kullanarak derin imzalat fareler üzerinde kalp ponksiyon terminal bir yordamı gerçekleştirin.</li>
		<li>Toplamak tam kan içine etiketli bir sodyum heparin plastik tüp püskürtülür ve yavaşça toplanan tam kan ile temas tüpü duvardaki heparin kaplı gelir sağlamak için tüp girdap. En az 50 µL bütün kan toplamak. Her zaman buz üzerinde örnekleri devam</li>
		<li>Güvenli ve açık belgili tanımlık karın ve göğüs kafesi bir çift makas ve forseps kullanarak fare fare tüm dört bacaklarda teyp. Bağırsak tarafına kayması ve yukarı doğru yeterince portal ven ortaya çıkarmak için karaciğer itin. Kan drenaj için portal ven kesti.</li>
		<li>Sıvı buz gibi % 0,9 serum 25 G iğne ile 10 mL şırınga kullanarak kalbine tüm fare gövdesi ile 50 mL. 
		Not: iğne şırınga portal ven rehberlik için 90 ° dirsek.</li>
		<li>Tüketim organlarda birini sipariş: kalp, akciğer, karaciğer, dalak, böbrekler. O zaman, meme tümör çevresindeki bağ dokusu fareyi sağ meme yağ yastığı kesi makas kullanarak ayırmak. Tüm organlarının ayrı ayrı 1,5 mL polipropilen tüpler içine toplamak ve hızlı bir şekilde onları sıvı azot içinde dondurma. 
		&#8203; Not: safra kesesi Karaciğer ayırın.</li>
		<li>4 ° C ve çıkarılan doku tam kan-80 ° C dondurucuya kadar daha sonra HPLC analiz depolamak.</li>
	</ol></li> <li>Ayıklamak DOX, MMC ve biyolojik matrisler DOXol.
	<ol><li>Tüm donmuş disseke dokularda hızla tartmak ve 13 mL yuvarlak alt konik tüp içine aktarabilirsiniz. Uyuşturucu metabolizma veya yıkımı önlemek için örnekleri üzerinde buz tutmak</li>
		<li>Ekleyin buz gibi hücre lizis arabellek 1-5 mL tüp içine. 
		Not: 1 g: 5 mL (w/v); doku-tampon oranına dayanarak doku ağırlık kullanmak için arabellek hacmi bağlıdır kalp ve dalak, gibi küçük organları için 1 g: oranıdır 2 mL.</li>
		<li>Doku örnekleri, bir elektrikli el homogenizer kullanarak 18.000 rpm hızında buzda homojenize için bir yukarı-aşağı inme hareket kullanın. 
		Not: Tamamlanan homojenizasyon kısa homojenizasyon işlemi daha az 15 yaklaşık 3-5 yinelemelerini gerektirir s, her kısa homojenizasyon arasında buz üzerinde soğutma doku ardından.</li>
		<li>Homogenizer distile deiyonize (DDI) H 2 O, % 70 etanol ve DDI H 2 O çapraz bulaşma kaçınmak için her doku örneği arasında 10 mm testere dişli jeneratör probe yıkayın.</li>
		Bir iç standart (I.S.) 4-methylumbelliferone (4-MU) (2000 ng/mL) tüp içine <li>transfer 50 µL doku homogenate veya tam kan bir 1,5 mL polipropilen mikro-santrifüj tüpü ve 5 Spike'la µL. 
		Not: 4-MU çözüm burada metanol hazırlanmıştır.</li>
		<li>Bir buz gibi ayıklama çözücü tam kan veya doku homogenate içeren tüp içine eklemek 250 µL. 
		Not: pH için ayarlanır pH ile % 60 Asetonitril (ACN) ve % 40 amonyum asetat (5 mM) çıkarma solvent oluşur 3.5 = %0,05 formik asit kullanarak. 1:5 (v/v) örneği kullanmak: hacim oranı için solvent ekstraksiyon.</li>
		<li>Şiddetle girdap karışımı için 2 dk, 3000 x 4 o C, g kuvvet, santrifüj 10 dk ve damlalıklı 200 µL başka bir önceden soğutulmuş taze mikro-santrifüj tüpüne süpernatant.</li>
		<li>Buharlaştırılarak süpernatant azot gazı ışık koruma ile yavaş bir akarsuyun altında 60 ° C'de.</li>
		<li>Buz gibi metanol, 30 s ve 3000 x g başka bir 5 dakika süreyle 4 ° C'de, santrifüj için şiddetle girdap 100 µL ile kurumuş kalıntı sulandırmak</li>
		<li>Örnek şişeleri enjeksiyon için bir Otomatik Örnekleyici tepsisine yerleştirin ve süpernatant HPLC şişe sokmak içine transfer.</li>
	</ol></li></ol> 2. HPLC araçları ve işlem parametrelerini <ol><li>HPLC hazırlamak cep fazlı tutarlı tekrarlanabilirlik ile <ol><li>500 mL HPLC sınıf H 2 O mezun silindir kullanarak ölçmek.</li>
		<li>Ölçmek ayrı bir mezun silindir kullanarak HPLC sınıf Asetonitril (ACN) 500 mL.</li>
		<li>Dikkatle her 500 mL H 2 O içine trifluoroacetic asit (TFA) (dikkat) 0.5 mL ekleyin ve ACN H 2 O mobil faz elde etmek için ve % 0.1 içeren ACN TFA, sırasıyla. 
		Not: TFA aşındırıcı ve toksik ve laboratuvar duman başlık altında ele alınmalıdır. Tüm çözücü karışımları oda sıcaklığında hazır mısınız.</li>
		<li>Naylon membran filtre 0,45 µm ile mobil aşamalardan filtre boyutu gözenek ve temiz HPLC rezervuar şişe transfer.</li>
	</ol></li> <li>Kurulum HPLC araçları aynı anda DOX, MMC ve DOXol ve I.S. 4-MU algılanması için.
	<ol><li>Degrade pompa, de-gasser, Otomatik Örnekleyici, fotodiyot dizi dedektörü ile multi λ Floresans Dedektör üzerinde geçiş.</li>
		<li>Mobil faz kompozisyon %16,5 H 2 O başlangıç koşullarını giriş (% 0,1 TFA) ve %83.5 ACN (% 0,1 TFA) (v/v).</li>
		<li>310 adlı iki kanaldaki UV dedektörü ayarla nm 4-MU (I.S.) için ve diğer 360 nm MMC için.</li>
		<li>λ ex adlı iki kanaldaki Floresans dedektörü ayarla / λ em 365/445 = nm 4-MU ve diğer λ ex at için / λ em 480 nm/560 nm DOX ve DOXol, sırasıyla =.</li>
		<li>1.0 mL/dak bir isocratic akış hızı ayarla</li>
		<li>Temel kuruluş için 10 dakika oda sıcaklığında bir önceden yüklenmiş ters faz C 18 sütun (4.6 mm x 250 mm, 5 µm) equilibrate.</li>
	</ol></li> <li>Ayrı uyuşturucu (DOX, MMC, DOXol ve 4-MU) degrade cep fazlı koşulu kullanarak.
	<ol><li>Enjekte 15 µL otomatik örnekleyici kullanarak örnekleri ayıklanan ve yeniden konsantre.</li>
		<li>Yavaş yavaş ilk mobil faz durumu değiştirmek (2.2.2 Protokolü adıma bakın) %100 ACN (% 0,1 TFA) üzerinde 18 dk otomatik degrade pompa kullanarak. 
		Not: ayırma işlemi sırasında dört kanal (iki UV emici ve iki floresan) aynı anda bir uyuşturucu bileşik görüntüleme her kanal ile görünür (iletişim kuralı adıma 2.2.3 ve 2.2.4 başvurun).</li>
		<li>Korumak %100 ACN (% 0,1 TFA) 1 dk ve 1 dk. içinde ilk mobil faz durumuna sonra dönüş için</li>
		<li>İlk mobil aşamasında Debi 1.5 mL/dk 4 dk için sonraki örnek enjeksiyon için sütunu yeniden durum.</li>
	</ol></li></ol> 3. HPLC doğrulama <ol><li>DOX, MMC ve DOXol ve 4-MU (I.S.) çalışma standartları hazırlayın.
	<ol><li>DOX ve MMC ilaç tozu (dikkat) ve 4-MU bir taze küçük kağıt (3 x 3 inç 2) ağırlığında tartmak ayrı ayrı 1 mg. 
		Not tüm antikanser ilaçların akut toksisite ve germ hücreli mutagenisitesinin solunum veya sindirim neden olabilir bir sağlık tehlikesi olarak kabul edilir. Eldiven ve maske ile dikkatli bir şekilde işleneceğini.</li>
		<li>Ağırlığını DOX, MMC ve 4-MU bir yeni bireysel 1,5 mL polipropilen mikro-santrifüj tüpüne transfer.</li>
		<li>Meth 1 mL ekleyinanol ve kısaca DOX ve MMC 1 mg/mL konsantrasyonu elde etmek için girdap.</li>
		<li>DOXol (dikkat) ve girdap kısaca DOXol konsantrasyonu 1 mg/mL edinmek için önceden ağırlığını 1 mg içeren bir flakon 1 mL metanol ekleyin. 
		Not: DOXol bir kardiyo-toksik metaboliti ve dikkatle ele alınmalıdır.</li>
		<li>Pipet 20 µL DOX, MMC, DOXol ve 4-MU içine yeni bir hazır hisse senedi çözümleri ayrı 1,5 mL polipropilen mikro-santrifüj tüpü ve metanol her uyuşturucu 20 µg/mL bir çalışma standartları elde etmek için 980 µL ekleyin.</li>
		<li>Seyreltik 20 µg/mL DOX, MMC ve metanol 50 çalışma standartları elde etmek için kullanarak DOXol ng - 20 µg /mL DOX, MMC ve DOXol ve 2000 ng/mL I.S. 4-MU için.</li>
		<li>Çalışma çözümleri metanol buharlaşma önlemek için tüm tüp doğrudan güneş ışığı ve -20 mağazada maruz önlemek için alüminyum folyo ile sarın parafin film kaplama dar bir parçası ile tüpün kapağı mühürle ° C.</li>
	</ol></li> <li>Doğrusallık, hassasiyet ve doğruluk DOX, MMC ve biyolojik matrisler (Yani, tam kan ve tümör homogenate) DOXol belirlemek.
	<ol><li>Aynı anda spike 5 µL çalışma standartları DOX ve DOXol (50 ng/mL - 20 µg/mL), MMC (1000 ng/mL - 16 µg/mL) ve 4-MU (2 µg/mL) içine boş tam kan veya doku homogenate polipropilen mikro-santrifüj tüpler için 50 µL 5-2000 ng/mL ilaç bileşikler için ve 4-MU (I.S.) için 200 ng/mL arasında değişen standart toplama eğrisi elde edilir.</li>
		<li>Protokolü 1.2 ile açıklanan uyuşturucu ayıklama tahlil gerçekleştirmek.</li>
		<li>DOX ve DOXol düşük, medyan ve yüksek konsantrasyonları kullanın (50, 500 ve 2.000 ng/mL) ve MMC (100, 1000, 2000 ng/mL) içi ve arası gün hassasiyet ve doğruluk için. 
		Not: analiz gününde taze standart konsantrasyonları hazırlayın.</li>
	</ol></li> <li>Analiz örnekleri <ol><li>enjekte 15 µL otomatik örnekleyici kullanarak örnek.</li>
		<li>Yavaş yavaş mobil faz üzerinden 0-18 min, artan ACN bileşimi aralığında değişir.</li>
		<li>Sonra 18 dk, mobil faz koşul 1 dk. tutun</li>
		<li>2 dk içinde ilk durumuna dönün ve sonra sonraki enjeksiyon önce 4 dk için yeniden equilibrate.</li>
		<li>Uyuşturucu bileşiklerin onların tutma zamanı ile doruklarına takip gösterilir koşmak her örnek sonra Not: MMC, DOXol, 4-MU (I.S.) ve DOX.</li>
		<li>Eğri (AUC) HPLC yazılımını kullanarak uyuşturucu bileşiklerin altındaki tepe alanını ile tümleştirmeniz.</li>
		<li>I.S. (Denklem 1) arasındaki bireysel uyuşturucu bileşik AUC oranı hesaplamak ve aynı ayıklama prosedürleri altında hazırlanan standart eğrileri DMPLN formülasyonu DOX, MMC ve DOXol ilaç konsantrasyonlarda belirlemek için kullanın. 
		<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56159/56159eq1.jpg" /></li> <li>o çivili biyolojik örnekler özleri gelen metanol kullanarak yeniden ilaç konsantrasyonları karşılaştırarak uyuşturucu kurtarma yüzdesi (Denklem 2) hesaplamak Standart (&#34; düzgün &#34;) uyuşturucu metanol çözümde. 
		<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56159/56159eq2.jpg" /></li></ol></li></ol>

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarının ve çıkar çatışması var.

Bir tek ilaç tür algılama bir anda diğer Kromatografik yöntemleri ile karşılaştırıldığında, mevcut HPLC protokolü aynı anda aynı biyolojik matris değiştirmeye gerek kalmadan üç uyuşturucu bileşikler (DOX, MMC ve DOXol) quantitate yapabiliyor mobil faz. Bu hazırlama ve analiz yöntemi başarıyla uygulandı farmakokinetik ve biyo-iki uyuşturucu nanoparçacık tabanlı dağıtım sistemlerinin dağıtımını belirlemek için (Yani, liposomal DOX ve DMPLN)22. Pegile nano tanecikleri yüklü uyuşturu...

Henüz kez şiddetli yan etkiler ve ilaç direnci nedeniyle sınırlı etkinliği ve diğer etkenler1,2,3ile ilişkili kemoterapi birçok kanser için birincil tedavi yöntemi var. Kemoterapi sonucu geliştirmek için ilaç kombinasyonu rejimlerinin konuları üst üste toksisite, uyuşturucu eylem ve çapraz ilaç direnci4,5 farklı mekanizmalar gibi temel kliniğinde uygulanan , 6. klinik çalışmalarda, daha iyi bir tümör yanıt oranı genellikle aynı anda kullanarak yönetilen ardışık ilaç teslim7,8bir rejimi için karşılaştırıldığında uyuşturucu kombinasyonları gözlendi. Ancak, alt-optimal biyo-dağıtım nedeniyle ücretsiz ilaç formları, birden çok ilaçların eşzamanlı enjeksiyon tedavi etkisi9,10,11daha ağır basar önemli normal doku toksisite neden olabilir. Nanocarrier tabanlı ilaç dağıtım alter farmakokinetik ve biyo-dağıtım tümör hedefli birikimi12,13,14artırılması kapsüllenmiş ilaçların olduğu gösterilmiştir. Bizim son makalelerinde gözden olarak sinerjik uyuşturucu kombinasyonları ile birlikte yüklenen nano tanecikleri ücretsiz uyuşturucu kombinasyonları, kontrollü kendi zamansal ve mekansal co teslimini nedeniyle karşılaştığı sorunları azaltmak için yetenek göstermiştir birden fazla uyuşturucu tümör doku sinerjik uyuşturucu etkileri kansere karşı etkinleştirme4,15,16hücreleri. Sonuç olarak, üstün terapötik etkinlik ve düşük toksisite her iki önceden klinik ve klinik çalışmalar4,17,18içinde gösterilmiştir.
Bizim önceki vitro çalışmalarda iki antikanser ilaç, doksorubisin (DOX) ve mitomycin C (MMC), kombinasyonu sinerjik etkisi birkaç meme kanseri hücreleri hattı karşı üretilen bulundu ve ayrıca, yükleme DOX ve MMC içinde co Polimer-lipid hibrid nano tanecikleri (DMPLN) çeşitli çok ilaca dirençli ilişkili sızma Pompalar (Örneğin, P-glikoprotein ve meme kanseri dayanıklı protein)19,20,21üstesinden geldi. Vivo, DMPLN DOX ve MMC tümör sitelere uzamsal-Zamansal eş teslimi ve ilaçların kanser hücreleri içinde artan bioavailability DOX metaboliti doxorubicinol (DOXol)22oluşumu ılımlılık tarafından belirtildiği şekilde etkin. Sonuç olarak, DMPLN gelişmiş tümör hücre apoptosis, tümör büyüme inhibisyonu ve DOX ve MMC kombinasyonu veya bir liposomal DOX formülasyonu22,23,24ücretsiz göre uzun süreli ana bilgisayar hayatta kalma, 25.
Ortak bir nanocarrier tarafından teslim uyuşturucu gerçek miktarı analiz etkili nanopartikül formülasyonları tasarlamak için önemlidir. Pek çok yöntem plazma düzeyini yüksek performanslı sıvı Kromatografi (HPLC) yalnız kullanarak tek DOX veya MMC doz veya kütle spektrometresi (MS)26,27,28 ile birlikte analiz etmek için geliştirilmiştir , 29 , 30 , 31 , 32 , 33 , 34. biyolojik örnekler çok sayıda ayrı ayrı birden çok uyuşturucu (bazen uyuşturucu metabolitleri dahil) analizi için hazırlıklı olması gerekiyor gibi Ancak, bu yöntemler genellikle zaman alıcı ve kombinasyon tedavisi için pratik vardır. Güçlü plazma protein bağlayıcı DOX ve MMC ek olarak kırmızı kan hücreleri da bağlamak ve pek çok antikanser ilaçlar35,36konsantre büyük bir kapasiteye sahip. Böylece, plazma analiz DOX veya MMC için gerçek kan ilaç konsantrasyonları karartmak. Mevcut çalışma (şekil 1) basit ve sağlam aynı anda ayıklamak ve DOX, MMC ve tam kan ve çeşitli dokular ( DOX metaboliti doxorubicinol (DOXol) quantitate ters faz HPLC kullanarak birden fazla uyuşturucu analiz yöntemi açıklar Örneğin, tümörler). Farmakokinetik ve biyo-DOX ve MMC dağıtımını yanı sıra DOXol oluşumu ilaç dağıtım yolu ile ücretsiz çözümler ya da nanopartikül formları (örneğin, DMPLN ve liposomal DOX) sonra bir orthotopically belirlemek için başarıyla uygulandı fare meme tümör fare modeli Intravenous (IV) sonra implante enjeksiyon22.

<table><tbody><tr><td>Doksorubisin&nbsp;</td><td>Polymed Theraeutics</td><td>111023</td><td>Antikanser ilacı</td></tr><tr><td>Mitomisin C</td><td>Polymed Theraeutics 060814</td><td></td><td>Antikanser ilacı</td></tr><tr><td>Doksorubisinol (DOXol)</td><td>Toronto Araştırma Kimyasalları</td><td>D558020</td> DOX <td></td></tr><tr><td>4-Metilumbelliferon sodyum tuzu metaboliti&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1508</td><td>İç standart</td></tr><tr><td>Miristik</td><td>Asit Sigma-Aldrich</td><td>544-63-8&nbsp; &nbsp;</td><td>Poli-lipid hibrit nanopartiküller için malzemeler</td></tr><tr><td>Polioksietilen (100) Stearat</td><td>Spektrumu</td><td>M1402</td><td>Poli-lipid hibrit nanopartiküller için malzemeler</td></tr><tr><td>Polioksietilen (40) Stearat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3440</td><td>Poli-lipid hibrit nanopartiküller için malzemeler</td></tr><tr><td>Pluronic F68 (PF68)</td><td>BASF Corp.</td><td>9003-11-6</td><td>Poli-lipid hibrid nanopartiküller için malzemeler</td></tr><tr><td>Ultrasonication (UP100H)</td> <td>Hielscher, Ultrason Teknolojisi</td><td>NA</td><td>Nanopartikül hazırlama</td></tr><tr><td>Su Banyosu (ISOTEMP 3016HS)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>NA</td><td>Nanopartikül hazırlama</td></tr><tr><td>Lipozomal Doksorubisin ve nbsp; (Caelyx)</td><td>Janssen</td><td>Princess Margaret Hastanesi eczanesinden satın alındı</td><td>Klinik olarak onaylanmış nanopartikül formülasyonu&nbsp;</td></tr><tr><td>HPLC dereceli Metanol</td><td>Caledon Kimyasalları</td><td>6701-7-40</td><td>HPLC mobil faz bileşimi</td></tr><tr><td>HPLC dereceli H2O</td><td>Caledon Chemicals</td><td>8801-7-40</td><td>HPLC mobil faz bileşimi</td></tr><tr><td>HPLC dereceli Asetonitril&nbsp;</td><td>Caledon Chemicals</td><td>1401-7-40</td><td>HPLC mobil faz bileşimi</td></tr><tr><td>Trifloroasetik Asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>302031</td><td>HPLC mobil faz bileşimi</td></tr><tr><td>0.45 &mu; m Naylon Membran Filtre Kağıdı</td><td>Whatman</td><td>WHA7404004</td><td>HPLC mobil faz hazırlama</td></tr><tr><td>1cc Plastik Şırıngalar</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>2606-309659</td><td>Tedavi enjeksiyonu</td></tr><tr><td>5cc Plastik Şırıngalar</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>2608-309646</td><td>Doku koleksiyonları</td></tr><tr><td>30G 1/2 İğneler</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305106</td><td>Tedavi enjeksiyonu</td></tr><tr><td>25G 5/8 İğneler</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305122</td><td>Doku koleksiyonları</td></tr><tr><td>Steril% 0.9 Salin</td><td>Toronto House Brand Üniversitesi</td><td>1011</td><td>Doku perfüzyonu</td></tr><tr><td>13 ml Yuvarlak tabanlı konik tüp&nbsp;</td><td>SARSTEDT</td><td>62.515.006</td><td>Proliprolen, doku homojenizasyonu</td></tr><tr><td>Alfa Minimum Esansiyel Ortam (MEM)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12571063</td><td>Hücre ortamı</td></tr><tr><td>1 x Fosfat Tampon Tuzlu</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td>Doku homojenizasyonu</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-100 ML</td><td>Doku homojenizasyonu</td></tr><tr><td>Formik asit</td><td>Caledon Chemicals</td><td>1/5/3840</td><td>Ekstraksiyon çözücüsü için pH'ı ayarlayın</td></tr><tr><td>Sodyum heparin püskürtülmüş plastik tüpler</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>367878</td><td>Kan alma</td></tr><tr><td>Analitik Tartı Terazisi&nbsp;</td><td>Sartorius&nbsp;</td><td>CPA225D</td><td>NA</td></tr><tr><td>pH metreler&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-637-671</td><td>accumet BASIC</td></tr><tr><td>Vortex Mixter</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-215-365</td><td>İstenilen hızda vorteksleme</td></tr><tr><td>örnekleri 1.5 ml&nbsp; Mikrosantrifüj Tüpü</td><td>Fisherbrand</td><td>2043-05408129</td><td>Proliprolene</td></tr><tr><td>Model 1000 homojenizatör</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-451-672</td><td>Doku homojenizasyon</td></tr><tr><td>Santrifüjü 5702R</td><td>Eppendorf</td><td>5702R</td><td>Ekstraksiyon hazırlığı</td></tr><tr><td>Isıtmalı Evaporatör Sistemi</td><td>Glas-Col</td><td>NA</td><td>Numune sulandırma</td></tr><tr><td>HPLC Vida Dişi Şişeleri</td><td>DIKMA</td><td>5320</td><td>HPLC numune</td></tr><tr><td>enjeksiyonu PTFE Beyaz Silikonlu HPLC Vidalı Kapaklar Septa</td><td>DIKMA</td><td>5325</td><td>HPLC numune enjeksiyonu</td></tr><tr><td>HPLC Polipropilen Uç&nbsp; &nbsp;</td><td>Agilent Technologies</td><td>5182-0549</td><td>Maksimum hacim 250 &mu; l, HPLC numune enjeksiyonu</td></tr><tr><td>Xbridge C18 Column</td><td>Waters Corporation</td><td>186003117</td><td>İlaç analizi</td></tr><tr><td>Gradyan pompası&nbsp;</td><td>Waters Corporation</td><td>W600</td><td>İlaç analizi</td></tr><tr><td>Otomatik örnekleyici</td><td>Waters Corporation</td><td>W2707</td><td>İlaç analizi</td></tr><tr><td>Fotodiyot dizi dedektörü&nbsp;</td><td>Waters Corporation</td><td>W2998</td><td>İlaç analizi</td></tr><tr><td>Multi &lambda; floresan dedektörü ve nbsp;</td><td>Waters Corporation</td><td>W2475</td><td>İlaç analizi</td></tr><tr><td>EMPOWER 2</td><td>Waters Corporation</td><td>NA</td><td>Veri analizi yazılımı</td></tr><tr><td>Bilim adamı</td><td>Micromath</td><td>NA</td><td>Farmakokinetik analiz</td></tr><tr><td>Dişi Balb/c Fareler</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>001026</td><td>İn vivo</td></tr><tr><td>EMT6/WT Meme Kanseri Hücreleri</td><td>Dr. Ian Tannock tarafından sağlanmıştır; Ontario Kanser Enstitüsü</td><td>NA</td><td>İn vivo</td></tr></tbody></table>

Örnek çıkarma ve eşzamanlı kromatografik nefelometri doksorubisin ve ilaç kombinasyonu dağıtımında nano tanecikleri tümörü taşıyan fareler takip mitomycin c

Sample Extraction and Simultaneous Chromatographic Quantitation of Doxorubicin and Mitomycin C Following Drug Combination Delivery in Nanoparticles to Tumor-bearing Mice

Kombinasyon kemoterapi, kanser tedavisi için klinikte sık kullanılır; Ancak, ilişkili yan etkileri normal doku için onun terapötik yarar sınırlayabilir. Nanoparçacık tabanlı ilaç kombinasyonu ücretsiz uyuşturucu kombinasyon tedavisi tarafından karşılaşılan sorunların etkisini azaltmak için gösterilmiştir. Önceki çalışmalarımız var, bu iki antikanser ilaç, doksorubisin (DOX) ve mitomycin C (MMC) ile birlikte gösterilen her iki fare karşı bir sinerjik etkisi üretilen ve vitroinsan meme kanseri hücreleri. DOX ve MMC birlikte yüklenen polimer-lipid hibrid nano tanecikleri (DMPLN) tedavisine direnç ve meme tümör modelleri gelişmiş etkinlik gösterdiği danışmam çeşitli sızma ışınlama pompalar yan yol. Geleneksel çözüm biçimlerine göre DMPLN üstün böyle etkinliğinin DOX ve MMC ve artan hücre içi uyuşturucu bioavailability tümör hücreleri nanocarrier PLN tarafından etkin içinde eşitlenmiş farmakokinetik atfedilen yapıldı.
Farmakokinetik ve biyo-dağılımı değerlendirmek için DOX ve MMC özgür eriyik ve nanoparçacık formları, ters fazlı yüksek performanslı sıvı Kromatografi (HPLC) yapıldı kullanarak basit ve verimli çoklu ilaç analizi yöntemi ortak idare geliştirdi. DOX veya MMC plazmada ayrı ayrı analiz daha önce bildirilen yöntemler aksine, bu yeni HPLC yöntem aynı anda DOX, MMC ve bir büyük kardiyo-toksik DOX metaboliti, doxorubicinol (DOXol), çeşitli biyolojik matrisler ( içinde quantitate yapabiliyor Örneğin, tam kan, meme tümör ve kalp). Bir çift floresan ve ultraviyole emici sondayı 4-methylumbelliferone (4-MU) farklı algılama dalga boyu ile birden fazla ilaç analizi tespiti tek adımlı bir iç standart (I.S.) olarak kullanılmıştır. Bu yöntem DOX ve tam kan nanopartikül ve çözüm yaklaşımları ve orthotopic meme tümör fare modelinde çeşitli dokular tarafından teslim MMC konsantrasyonları belirlemek için başarıyla uygulandı. Analitik yöntemi sunulan nanoparçacık tabanlı teslimat uyuşturucu kombinasyonları önceden klinik analiz için yararlı bir araçtır.

İki antikanser ilaç, DOX ve MMC yanı sıra DOX metaboliti, DOXol, aynı anda aynı uygulanan degrade HPLC koşul I.S. floresan ve UV dedektörleri için 4-MU kullanarak altında biyolojik herhangi bir müdahale olmadan tespit edildi. DOX, MMC, DOXol ve 4-MU birbirinden MMC için 5,7 min, 10.4 min DOXol için 4-MU için 10.9 min ve 11.1 min DOX (Şekil 2) için saklama kez ile iyi ayrılmış. Tam kan her ilaç ve çeşitli dokuların konsantrasyon doğrusallık ile korelasyon kats...

Bu iletişim kuralı bir verimli ve kullanışlı analitik süreci örnek ekstraksiyon ve birden fazla uyuşturucu, doksorubisin (DOX), mitomycin C (MMC) ve doxorubicinol (DOXol), biyolojik bir kardiyo-toksik DOX metaboliti eşzamanlı belirlenmesi açıklar Preklinik meme tümör modeli örnekleri nanopartikül formülasyonları sinerjik ilaç kombinasyonu ile tedavi.

Örnek çıkarma ve eşzamanlı Kromatografik Nefelometri doksorubisin ve ilaç kombinasyonu dağıtımında nano tanecikleri tümörü taşıyan fareler takip Mitomycin C

Combination chemotherapy is frequently used in the clinic for cancer treatment; however, associated adverse effects to normal tissue may limit its ...

Bu analitik protokolün genel amacı, polimer-lipid hibrit nanopartiküller tarafından birlikte verilen iki anti-kanser ilacı Doksorubisin ve Mitomisin C'yi ve Doksorubisin'in metaboliti Doksorubisinol'ü basit ve sağlam bir ters faz yüksek performanslı sıvı kromatografisi yöntemi kullanarak biyolojik matrislerde aynı anda ekstrakte etmek ve niceliklendirmektir. Bu yöntem, ilaç kombinasyonlarının nanofarmakokinetiğine dayalı etkili bir nanocarry sisteminin nasıl tasarlanacağı gibi nanotıp alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajı, HPLC'nin mobil fazını değiştirmeye gerek kalmadan aynı biyolojik matriste üç ilaç bileşiğinin aynı anda kantitasyonuna izin vermesidir.Bu nedenle, bu yöntem primer meme tümörlerinde Doksorubisin, Mitomisin C ve Doksorubisinol'ün biyolojik davranışları hakkında fikir verebilir. Benzer ilaçlarla tedavi edilen diğer kanser türlerine de uygulanabilir. Etkili numune hazırlama adımlarının öğrenilmesi zor olduğu için bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi çok önemlidir.Bu işleme başlamak için, metin protokolünde belirtildiği gibi tam kanı, ana organları ve meme tümörünü toplayın ve dondurun. Dondurulmuş dokuları hızlı bi

sample-extraction-simultaneous-chromatographic-quantitation

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kanser Araştırmaları

Mikro kabarcık Insonation azaltılmış zaman-ortalamalı akustik güçler tümör ablasyonu için umut vaat eden bir strateji yanı sıra, hedeflenen terapötik teslimat için. Bu çalışmanın amacı non-termal mikrovasküler ablasyon subkutan C6 gliomlar ve yükü teslim maksimize etmek için düşük görev döngüsü ultrason darbeli stratejileri ve nanocarriers geliştirmek.

Kontrast Ultrason Gliomlar, Tedavi Hedeflenen İlaç-Rulman Nanopartikül Teslimat ve Mikrovasküler Ablasyon ile Fare

Bu anti-kanser tedavisi için, görüntüleme yanıt için bir yöntem...

Meme Kanseri Fare Modelleri Tümör Mikroçevre İlaç Yanıtlarının Görüntüleme Canlı

Bu makalede, tümör hedefli nanoparçacık, Herdox optik görüntüleme analizi için prosedürler. Özellikle, hedef ve tümör penetrasyon değerlendirilmesi tümör tespit için çoklu görüntüleme cihazı ayrıntılı kullanımı burada açıklanmıştır.

Hedefli Viral Protein analizi HER2 + tümörler için teslim Nanopartiküller

Polymalic asit bazlı bir nano ilacın bir örnek kanser için de geçerlidir kişiye tıp rasyonel tasarım karşı sunulmuştur. Bu, bir çıplak fare Her2-pozitif insan meme kanseri tedavisi için bir nano ilacın sentezini tarif eder.

Çoklu Tümör Belirteçleri Hedefleme için Polymalic Asit bazlı Nano Biopolymers: Kişiselleştirilmiş Tıp için Bir Fırsat?

Burada, hayvan deneklerde hücresel ve hücre altı düzeylerde fizyolojik olayları anlamak için yenilikçi bir mod sağlayan lifli konfokal floresan mikroskobu (FCFM) tabanlı görüntüleme yöntemini açıklıyoruz.

Kemoterapi kaynaklı Vasküler Toksisite - Gerçek zamanlı<em&gt; In vivo</em&gt; Gemi Düşüklüğü Görüntüleme

Lipozomların heterojen intra-tümöral birikimi, anormal bir tümör mikroçevresi ile ilişkilendirilmiştir. Burada, perfüzyon görüntüleme ile tümör mikrosirkülasyonunu ölçmek ve görüntü kılavuzluğunda robotik bir sistem kullanılarak yüksek interstisyel sıvı basıncını (IFP) ölçmek için yöntemler sunulmaktadır. Ölçümler, hacimsel mikro-BT görüntüleme kullanılarak belirlenen lipozomların intratümöral birikimi ile karşılaştırılır.

Perfüzyon Mekansal Ölçümler, Solid Tümörlerde interstisyel sıvı basınç ve lipozomlar Birikim

Lipofilik doksorubisin ön-ilacın hazırlanması ve tanımlanması için bir protokol, 1,2-distearoil, sn -glisero-3-phosphoethanolamine- N yüklü - [amino (polietilen glikol) -2000] (DSPE-PEG) miseller anlatılmıştır.

Lipofilik Doksorubisin Pro-ilaç misellerin Hazırlanması ve Karakterizasyonu

Nanopartiküller endikasyonlar geniş bir aralığı için ümit vaadeden bir ilaç sağlama sistemlerini ortaya çıkmaktadır. Burada, ters mühendislik ipek böceği ipek kullanılarak ipek nanopartiküller üretmek için basit ama güçlü bir yöntem açıklanmaktadır. Bu ipek nanopartiküller terapötik bir yük ile yüklenen ve daha sonra ilaç dağıtım uygulamaları için keşfedilebilir.

İpek Nanopartiküller imalatı ve İlaç Dağıtım Uygulamaları

Nanoilaçların in vivo performansının zayıf anlaşılması, klinik translasyonlarını engellemektedir. Tümör taşıyan immünokompetan farelerde kanser nanoilaçlarının sistemik, doku, tek hücreli ve subselüler düzeylerde in vivo davranışını değerlendirme prosedürleri burada açıklanmaktadır. Bu yaklaşım, araştırmacıların klinik çeviri için umut verici kanser nanoilaçlarını tanımlamalarına yardımcı olabilir.

Kapsamlı Usulü değerlendirin<em&gt; İn Vivo</em&gt; Kanser Nanomedicines performans

Bu protokolde, doxorubicin yüklü AS1411-g-PEI-g-PEG modifiye altın nanopartiküller üç aşamalı reaksiyonlar yoluyla sentezlenir. Daha sonra doksofobikin yüklenir ve kanser tedavisi için hedef kanser hücrelerine teslim edilir.

Hedeflenen İlaç Teslimatı için Doxorubicin Yüklü Aptamer-PEI-g-PEG Modifiye Altın Nanopartiküllerinin Sentezi

Burada, onkojenik nükleik asitlerin terapötik susturulması için klinik olarak uygulanabilir bir yaklaşım sağlayarak, RNA oligomerlerini taşıyan manyetik demir oksit nanopartiküllerinin hayvan modellerinde metastatik meme kanserine in vivo olarak verilmesi için protokolü açıklıyoruz.

Murin Meme Kanseri Metastazlarında Nanoilaç Birikiminin İzlenmesi

Keşfedin, Doxorubicin, Mitomycin C ve Doxorubicinol'ün ters faz yüksek performanslı sıvı kromatografisi ile biyolojik örneklerden eşzamanlı ekstraksiyon ve kantitasyon yöntemini. Nanotıp alanında ilaç kombinasyonlarının nanofarmakokinetiğini incelemek için etkili bir analitik teknik sunar.

Örnek çıkarma ve eşzamanlı Kromatografik Nefelometri doksorubisin ve ilaç kombinasyonu dağıtımında nano tanecikleri tümörü taşıyan fareler takip Mitomycin C (Video) | JoVE Journal

Örnek çıkarma ve eşzamanlı Kromatografik Nefelometri doksorubisin ve ilaç kombinasyonu dağıtımında nano tanecikleri tümörü taşıyan fareler takip Mitomycin C

Daha fazla video keşfet