Name: Metodoloji balgam indüksiyon ve laboratuvar için (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-12-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 28 s
Description: Öğrenin, astım ve KOAH gibi solunum hastalıklarında balgam indüksiyonu ve işleme protokolünü. Bu invaziv olmayan yöntem, hava yolu iltihabını değerlendirmek için hücre analizi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu eser Üniversitesi Hastanesi, Liege tarafından (CHU Liege) destek verdi. "Instants üretimler" video üretimi için anıyoruz. Ayrıca Cedric François,'adlı filmde hasta anıyoruz.

Tüm yöntemleri bu bölümde açıklanan Liege Üniversitesi hastane Etik Kurulu tarafından onaylanan ve tüm sağlıklı konular katılım için yazılı onay verdi.
1. balgam indüksiyon
<ol>
	<li>Öncesi ve sonrası bronchodilator Spirometri
	<ol>
		<li>Bir Spirometri gerçekleştirmek (Ekspiratuar Cilt 1 saniye içinde [FEV1] zorla ve zorla vital kapasite [FVC] manevra) Amerikan Toraks Derneği (ATS) göre / Avrupa Solunum Derneği (ERS) standart ölçütleri12.</li>
		<li>İnhale salbutamol 400 µg ölçülü doz inhaler (MDI) bir spacer aygıtı aracılığıyla yönetmek. Not: yetişkinlerde, tremor ve taşikardi13inhale salbutamol olumsuz olayları içerir.</li>
		<li>Spirometri (FEV1 ve FVC manevra) 15 dk sonra göre ATS/ERS standart ölçütleri12yineleyin.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Ultrasonik Nebulizatör hazırlanması Not: Nebulizatör gerekir iyice temizlenmesi ve üreticinin yönergelerine uygun olarak her kullanımdan önce dezenfekte.<ol>
		<li>Nebulizatör odası önerilen düzeye kadar distile su ile doldurun.</li>
		<li>Nebulizatör odası temiz bir kaba bir yer.</li>
		<li>Kupası uygun kapaklı kapağı.</li>
		<li>Kupası sonrası bronchodilator FEV1 olan bir hastam için hipertonik salin (% 5) ya da 50 mL ile doldurulması &#62; öngörülen % 65 veya 50 mL izotonik salin (% 0,9) sonrası bronchodilator FEV1≤65% tahmin ile bir hasta için.</li>
		<li>1,75 mL salbutamol sülfat çözeltisi (5 mg/mL) Kupası için ekleyin.</li>
		<li>Borular ve vanalar üreticinin yönergelerine uygun olarak bağlayın.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Nebulization ve balgam koleksiyonu Not: Bu teknik tıbbi gözetim altında gerçekleştirin.<ol>
		<li>Prosedür hastaya açıklamak.</li>
		<li>Hastanın burun kıskacı kullanmak için sor.</li>
		<li>Nebulizatör açmak ve aerosol ve fan ayarlarını en düşük düzeyini seçin.</li>
		<li>Aerosol gelgit nefesi 5 min için ağız parçası aracılığıyla nefes edilmesine sor. Not: Aerosol ve fan ayarlarını hastanın tolerans bağlı olarak artırılabilir.<ol>
			<li>Dayanılmaz öksürük veya mide bulantısı, durumunda yordamı sona erdirme ve 1.3.5 adıma geçin.</li>
			<li>Göğüs sıkışması veya solunum rahatsızlık durumunda 1.3.8 adıma geçin.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Nebulizatör kapat.</li>
		<li>Hasta burun kıskacı kaldırmak, ağzını suyla durulayın ve iki kez lavaboya atılmadan önce gargara sor. Not: Tükürük hücreleri balgam örneği kontamine ve kullanışsız bir örnek kurşun.</li>
		<li>Hasta balgam plastik bir kap içine kadar öksürük sor.</li>
		<li>FEV1ölçmek için bir Spirometri (zorunlu Ekspiratuar manevra) gerçekleştirin.</li>
		<li>FEV1 Güz aşağıdaki gibi değerlendirmek: (FEV1 3.8 [mL] adımda ölçülen) - (sonrası bronchodilator FEV1 ölçülen adım 1.3 [mL]) / (sonrası bronchodilator FEV1 ölçülen adım 1.3 [mL]) * 100.<ol>
			<li>FEV1 %20 veya sonrası bronchodilator değerinden daha fazla düşerse, yordamı durdurun. Ölçü FEV1 tekrar 10 dakika sonra. FEV%1 20 veya daha fazla düşerse, nebulize ipratropium bromür (0.25 mg/2 mL) yönetmek ve hastanın tıbbi gözlem altında tutmak için doktor isteyin. 1.3.10 adıma geçin.</li>
			<li>FEV1 %20 veya sonrası bronchodilator değerinden daha fazla düşmek değil, 3.2-3,9 üç katına yineleyin 10-20 dk toplam nebulization zaman ulaşmak için. Not: Toplam nebulization zaman kalite (fişler veya yapışkan parçalar varlığı) ve balgam örnek miktarı bağlıdır. Örnek kalite ve/veya miktarı ise zavallı nebulization 10 dakika sonra yordamı bir 15-20 dk toplam nebulization zaman ulaşmak için genişletilmiş.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Balgam örnek işleme kadar buzdolabında tutun.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. balgam işleme
Not: balgam örnekleme 3 saat için optimum hücre canlılığı içinde işlemek.
Dikkat: bir önlük, koruyucu eldiven ve gözlük giymek.
<ol>
	<li>Ön hazırlıklar
	<ol>
		<li>10 mL üreticinin yönergelerine uygun olarak bir 6.5 mM çözüm elde etmek için steril distile su ile 10 kat seyreltme konsantre dithiothreitol çözüm (mucolytic Ajan) olun. Not: Konsantre dithiothreitol çözüm ortam havası ile karıştırma önlemek için çözüm flakon steril şırınga ve iğne ile geri alıyorum. Bir kez açıldı, konsantre çözüm şişe oda sıcaklığında muhafaza ve 5 gün içinde kullanılır. Seyreltik çözüm günlük hazırlanır. Dikkat: göz ve deri tahrişi tehlike nedeniyle koruma araçlar (giyim, eldiven ve gözlük) giymek.</li>
		<li>Trypan mavi çözüm (% 0,4) 5-fold bir seyreltme Dulbecco'nın Phosphate-Buffered serum fizyolojik (%0,08 çözümü elde etmek için DPBS ile) olun. Bu seyreltilmiş çözüm oda sıcaklığında tutmak ve 2 hafta içinde kullanın. Dikkat: kanserojen tehlike nedeniyle, koruma araçlar (giyim, eldiven ve gözlük) giymek.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Balgam süpernatant topluluğu
	<ol>
		<li>50 mL konik alt plastik tüp içinde bütün balgam aktarmak ve örnek tartın.</li>
		<li>3 kat ağırlığını DPBS çözüm ekleyin.</li>
		<li>Yavaş yavaş girdap örnek 30 s.</li>
		<li>Santrifüj vasıl 800 x g ve 4 ° C'de 10 dakika için.</li>
		<li>Steril gazlı bez 2 tek katmanı üzerinden örnek filtre ve süpernatant 50 mL konik alt plastik tüp içinde toplamak.</li>
		<li>Aliquot süpernatant 2 mL plastik tüpler ve onları-80 ° C'de depolayın Not: Süpernatant örnekleri balgam sıvı faz bileşenlerini tahlil yararlıdır.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Balgam Mucolysis
	<ol>
		<li>Gerekirse, DPBS 5 mL süspansiyon hücre toplam hacmi ulaşmak için hücre Pelet ekleyin.</li>
		<li>6.5 mM dithiothreitol 1 hacmi ile hücre süspansiyon sulandırmak. Bir tezgah rocker hücre süspansiyon için oda sıcaklığında 20 dk rock için kullanın.<ol>
			<li>DPBS ile en az 3 kez tekrarlayın.</li>
		</ol>
		</li>
		<li>Seyreltilmiş hücre süspansiyon, 550 x g ve 4 ° C'de 10 dakika santrifüj kapasitesi.</li></ol></li></ol>Süpernatant atmak.
		<li>Hücre Pelet DPBS yaklaşık 1 mL resuspend.</li>
	
	
	<li>Nitel özellikleri hemasitometre sayı balgam örneği (hücre konsantrasyonu, Skuamöz hücreli kirlenme ve canlılığı Trypan mavi dışlama yöntemi tarafından) değerlendirilmesi
	<ol>
		<li>Değerlendirmek ve hücre süspansiyon tam ses kaydedebilirsiniz.</li>
		<li>Homojenize ve hücre süspansiyon 50 µL %0,08 trypan mavi çözüm 50 µL için ekleyin.</li>
		<li>Örnek bir hemasitometre (Thoma odası) coverslip altında koymak ve optik mikroskop altında (400 X) yerleştirin.</li>
		<li>Skuamöz Hücre, canlı olmayan Skuamöz hücreler (tutamaçlarından hücresi) ve ölü Skuamöz Hücre sayısı (mavi renkli hücreleri). Not: Durumunda çok düşük veya çok yüksek hücre yoğunluğu, konsantre veya hücre süspansiyon sulandırmak ve adımları 2.4.1-2.4.3 tekrarlayın.</li>
		<li>Süspansiyon, Skuamöz Hücre yüzdesi ve canlılığı sigara Skuamöz Hücre yüzdesi hücre konsantrasyonu değerlendirmek. Not: Toplam sigara Skuamöz Hücre sayısı/g, balgam hesaplamak: hücre süspansiyon (Adım 5,4) konsantrasyon * birim hücre süspansiyon (Adım 4.8) * % sigara Skuamöz Hücre / kilo balgam örneği (Adım 2.2.1).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Lekeli cytospin hazırlanması slayt hücre süspansiyon ve depolama kalan hücrelerin ile gerekirse Not: % 80'den fazla Skuamöz Hücre süspansiyon içeriyorsa, hücreleri, örnek olarak kabul edilir yoksul kaliteli ve uygun olmayan bir cytospin slayt14. Bu durumda, işlem sona erdirme ve bu örnek başarısız düşünün.<ol>
		<li>Hücre süspansiyon hücre süspansiyon 500.000 hücre/mL, en az 350 µL elde etmek için DPBS ile bir aliquot oranında seyreltin.</li>
		<li>Hücre yoğunlaştırıcı üreticinin yönergelerine uygun olarak bir araya getirin.</li>
		<li>Her hücre yoğunlaştırıcının 3 bölmeleri bu hücre süspansiyon 100 µL ile doldurun.</li>
		<li>Bir cytocentrifuge içinde vasıl 150 x g ve oda sıcaklığında 2 min için spin. Supernatants atın.</li>
		<li>Üreticinin yönergelerine uygun olarak hücre yoğunlaştırıcı sökmeye.</li>
		<li>Slayt hava kuru izin. Not: Bu aşamada, kalan hücreleri yeterli bir arabellekte daha fazla deneyler için gerekli saklanabilir.</li>
		<li>Bir ticari boyama ile slayt Kiti (bkz. Tablo reçetesi) üretici yönergelerine uygun olarak leke.</li>
		<li>Slayt uygun montaj orta ve kapak kayma ile bağlayın.</li>
		<li>Slayt yağı daldırma ile optik mikroskop (600 X) altında yerleştirin.</li>
		<li>En az 500 Skuamöz olmayan hücreleri saymak: nötrofiller, eozinofiller, makrofajlar, lenfositler ve epitel hücreleri. Not: Farklı hücre sayısı genellikle tek kişi tarafından yapılır veya iki adanmış ve gözlemciler interobserver farklılıklar sınırlamak için eğitilmiş.</li>
		<li>Kayıt mutlak değerler ve her hücre türü yüzdeleri.</li>
	</ol>
	</li>

<ol><li>Jayaram, L., Parameswaran, K., Sears, M. R., Hargreave, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+sputum+cell+counts%3A+their+usefulness+in+clinical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Induced sputum cell counts: their usefulness in clinical practice.</a> European Respiratory Journal. 16 (1), 150-158 (2000).</li>
<li>Pavord, I. D., Pizzichini, M. M., Pizzichini, E., Hargreave, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+induced+sputum+to+investigate+airway+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">The use of induced sputum to investigate airway inflammation.</a> Thorax. 52 (6), 498-501 (1997).</li>
<li>Leigh, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sputum+induction+for+diagnosis+of+Pneumocystis+carinii+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Sputum induction for diagnosis of Pneumocystis carinii pneumonia.</a> The Lancet. 334 (8656), 205-206 (1989).</li>
<li>Pin, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+induced+sputum+cell+counts+to+investigate+airway+inflammation+in+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Use of induced sputum cell counts to investigate airway inflammation in asthma.</a> Thorax. 47 (1), 25-29 (1992).</li>
<li>Pizzichini, M. M. M., Leigh, R., Djukanović, R., Sterk, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Safety+of+sputum+induction%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Safety of sputum induction.</a> European Respiratory Journal. 20 (37 suppl), 9s-18s (2002).</li>
<li>Delvaux, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nebulised+salbutamol+administered+during+sputum+induction+improves+bronchoprotection+in+patients+with+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Nebulised salbutamol administered during sputum induction improves bronchoprotection in patients with asthma.</a> Thorax. 59 (2), 111-115 (2004).</li>
<li>Efthimiadis, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+sputum+processing+for+cell+counts%2C+immunocytochemistry+and+in+situ+hybridisation%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Methods of sputum processing for cell counts, immunocytochemistry and in situ hybridisation.</a> European Respiratory Journal. 20 (37 suppl), 19s-23s (2002).</li>
<li>Kelly, M., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/12361360">Analysis of fluid-phase mediators.</a> European Respiratory Journal. 20 (37 suppl), 24s-39s (2002).</li>
<li>Lay, J. C., Peden, D. B., Alexis, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+of+sputum%3A+assessing+inflammation+and+immune+response+elements+in+the+bronchial+airways%5BTitle%5D)+AND+%22Inhalation+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry of sputum: assessing inflammation and immune response elements in the bronchial airways.</a> Inhalation Toxicology. 23 (7), 392-406 (2011).</li>
<li>Vignola, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Future directions.</a> European Respiratory Journal. 20 (37 suppl), 51s-55s (2002).</li>
<li>Brightling, C. E. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16685028">Clinical applications of induced sputum.</a> Chest. 129 (5), 1344-1348 (2006).</li>
<li>Miller, M. R. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16055882">Standardisation of spirometry.</a> European Respiratory Journal. 26 (2), 319-338 (2005).</li>
<li>Global Initiative for Asthma (GINA) Global Strategy for Asthma Management and Prevention. , 
 <a target="_blank" href="http://www.ginasthma.org/">http://www.ginasthma.org/</a> (2017).</li>
<li>Szefler, S. J., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3390196/">Asthma outcomes: biomarkers.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 129 (3 Suppl), S9-S23 (2012).</li>
<li>Douwes, J., Gibson, P., Pekkanen, J., Pearce, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-eosinophilic+asthma%3A+importance+and+possible+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Non-eosinophilic asthma: importance and possible mechanisms.</a> Thorax. 57 (7), 643-648 (2002).</li>
<li>Schleich, F. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+concomitant+local+and+systemic+eosinophilia+in+uncontrolled+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Importance of concomitant local and systemic eosinophilia in uncontrolled asthma.</a> The European Respiratory Journal. 44 (1), 97-108 (2014).</li>
<li>Demarche, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+analysis+of+sputum+and+systemic+inflammation+in+asthma+phenotypes%3A+are+paucigranulocytic+asthmatics+really+non-inflammatory%3F%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+pulmonary+medicine%22%5BJournal%5D)">Detailed analysis of sputum and systemic inflammation in asthma phenotypes: are paucigranulocytic asthmatics really non-inflammatory?</a> BMC pulmonary medicine. 16, 46(2016).</li>
<li>Pavord, I. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+applications+of+assessment+of+airway+inflammation+using+induced+sputum%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+Respiratory+Journal.+Supplement%22%5BJournal%5D)">Clinical applications of assessment of airway inflammation using induced sputum.</a> The European Respiratory Journal. Supplement. 37, 40s(2002).</li>
<li>Guiot, J., Henket, M., Corhay, J. L., Moermans, C., Louis, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sputum+biomarkers+in+IPF%3A+Evidence+for+raised+gene+expression+and+protein+level+of+IGFBP-2%2C+IL-8+and+MMP-7%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Sputum biomarkers in IPF: Evidence for raised gene expression and protein level of IGFBP-2, IL-8 and MMP-7.</a> PLOS ONE. 12 (2), e0171344(2017).</li>
<li>Green, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asthma+exacerbations+and+sputum+eosinophil+counts%3A+a+randomised+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Asthma exacerbations and sputum eosinophil counts: a randomised controlled trial.</a> Lancet. 360 (9347), 1715-1721 (2002).</li>
<li>Siva, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eosinophilic+airway+inflammation+and+exacerbations+of+COPD%3A+a+randomised+controlled+trial%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Eosinophilic airway inflammation and exacerbations of COPD: a randomised controlled trial.</a> European Respiratory Journal. 29 (5), 906-913 (2007).</li>
<li>Louis, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+infiltration%2C+ICAM-1+expression%2C+and+eosinophil+chemotactic+activity+in+asthmatic+sputum%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Cell infiltration, ICAM-1 expression, and eosinophil chemotactic activity in asthmatic sputum.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 155 (2), 466-472 (1997).</li>
<li>Maes, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asthma+inflammatory+phenotypes+show+differential+microRNA+expression+in+sputum%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Asthma inflammatory phenotypes show differential microRNA expression in sputum.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 137 (5), 1433-1446 (2016).</li>
<li>Moermans, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+systemic+cellular+inflammation+and+cytokine+release+in+chronic+obstructive+pulmonary+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cytokine%22%5BJournal%5D)">Local and systemic cellular inflammation and cytokine release in chronic obstructive pulmonary disease.</a> Cytokine. 56 (2), 298-304 (2011).</li>
<li>Gibson, P. G., et al. <a target="_blank" href="http://erj.ersjournals.com/content/20/37_suppl/44s">Sputum induction in children.</a> European Respiratory Journal. 20 (37 suppl), 44s-46s (2002).</li>
<li>Reddel, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Official+American+Thoracic+Society%2FEuropean+Respiratory+Society+Statement%3A+Asthma+Control+and+Exacerbations%3A+Standardizing+Endpoints+for+Clinical+Asthma+Trials+and+Clinical+Practice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">An Official American Thoracic Society/European Respiratory Society Statement: Asthma Control and Exacerbations: Standardizing Endpoints for Clinical Asthma Trials and Clinical Practice.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 180 (1), 59-99 (2009).</li>
<li>Duncan, C. J. A., Lawrie, A., Blaylock, M. G., Douglas, J. G., Walsh, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+eosinophil+apoptosis+in+induced+sputum+correlates+with+asthma+severity%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Reduced eosinophil apoptosis in induced sputum correlates with asthma severity.</a> The European Respiratory Journal. 22 (3), 484-490 (2003).</li>
<li>Demarche, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asthma+Control+and+Sputum+Eosinophils%3A+A+Longitudinal+Study+in+Daily+Practice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%3A+In+Practice%22%5BJournal%5D)">Asthma Control and Sputum Eosinophils: A Longitudinal Study in Daily Practice.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology: In Practice. 5 (5), 1335-1343 (2017).</li>
<li>Belda, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induced+sputum+cell+counts+in+healthy+adults%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Induced sputum cell counts in healthy adults.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 161 (2 Pt 1), 475-478 (2000).</li>
<li>Brooks, C. R., Gibson, P. G., Douwes, J., Dalen, C. J. V., Simpson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+between+airway+neutrophilia+and+ageing+in+asthmatics+and+non-asthmatics%3A+Airway+neutrophilia+and+ageing%5BTitle%5D)+AND+%22Respirology%22%5BJournal%5D)">Relationship between airway neutrophilia and ageing in asthmatics and non-asthmatics: Airway neutrophilia and ageing.</a> Respirology. 18 (5), 857-865 (2013).</li>
<li>Thomas, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+age+on+induced+sputum+differential+cell+counts+in+normal+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">The influence of age on induced sputum differential cell counts in normal subjects.</a> Chest. 126 (6), 1811-1814 (2004).</li>
<li>Chalmers, G. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Smoking+and+airway+inflammation+in+patients+with+mild+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">Smoking and airway inflammation in patients with mild asthma.</a> Chest. 120 (6), 1917-1922 (2001).</li>
<li>Hansel, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comprehensive+Evaluation+of+Nasal+and+Bronchial+Cytokines+and+Chemokines+Following+Experimental+Rhinovirus+Infection+in+Allergic+Asthma%3A+Increased+Interferons+%28IFN-%CE%B3+and+IFN-%CE%BB%29+and+Type+2+Inflammation+%28IL-5+and+IL-13%29%5BTitle%5D)+AND+%22EBioMedicine%22%5BJournal%5D)">A Comprehensive Evaluation of Nasal and Bronchial Cytokines and Chemokines Following Experimental Rhinovirus Infection in Allergic Asthma: Increased Interferons (IFN-γ and IFN-λ) and Type 2 Inflammation (IL-5 and IL-13).</a> EBioMedicine. 19, 128-138 (2017).</li>
<li>Popov, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Some+technical+factors+influencing+the+induction+of+sputum+for+cell+analysis%29%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Some technical factors influencing the induction of sputum for cell analysis).</a> European Respiratory Journal. 8 (4), 559-565 (1995).</li>
<li>Holz, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+sputum+composition+between+two+inductions+performed+on+consecutive+days%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Changes in sputum composition between two inductions performed on consecutive days.</a> Thorax. 53 (2), 83-86 (1998).</li>
<li>Louis, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+processing+on+inflammatory+markers+in+induced+sputum%5BTitle%5D)+AND+%22European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">The effect of processing on inflammatory markers in induced sputum.</a> European Respiratory Journal. 13 (3), 660-667 (1999).</li>
<li>Fahy, J. V., Liu, J., Wong, H., Boushey, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+Biochemical+Analysis+of+Induced+Sputum+from+Asthmatic+and+from+Healthy+Subjects%5BTitle%5D)+AND+%22American+Review+of+Respiratory+Disease%22%5BJournal%5D)">Cellular and Biochemical Analysis of Induced Sputum from Asthmatic and from Healthy Subjects.</a> American Review of Respiratory Disease. 147 (5), 1126-1131 (1993).</li>
<li>Pizzichini, E., Pizzichini, M. M., Efthimiadis, A., Hargreave, F. E., Dolovich, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measurement+of+inflammatory+indices+in+induced+sputum%3A+effects+of+selection+of+sputum+to+minimize+salivary+contamination%5BTitle%5D)+AND+%22The+European+Respiratory+Journal%22%5BJournal%5D)">Measurement of inflammatory indices in induced sputum: effects of selection of sputum to minimize salivary contamination.</a> The European Respiratory Journal. 9 (6), 1174-1180 (1996).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

İndüklenen balgam çıkarma yöntemi hava yolu bölme eğitim için yararlı bir araçtır. Bu teknik birkaç olası uygulama vardır. İlk olarak, bağışıklık hücreleri ve mekanizmaları çeşitli solunum yolu hastalıkları yer hakkında bilgi artırabilir. Örneğin, bu teknik içinde hastaların büyük tabur hava yolu iltihabı incelenmesi izin verdi ve astım hastaları yaklaşık yarısı bir anormal hava yolu Eozinofilik iltihap15tarafından, ile karakterize gösterilmiştir 16 , KOAH hastaları genellikle yükseltilmiş balgam nötrofil sergiler Ise 17,18saymak. Bu teknik aynı zamanda daha iyi hava yolu iltihabı idiyopatik Pulmoner Fibrozis olan hastalarda karakterizasyonu ve bu hastalığı19' a katkıda bulunabilir kanıt arabulucu katkıda bulunmuştur. İkinci olarak, indüklenen balgam çıkarma tekniği tedaviye yanıt tahmin etmek yararlı olabilir. Örneğin, balgam eozinofil anormal bir yüzdesi varlığı kortikosteroid yanıt verme hızını11,18akýllý bir marker olduğu gösterilmiştir. Astım ve KOAH, balgam eozinofil yüzdesi normalleştirmek için kortikosteroid doz terzilik tedavi mevcut klinik kurallar11 göre ayarlama daha exacerbations sayısını azaltmada daha etkili olduğu gösterilmiştir ,20,21. Üçüncü olarak, balgam analiz hedefli tedaviler geliştirmek için yardımcı olabilir. Örneğin, KOAH ve astım hastaları balgam nötrofil sayısı anormal bir varlığı antineutrophilic tedaviler11gelişmesine yol açmıştır. Dördüncü olarak, teknik tanıda bir rol oynayabilir. Örneğin, balgam Granülom varlığı olmayan astımlı Eozinofilik bronşit11tanı yapmak gereklidir.
Farklı hücre sayısı almak yanı sıra, balgam inducing tekniği de birçok ek Değerlendirmeler, performansını balgam süpernatant veya balgam hücreleri okuyan tarafından sağlanır. Arabulucu8,19,22 analiz ve değerlendirme örnek eozinofil22için kemotaktik etkinliğinin örnekler balgam süpernatant ile. Balgam hücrelerden RNA çıkarılan ve mikroRNA için kullanılan veya gen ekspresyonu19,23 inceliyor. Balgam hücreleri de, diğerleri arasında immunophenotyping ve hücreleri sıralama sağlar Akış Sitometresi9,23 tarafından analiz edilebilir. Ayrıca, balgam hücreler kültürlü10olabilir ve arabulucu üretim ölçülen vitro24olabilir. Bu durumda fazlalaştı, arabulucu içerik ne balgam içinde süpernatant bulunabilir farklıdır. Nitekim, balgam süpernatant arabulucu salgıları hava yolu ikamet hücrelerden ve balgam hücre kültür model24aksine plazma reaksiyon tarafından etkilenebilir. Son olarak, immunocytochemistry ve in situ hibridizasyon da balgam hücreleri7kullanarak gerçekleştirilebilir.
İndüklenen balgam teknik bazı sınırlamalara sahiptir. İndüksiyon tıbbi gözetim altında gerçekleştirilmelidir. Bu da hastalar için ayrıntılı talimatlar verir işleç için esastır. Solunum çabaları gerektiğinde işbirliği ve hastaların, sağlık durumu diğer sınırlamaları içerir. Çocuklarda bu Teknik fizibilite ile ilgili çeşitli çalışmalarda başarılı ve güvenli çocuklarda 6 yaşında25daha büyük olduğunu bildirdi. Çocuklar üzerinde veri &#60; 6 yaşın25eksik, ama büyük olasılıkla balgam indüksiyon o çocuk14' te yapmak zor olduğunu. Teknik araştırma hizmetleri ve özel merkezleri bu teknik olarak yüksek güç gerektiren, zaman alıcı ve eğitimli personel1gerektirir çünkü şu anda olamaz. Balgam indüksiyon ve analiz tekniği her zaman başarılı, okunabilir bir cytospin her zaman26elde değil anlam değil başka bir kısıtlamadır. Ancak, başarı oranı genellikle hastalar4,26,27,28,29farklı tabur % 80 civarındadır. Son olarak, ne zaman karşılaştırma ile ilgili yaş eşleşen balgam hücre sayısı30,31çarpışmaya gösterildiği hastaların farklı tabur dikkat alınmalıdır. Aynı şekilde, toplumsal cinsiyet ve tütün alışkanlıkları gibi diğer parametreleri olarak onlar da ile balgam hücre sayısı29,32engelleyebilir uyumlu olması gerekiyor. Hasta eşleşen mümkün olmadığında, yaşı, cinsiyeti ya da yasaktır durumu dikkate almak için başka bir istatistiksel analiz için bu özellikleri ayarlamak için yoludur.
Havayolları, biyopsi ve bronchoalveolar lavages, gibi gelen hücre toplama sağlar diğer teknikleri ile karşılaştırıldığında indüklenen balgam çıkarma yöntemi basit, iyi tolere, güvenli, tekrarlanabilir, düşük maliyetli ve non-invaziv olmanın avantajı vardır. Bu avantajları büyük ölçüde ve art arda zaman içinde gerçekleştirilecek indüklenen balgam çıkarma tekniği izin ve hava yolu örnekleme için tercih edilen bir alternatif yapmak. Bronchosorption hava yolu arabulucu33değerlendirmek amacıyla Mukozal astar sıvı toplanmasını sağlayan bir tekniktir. Bu teknik (gerektiren Bronkoskopi) indüklenen balgam daha daha invaziv olmakla birlikte, tükürük ile herhangi bir bulaşma kaçınmak ve arabulucu bronchoalveolar lavaj33içinde daha yüksek konsantrasyonlarda alma avantajları vardır.
Kritik adımlar protokolündeki dinlesin. İlk olarak, bu iki parametre sonuçları etkiler ve bu nedenle standart34,35olmak zorunda çünkü tuz konsantrasyonu ve indüksiyon, zaman ile ilgili dikkatli alınmalıdır. İkinci olarak, mucolysis DTT ile işleme önemli bir adımdır. PBS ile karşılaştırıldığında, DTT daha iyi cytopsin slayt kalitesini artırır ve tekrarlanabilir hücre sayısı2olması esastır balgam hücreleri7, hangi dağıtmak için gösterildi. Ancak, mucolytic Ajan biyokimyasal bileşenleri ölçüm ile girişime neden olabilir.Deneyler spiking sonra ne zaman yeni bir biyokimyasal bileşik36ölçme yapılmalıdır. Son olarak, başka bir önemli adım yordam yorumlanabilir ve güvenilir sonuçlar alabilmek için eğitimli bir teknisyen tarafından gerçekleştirilmesi gereken adım sayma hücredir.
Yerine tüm balgam, balgam prizler (parçalar) yılanının veya daha yoğun, kullanarak alternatif bir yöntem edebiyat7' de açıklanmıştır. Her iki teknik avantajları ve dezavantajları vardır. Bütün balgam çıkarma tekniği daha fazla hızlı7işleme izin verir ama sık sık örnek sulandırır ve cytospins2,7kalitesini düşürebilir tükürük ile kirlenmiş durumda. Tak seçim tekniği ile tükürük kirlenme azaltılmış örnekleri sık sık daha iyi kalite için sıvı faz arabulucu doz ve cytospin slayt7için olduğu anlamına gelir. İşlem ancak daha uzun7 ve seçili fiş tüm örnek37temsilcisi olmayabilir. Bu da tüm örnekleri sınırlama bujileri içeren dikkati çekiyor. Her iki yöntem doğrulanmış ve tekrarlanabilir ve şu anda her iki yöntem elde edilen fark hücre sayısı farklı14,38olduğunu hiçbir kanıt yoktur.
Gelecekte, indüklenen balgam klinik bir araç olarak Biyolojik araştırma, tanı ve yönetim inflamatuar solunum yolu hastalıkları her türlü sağlamak için kullanılabilir.

Hava yolu iltihabı araştırmak için çeşitli yöntemler kullanılır: doğrudan (bronş biyopsi veya bronchoalveolar lavages gibi) ölçümleri ve dolaylı yöntemleri (belirti değerlendirme gibi kan örneği analiz ve akciğer fonksiyon testleri)1. Doğrudan teknikleri güvenilir havayolu inflamasyonu değerlendirme avantajı var ama invaziv ve mümkün değil, geniş ölçekli nedeniyle hasta rahatsızlık ve risk1tahakkuk. Dolaylı yöntemler gelince, onlar kötü hava yolu iltihabı1doğrudan değerlendirmesi ile aralarındaki ilişkileri belirlemektir.
Balgam toplanması airways örnek hücreleri için başka bir yol olduğunu ve hava yolu iltihabı doğrudan değerlendirmesini sağlar. Yine de kendiliğinden balgam üreten kalitesiz örnekleri için neden olabilir ve tüm hastaların2için mümkün değildir. Bu sorun balgam üretim2ikna etmek için ultrasonik nebulize hipertonik salin kullanarak üstesinden gelmiştir. Bu yöntem başlangıçta insan immün yetmezlik virüsü (HIV) ile infekte hastaların emin carinii pnömoni3 tanı için kullanılmıştır ve sağlıklı ve astımlı 19924için uyarlanmıştır. İzotonik salin5kullanarak balgam indüksiyon daha ağır hastalarda Ayrıca uygulanabilirdir. Genellikle iyi tolere, serum zehirlenmesinden bronkospazm hyperresponsive airways5olan hastalarda neden olabilir, ancak. Bu nedenle, bu yordam1önce kısa etkili beta agonist yönetmek için tavsiye edilir. Ayrıca, biz daha önce ultrasonik Nebulizatör tuzlu çözümde salbutamol ekleyerek daha fazla bu riski6azalma göstermiştir. Balgam indüksiyon avantajları ise non-invaziv2 ve5uygun olduğunda güvenli önlemler alınır.
Balgam örnekleri işleme için iki yöntem şu anda literatürde kullanılır: Bütün balgam çıkarma tekniği ve fiş seçimi7. Bizim laboratuvar bütün balgam çıkarma tekniği gerçekleştirilir. Balgam işleme birincil amacı iltihap hava yolu Lümen mevcut tür çalışmaya farklı hücre sayısı elde etmektir. Ancak, birçok ek Değerlendirmeler da iltihabi süreçleri ve bağışıklık mekanizmaları, arabulucu balgam süpernatant8 okuyan tarafından veya balgam hücreleri üzerinde detaylı araştırma yaparak daha fazla araştırmak mümkündür (Örneğin , Akış Sitometresi9, hücre kültürleri10, genomik10, proteomik10, immunocytochemistry7, in situ hibridizasyon7, vb)
Şu anda teknik olarak yüksek güç gerektiren, zaman alıcı ve eğitimli personel1gerektirir çünkü araştırma hizmetleri ve özel klinik uygulama merkezlerinde sınırlı balgam indüksiyon ve analiz tekniğidir. Hava yolu iltihabı astım, kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH), kronik öksürük ya da idiyopatik Pulmoner Fibrozis11gibi çeşitli solunum yolu hastalıkları için bu yöntemi ile soruşturma olmaktır.

<table><tbody><tr><td>Spirometre - Spirobank</td><td>MIR Fransa</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Salbutamol MDI - Ventolin</td><td>GLAXOSMITHKLINE</td><td>CNK: 0135-913</td><td>Ülkede bulunan ilaca bakın</td></tr><tr><td>Nebulizatör UltraNeb</td><td>DeVilbiss Healthcare USA</td><td>UltraNeb U3000</td><td></td></tr><tr><td>Devilbiss UltraNeb Tek Kullanımlık Bardaklar ve Kapaklar</td><td>DeVilbiss Healthcare USA</td><td>100HD-647</td><td></td></tr><tr><td>UltraNeb Nebulizatörler için</td><td>DeVilbiss Bakteri Filtresi DeVilbiss Healthcare USA</td><td>1001005879</td><td></td></tr><tr><td>Tek Yönlü Valfler</td><td>Hudson RCI USA</td><td>41664</td><td></td></tr><tr><td>Tek Yönlü Vanalar</td><td>Hudson RCI USA</td><td>41665</td><td></td></tr><tr><td>Aerosol T-konektörü&nbsp;</td><td>Hudson RCI USA</td><td>41077</td><td></td></tr><tr><td>Ventilasyon devresi monodal oluklu</td><td>Int'Air Medical France</td><td>TA30A</td><td></td></tr><tr><td>NaCl %5&nbsp;</td><td>Hastane</td><td></td> <td>eczanemiz</td></tr><tr><td>Mini-Plasco NaCl tarafından üretilmiştir %0.9</td> <td>B.Braun Medikal&nbsp; Diegem Belçika</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Salbutamol sülfat 5 mg / mL - Ventolin</td><td>GLAXOSMITHKLINE</td><td>CNK: 0094-987</td><td>Ülkede bulunan ilaca bakın</td></tr><tr><td>Ipratropium bromür 0.25 mg / 2 mL - Atrovent</td><td>Boehringer Ingelheim Almanya</td><td>CNK: 1543-305</td><td>Ülkede bulunan ilaca bakın</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salin</td><td>LONZA Belçika</td><td>BE17512F</td><td></td></tr><tr><td>Sputolysin reaktifi</td><td>Calbiochem</td><td>56000</td><td></td></tr><tr><td>Tripan mavisi% 0.4 çözelti 100 mL</td><td>LONZA Bio Whittaker Belçika</td><td>17-942E</td><td></td></tr><tr><td>Hemositometre - Thoma odası</td><td>Emek Optik Lancing UK</td><td>1500000</td><td></td></tr><tr><td>Hemacolor Boyama seti</td><td>Merck Belçika</td><td>1116610001</td><td>Alternatif ürün&nbsp; : Diff Quik Boyama Seti &nbsp; Medion Teşhis&nbsp;</td></tr><tr><td>Montaj ortamı - Entellan</td><td>Merck Belçika</td><td>107960</td><td></td></tr><tr><td>Statspin Cytofuge 12&nbsp;</td><td>Beckman Coulter Belçika</td><td>X00-003066-001</td><td></td></tr></tbody></table>

metodoloji balgam indüksiyon ve laboratuvar için

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

Tanınan bir non-invaziv yöntem toplama ve astım, kronik obstrüktif akciğer hastalığı (KOAH), gibi çeşitli solunum yolu hastalıklarında ilginç Havayolları, hücrelerden analizini sağlayan tekniktir balgam indüksiyon ve işleme kronik öksürük, ya da idiyopatik Pulmoner Fibrozis. Bu teknik de toleranslı, güvenli ve non-invaziv, ama teknik olarak yüksek güç gerektiren, zaman alıcı ve eğitimli personel gerektirir çünkü klinik pratikte araştırma hizmetleri ve özel merkezleri ile şu anda sınırlı. Balgam indüksiyon ve analiz başarı oranı yaklaşık % 80 var.
Burada, balgam örnekleri indüksiyon ve laboratuvar işlenmesi açıklayın. Balgam Solunduğunda hipertonik veya izotonik salin salbutamol ile indüklenen. İşleme için biz bütün balgam çıkarma tekniği kullanın. Dithiothreitol (DTT) mucolysis balgam örneklerinin izin vermek için kullanılır. Balgam işleme birincil amacı hücre tipleri hava yolu Lümen mevcut eğitim için farklı hücre sayısı elde etmektir. Ek değerlendirmeler balgam süpernatant ve daha fazla inflamatuar süreçleri ve bağışıklık mekanizmaları üzerindeki araştırmasını izin verebilir balgam hücreleri de gerçekleştirilebilir. Arabulucu balgam süpernatant içinde eğitim ve geniş bir spektrum analizi balgam hücreleri Akış Sitometresi, genomik ve proteomik gibi performans örnekleri içerir.
Son olarak, balgam analizi sağlıklı kontrol, astımlı ve KOAH hastaları temsilcisi sonuçları sunulmuştur.

Hemasitometre Tipik bir görüntü hemasitometre kullanarak mikroskopla görselleştirildiği şekil 1 ' deki gösterilir. Daha sigara Skuamöz Hücre daha büyük olduğu gibi Skuamöz hücreler kolayca tanımlanır. Bu Skuamöz epitel hücreleri ağzından gelen hücrelerdir. Her iki tip hücre Trypan mavi zaman ölü lekeli. Dikkat, Maya, bakteri ve hurda sayma önlemek için alınmalıdır.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig1.jpg"> 
Resim 1 : (A) bir yaşam sigara Skuamöz hücreli, (B) bir ölü Skuamöz hücreli ve (C) bir Skuamöz Hücre gösteren hemasitometre resim. Ölçek çubuğu 50 µm. = <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56612/56612fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Cytospin slayt: Şekil 2 temsilcisi bir balgam işlendikten sonra elde edilen bir cytospin slayt görüntüsünü gösterir. Farklı hücre tipleri (nötrofiller, eozinofiller, makrofajlar, lenfositler ve epitel hücreleri) onların morfolojisi ve renklendirme ile farklı. Bazı durumlarda, kirlenme Skuamöz hücreler tarafından önemli olabilir ve Skuamöz Hücre yüzdesi % 80'den büyük ise, başarısız (şekil 3) örnek olarak kabul edilir.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig2.jpg"> 
Resim 2 : (A)bir nötrofil, (B) bir makrofaj, (C) bir eozinofil, (D) bir lenfosit gösteren Cytospin slayt resim ve (E) bir epitel hücre. Ölçek çubuğu 20 µm. = <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56612/56612fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig3.jpg"> 
Şekil 3 : Kalitesiz cytospin slayt ile örnek &gt;<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56612/56612fig3large.jpg" target="_blank"></a> <img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig4.jpg"> <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56612/56612fig4large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig5.jpg"> <a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56612/56612fig5large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig6.jpg"> &lt;&lt;&lt;&lt;<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56612/56612fig6large.jpg" target="_blank"></a> <img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56612/56612fig7.jpg"> &lt;&lt;&lt;&lt;&lt;<a href="//ecsource.jove.com/files/ftp_upload/56612/56612fig7large.jpg" target="_blank"></a>

Burada biz balgam indüksiyon tekniğini tanımlamak. Bu iletişim kuralı bir fark hücre sayısı gerçekleştirmek ve balgam süpernatant toplamak için işleme balgam ve hücreleri daha fazla çözümleme için da açıklanmaktadır.

Metodoloji balgam indüksiyon ve laboratuvar için

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

İndüklenmiş balgam tekniği 90'lı yılların başında geliştirilmiştir. Bu teknik, astım, KOAH gibi obstrüktif hava yolu hastalıklarında yeni bilgileri araştırmak için önerilmiştir ve daha yakın zamanda pulmoner fibrozis ile ilgili yeni bilgilere bakmak için de bir ilgi olmuştur. Bu tekniğin ana avantajı, bronkoskopinin aksine nispeten non-invaziv olmasıdır.İşleme laboratuvar çalışması gerektirir ve zaman alır, bu nedenle oldukça zahmetli, zaman alıcıdır ve laboratuvarda biraz uzmanlığa sahip olması gerekir, bu nedenle her merkezde elde edilmesi zor olan bir tekniktir. İndüklenmiş balgam tekniği iki bölümden oluşur, ilk kısım indüksiyon ve ikinci kısım işlemedir. Balgamı indüklemeden önce, hastanın üretebildiği hacim ve akış hızının bir değerlendirmesi olan bir spirometri yapmamız gerekir.Ve bunu yapmamız gerekiyor çünkü balgam indüksiyonu kendi başına bronşospazma neden olabilir, bu yüzden hastaların spirometrisinin temel değerini kesinlikle bilmemiz gerekiyor. Bu yüzden önce bir spirometri yapıyoruz, sonra hastalara bronkodilatörler veriyoruz, genellikle 400 mikrogram salbutamol veriyoruz, hastaların hava yollarını maksimum düzeyde açmak ve ayrıca indüksiyon aşamasında oluşabilecek bronşispazmı önlemek için. Ve 15 dakika sonra, spirometrinin temel değeri dediğimiz şeyi elde etmek için spirometriyi tekrar ölçüyoruz ve özellikle hastanın bir saniye içinde nefes verebildiği hacim olan FEV1'e bakıyoruz.Önerilen seviyeye kadar damıtılmış suyu nebulizatör odasına dökün. Nebulizatör haznesine temiz bir kap yerleştirin. Doldurulmuş kapağı uygun kapakla kapatın.Bronkodilatör sonrası FEV1 tahmin edilenden daha büyükse bardağı 50 mL hipertonik salin %5 veya bronkodilatör sonrası FEV1 tahmin edilenden azsa 50 mL izotonik salin %9 ile doldurun. Kaba ml başına beş miligram konsantrasyonda 1.75 salbutamol sülfat çözeltisi ekleyin. Tüpleri ve valfleri üretici talimatlarına göre bağlayın.Teknik, tıbbi gözetim altında gerçekleştirilmelidir. Testin prensibini hastaya açıklayın. Hastadan burun klipsi kullanmasını isteyin.Nebulizatörü başlatın ve en düşük aerosol seviyesini ve fan ayarını seçin. Hastadan aerosolü ağızlıktan tidal nefes ile solumasını isteyin. Aerosol seviyesi ve fan ayarı hastanın toleransına bağlı olarak artırılabilir.Solunum rahatsızlığının göğüste sıkışması durumunda, prosedürü durdurun ve hastanın FEV1 değerini ölçmek için bir spirometri yapın. Beş dakikalık inhalasyondan sonra veya öksürük veya mide bulantısı durumunda, nebulizatörü durdurun. Hastadan burun klipsini çıkarmasını, ağzını çalkalamasını ve musluk suyu ile iki kez gargara yapmasını ve bu suyu lavaboya atmasını isteyin.Daha sonra hasta olarak balgam çıkarıp plastik bir kap içinde boğazdan çıkanları tükürür. FEV1'i ölçmek için ilk solunum manevrasını gerçekleştirin. Balgam üretiminin her denemesinden sonra FEV1 değerini ölçüyoruz.FEV1 değeri %20'den fazla düşerseişlemi durdururuz ve hastaya işlem sırasında daha önce uyguladığımız beta-iki agonist ile kombinasyon halinde hareket edecek bir antikolinerjik olan ipratropium bromür nebulizasyonunu veririz. FEV1 değeri %20'den fazla düşmezse, hastanın ürettiği balgamın kalitesine ve hacmine göre toplam 10 ila 20 dakika boyunca işlemi sürdürürüz. Balgam örneğini aldıktan sonra, işlenene kadar buzdolabında saklayın.Yani ikinci kısım balgam işlemeden oluşuyor ve bunun için öncelikle bu işlem için kullanacağımız iki çözümü hazırlamamız gerekiyor. Bu yüzden DTT olarak da bilinen Dithiothreitol'ü hazırlamalıyız. Çözelti, 6.5 milimolar bir çözelti elde etmek için DTT'nin steril su ile seyreltilmesiyle hazırlanmalıdır.Bu nedenle DTT'yi ortam havasına maruz bırakmaktan kaçınmalısınız ve bunun için bir şırınga ve iğne kullanıyoruz. İkinci olarak, tripan mavisi çözeltisini hazırlamanız gerekir ve bunun için %0.08'lik bir çözelti elde etmek için DPBS'yi tripan mavisi ile seyreltmeniz gerekir.Bu nedenle balgamla ilgili olarak, tüm balgamı 50 mL'lik konik tabanlı bir plastik tüpe aktarmanız ve numuneyi tartmanız gerekir. Üç kat daha fazla DPBS çözeltisi ekleyin.Numuneyi 30 saniye boyunca yavaşça girdaplayın, 800 g'da dört santigrat derecede 10 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı, iki tek kat steril gazlı bezden süzüldükten sonra 50 mL'lik konik tabanlı plastik bir tüpte toplayın. Süpernatanı 2 mL plastik tüplere ayırın ve eksi 80 santigrat derecede saklayın.Süpernatan numunelerin balgamın üç fazlı bileşeni olarak bizim için yararlı olduğunu unutmayın. Hücre paleti hacmi 5 mL'den azsa, 5 mL'lik bir hücre süspansiyonu hacmine ulaşmak için DPBS ekleyin. Hücre süspansiyonunu 6.5 milimolar'da bir hacim DTT ile seyreltin.Hücre süspansiyonunu bir tezgah çalışanı ile oda sıcaklığında 20 dakika boyunca sallayın. Hücre süspansiyonunu DPBS ile en az üç kez seyreltin. Seyreltilmiş hücre süspansiyonunu 550 g'da dört santigrat derecede 10 dakika santrifüjleyin.Süpernatanı atın. Hücre paletini yaklaşık bir ml DPBS'de askıya alın. Hücre süspansiyonunun tam hacmini değerlendirin ve kaydedin.50 mikrolitre seyreltilmiş tripan mavisi çözeltisine 50 mikrolitre hücre süspansiyonu ekleyin ve homojenize edin. Numuneyi bir hemosil sitometrenin kapak fişinin altına koyun ve optik mikroskop altına yerleştirin. Hücre süspansiyonunun hücre konsantrasyonunu, skuamöz hücrelerin yüzdesini ve skuamöz olmayan hücrelerin canlılık yüzdesini değerlendirin.mL başına 500.000 hücrede en az 350 mikrolitre hücre süspansiyonu elde etmek için süspansiyonun bir tahsisini DPBS ile seyreltin. Hücre yoğunlaştırıcıyı üretici talimatlarına göre monte edin. Hücre yoğunlaştırıcının üç bölmesinin her birine 100 mikrolitre hücre süspansiyonu ekleyin.Bir sito santrifüjde oda sıcaklığında 150 g'da iki dakika döndürün. Süpernatanı atın. Sürgünün kurumasına izin verin.Slaytı, üretici talimatlarına uygun olarak div quick veya nikel değerlik leke kiti ile boyayın. Bir montaj ortamı ve kapak kayması ile monte edin. Slaytı yağa daldırılarak optik mikroskobun altına yerleştirin.En az 500 skuamöz olmayan hücreyi, nötrofilleri, eozinofilleri, makrofajları, lenfositleri ve epitel hücrelerini sayın ve mutlak değerleri, yüzdeyi ve hücre tipini kaydedin. Sonuçlarla ilgili olarak, hemositometreyi kullanarak, renksiz olan canlı skuamöz olmayan hücreleri saymamız gerekiyor. Ayrıca, mavi renkli ölü skuamöz olmayan hücreler.Ve skuamöz hücreler. Bu hücreler ağızdan gelen epitel hücreleridir. Büyüktürler, bu nedenle küçük insan hücrelerine kıyasla tanınmaları kolaydır.Bu yüzden bakteri, maya veya hurda saymaktan da kaçınmalısınız. Hücre süspansiyonu %80'den fazla skuamöz hücre içeriyorsa, bu numunenin kalitesiz olduğu ve bir sitospin lamı için uygun olmadığı kabul edilir. Bu nedenle bu örnek başarısız olarak kabul edilir.Lekeli sitospin üzerindeki sayım, hücrelerin rengine ve morfolojisine göre yapılır. Nötrofillerin temel özellikleri, hücrelerin tanımlanmasını kolaylaştıran çok loblu çekirdektir. Bu hücreler yuvarlak, küçük ve nötr pembe renktedir.Eozinofiller, bu hücreler tanımlanması kolay kırmızı granüllerden oluşur. Bu hücrelerin büyüklüğü nötrofillere yakındır. Makrofajlar, nötrofillerden iki ila beş kat daha büyüktürler ve mavi renklidirler.Sitoplazma enkaz ve vakuol içerebilir. Lenfositler, bu hücreler yuvarlak ve küçüktür, mavi renklidir ve büyük ve yoğun bir çekirdeğe sahiptir. Epitel hücreleri sütunlu bir şekle sahiptir, pembe renktedir ve genellikle üstte kirpikler bulunur.Burada, skuamöz hücrelerin %80'inden fazlasına sahip okunamayan bir sitospin örneklerinin bazı örnekleri verilmiştir. Bence çok faydalı bir teknik, ancak çok dikkatli olmalıyız çünkü balgam indüksiyonu tıbbi gözetim altında yapılmalıdır, ancak balgam indüksiyonu tekniği size hava yollarındaki hastaların iltihabi durumu hakkında çok fazla bilgi verir. Süpernatanttaki farklı biyokimyasal belirteçleri ölçmenize izin verebilir ve ayrıca hücresel parçalar üzerindeki farklı şeyleri de ölçebilirsiniz, bu nedenle indüklenmiş balgam, akış sitometrisi, proteomik, transkriptomik ve hatta genomik yapmanıza izin verir.

methodology-for-sputum-induction-and-laboratory-processing

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Örneğin, kistik fibroz hava yolunu kullanarak, el yazması bir hayvan ile ilişkili örneklerde mikrobik ve virüs toplulukları karakterize metagenomic ve metatranscriptomic yaklaşımların bir kombinasyonu içeren kapsamlı bir akışını göstermektedir.

Saf olmayan Arındırıcı: Sıralama Metagenomes ve Metatranscriptomes Kompleksi Hayvan ilişkili Örneklerinden

mukus kistik fibrozis solunum yolları (CF) hastalarının mikrobiyal patojenler gelişmek için ideal bir ortam vardır takılı. el yazması onlar kimyasal koşulların hastalığı ve nasıl değişikliklere neden taklit mikrobiyal dinamikleri harekete geçirebilir bir ortamda CF akciğer mikrobiyomu eğitimi için yeni bir yöntem tarif eder.

WinCF Modeli - Bir Mukus bir Ucuz ve Çekilebilir Microcosm Akciğer İnfeksiyonları Mikrobiyoloji Eğitim için bronşiole Takıldı

Bu protokol, kistik fibrozis hastalarının balgamındaki bakteri hücrelerinin ve polisakkarit sentez lokusu (Psl) polisakkaritinin görüntülenmesi için yöntemler sağlar.

Kistik Fibrozis Hastalarının Balgamında Pseudomonas aeruginosa'nın Görüntülenmesi

Bu protokol, biyolojik bir numuneden uçucu organik bileşiklerin vakum destekli sorbent ekstraksiyon yöntemi, Entech Numune Hazırlama Rayı kullanılarak kütle spektrometresi ile birleştirilmiş gaz kromatografisi ve veri analizi ile ekstraksiyonunu açıklar. Ayrıca biyolojik örneklerin kültürünü ve kararlı izotop sondalamasını da açıklar.

Vakum Yardımlı Sorbent Ekstraksiyonu ile İnsanla İlişkili Numunelerden Aktif Olarak Üretilen Mikrobiyal Uçucu Organik Bileşiklerin Yakalanması

Bu protokol, balgamını tek bir hücre süspansiyonuna dağıtmak ve standart akış sitometrik platformlarındaki hücresel alt kümelerin daha sonra karakterizasyonu için etkili bir yöntemi açıklar.

Akış Sitometrisi ile Kalite Kontrollü Balgam Analizi

Çeşitli bakteriyel patojenler, doğru bir şekilde tespit edilmez ve derhal tedavi edilmezse solunum yolu enfeksiyonlarına neden olabilir ve ciddi sağlık sorunlarına yol açabilir. Döngü aracılı izotermal amplifikasyon yoluyla bu patojenlerin hızlı ve doğru tespiti, klinik ortamlarda solunum yolu enfeksiyonlarının etkili bir şekilde yönetilmesini ve kontrol edilmesini sağlar.

Mikroakışkan çip bazlı döngü aracılı izotermal amplifikasyon yoluyla alt solunum yolu enfeksiyonlarına neden olan bakteriyel patojenlerin hızlı tespiti

Bu makale, bireysel partikül madde maruziyeti düzeyinde iç maruziyet dozunu değerlendirmek amacıyla hava yolu makrofajlarının karbon içeriğini ölçmek için ayrıntılı bir deneysel protokolü açıklamaktadır.

Karbon İçeren Partikül Maddelere Maruz Kalan Hava Yolu Makrofajlarındaki Karbon İçeriğinin Ölçülmesi

Mycobacterium tuberculosis'in aşağı akış hedefli yeni nesil dizilemesi için manyetik boncuk saflaştırması ile birleştirilmiş matris tabanlı bir ekstraksiyon yöntemi kullanarak dekontamine balgamdan DNA ekstraksiyonu için optimize edilmiş bir yöntem sunuyoruz.

Dekontamine Balgam Örneklerinde Hedeflenen Yeni Nesil Dizileme için Matris Tabanlı DNA Ekstraksiyonu

Fat pad aspirasyon gibi sistemik amiloidoz tanısı için amiloid algılamak için diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında çok tercih edilen, minimal invazif ve düşük maliyetli bir yaklaşımdır. Bu video makale numunenin optimal tanı sonucu için uygun bir işleme ile yağ yastığı aspirasyonu gerçekleştirmek için bir usul anahat göstermektedir.

Amiloid için Anterior Fat Pad FNA Sahne ve İşleme

Ölçüm gyrification (kortikal katlama) herhangi bir yaşta, erken beyin gelişiminde bir pencere temsil eder. Bu nedenle, daha önce yarımkürede üzerinde puan binlerce yerel gyrification ölçmek için bir algoritma...

Yerel Gyrification Endeksi hesapla Adım Adım Öğretici: MR Görüntüleri Kortikal Katlama nasıl ölçülür

Öğrenin, astım ve KOAH gibi solunum hastalıklarında balgam indüksiyonu ve işleme protokolünü. Bu invaziv olmayan yöntem, hava yolu iltihabını değerlendirmek için hücre analizi sağlar.

Metodoloji balgam indüksiyon ve laboratuvar için

Daha fazla video keşfet