Name: Matris yardımlı Lazer Desorpsiyon/iyonlaşma kütle spektrometresi karbonhidrat iyon sinyalleri geliştirmek için bir verimli örnek hazırlama yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 12 s
Description: Öğrenin MALDI kütle spektrometrisinde karbonhidrat iyon sinyallerini artırmak için optimize edilmiş örnek hazırlama yöntemini. Kristal yapıları yeniden şekillendirerek sinyal yoğunluğunu etkili şekilde iyileştirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar hiçbir katkıda bulunanlar var.

1. örnek plaka Önkoşullanma
<ol><li>
Örnek plakası temizleme
	<ol>
<li>Temizleme sırasında kontaminasyon örnek plaka için nitril eldiven giymek.</li>
		<li>El-yıkama deterjan solüsyonu (1,0 mg/mL) 100,0 mL örnek plakalı.</li>
		<li>El-distile-deiyonize su (DDW) ile örnek tabak yıkama.</li>
		<li>Örnek plaka yüzeyi MeOH 30,0 mL ile yıkayın.</li>
		<li>Örnek plaka tamamen suya batırılır kadar 600 mL kabı ve dolgu ile DDW örnek plaka koymak.</li>
		<li>Kabı bir ultrasonik koymak ( tablo malzemelerigörmek) banyo ve örnek plaka 15 dk (200 W, 40 kHz) için solüsyon içeren temizleyicide.</li>
		<li>Örnek plaka almak ve basınçlı azot kullanarak su damlaları darbe.</li>
		<li>MeOH 0.2 µL MeOH diğer noktalar yayılır olup olmadığını denetlemek için örnek plaka üzerinde mevduat. Not: MeOH diğer noktalar ile birleştirir adımları 1.1.3-1.1.5 işlemini yineleyin; Eğer değilse, sonraki adıma geçin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Kurutma odası sıcaklık düzenleme
	<ol>
<li>Kurutma odası istikrarlı koşullar altında damlacıkları,11,12,13daha önce açıklandığı gibi kuru için kullanın. Özellikle, Ou, Y.-M 2.1-2,5 adımlarda açıklandığı ayrıntılı yordamı kullanın. vd. 201612. Kısaca:<ol>
<li>Kurutma odası oda sıcaklığında azot düşük bağıl nem ortam sağlamak için sürekli akış hızında tarafından tasfiye.</li>
			<li>Isı kontrollü bakır bloğunda kurutma odası tarafından düzenlenen örnek plaka sıcaklık sabiti normal - (25 ° C) veya hızlı kurutma koşulları (50 ° C), devam et.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Matris ve analit çözümleri hazırlanması
	<ol>
<li>
Matris çözümleri hazırlanması
		<ol>
<li>DHB % 50 Asetonitril (ACN) dağıtılması: %50 0.1 M çözüm hazırlamak için DDW.</li>
		</ol>
</li>
		<li>
Karbonhidrat analitler hazırlanması
		<ol>
<li>SLeA 10-4 M çözüm hazırlamak için DDW geçiyoruz.</li>
			<li>Bir 10-4 M çözüm hazırlamak için DDW MH geçiyoruz.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. örnek ifade ve rekristalizasyon
Not: Küçük ve düzenli miktarlarda örnekleri analiz etmek için en iyi duruma getirilmiş yordamlar burada açıklanmıştır. Çözümler yatırma önce numune plaka sıcaklığı istenilen sıcaklıkta stabil emin olun. Örnek diğer örnek noktalar rekristalizasyon sırasında karşılamak için büyük bir alana yayılırsa, yeni bir örnek hazırlamak veya 1.1 arasındaki adımları yineleyin.
<ol><li>
Küçük bir miktar (0.1 µL) örnek analizi için Not: örnek ve zaman tüketimi en aza indirmek için aşağıdaki adımları geliştirilmiştir. Kantitatif analiz sınırlı veya miktar analiz için hızlı IMS ile gerçek örnekleri için uygundur.<ol>
<li>DHB çözüm ve 0,25 SLeA µL veya MH çözüm microcentrifuge tüp içinde 0.25 µL premix.</li>
		<li>Girdap 3 için bir girdap Mikser kullanarak karma çözüm s.</li>
		<li>Spin aşağı 2 için mini santrifüj karışık çözümde s (2000 x g).</li>
		<li>Premix çözüm 0.1 µL çizmek ve hemen örnek plaka üzerinde mevduat bir pipet kullanın. Not: Örnek küçük bir miktar yatırırken, Yapmak değil tutmak premix çözüm için 10 pipet ucu s.</li>
		<li>Örnek kurumasını bekleyin. Tipik kurutma kez Tablo 1' de listelenmiştir.</li>
		<li>MeOH 0.2 µL şu kurutulmuş örnek nokta yatırmak için bir pipet kullanın. Örnek alacak ıslak ve kuru hemen. Not: İfade yordamı 3'te tamamlandığını emin olmak MeOH önemli buharlaşma kaybı olmaması için s.</li>
		<li>Bir mikroskop kullanarak örnek inceleyin. Kristal türleri morfoloji olarak beklenen (bakınız Şekil 1 örneğin istenen sonuçları) yoksa, yeni bir örnek hazırlamak için 2.1.1-2.1.6 kadar olan adımları tekrarlayın.</li>
		<li>Nitril eldiven giymek ve dikkatle kurutma odası örnek tabaktan dışarı almak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Düzenli bir miktar (1 µL) örnek analizi için Not: Aşağıdaki adım karbonhidrat örnekleri ile genellikle kullanılan maldı örnek miktar polimerlerin en üst düzeye çıkarma geliştirilir. Rutin ve kantitatif analizleri için uygun bir süreçtir. Rekristalizasyon işlemi örnekleri ve matrisleri büyük alanlar için eşit olarak yeniden dağıtır.<ol>
<li>DHB çözüm ve 2.5 µL SLeA veya bir microcentrifuge tüp çözümde MH 2.5 µL premix.</li>
		<li>Girdap 5 için bir girdap karıştırıcılı premix çözüm s.</li>
		<li>Spin aşağı 2 için mini santrifüj karışık çözümde s (2000 x g).</li>
		<li>Premix çözüm 1.0 µL çizmek ve hemen örnek plaka üzerinde mevduat bir pipet kullanın. Not: yok kalan kullanım kılavuzuyla çözüm tekrar örnekleri yatırma sonra.</li>
		<li>Örnek kurumasını bekleyin. Tipik kurutma kez Tablo 1' de listelenmiştir.</li>
		<li>Şu kurutulmuş örnek nokta MeOH 1,5 µL yatırmak bir pipet kullanın. Örnek alacak ıslak ve kuru hemen. Not: Yüksek örnek plaka sıcaklık (50 ° C) durumlarda, rekristalizasyon adım 5 içinde yapılmalıdır s MeOH buharlaşma pipet ipucunda en aza indirmek için.</li>
		<li>Bir mikroskop kullanarak örnek inceleyin. Kristal türleri morfoloji olarak beklenen (bakınız Şekil 1 örneğin istenen sonuçları) yoksa, yeni bir örnek hazırlamak için 2.2.1-2.2.6 kadar olan adımları tekrarlayın.</li>
		<li>Nitril eldiven giymek ve dikkatle kurutma odası örnek tabaktan dışarı almak.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. kütle spektrometresi veri toplama ve Analizi
Not: Analiz bir maldı İyon kaynağı ile donatılmış bir ticari uçuş zaman kütle spektrometre (Tablo reçetesi) kullanılarak gerçekleştirilir. Araç ön en iyi duruma getirilmiş ayıklama gecikme ve lazer enerjisi ile belirli kontrol yazılımı (Tablo reçetesi) tarafından işletilmektedir. Spectra m/z kitlesel bir dizi ile doğrusal modu kaydedilir = 0-1500. Örnek potansiyel ±25 plakadır keV ve her spektrum ortalama 10 lazer çekim. Kullanıcıların araç optimizasyonu ve uyumlu yazılım kullanarak örnek analiz yapmak ve araç üreticisinin yönergelerini izleyin.
<ol><li>Araç kontrol yazılımı açın (bkz. Tablo malzeme).</li>
	<li>Örnek plaka kütle spektrometre yerleştirin.</li>
	<li>Önceden en iyi duruma getirilmiş veri toplama yöntemi yazılımı seçin.</li>
	<li>Tüm örnek bölge görüntüleme yazılımı kullanarak IMS için kayıt ( Tablo malzemelerigörmek). Not: IMS yapıyor yoksa bu adımı atlayın.</li>
	<li>Veri toplama kontrol yazılımı toplu modunda başlatın.</li>
	<li>İyon görüntüleri veri toplama işlemi tamamlandıktan sonra görüntüleme yazılımı kullanarak çizmek.</li>
	<li>Kitle spectra analiz yazılımı kullanarak analiz ( Tablo malzemelerigörmek) verileri bir iyon görüntü kaydedilirse.</li>
</ol>

<ol><li>Holme, D. J., Peck, H. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHolme%2C+DJ+%22Analytical+Biochemistry%22">Analytical Biochemistry</a>. , 3rd edn, Addison Wesley Longman Limited. (1998).</li>
<li>Costello, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time%2C+life+...+and+mass+spectrometry+-+New+techniques+to+address+biological+questions%5BTitle%5D)+AND+%22Biophysical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Time, life ... and mass spectrometry - New techniques to address biological questions.</a> Biophysical Chemistry. 68 (1-3), 173-188 (1997).</li>
<li>Caroff, M., Karibian, D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14670707">Structure of bacterial lipopolysaccharides.</a> Carbohydrate Research. 338 (23), 2431-2447 (2003).</li>
<li>Marvin, L. F., Roberts, M. A., Fay, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization+time-of-flight+mass+spectrometry+in+clinical+chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry in clinical chemistry.</a> Clinica Chimica Acta. 337 (1), 11-21 (2003).</li>
<li>Harvey, D. J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10639030">Matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry of carbohydrates.</a> Mass Spectrometry Reviews. 18 (6), 349-450 (1999).</li>
<li>Ciucanu, I., Kerek, F. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/0008621584852428">A simple and rapid method for the permethylation of carbohydrates.</a> Carbohydrate Research. 131 (2), 209-217 (1984).</li>
<li>Lamari, F. N., Kuhn, R., Karamanos, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivatization+of+carbohydrates+for+chromatographic%2C+electrophoretic+and+mass+spectrometric+structure+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Chromatography+B%22%5BJournal%5D)">Derivatization of carbohydrates for chromatographic, electrophoretic and mass spectrometric structure analysis.</a> Journal of Chromatography B. 793 (1), 15-36 (2003).</li>
<li>Nishikaze, T., Amano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reverse+thin+layer+method+for+enhanced+ion+yield+of+oligosaccharides+in+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Communications+in+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Reverse thin layer method for enhanced ion yield of oligosaccharides in matrix-assisted laser desorption/ionization.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 23 (23), 3787-3794 (2009).</li>
<li>Williams, T. I., Saggese, D. A., Wilcox, R. J., Martin, J. D., Muddiman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+matrix+crystal+structure+on+ion+abundance+of+carbohydrates+by+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization+Fourier+transform+ion+cyclotron+resonance+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Communications+in+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Effect of matrix crystal structure on ion abundance of carbohydrates by matrix-assisted laser desorption/ionization Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 21 (5), 807-811 (2007).</li>
<li>Nicola, A. J., Gusev, A. I., Proctor, A., Jackson, E. K., Hercules, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+fast-evaporation+sample+preparation+method+for+improving+quantification+of+angiotensin+II+by+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization%5BTitle%5D)+AND+%22Rapid+Communications+in+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Application of the fast-evaporation sample preparation method for improving quantification of angiotensin II by matrix-assisted laser desorption/ionization.</a> Rapid Communications in Mass Spectrometry. 9 (12), 1164-1171 (1995).</li>
<li>Lai, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+Spatial+Heterogeneity+of+MALDI+Samples+with+Marangoni+Flows+During+Sample+Preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Society+for+Mass+Spectrometry%22%5BJournal%5D)">Reducing Spatial Heterogeneity of MALDI Samples with Marangoni Flows During Sample Preparation.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 27 (8), 1314-1321 (2016).</li>
<li>Ou, Y. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+Homogeneous+MALDI+Samples+for+Quantitative+Applications%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Preparation of Homogeneous MALDI Samples for Quantitative Applications.</a> Journal of Visualized Experiments. (116), e54409(2016).</li>
<li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+carbohydrate+ion+yield+by+controlling+crystalline+structures+in+matrix-assisted+laser+desorption%2Fionization+mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Analytica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Enhancing carbohydrate ion yield by controlling crystalline structures in matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry.</a> Analytica Chimica Acta. , 49-55 (2017).</li>
<li>Allwood, D. A., Perera, I. K., Perkins, J., Dyer, P. E., Oldershaw, G. A. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0169433296005302">Preparation of 'near' homogeneous samples for the analysis of matrix-assisted laser desorption/ionisation processes.</a> Applied Surface Science. 103 (3), 231-244 (1996).</li>
<li>Sadeghi, M., Vertes, A. <a target="_blank" href="https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0169433297006363">Crystallite size dependence of volatilization in matrix-assisted laser desorption ionization.</a> Applied Surface Science. 127 (Supplement C), 226-234 (1998).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Örnek heterojenite maldı-Bayan DD çok önemli bir sorun en sık kullanılan örnek hazırlama yöntemi, ama sonuç kristalleri son derece heterojen olmasıdır. Böyle örnekleri zavallı atış-to-shot ve örnek örnek sinyal tekrarlanabilirlik göster. Bu nedenle, veri toplama sırasında "tatlı noktalar" örnek alanlarda arama ortak bir maldı deneylerde yöntemidir. Miktar rutin analizleri için uygun olmayan türdeş olmayan böyle örneklerindendir.
Mevcut çalışmada, maldı örnek morfoloji rekristalizasyon tarafınd...

Karbonhidrat analiz önemli ve zorlu bir konudur. Karbonhidrat ve onların türevleri yaşayan organizmalar1,2,3önemli roller oyun olarak. Bu moleküllerin yapıları karmaşık ve çürümeye yatkındır. Birçoğu açıkça ayrılık ve algılama zorluklar nedeniyle karakterize olamaz. Matris yardımlı Lazer Desorpsiyon/iyonlaşma (MALDI) kütle spektrometresi (MS) biomolecules, duyarlılık ve anlaşılır sonuçları4, geniş bir analizi uygulanmış olduğundan ne kadar karbonhidratlar MALDI-MS kullanarak analiz devam ediyor Böyle molekülleri5düşük iyonlaşma verimliliği nedeniyle büyük bir meydan okuma olacak. Kimyasal derivatization karbonhidrat6,7iyonlaşma verimliliğini artırmak için sık kullanılan bir yöntemdir, ancak zaman ve örnek tüketen tür yordamlar vardır. Ayrıca, derivatized karbonhidrat iyonlaşma verimliliğini hala proteinlerin daha düşüktür. Bu nedenle, karmaşık prosedürler olmaksızın MALDI-MS karbonhidrat sinyallerinin geliştirilmesi için yöntemler geliştirilmesi gereklidir.
Kantitatif analiz MALDI-MS uygulamaya zor bir konudur. Bir büyük MALDI-MS onun duyarlılığı ve veri tekrarlanabilirlik eleştirel örnek hazırlama protokolleri ve deneysel parametreleri kullanır bir sorundur. Birçok durumda, kantitatif analiz MALDI-MS tarafından türdeş olmayan örnek türleri Morfoloji ve analit dağıtım nedeniyle güvenilmez olduğunu. 2,5-dihidroksibenzoik asit (DHB) maldı matris ile hazırlanan örnekleri iyi bilinen bir örnektir. DHB yavaş yavaş ortam bir ortamda kristalize zaman, çünkü sonuç örnekleri düzensiz türleri morfoloji ölçüde matris kristalleri içine analit şirketleşme, tahmin edilemez. Böyle örnekleri normalde büyük iğne şekilli ve güzel kristalleri oluşur. DHB uçucu solvent ve/veya ısıtmalı örnek plaka kullanılarak hazırlanan zaman hızlı bir kurutma işlemi daha homojen iyi kristaller ve daha iyi nicel sonuçları8,9,10ile sonuçlanır. Bu teknik maldı örnekleri "rekristalizasyon" bilinir. İyileşme analitler hızlı kristalizasyon işlemi sırasında daha iyi birleşme iyi matris kristalleri içine atfedilir. Biz de örnek hazırlama ortamını ayarlama karbonhidrat sinyal ve geliştirilmiş nicel sonuçları11,12heterojen azalma göstermiştir. Bu çalışmaların bulguları örnek morfoloji karbonhidrat sinyal kalitesini belirlemede önemli bir faktör olduğunu göstermektedir. Günlük analiz için genel bir strateji geliştirmek için geliştirilmiş karbonhidrat duyarlılık sağlayan bir verimli örnek reformasyon yöntemi gereklidir.
Sistematik olarak örnek Morfoloji ve karbonhidrat duyarlılık MALDI-MS bir son raporu13arasında korelasyon inceledik. Birkaç önemli karbonhidrat kullanılarak sonuçlar elde ve en iyi sinyal geliştirme recrystallizing tarafından yerine getirilir matrisleri Haritayı maldı örnekleri kurutulmuş. Geleneksel kurutulmuş damlacık (DD) yöntemi kullanılarak hazırlanan örnekleri morfolojisi metanol (MeOH) ile hızlı rekristalizasyon tarafından reform. Detaylı örnek hazırlama protokolleri burada gösterildiği. Protokol örnek plaka Önkoşullanma, örnek ifade ve rekristalizasyon ve kütle spektrometresi analizleri de dahil olmak üzere üç ana adımlardan oluşur. Kullanılan karbonhidrat sialyl-lewis bir (SLeA) ve maltoheptaose (MH) içerir. DHB modeli matris kullanılır. Karbonhidrat sinyal yoğunluğu ve kayma dağıtım belirgin rekristalizasyon sonra geliştirilmiş sonuçlar gösterir. Böyle bir yöntem örnekleri 2,4,6-trihydroxyacetophenone (THAP) ve α- cyano-4-hydroxycinnamic asit gibi diğer popüler matrisleri ile uygulanabilir. Bu yöntem kolayca laboratuvar rutin karbonhidrat analiz için entegre edilebilir genel bir yaklaşım olarak hizmet vermektedir.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Reaktif< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Deterjan tozu</td><td>Alconox</td><td>242985</td><td></td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Merck</td><td>106009</td><td></td></tr><tr><td>Asetonitril</td><td>Merck</td><td>100003</td><td></td></tr><tr><td>2,5-dihidroksibenzoik asit (DHB)</td> <td>Alfa Aesar</td><td>A11459</td><td></td></tr><tr><td>sialil-lewis A (SLeA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1782</td><td></td></tr><tr><td>Maltoheptaose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7753</td><td></td></tr><tr><td>Pipet uçları</td><td>Mettler Toledo</td><td>17005091</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpü</td><td>Axygen</td><td>MCT-150-C</td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q su arıtma sistemi</td><td>Millipore</td><td>ZMQS6VFT1</td><td></td></tr><tr><td>Pudrasız nitril eldiven</td><td>Microflex</td><td>SU-690</td><td></td></tr><tr><td>600 mL beher</td><td>Duran</td><td>2110648</td><td></td></tr><tr><td>Ultrasonik temizleyici</td><td>Delta</td><td>DC300H</td><td></td></tr><tr><td>Higrometre</td><td>Wisewind</td><td>5330</td><td></td></tr><tr><td>Azot gazı akış ölçer</td><td>Dwyer</td><td>RMA-6-SSV</td><td></td></tr><tr><td>K-tipi termokupllar</td><td>Digitron</td><td>311-1670</td><td></td></tr><tr><td>Vorteks karıştırıcı</td><td>Bilimsel Endüstriler</td> <td>&nbsp; SI-0236</td><td></td></tr><tr><td>Mini santrifüj</td><td>Select BioProducts</td><td>Force Mini&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Pipet</td><td>Rainin</td><td>pipet-lite XLS</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Olympus</td><td>SZX16</td><td></td></tr><tr><td>Sıcaklık kontrollü kurutma odası</td><td>Bu laboratuvar</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ultraflex II TOF/TOF kütle spektrometresi</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MTP 384 hedef plakası cilalı çelik BC</td><td>Bruker Daltonics</td><td>8280781</td><td></td></tr><tr><td>Flexcontrol Sürüm 3.4</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td>Control yazılımı</td></tr><tr><td>Fleximaging Sürüm 2.1</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td>Görüntüleme yazılımı</td></tr><tr><td>Flexanalysis Sürüm 3.4</td><td>Bruker Daltonics</td><td></td><td>Analiz yazılımı</td></tr></tbody></table>

matris yardımlı lazer desorpsiyon/iyonlaşma kütle spektrometresi karbonhidrat iyon sinyalleri geliştirmek için bir verimli örnek hazırlama yöntemi

An Efficient Sample Preparation Method to Enhance Carbohydrate Ion Signals in Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Mass Spectrometry

Numune hazırlama karbonhidrat kütle spektrometresi (MS) analizi kritik bir süreçtir. Matris yardımlı Lazer Desorpsiyon/iyonlaşma (MALDI) MS seçtiğiniz karbonhidrat analiz yöntemi olsa da, zavallı iyon sinyal ve veri tekrarlanabilirlik karbonhidrat örnekleri ciddi sorunlar olmaya devam etmektedir. Karbonhidrat kantitatif analiz için üstün veri kalite sağlayan etkili bir analitik Protokolü gereklidir. Bu video sinyal yoğunluğu artırmak ve veri değişim karbonhidrat MALDI-MS en aza indirmek için örnek hazırlanması protokolleri gösteriyor. Kurutma ve örnek damlacıkları kristalleşme sonra kristal morfoloji metanol kitle spektrometrik analiz önce reformlar yaptı. Karbonhidrat sinyalinde geliştirme maldı görüntüleme kütle spektrometresi ile (IMS) incelenir. Deneysel sonuçlar kristal reformasyon kristal yapıları ayarlar ve karbonhidrat analitler yeniden dağıtan gösterir. Geleneksel MALDI-MS, reform karbonhidrat kristal türleri morfoloji metanol gösterir önemli ölçüde daha iyi sinyal yoğunluğu, iyon görüntü dağıtım ve veri istikrar ile kurutulmuş damlacık hazırlama yöntemi ile karşılaştırıldığında. Burada gösterildiği protokollerin örnek kompozisyon değişiklikleri içermeyen beri onlar çeşitli karbonhidrat ve matrisleri genellikle tabidir.

SLeA temsilcisi SEM görüntüleri DD kullanılarak hazırlanan DHB ile karışık ve rekristalizasyon Yöntemler Şekil 1' de gösterilmektedir. Tipik bir DHB morfoloji DD yöntemi tarafından hazırlanan büyük iğne biçimli kristaller RIM ve örnek noktalar ortasına ince kristal yapıları var. İğne şeklindeki böyle kristallerinin tipik uzunluğu ~ 100 µm ' dir. MeOH tarafından rekristalizasyon sonra örnek eşit iyi pul gibi kristallerle kaplı geniş bir alanı vardır...

Karbonhidrat iyon sinyalleri maldı kütle spektrometresi reform kristal yapılar tarafından örnek hazırlama sürecinde güçlendirmeye yönelik bir protokol gösterilmiştir.

Matris yardımlı Lazer Desorpsiyon/iyonlaşma kütle spektrometresi karbonhidrat iyon sinyalleri geliştirmek için bir verimli örnek hazırlama yöntemi

Sample preparation is a critical process in mass spectrometry (MS) analysis of carbohydrates. Although matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) ...

Kurutma işlemi sırasında basit morfolojiyi yeniden düzenleyerek matris destekli lazer desorpsiyon iyonizasyon kütle spektrometrisinde geleneksel yöntemi iyileştirmek için basit bir numune hazırlama prosedürü geliştirilmiştir. Bu tekniğin avantajı, bu optimize edilmiş yöntemle hazırlanan karbonhidrat numunelerinin sinyal yoğunluğunun etkili bir şekilde geliştirilebilmesidir. Genel olarak, bu yönteme yeni olan kişiler mücadele edecektir çünkü metanol basınçsızlaştırma adımı çok önemlidir ve tek seferde yapılması gerekir.Herhangi bir tereddüt veri kalitesini düşürecektir. Başlamak için, nitril eldiven giyerken, numune plakasını elde yıkamak için 100 mililitre deterjan solüsyonu kullanın. Plakayı elde yıkamak için damıtılmış-deiyonize veya DD su kullanın.Daha sonra 30 mililitre metanol ile yüzeyini durulayın. Numune plakasını 600 mililitrelik bir behere yerleştirin ve plaka tamamen daldırılana kadar DD suyu ile doldurun. Ardından kabı ultrasonik bir banyoya yerleştirin ve plakayı 15 dakika boyunca sonikleştirin.Numune plakasını beherden çıkarın ve su damlalarını üflemek için basınçlı nitrojen kullanın. Ardından, diğer noktalara yayılıp yayılmadığını kontrol etmek için numune plakasına 0,2 mikrolitre metanol bırakın. Eğer öyleyse, az önce gösterildiği gibi yıkama, sonikasyon ve azot tedavisini tekrarlayın.Kurutma odasını metin protokolüne göre hazırladıktan sonra, mikro santrifüj tüpünde 0.25 mikrolitre 2, 5-Dihidroksibenzoik asit çözeltisi ve 0.25 mikrolitre Sialil-Lewis A veya maltoheptaoz çözeltisini önceden karıştırın. Ardından tüpü üç saniye boyunca girdaplayın. Karışık çözeltiyi mini santrifüjde iki saniye boyunca 2000 kez G'de döndürün.Ardından, önceden karıştırılmış çözeltinin 0.1 mikrolitresini hemen numune plakasına pipetleyin. Numune kuruduğunda, buharlaşmayı önlemek için hızlı bir şekilde çalışırken, 0,2 mikrolitre metanolü doğrudan numune noktasına pipetleyin. Numune yeniden çözülecek ve ardından hemen kuruyacaktır.Metanol biriktirme adımı, veri kalitesini ve tekrarlanabilirliği belirleyen en zor adımdır. En iyi performansı sağlamak için, metanolün önemli buharlaşma kaybını önlemek için kullanıcının biriktirme işlemini üç ila beş saniye içinde bitirmesini öneririz. Nitril eldiven giyin ve numune plakasını kurutma odasından dikkatlice çıkarın.Daha sonra mikroskop altında numuneyi inceleyin. Kristal morfolojileri beklendiği gibi değilse, numuneyi karıştırmayı ve numune plakası üzerine lekelemeyi tekrarlayın. Numune kristallerinin yeniden kristalleşmeden sonra optimum morfolojiye sahip olduğundan emin olmak için, bunları incelemek için her zaman bir mikroskop kullanın.Kristal morfolojisinin kalitesini çıplak gözle doğru bir şekilde belirlemek zordur. Bir mikrolitrelik bir numuneyi analiz etmek için, 2.5 mikrolitre 2, 5-Dihidroksibenzoik asit çözeltisi ve 2.5 mikrolitre Sialil-Lewis A veya maltoheptaoz çözeltisini bir mikro santrifüj tüpünde önceden karıştırın. Önceden karıştırılmış çözeltiyi beş saniye boyunca girdaplayın.Karışık çözeltiyi iki saniye boyunca 2000 kez G'de döndürün, ardından önceden karıştırılmış çözeltinin bir mikrolitresini hemen numune plakasına pipetleyin. Numune kuruduktan sonra, 1,5 mikrolitre metanolü doğrudan kurutulmuş numune noktasına pipetleyin. Numune yeniden çözülür ve hemen kurur.Numuneyi kurutma odasından dikkatlice çıkarın. Numuneyi mikroskop altında inceleyin. Kristal morfolojileri beklendiği gibi değilse, çözelti hazırlığını az önce gösterildiği gibi tekrarlayın.Kütle spektrometresi yapmak için kütle spektrometresi kontrol yazılımını açın ve numune plakasını makineye yerleştirin. Yazılımda önceden optimize edilmiş veri toplama yöntemini seçin, ardından görüntüleme yazılımını kullanarak tüm numune bölgesini görüntüleme kütle spektrometresi için kaydedin. Kontrol yazılımının toplu modunda veri toplamayı başlatın.Veri toplama işlemi tamamlandığında, iyon görüntülerini çizmek ve verileri metin protokolüne göre analiz etmek için görüntüleme yazılımını kullanın. Kurutulmuş damlacık ve yeniden kristalleştirme yöntemleri kullanılarak hazırlanan 2, 5-Dihidroksibenzoik asit ile karıştırılmış Sialyl-Lewis A'nın temsili SEM görüntüleri burada gösterilmektedir. Tipik bir 2, 5-Dihidroksibenzoik asit morfolojisi, kenarda büyük, iğne şeklindeki kristaller ve numune noktalarının merkezinde ince kristal yapılardır.Metanol ile yeniden kristalleştirildikten sonra, numune ince, pul benzeri kristallerle eşit şekilde kaplanmış daha geniş bir alana sahiptir. Bu şekil, metanol yeniden kristalizasyonu olan ve olmayan Sialil-Lewis A ve maltoheptaozun görüntüleme kütle spektrometresi sonuçlarını göstermektedir. Yeniden kristalleşmeden sonra, Sialyl-Lewis A ve maltohepaoz sinyallerinin dağılımı, numune noktalarının parlak alan görüntüleriyle iyi bir şekilde eşleşir.Yeniden kristalize edilmiş karbonhidrat numunelerinin sinyal yoğunlukları da geleneksel kuru damlacık numunelerine kıyasla geliştirilmiştir. Bu grafik, yeniden kristalize edilmiş numunelerin sodyum veya pozitif iyon modunun ve protondan arındırılmış veya negatif iyon modu karbonhidratlarının sinyal yoğunluğunu, kurutulmuş damlacık numunelerininkine göre karşılaştırır. Ortalama olarak, Sialyl-Lewis A ve maltoheptaoz örneklerinin yeniden kristalleşmesi, sodyum sinyalleri 3.9 ve 3.3 faktörleriyle arttırdı.Protondan arındırılmış Sialil-Lewis A iyon sinyalleri, yeniden kristalleşmeden sonra 4.7 faktörü ile arttırıldı. Bir kez ustalaştıktan sonra, uygun şekilde yapılırsa bu teknik kullanılarak numuneler 10 dakika içinde hazırlanabilir. Bu prosedürü denerken, metanol damlacığının numune noktasına derhal ve hassas bir şekilde bırakılması önemlidir.Bu videoyu izledikten sonra, rutin analiz için en iyi iyon sinyallerini elde etmek için çoklu numunelerin kristal morfolojisini etkili bir şekilde nasıl kontrol edeceğinizi iyi anlamış olmalısınız.

an-efficient-sample-preparation-method-to-enhance-carbohydrate-ion

Research

JoVE Journal

Chemistry

Kimya

Bu video Matriks Yardımlı Lazer Desorpsiyon İyonizasyon Kütle Spektrometresi (MALDI-MS) ile peptitler ve proteinlerin analizi için bir ultra-ince matris / analit bir tabaka hazırlık göstermektedir.

MALDI Numune Hazırlama: Ultra İnce Tabaka Yöntemi

Doğru kütle ölçüm proteinlerin soruşturma sırasında önemli bir adımı temsil etmektedir. Matris destekli lazer desorpsiyon / iyonizasyon (MALDI) kütle spektrometresi (MS) gibi tespiti için kullanılabilir ve önemli avantajı tuzları, deterjan ve kirleticilere karşı tolerans. Burada MALDI-MS ile 100 kDa'dan daha büyük proteinlerin analizi için erişilebilir bir yaklaşımı göstermektedir.

Uçuş lazer desorpsiyon / iyonizasyon zaman sağlam proteinler (MALDI-TOF) kütle spektrometrik analizi Matris destekli daha büyük 100 kDa

Ditranol (DT, 1,8-dihidroksi-9 ,10-dihydroanthracen-9-on) daha küçük moleküllerin doku görüntüleme için bir MALDI matris olarak bildirilmiştir; üzerinde endojen lipidlerin MALDI görüntüleme için DT kullanımı için protokoller Bir ultra çözünürlüklü kuadrupol-FTICR alet üzerinde pozitif iyon MALDI-MS tarafından doku kesitlerinin yüzey burada verilmektedir.

Bir Fourier Matrix Yardımlı Lazer Dezorpsivon / İyonizasyon Görüntüleme için bir Matrix olarak ditranol İyon Cyclotron Rezonans Kütle Spektrometresi Dönüşümü

Örnek Kurutma işlemleri esnasında alt-tabaka sıcaklığının ayarlanması sayesinde yöntemde MALDI kütle spektrometresi iyon sinyallerin uzaysal farklılıklarını azaltmak için bir kuralı gösterilmektedir.

Kantitatif Uygulamalar için Homojen MALDI Örneklerin Hazırlanması

Bu iletişim kuralı için görüntüleme kütle spektrometresi mukadder doku sabit formalin süblimasyon tabanlı hazırlanması için tekrarlanabilir ve güvenilir bir yöntem açıklanır.

Örnekleri için matris peptit esaslı tamir Formalin en iyi hazırlık lazer desorpsiyon/iyonlaşma kütle spektrometresi iş akışlarını görüntüleme destekli

Sentetik polimerler karakterizasyonu kütle spektrometresi (MALDI-TOF MS) numune hazırlama, spektral toplama ve veri analizi getirilmesi de dahil olmak üzere anlatılan uçuş matris yardımlı Lazer Desorpsiyon iyonlaşma süresi için bir protokol.

Matris ile sentetik polimerler karakterizasyonu Lazer Desorpsiyon iyonlaşma zaman uçuş (MALDI-TOF) kütle spektrometresi destekli

İyon hareketlilik spektrometresi (IMS), biyomoleküllerin karakterizasyonu için kütle spektrometrisinin ilginç bir tamamlayıcısıdır, özellikle izomerizme duyarlı olduğu için. Bu protokol, bir molekülün izolasyonuna ve parçalarının hareketlilik profillerinin oluşturulmasına izin veren bir tandem IMS (IMS / IMS) deneyini tanımlar.

Tandem İyon Hareketlilik Deneyleri için Döngüsel İyon Hareketlilik Spektrometresi Kullanma

Matris yardımlı lazer desorpsiyon/iyonizasyon görüntüleme kütle spektrometrisi ile agara bazlı, bakteriyel makrokolonilerin analizi için yeni bir numune hazırlama yöntemi gösterilmiştir.

Enfeksiyon Sırasında Agar ve Dokuda Yetişen Bakteri Kolonilerinin Görüntüleme Kütle Spektrometrisi Analizi Yoluyla Mikrobiyal İşbirliğinin İncelenmesi

Bu protokol, MALDI-IMS analizi için düşük su içeriğine sahip sert tohum numune kesitlerinin hazırlanması, analitlerin orijinal dağılımının ve bolluğunun korunması ve yüksek kaliteli sinyal ve uzamsal çözünürlük sağlanması hakkında ayrıntılı rehberliği tanımlamayı amaçlamıştır.

Matris Destekli Lazer Desorpsiyon/İyonizasyon-Görüntüleme Kütle Spektrometrisi Analizi için Sert Palmiye Tohumlarının Hazırlanması

Bu protokol, matris destekli lazer desorpsiyon/iyonizasyon uçuş süresi kütle spektrometrisi kullanarak değişen dağılım ve uç gruplara sahip sentetik polimerleri karakterize etmek için numune hazırlama, veri toplama ve veri analizi için ayrıntılı talimatlar ve örnekler sağlar.

Değişen Dispersite ve Uç Gruplara Sahip Sentetik Polimerlerin Karakterizasyonu için MALDI-ToF MS Yöntemi

Öğrenin MALDI kütle spektrometrisinde karbonhidrat iyon sinyallerini artırmak için optimize edilmiş örnek hazırlama yöntemini. Kristal yapıları yeniden şekillendirerek sinyal yoğunluğunu etkili şekilde iyileştirin.

Matris yardımlı Lazer Desorpsiyon/iyonlaşma kütle spektrometresi karbonhidrat iyon sinyalleri geliştirmek için bir verimli örnek hazırlama yöntemi (Video) | JoVE Journal

Matris yardımlı Lazer Desorpsiyon/iyonlaşma kütle spektrometresi karbonhidrat iyon sinyalleri geliştirmek için bir verimli örnek hazırlama yöntemi

Daha fazla video keşfet