Hepatosellüler karsinom Vivo içinde geliştirilmesi üzerinde mezenkimal kök hücre sayfası potansiyelini keşfetmek

Merhaba, ben Kral Abdullah Uluslararası Tıbbi Araştırma Merkezi, Kök Hücre ve Rejeneratif Tıp Bölümü'nden Dr.Alaa Alshareeda. Bugün, mezenkimal kök hücrelerin hepatosellüler karsinom gelişimi üzerindeki etkisini hücre tabakası teknolojisini kullanarak sıçan modelinde göstereceğiz. Merhaba, ben Abdullah Almubarak.

King Saud Üniversitesi Deneysel Cerrahi ve Hayvan Laboratuvarı'nda çalışıyorum. Hücre tabakasını naklettikten sonra herhangi bir reddedilmeyi önlemek için çıplak fareyi kullanıyoruz. Bu diyagram, çıplak sıçanlarda hücre tabakası nakli prosedürünü göstermektedir.

Bu çalışmada sekiz ila 12 haftalık çıplak fareler kullanılacaktır. İlk olarak, fareleri çentikleyin ve karaciğeri açığa çıkarmak için neşter kullanarak cilt ile alttaki kaslar arasında yedi ila on santimetrelik bir kesi yapın. Hücre tabakasını aktarmak için steril bir zar kullanın.

Zarı toplamak için hücre tabakasının üzerine yerleştirin. Ardından, hücre tabakasını zarla birlikte karaciğerin bir lobunun üzerine yerleştirin. Hücre levha yapımı.

Hücreleri tohumlamadan önce, 3,5 santimetre sıcaklığa duyarlı UpCell kültür kaplarını seyreltilmemiş FBS ile kaplayın. Bulaşıkların FBS ile kaplanması, zar tabakasındaki hücrelerin büyümesini destekler ve hücrelerin bozulmasını önler. Bulaşıkların tüm yüzeyini kapladığınızdan emin olun.

Bulaşıkları %5 karbondioksit ve %95 hava içeren nemlendirilmiş bir atmosferde 37 Santigrat derecede 24 saat inkübe edin. Ertesi gün fazla FBS'yi çıkarın ve bulaşıkların oda sıcaklığında en az bir saat kurumasını bekleyin. En az bir milyon HepG2 kanser hücresinin tek başına veya mezenkimal kök hücrelerle birlikte kültürlenerek DMEM kültür ortamına tohumlanması.

Ortam% 10 FBS ve% 1 penisilin-streptomisin ile desteklenmiştir. Bu çalışmada kanser hücrelerinin mezenkimal kök hücrelere oranı 4:1'dir. Hücreleri ekledikten sonra, bulaşıkları hafifçe sallayın.

Hücreleri 37 Santigrat derecede% 5 karbondioksit ve% 95 hava içeren nemlendirilmiş bir atmosferde inkübe edin. Hücre tabakasının ayrılması. % 100 hücre birleşiminde, bulaşıkları 37 Santigrat inkübatörden çıkarın.

Şimdi, HepG2 kanser hücre tabakasını oda sıcaklığında bir saat inkübe ederken, mezenkimal kök hücre ile birlikte kültürlenmiş HepG2'yi 20 Santigrat derecede 30 ila 40 dakika boyunca% 95 havada% 5 karbondioksit içeren nemlendirilmiş bir atmosferde inkübe edin. Hücre tabakasının ayrılması için kuluçka süresi boyunca, hayvan prosedürünü başlatın. Hayvanlar üzerinde yapılan tüm çalışmalar King Saud Üniversitesi etik komitesi tarafından onaylanmıştır.

Cerrahi işlemin gerçekleştirilmesi. Pedal çekme refleksini test ederek anestezi derinliğini kontrol edin. Ameliyat bölgesini iyot ile dezenfekte edin.

Şimdi, iyotlu ikinci bir fırçalama uygulayın. Kesiğin kirlenmesini önlemek için hayvanı sterilize edilmiş bir örtü ile örtün. Sterilize edilmiş bir neşter kullanarak, karaciğeri açığa çıkarmak için cilt ile alttaki kaslar arasında yaklaşık yedi ila on santimetre büyüklüğünde bir kesim yapın.

Neşterin düz arka kenarı ile karın kasını deriden ayırın. Bir neşter kullanarak linea alba'yı dikkatlice bıçaklayın ve kesimi keskin bir makasla uzatın. Sıçan karaciğerinde hücre tabakası nakli.

Levhayı yüzeyinden ayırmak için kültür kabını tezgahın üzerine hafifçe vurun. Yaprak kenarlarını yarım daire şeklinde kazıyarak hücre tabakasını tabağın yüzeyinden ayırın. Şimdi, tüm kültür ortamını tabaktan yavaşça çıkarın.

Levhanın herhangi bir hasar görmeden sağlam olduğundan emin olun, aksi takdirde kullanılamaz. Hücre tabakasını hasat etmek ve aktarmak için steril bir zar hazırlayın. Bu yüzden önce zarı normal tuzlu su ile ıslatın, ardından fazla tuzlu suyu steril bir pamuklu çubukla çıkarın.

Zar ile hücre tabakası arasında herhangi bir hava kabarcığı oluşmasını önleyerek ıslak zarı hücre tabakasının üzerine yerleştirin. Materyali toplamak için zarın ve hücre tabakasının üzerine birkaç damla normal salin ekleyin. Hücre tabakasının zara düzgün şekilde takıldığından emin olmak için zarı birkaç saniye bırakın, ardından toplayın.

Şimdi, karaciğeri nakil için hazırlayın. Karaciğer yüzeyinin kuru olduğundan emin olun. Hücre tabakası ile zarı, farenin karaciğerinin tek bir lobunun üzerine yerleştirin.

Hücre tabakasını zardan ayırmak için birkaç damla sterilize salin ekleyin. Membranı dikkatlice çıkarmadan önce beş dakika bekleyin. Bu videoda hücre tabakası karaciğere bağlı olarak görülebilir.

Son olarak, alttaki kasları ve cilt kesilerini beş naylon dikişle kapatın. Kesi kapatıldıktan sonra ameliyat bölgesini betadin ile dezenfekte edin. Anesteziden başa çıkmaya kadar geçen süre değişkendir, ancak genellikle beş ila 20 dakika arasında bir yerdedir Sonuçlar.

Bu şekil, HepG2 hücre tabakası transplantasyonundan bir ay sonra sıçan karaciğerinde gelişen tümörü göstermektedir. Burada, hücre tabakası fabrikasyon HepG2 kanser hücreleri ve kemik iliği mezenkimal kök hücresinin transplantasyonu sonrasında tümör gelişti. Bu, HepG2 kanser hücrelerinden ve umbilikal kord mezenkimal kök hücresinden üretilen hücre tabakasının transplantasyonundan sonra sıçan karaciğerinde en küçük gelişen tümörü gösterirken, Bu şekil, hücre tabakası transplantasyonundan bir ay sonra sıçan karaciğerinin H ve E boyamasını göstermektedir.

A'nın normal sıçan karaciğer hücrelerini temsil ettiği ve B'nin kanserli sıçan karaciğer hücrelerini gösterdiği yer. Son. Bu videoyu izledikten sonra, hücre tabakası teknolojisini kullanarak çıplak sıçan üzerinde hepatosellüler karsinom modeli geliştirebilmelisiniz. İzlediğiniz için teşekkürler.