Name: Hepatosellüler karsinom Vivo içinde geliştirilmesi üzerinde mezenkimal kök hücre sayfası potansiyelini keşfetmek (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-09-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 10 min 18 s
Description: Keşfedin hücre sayfası teknolojisi kullanarak çıplak sıçanlarda hepatosellüler karsinom geliştirme yöntemini. Mezenkimal kök hücrelerin tümör gelişimi üzerindeki etkisini inceleyerek kanser tedavileri için güvenilir bir model oluşturun.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar deneysel cerrahi ve tıp Koleji, Kral Suud Üniversitesi, hayvan Laboratuvarı personeli onların işbirliği ve destek-hüseyin Almukhayzim ve özellikle Hisham Aloudah için teşekkür etmek istiyorum. Yazarlar ayrıca medya ekibinin King Saud bin Abdul-Aziz Üniversitesi'nde görsel hazırlanması için kabul etmek istiyorum malzeme özellikle Hüseyin bin Ghannam ve Abdulwahab Alsulami.

Protokol Kral Suud Üniversitesi'nin etik kurul hayvan bakımı kuralları izler. Cerrahi, anestezi ve hayvanlar üzerinde kullanılan diğer ilaçlar Kral Suud Üniversitesi'nin etik kurul tarafından onaylanır. Tüm deneysel çalışma uygun eğitimli personel tarafından gerçekleştirilir.
1. hücre sac İnşaat
<ol><li>Kültür yemekleri (3.5 cm sıcaklık duyarlı kültür yemekleri) su katılmamış fetal Sığır serum (FBS) ile ceket ve çanak tüm yüzeyi kapsayacak şekilde sağlamak. Not: Bu bir monolayer hücrelerinin büyümesini destekler ve hücre toplama engeller bu adımı hücre sayfası dekolmanı için önemlidir.</li>
	<li>Yemekleri için % 5 CO2 ve % 95 hava içeren bir oksijen atmosferde 37 ° C'de 24 saat kuluçkaya.</li>
	<li>Aşırı FBS kaplamalı yemeklerini kaldırın ve yemekleri için en az 1 h (RT) Oda sıcaklığında kurumasını sağlar.</li>
	<li>Üç hücre süspansiyonlar hazırlamak: 1 x 106 HepG2 hücreleri, 1 x 106 HepG2 hücreleri ile BMMSCs ve 1 x 106 HepG2 hücreleri ile UCMSCs (BMMSCs ve UCMSCs için 4:1 oranında).</li>
	<li>Tohum uygun hücre süspansiyon etiketli her yemeğin için.</li>
	<li>DMEM kültür % 10 FBS ve % 1 penisilin/streptomisin ile desteklenmiş orta bütün hücrelerdeki askıya alma.</li>
	<li>Hücreleri oksijen bir atmosferde % 5 CO2 ve % 95 hava içeren 37 ° C'de kuluçkaya.</li>
</ol>2. hücre sayfası dekolmanı
<ol><li>% 100 hücre izdiham bulaşıkları da 37 ° C kuluçka dışarı al.</li>
	<li>HepG2 hücre sayfası çanak RT, 1 h için HepG2/BMMSC ve HepG2/UCMSC hücre sayfası yemekler %5 CO2 ve % 95 hava içeren bir oksijen atmosferde 20 ° C'de 30-40 dk için kuluçka sırasında kuluçkaya. Not: sadece HepG2 yapılan hücre sayfası kırılgandır; sıcaklık 20 ° C-azaltarak sayfanın yapısına zarar neden.</li>
</ol>3. cerrahi işlem performansını
Not: hücre sayfası dekolmanı için kuluçka süre boyunca, hayvan yordam başlatın.
<ol><li>
Cerrahi alan hazırlanması için yönergeler
	<ol>
<li>Laboratuvar, bir başlık, laminar akış kabine veya aseptik cerrahi oda gibi bir steril ayrı alanındaki tüm cerrahi prosedürlerini yürütecektir. Cerrahi alan tüm yüzeyleri gözenekli olmayan, mühürlü, dayanıklı ve sanitizable olduğundan emin olun.</li>
		<li>Önlük, eldiven, facemasks ve baş ve ayakkabı kapakları da dahil olmak üzere uygun koruyucu giysiler giymek.</li>
		<li>Kullanım cerrahi alet are temiz ve steril (yolu ile ısıyla; yüksek basınç altında doymuş kök) başında cerrahinin.</li>
		<li>Eldiven fareler arasında değiştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Ameliyat için hayvan hazırlanması
	<ol>
<li>8 - için 12-hafta-yaşlı çıplak fareleri kullanın.</li>
		<li>Fareler için enjekte edilebilir anestezi oluşturun.<ol>
<li>Anestezi çözüm hazırlamak için ketamin-xylazine, ketamin 2 mL, xylazine (bir konsantrasyon 20 mg/mL), 1 mL ve 1 mL steril fizyolojik serum (Örneğin, % 0,9 sodyum klorür) steril 10 mL serum koleksiyonu şişe içinde karıştırın ve çok önce sallamak kullanın.</li>
			<li>Anestezi uygulamak için intraperitoneally 0.2 mL farenin vücut ağırlığının 100 gr başına ketamin-xylazine çözeltisi enjekte et. Not: Çözüm toplam doz 100 mg/kg ketamin bas ve 10 mg/kg xylazine değil.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Görünür kir/enkaz cerrahi sitesinden kaldırın.</li>
		<li>Anestezi derinliği pedal çekilme refleks (ayak pedi tutam her iki arka ayakları üzerinde) test ederek kontrol edin. Not: Ayak pedi tutam bir yanıt neden oluyorsa, bir doz, 0.05 mL/100 g (yaklaşık her 30 dakika) yineleyin ve sonra anestezik derinlik yeniden denetleyin.</li>
		<li>Bir iki aşamalı bodur ile cerrahi alan povidone-iyot/isopropanol tarafından dezenfekte.</li>
		<li>Belgili tanımlık kesme kirlenmesini önlemek için steril bir örtüsü fareyle kapsar.</li>
		<li>Fareler subkutan buprenorfin (0.01 - 0.05 mg/kg) ile enjekte kesi yapmadan önce8 .</li>
		<li>Steril neşter kullanmadan, bir 7 - için 10-cm derileri ve karaciğer ortaya çıkarmak için temel kaslar arasında kesin olun.<ol>
<li>Karın kas deri neşteri düz arka kenarı ile ayırın.</li>
			<li>Dikkatli bir şekilde bıçakla linea alba neşter kullanarak ve keskin makas ile kesme genişletmek.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. hücre sac ekimi
Not: Üzerinde karaciğer hücre sac ekimi gerçekleştirilir.
<ol><li>Hücre sayfası kültür çanak toplamak.<ol>
<li>Yavaşça kültür çanak yüzeyi sacdan ayırmak için tezgah üzerine dokunun.</li>
		<li>Hücre sayfası çanak'ın yüzeyinden bir yarım daire bir steril pipet ucu kullanarak sayfanın kenarına kazıma ayırın.</li>
		<li>Yavaşça tüm Orta kültür çanak çıkarın.</li>
		<li>Sayfanın herhangi bir zarar vermeden sağlam olduğundan emin olun; Aksi takdirde, olamaz (Şekil 1) kullanılır. Not: Elde edilen sayfaları doğrudan göz tarafından tespit edilebilir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Yemeğin hücre sacdan hasat için steril bir membran (filtre kağıdı) hazırlayın.<ol>
<li>İlk olarak, membran normal salin ile ıslatın. Sonra aşırı tuz ile steril pamuk yastık kaldırın.</li>
		<li>Islak membran hücre sayfası, kırışıklıklar ve hava kabarcıkları membran ve hücre sayfası arasındaki kaçınırken yerleştirin.</li>
		<li>Membran ve onları daha kolay toplamak için hücre sayfası normal salin birkaç damla ekleyin. Not: hücre sayfası bozulmaması için değil soğuk serum kullanın ve membran ve hücre sayfasını forseps ile kaldırın.</li>
		<li>Membran hücre sayfası membran için düzgün takıldığından emin olmak birkaç saniye için bırakın ve sonra onu toplamak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Karaciğer hücre sac ekimi için hazırlayın.<ol>
<li>Karaciğer yüzey hafifçe steril pamuk yastık ile dokunarak kuru olduğundan emin olun.</li>
		<li>Steril forseps kullanarak, membran hücre levha ile sıçan karaciğer tek bir lob yerleştirin.</li>
		<li>Steril serum fizyolojik birkaç damla ekleyin ve hücre sacdan ayırmak için membran için hafif bir basınç uygulayın.</li>
		<li>Dikkatle membran kaldırmadan önce 5 min için bekleyin. Not: Bu hücre sayfası karaciğere düzgün takıldığından emin olmak için yapılır.</li>
		<li>Son olarak, temel kasları kapatın ve insizyon ile 5-0 naylon dikiş cilt.</li>
		<li>Cerrahi alan povidone-iyot ile dezenfekte. Not: Resim 2 çıplak bir sıçan karaciğer üzerinde bir diyagram hücre sac ekimi yordam gösterir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. ameliyat sonrası bakım
<ol><li>Ameliyattan hemen sonra tek tek yamyamlık veya boğulma önlemek için fareyi ev ve onu düzenli olarak (en azından her 15 dk) izlemek kadar bilinçli ve tam olarak ayakta.</li>
	<li>Sonra günlük 5-14 d, en az 5 d için fareler post-operatively, herhangi bir komplikasyon sağlamak için değerlendirmek. Günlük değerlendirme sırasında şunlardan emin olun.<ol>
<li>Yara kapalı ve bir dikiş aşırı sıkı olmadan arada.</li>
		<li>Aşırı ısı gibi kesi site enfeksiyon belirtisi yok şişme veya pürülan akıntı.</li>
		<li>Azalan yiyecek ve su tüketimi, kilo kaybı, dehidratasyon, cilt çadır veya hızlı ve açık ağız nefes gibi ağrı ile ilişkili belirti yok. Şiddetli ameliyat sonrası ağrı için ılımlı denetlemek için varsa, fareler subkutan buprenorfin (0.01 - 0.05 mg/kg) ile en az 48-72 saat için her 6-8 h9 postoperatively enjekte et.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. transplante çevrenin Analizi
<ol><li>Bir ay sonra nakli, scarifice fare ve transplante alan için toplamak histolojik ve immunohistokimyasal analizi.</li>
</ol>

<ol><li>Marra, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+targets+and+oxidative+stress+biomarkers+in+hepatocellular+carcinoma%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Molecular targets and oxidative stress biomarkers in hepatocellular carcinoma: an overview.</a> Journal of Translational Medicine. 9, 171(2011).</li>
<li>Yamada, K. M., Cukierman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+tissue+morphogenesis+and+cancer+in+3D%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Modeling tissue morphogenesis and cancer in 3D.</a> Cell. 130 (4), 601-610 (2007).</li>
<li>Kushida, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decrease+in+culture+temperature+releases+monolayer+endothelial+cell+sheets+together+with+deposited+fibronectin+matrix+from+temperature-responsive+culture+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research%22%5BJournal%5D)">Decrease in culture temperature releases monolayer endothelial cell sheets together with deposited fibronectin matrix from temperature-responsive culture surfaces.</a> Journal of Biomedical Materials Research. 45 (4), 355-362 (1999).</li>
<li>Okano, T., Yamada, N., Sakai, H., Sakurai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+recovery+system+for+cultured+cells+using+plasma-treated+polystyrene+dishes+grafted+with+poly+%28N-isopropylacrylamide%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Materials+Research+Part+A%22%5BJournal%5D)">A novel recovery system for cultured cells using plasma-treated polystyrene dishes grafted with poly (N-isopropylacrylamide).</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 27 (10), 1243-1251 (1993).</li>
<li>Chamberlain, G., Fox, J., Ashton, B., Middleton, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Concise+review%3A+mesenchymal+stem+cells%3A+their+phenotype%2C+differentiation+capacity%2C+immunological+features%2C+and+potential+for+homing%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Concise review: mesenchymal stem cells: their phenotype, differentiation capacity, immunological features, and potential for homing.</a> Stem Cells. 25 (11), 2739-2749 (2007).</li>
<li>Waterman, R. S., Tomchuck, S. L., Henkle, S. L., Betancourt, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+mesenchymal+stem+cell+%28MSC%29+paradigm%3A+polarization+into+a+pro-inflammatory+MSC1+or+an+Immunosuppressive+MSC2+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A new mesenchymal stem cell (MSC) paradigm: polarization into a pro-inflammatory MSC1 or an Immunosuppressive MSC2 phenotype.</a> PLoS One. 5 (4), e10088(2010).</li>
<li>Waterman, R. S., Henkle, S. L., Betancourt, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+stem+cell+1+%28MSC1%29-based+therapy+attenuates+tumor+growth+whereas+MSC2-treatment+promotes+tumor+growth+and+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal stem cell 1 (MSC1)-based therapy attenuates tumor growth whereas MSC2-treatment promotes tumor growth and metastasis.</a> PLoS One. 7 (9), e45590(2012).</li>
<li>Curtin, L. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+buprenorphine+in+a+postoperative+pain+model+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Evaluation of buprenorphine in a postoperative pain model in rats.</a> Comparative Medicine. 59 (1), 60-71 (2009).</li>
<li>Nowland, M. H. Guidelines on Anesthesia and Analgesia in Rats - ULAM Guidelines and SOPs - Michigan Medicine Confluence. , 
 <a target="_blank" href="https://wiki.med.umich.edu/display/ULAMGSOP/Guidelines+on+Anesthesia+and+Analgesia+in+Rats">https://wiki.med.umich.edu/display/ULAMGSOP/Guidelines+on+Anesthesia+and+Analgesia+in+Rats</a> (2017).</li>
<li>Alshareeda, A. T., Sakaguchi, K., Abumaree, M., Mohd Zin, N. K., Shimizu, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+potential+of+cell+sheet+technique+on+the+development+of+hepatocellular+carcinoma+in+rat+models%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">The potential of cell sheet technique on the development of hepatocellular carcinoma in rat models.</a> PLoS One. 12 (8), e0184004(2017).</li>
<li>Russo, J., Russo, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atlas+and+histologic+classification+of+tumors+of+the+rat+mammary+gland%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Mammary+Gland+Biology+and+Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Atlas and histologic classification of tumors of the rat mammary gland.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 5 (2), 187-200 (2000).</li>
<li>Lin, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+and+limitations+of+genetically+modified+mouse+models+in+drug+discovery+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Drug+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Applications and limitations of genetically modified mouse models in drug discovery and development.</a> Current Drug Metabolism. 9 (5), 419-438 (2008).</li>
<li>Driscoll, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+preclinical+new+drug+research+program+of+the+National+Cancer+Institute%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+Reports%22%5BJournal%5D)">The preclinical new drug research program of the National Cancer Institute.</a> Cancer Treatment Reports. 68 (1), 63-76 (1984).</li>
<li>Suzuki, R., Aruga, A., Kobayashi, H., Yamato, M., Yamamoto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+in+vivo+cancer+model+using+cell+sheet+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Research%22%5BJournal%5D)">Development of a novel in vivo cancer model using cell sheet engineering.</a> Anticancer Research. 34 (9), 4747-4754 (2014).</li>
<li>Chen, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+cell+sheet+technique+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedical+Reports%22%5BJournal%5D)">Application of the cell sheet technique in tissue engineering.</a> Biomedical Reports. 3 (6), 749-757 (2015).</li>
<li>Matsuura, K., Haraguchi, Y., Shimizu, T., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+sheet+transplantation+for+heart+tissue+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">Cell sheet transplantation for heart tissue repair.</a> Journal of Controlled Release. 169 (3), 336-340 (2013).</li>
<li>Matsuura, K., Shimizu, T., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Toward+the+development+of+bioengineered+human+three-dimensional+vascularized+cardiac+tissue+using+cell+sheet+technology%5BTitle%5D)+AND+%22International+Heart+Journal%22%5BJournal%5D)">Toward the development of bioengineered human three-dimensional vascularized cardiac tissue using cell sheet technology.</a> International Heart Journal. 55 (1), 1-7 (2014).</li>
<li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+the+evidence+that+tumors+are+angiogenesis+dependent%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent?</a> Journal of the National Cancer Institute. 82 (1), 4-6 (1990).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Araştırma geniş bir miktarda insan kanserlerin benzer bir yeterli in vivo preklinik hayvan modeli geliştirmek için adamıştır. Şu anda, genetik mühendisliği ve hücre nakli11kanser hayvan modelleri oluşturmak için kullanılan ana yaklaşımlar gerektirir. Genetiği değiştirilmiş hayvan modelleri tanıma ve onaylama hedef genlerin hem uyuşturucu kaynaklı toksisite temel moleküler mekanizmaları anlama iyi araçlardır. Ancak, bu model bazı sınırlamalar ile ilişkilidir; Örneğin, belirli bir gen modif...

HCC önemli ölçüde kötü prognoz ile ilişkili karaciğer birincil bir kanserdir. Her yıl, neredeyse yarım milyon yeni hastaların karaciğer kanseri hastaları dünya çapında%185'i temsil eden HCC ile tanısı. Hepatocarcinogenesis bir tek biçimli hastalık değildir; değil, ek olarak farklı histopatolojik özellikler ve genetik ve genomik çeşitliliğine sahip hastalıkları topluluğu prognostik sonuçlar1çeşitli olduğunu. Bu nedenle, ana zorluklar HCC için etkili bir tedavi stratejisi geliştirme HCC Biyoloji sınırlı bilgi ve karmaşık bu hastalığı anlamak yardımcı olabilir uygun bir deneysel hayvan modeli eksikliği vardır. İnsan kanseri taklit eden bir in vivo hayvan modeli aday genler seçmek ve prognostik/akıllı işaretler kanseri indüksiyon yanı sıra kanser yanıt etkileyebilecek faktörler farklı soruşturma için karıştığı belirlenmesi için gereklidir terapötik ajanlar için.
Vitro kanser çalışmaları hala büyük sınırlamalar ile ilişkilidir. Gerçeğini kanser hücrelerinin kültürü muhafaza ne zaman onların in vivo özelliklerinin çoğunu kaybetmek nedeni bu. Bütün doku Fizyoloji bir ex vivo ortamda olmamasından hücreleri vitro sonucu oluşan değişiklikleri. Kanser hücre hücre etkileşim (stromal, bağışıklık, damarlara, epitel, vb) tümör microenvironment içinde büyük ölçüde kanser hücre özellikleri2üzerinde yansıtır. Tümör microenvironment kanser hücre gen/protein ifade ve ek olarak angiogenetic ve metastatik potansiyeli fenotipik özellikleri değiştirmek. İki boyutlu (2B) vitro kültür sistemi de tümör ilerleme düzenlemek gerekli olan uygun doku matris yoksun. Böylece, bu sınırlamaları nedeniyle vivo içinde modelleri her zaman vitro modelleri ön bulguları desteklemek için kullanılması gereken. Bu çalışmada, HCC yatan tam biyolojik süreci elucidates in vivo hayvan modeli geliştirmek için hücre sayfası teknolojisini kullanır.
Daha--dan a on yıl önce Okano'nın laboratuvar doku mühendisliği hücre sayfa teknoloji3dayalı bir roman yöntemi kurdu. Bir termo-yanıt veren Kültür plastik geri dönüşümlü hücre adezyon/dekolmanı yüzey hydrophobicity kontrol ederek izin vermek için bu tekniği kullanır. Bu yöntem nazik bir biçimde olduğu gibi üç boyutlu (3-D) (i.e.,cell sayfa), kültürlü hücre hasat bakımlı hücre dışı matriks (ECM) ve hücre-hücre etkileşimleri ile sağlar. Hücre sayfası teknik ticari olarak kullanılabilir ve kullanıma hazır olan kültür yemekleri ile bir sıcaklık duyarlı polimer poly(N-isopropylacrylamide) (PIPA değilim), precoating gerektirir. Bir sıcaklık 20 ° C'den polimerler PIPA Am sulu olmak ve (37 ° C) daha yüksek bir sıcaklık, polimerler susuz haline ve bulanık bir çökelti dönüşümü ise sulu çözümler içinde çözülür. Polimer hidrofilik Amid zincirleri ve hidrofobik yan zincirleri (izopropil gruplar) içerir. Sulu yapısı dökümü izopropil grupları ve hidrofobik izopropil grupları çevreleyen su moleküllerinin düşük sıcaklıkta Toplam ise, yüksek sıcaklıklarda su molekülleri Albert hareketi, yoğun hidrofobik etkileşimler nedeniyle. Bu nedenle, tüm polimer zincirini toplar ve4precipitates.
Sunulan çalışmada, üç farklı hücre yaprak kullanarak bir HCC hayvan modeli geliştirmek için bu tekniği istihdam. Diğer iki yaprak HCC hücre satır hücreleri ve MSCs iki farklı kaynaklardan oluşur, ancak istihdam ilk sayfayı HCC hücre satır hücreleri yalnızca, oluşur: kemik iliği MSCs (BMMSCs) ve göbek kordonu MSCs (UCMSCs). MSCs intocell türevleri adipositler, osteocytes, kondrosit ve miyositler5gibi mezenkimal soyundan ayırt yeteneğine hematopoetik stromal hücreler vardır. Biz bu hücrelerin kanser hücre sayfası oluştururken istihdam MSCs etkisi kanser tutarsız raporlama nedenidir. MSCs iki ayrı fenotipleri olabilir sürülmüştür: "MSC1", proinflamatuar fenotip ve "MSC2", bir immünsüpresif fenotip6. MSCs toll benzeri reseptörler (TLR) hızlı. TLR3 astar immünsüpresif faktörler6onların salgılanmasını artırır, ancak TLR4 astar MSCs, proinflamatuar faktörler, onların salgılanmasını artırır. Bu iki fenotipleri vitro incelenmesi MSC2 ortak kültür ters etkisi7varken MSC1 ortak bir kültür kanser hücre hatları ile kanser hücre büyümesi, zayıflatılmış bildirdi. Bu MSCs yanlısı kanser veya bağlı olarak onların fenotip antikanser olabilir implicates. Böylece, hücre sayfası teknolojisi kullanarak HCC hayvan modeli geliştirmeye ek olarak, tümör gelişimi, MSC nakli etkisi keşfetmek istiyoruz ve bu hücreler kullanarak geliştirmek olup bu model geliştirilmesi azaltmak.

<table><tbody><tr><td><güçlü>Reaktifler&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FBS&nbsp;</td><td>Gibco/Invitrogen</td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>DMEM yüksek glikoz&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>D5671-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / streptomisin ve nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojisi</td><td>15070063</td><td></td></tr><tr><td>Steril fizyolojik serum fizyolojik</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>S0817-1GA</td><td></td></tr><tr><td>İnsan HepG2 hücre hattı</td><td>ATCC, ABD</td><td>HB-8065</td><td></td></tr><tr><td>İnsan kemik iliği MSC'leri hücre hattı</td><td>PromoCell, ABD</td><td>C-12974</td><td></td></tr><tr><td>insan göbek kordonu dokusu MSC'leri</td><td>PromoCell, ABD&nbsp;</td><td>C-12971</td><td></td></tr><tr><td>Ketamin% 50</td> <td>Rompun, Bayer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ksilazin% 2</td> <td>Rompun</td><td>23076-35-9</td><td></td></tr><tr><td>Alfadin > &nbsp; çözüm.</td><td>Riyad Pharma</td><td>LBL0816</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Tek Kullanımlık:&nbsp; < / güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>15mL Polipropilen Yüksek Berraklık PP Santrifüj Tüpü Şahin</td><td>&nbsp;</td><td></td><td></td>352097</tr><tr><td>3,5 cm steril UpCell kültür kapları, filtre kağıdı (membran) ile</td> <td>Sigma</td><td>174904-1CS</td><td></td></tr><tr><td>100-1000 & L &nbsp; Pipet Uçları&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>CLS4868-1000EA&nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Temel Prosedür Drape</td><td>Thermofisher</td><td>PMD5293.0</td><td></td></tr><tr><td>Equipment&nbsp; </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plus pipet, değişken hacimli</td><td>Eppendorf&reg; &nbsp; Araştırma&reg;</td><td>Z683779-1EA</td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü inkübatörü 37 & derece; C, %5 CO2</td> <td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biyolojik güvenlik kabini</td><td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Doku kültürü inkübatörü 20 & °C; C,% 5 CO2</td> <td>Herhangi bir marka</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steril cerrahi aletler ve çıplak fareler:&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Forseps</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>neşter&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Naylon Sütür&nbsp; 5-0</td><td>Accutome</td><td>AB-3854S</td><td>Monofilament, Lancet</td></tr><tr><td>1 ml Tüberkülin Şırıngaları</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-88</td><td></td></tr><tr><td>Çıplak sıçanlar&nbsp;</td><td>Charles nehri</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

hepatosellüler karsinom vivo içinde geliştirilmesi üzerinde mezenkimal kök hücre sayfası potansiyelini keşfetmek

Exploring the Potential of Mesenchymal Stem Cell Sheet on The Development of Hepatocellular Carcinoma In Vivo

İnsan kanseri taklit eden bir in vivo hayvan modeli önemli klinik bilgi sunar çeşitli uygulamalar olabilir. Şu anda kullanılan teknikleri vivo içinde kanser modelleri geliştirilmesi için önemli kısıtlamalar bulunmaktadır. Bu nedenle, bu çalışmada, bir vivo içinde kanser modeli geliştirmek için hücre sayfası teknolojiyi uygulamak için amacımız. Hepatosellüler karsinom (HCC) başarıyla çıplak fareleri HCC hücre satırı hücrelerinden oluşturulan hücre sayfalarını kullanarak geliştirilmiştir. Kanser hücre yaprak hücre içi adezyon ve hücre dışı matriks tarafından kontrollü bir tabakalı yapısı oluşumu aracılığıyla oluşturulur. Bu HCC sac ekimi karaciğer ve bir ay içinde bir tümörü taşıyan hayvan modeli oluşturulması için izin verir. Buna ek olarak, mezenkimal kök hücre (MSC), bu kanser modeli geliştirilmesinde rol araştırıldı. HCC hücre satırı sayfa ek olarak başka bir iki hücre sayfaları oluşturulur: HCC hücreleri ve kemik iliği MSCs (BMMSCs) ve bir levha HCC hücrelerin ve göbek kordonu MSCs (UCMSCs) bir sayfası. HCC hücreleri ve MSCs kombinasyon var sayfaları da bir tümörü taşıyan hayvanı üretme yeteneğine sahiptirler. Ancak, MSCs eklenmesiyle oluşan tümör boyutunu küçültür ve bu tümör gelişimi üzerinde olumsuz etkisi kullanılan MSCs kaynağına bağlı olarak değişir. Bu hücre sabıkası belirli MSC alt türlerinden yapılan tümör yönetimi ve denetimi kullanıldığında olabilir gösterir.

Transplante hücre yaprak sıçanlarda tumorigenicity:
Bir ay sonra nakli, tüm transplante hücre çarşaflarda rats karaciğer tümörleri (Şekil 3) geliştirdik. Gelişmiş tümör HepG2, HepG2/BMMSC ve HepG2/UCMSC hücre sayfaları üzerinden ortalama büyüklüğü 4,5 cm, 4 cm ve 2,5 cm, sırasıyla10vardı.
Ka...

Burada, hücre sayfası teknolojisi kullanarak bir vivo içinde kanser modeli geliştirmek için bir protokol mevcut. Böyle bir model antikanser therapeutics değerlendirme için çok yararlı olabilir.

Hepatosellüler karsinom Vivo içinde geliştirilmesi üzerinde mezenkimal kök hücre sayfası potansiyelini keşfetmek

An in vivo animal model that mimics human cancer could have various applications that deliver significant clinical information. The currently used ...

Merhaba, ben Kral Abdullah Uluslararası Tıbbi Araştırma Merkezi, Kök Hücre ve Rejeneratif Tıp Bölümü'nden Dr.Alaa Alshareeda. Bugün, mezenkimal kök hücrelerin hepatosellüler karsinom gelişimi üzerindeki etkisini hücre tabakası teknolojisini kullanarak sıçan modelinde göstereceğiz. Merhaba, ben Abdullah Almubarak.King Saud Üniversitesi Deneysel Cerrahi ve Hayvan Laboratuvarı'nda çalışıyorum. Hücre tabakasını naklettikten sonra herhangi bir reddedilmeyi önlemek için çıplak fareyi kullanıyoruz. Bu diyagram, çıplak sıçanlarda hücre tabakası nakli prosedürünü göstermektedir.Bu çalışmada sekiz ila 12 haftalık çıplak fareler kullanılacaktır. İlk olarak, fareleri çentikleyin ve karaciğeri açığa çıkarmak için neşter kullanarak cilt ile alttaki kaslar arasında yedi ila on santimetrelik bir kesi yapın. Hücre tabakasını aktarmak için steril bir zar kullanın.Zarı toplamak için hücre tabakasının üzerine yerleştirin. Ardından, hücre tabakasını zarla birlikte karaciğerin bir lobunun üzerine yerleştirin. Hücre levha yapımı.Hücreleri tohumlamadan önce, 3,5 santimetre sıcaklığa duyarlı UpCell kültür kaplarını seyreltilmemiş FBS ile kaplayın. Bulaşıkların FBS ile kaplanması, zar tabakasındaki hücrelerin büyümesini destekler ve hücrelerin bozulmasını önler. Bulaşıkların tüm yüzeyini kapladığınızdan emin olun.Bulaşıkları %5 karbondioksit ve %95 hava içeren nemlendirilmiş bir atmosferde 37 Santigrat derecede 24 saat inkübe edin. Ertesi gün fazla FBS'yi çıkarın ve bulaşıkların oda sıcaklığında en az bir saat kurumasını bekleyin. En az bir milyon HepG2 kanser hücresinin tek başına veya mezenkimal kök hücrelerle birlikte kültürlenerek DMEM kültür ortamına tohumlanması.Ortam% 10 FBS ve% 1 penisilin-streptomisin ile desteklenmiştir. Bu çalışmada kanser hücrelerinin mezenkimal kök hücrelere oranı 4:1'dir. Hücreleri ekledikten sonra, bulaşıkları hafifçe sallayın.Hücreleri 37 Santigrat derecede% 5 karbondioksit ve% 95 hava içeren nemlendirilmiş bir atmosferde inkübe edin. Hücre tabakasının ayrılması. % 100 hücre birleşiminde, bulaşıkları 37 Santigrat inkübatörden çıkarın.Şimdi, HepG2 kanser hücre tabakasını oda sıcaklığında bir saat inkübe ederken, mezenkimal kök hücre ile birlikte kültürlenmiş HepG2'yi 20 Santigrat derecede 30 ila 40 dakika boyunca% 95 havada% 5 karbondioksit içeren nemlendirilmiş bir atmosferde inkübe edin. Hücre tabakasının ayrılması için kuluçka süresi boyunca, hayvan prosedürünü başlatın. Hayvanlar üzerinde yapılan tüm çalışmalar King Saud Üniversitesi etik komitesi tarafından onaylanmıştır.Cerrahi işlemin gerçekleştirilmesi. Pedal çekme refleksini test ederek anestezi derinliğini kontrol edin. Ameliyat bölgesini iyot ile dezenfekte edin.Şimdi, iyotlu ikinci bir fırçalama uygulayın. Kesiğin kirlenmesini önlemek için hayvanı sterilize edilmiş bir örtü ile örtün. Sterilize edilmiş bir neşter kullanarak, karaciğeri açığa çıkarmak için cilt ile alttaki kaslar arasında yaklaşık yedi ila on santimetre büyüklüğünde bir kesim yapın.Neşterin düz arka kenarı ile karın kasını deriden ayırın. Bir neşter kullanarak linea alba'yı dikkatlice bıçaklayın ve kesimi keskin bir makasla uzatın. Sıçan karaciğerinde hücre tabakası nakli.Levhayı yüzeyinden ayırmak için kültür kabını tezgahın üzerine hafifçe vurun. Yaprak kenarlarını yarım daire şeklinde kazıyarak hücre tabakasını tabağın yüzeyinden ayırın. Şimdi, tüm kültür ortamını tabaktan yavaşça çıkarın.Levhanın herhangi bir hasar görmeden sağlam olduğundan emin olun, aksi takdirde kullanılamaz. Hücre tabakasını hasat etmek ve aktarmak için steril bir zar hazırlayın. Bu yüzden önce zarı normal tuzlu su ile ıslatın, ardından fazla tuzlu suyu steril bir pamuklu çubukla çıkarın.Zar ile hücre tabakası arasında herhangi bir hava kabarcığı oluşmasını önleyerek ıslak zarı hücre tabakasının üzerine yerleştirin. Materyali toplamak için zarın ve hücre tabakasının üzerine birkaç damla normal salin ekleyin. Hücre tabakasının zara düzgün şekilde takıldığından emin olmak için zarı birkaç saniye bırakın, ardından toplayın.Şimdi, karaciğeri nakil için hazırlayın. Karaciğer yüzeyinin kuru olduğundan emin olun. Hücre tabakası ile zarı, farenin karaciğerinin tek bir lobunun üzerine yerleştirin.Hücre tabakasını zardan ayırmak için birkaç damla sterilize salin ekleyin. Membranı dikkatlice çıkarmadan önce beş dakika bekleyin. Bu videoda hücre tabakası karaciğere bağlı olarak görülebilir.Son olarak, alttaki kasları ve cilt kesilerini beş naylon dikişle kapatın. Kesi kapatıldıktan sonra ameliyat bölgesini betadin ile dezenfekte edin. Anesteziden başa çıkmaya kadar geçen süre değişkendir, ancak genellikle beş ila 20 dakika arasında bir yerdedir Sonuçlar.Bu şekil, HepG2 hücre tabakası transplantasyonundan bir ay sonra sıçan karaciğerinde gelişen tümörü göstermektedir. Burada, hücre tabakası fabrikasyon HepG2 kanser hücreleri ve kemik iliği mezenkimal kök hücresinin transplantasyonu sonrasında tümör gelişti. Bu, HepG2 kanser hücrelerinden ve umbilikal kord mezenkimal kök hücresinden üretilen hücre tabakasının transplantasyonundan sonra sıçan karaciğerinde en küçük gelişen tümörü gösterirken, Bu şekil, hücre tabakası transplantasyonundan bir ay sonra sıçan karaciğerinin H ve E boyamasını göstermektedir.A'nın normal sıçan karaciğer hücrelerini temsil ettiği ve B'nin kanserli sıçan karaciğer hücrelerini gösterdiği yer. Son. Bu videoyu izledikten sonra, hücre tabakası teknolojisini kullanarak çıplak sıçan üzerinde hepatosellüler karsinom modeli geliştirebilmelisiniz. İzlediğiniz için teşekkürler.

exploring-potential-mesenchymal-stem-cell-sheet-on-development

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu makale, insan embriyonik kök hücre popülasyonlarının insan hepatik endoderm üretimi üzerinde durulacaktır.

İnsan Embriyonik Kök Hücre Popülasyonlar Hepatosit gibi Hücreleri Sağlam Nesil

İşte biz bütün fare karaciğer doku sindirim, hücre zenginleştirme ve flow sitometri izolasyonu gerektiren bir süreçten CD133 eksprese karaciğer kök hücre ve kanser kök hücrelerin izolasyonu tarif. Biz gelişmiş tek hücre izolasyonu ve klonal genişleme için yöntemler içerir.

Klonal Genişleme CD133 + Karaciğer Kök Hücre İzolasyonu

Immünyetmezligi farelerde insan tümör ksenogratflardır kanser biyolojisi okumak için değerli araçlardır. Insan hepatoselüler karsinoma hücreleri ya da tümör fragmanlarından deri altı ve intrahepatik ksenograftları oluşturmak için özel protokolleri açıklanmıştır. Alıcı farede hepatektomiden tarafından uyarılan karaciğer rejenerasyon intrahepatik naklini kolaylaştırmak için bir strateji olarak sunulmuştur.

Bağışıklık yetersizliği olan farelere subkutan olarak ve intrahepatik insan hepatoselüler karsinoma ksenograftlarının Üretimi

Civciv koryoallantoik membran (CAM) immün yetmezliklidir ve oldukça vaskülarizedir, bu da onu doğal bir in vivo tümör büyümesi ve anjiyogenez modeli yapar. Bu protokolde, CAM testi kullanılarak üç boyutlu, vaskülarize hepatosellüler karsinom (HCC) tümörlerinin büyütülmesi için güvenilir bir yöntem tanımlanmıştır.

<em&gt; Ovo</emHepatosellüler karsinom Verimli Xenograftlarında Modeli olarak&gt; Piliç Chorioallantoic Membran (CAM) Deneyi

Kanserin metastaz kansere bağlı ölümlerin önemli bir nedenidir. Biz solid organ tümörlerinin metastaz mekanizmaları çalışmak için bir "hasta" gibi ortotopik singenik fare modeli sistemi kurulması için hayatta kalma cerrahi yönteminin derinlemesine bir açıklama sağlar.

Bir &quot;Hasta gibi&quot; Ortotopik singenik Fare Modeli Hepatoselüler karsinomu metastazı

Hazırlık ve nakli Yağ dokusundan elde edilen kök hücre (ASC) yaprak bir sıçan modelinde yeterince dikilmiş kolorektal anastomoses üzerine sunulur. Bu yeni uygulama ASC sayfaları kolorektal anastomoz kaçağı azaltmak gösterir.

Bir sıçan modelinde kısmi kolektomi sonra kaçağı azaltmak için Yağ dokusundan elde edilen kök hücre sayfasının nakli

Bu makale uygun kök hücre özelliği ile çok katmanlı kök hücre tabloları oluşturmak için verimli ve uygun bir yöntem sağlar.

3D dinamik kültür sistemi ile bir çok katmanlı mezenkimal kök hücre levha inşaatı

Burada, hepatosellüler kanserin (HCC) tipik bağışıklık özelliklerini özetlemek için karaciğer kanserinin klinik olarak ilgili bir murine modelinin gelişimini açıklıyoruz.

Hepatik İnflamasyon ve Fibrozis Ortamında Ortaya Çıkan Hepatosellüler Kanserin Onkojenik Hepatositkaynaklı Ortotopik Fare Modeli

Bu protokol, eşlik eden fibrotik stromal bölmeli 3D biyomimetik bir model sunar. Hücresel etkileşimlerin, tümör büyümesinin ve metastazın aktif bir arabulucu olan stromal hücre dışı matrisin biyo-fiziksel özelliklerini taklit eden oranlarda fizyolojik olarak ilgili hidrojellerle hazırlanmıştır.

Ayarlanabilir Biyo-Fiziksel Özelliklere Sahip 3D Ortamda Tümör-Stroma Etkileşimlerini İncelemek İçin Karaciğer Kanseri için Biyomimetik Model

Karaciğer hastalıkları fibrozis veya sirozun teşvik ettiği birçok nedenden kaynaklanır. Sağlığın iyileşmesi için tek seçenek transplantasyondur. Bununla birlikte, nakledilebilir organların kıtlığı göz önüne alındığında, alternatifler araştırılmalıdır. Araştırmamız, karaciğer dokusuna bir hayvan modelinden kollajen iskelelerin yerleştirilmesini önermektedir.

Karaciğer Rejenerasyon Stratejisi Olarak Üç Boyutlu Kollajen Matris İskele İmplantasyonu

Organoidler, organ geliştirme, ilaç keşfi ve hastalık araştırmaları için kişiselleştirilmiş doku modellemesinde devrim yaratıyor. Organoid mühendisliği, karmaşık sentetik dokular oluşturmaya doğru ilerler. Amaç, doku mühendisliğini ilerletmek için morfogenez, assembloid teknolojisi ve biyomatrisleri entegre etmektir. Bu protokol, karaciğer organogenezinin modellenmesine ve sentetik doku yapımı için kılavuzların oluşturulmasına yardımcı olur.

Karaciğer Organogenezini Modellemek, Assembloidler Oluşturmak ve İnsan Hücre Hatlarını Kullanarak Sentetik Dokular Tasarlamak için İn Vitro Yetiştirme Teknikleri

Keşfedin hücre sayfası teknolojisi kullanarak çıplak sıçanlarda hepatosellüler karsinom geliştirme yöntemini. Mezenkimal kök hücrelerin tümör gelişimi üzerindeki etkisini inceleyerek kanser tedavileri için güvenilir bir model oluşturun.

Hepatosellüler karsinom Vivo içinde geliştirilmesi üzerinde mezenkimal kök hücre sayfası potansiyelini keşfetmek

Daha fazla video keşfet