Hepatosellüler karsinom Vivo içinde geliştirilmesi üzerinde mezenkimal kök hücre sayfası potansiyelini keşfetmek
September 11th, 2018
Burada, hücre sayfası teknolojisi kullanarak bir vivo içinde kanser modeli geliştirmek için bir protokol mevcut. Böyle bir model antikanser therapeutics değerlendirme için çok yararlı olabilir.
Merhaba, ben Kral Abdullah Uluslararası Tıbbi Araştırma Merkezi, Kök Hücre ve Rejeneratif Tıp Bölümü'nden Dr.Alaa Alshareeda. Bugün, mezenkimal kök hücrelerin hepatosellüler karsinom gelişimi üzerindeki etkisini hücre tabakası teknolojisini kullanarak sıçan modelinde göstereceğiz. Merhaba, ben Abdullah Almubarak.
King Saud Üniversitesi Deneysel Cerrahi ve Hayvan Laboratuvarı'nda çalışıyorum. Hücre tabakasını naklettikten sonra herhangi bir reddedilmeyi önlemek için çıplak fareyi kullanıyoruz. Bu diyagram, çıplak sıçanlarda hücre tabakası nakli prosedürünü göstermektedir.
Bu çalışmada sekiz ila 12 haftalık çıplak fareler kullanılacaktır. İlk olarak, fareleri çentikleyin ve karaciğeri açığa çıkarmak için neşter kullanarak cilt ile alttaki kaslar arasında yedi ila on santimetrelik bir kesi yapın. Hücre tabakasını aktarmak için steril bir zar kullanın.
Zarı toplamak için hücre tabakasının üzerine yerleştirin. Ardından, hücre tabakasını zarla birlikte karaciğerin bir lobunun üzerine yerleştirin. Hücre levha yapımı.
Hücreleri tohumlamadan önce, 3,5 santimetre sıcaklığa duyarlı UpCell kültür kaplarını seyreltilmemiş FBS ile kaplayın. Bulaşıkların FBS ile kaplanması, zar tabakasındaki hücrelerin büyümesini destekler ve hücrelerin bozulmasını önler. Bulaşıkların tüm yüzeyini kapladığınızdan emin olun.
Bulaşıkları %5 karbondioksit ve %95 hava içeren nemlendirilmiş bir atmosferde 37 Santigrat derecede 24 saat inkübe edin. Ertesi gün fazla FBS'yi çıkarın ve bulaşıkların oda sıcaklığında en az bir saat kurumasını bekleyin. En az bir milyon HepG2 kanser hücresinin tek başına veya mezenkimal kök hücrelerle birlikte kültürlenerek DMEM kültür ortamına tohumlanması.
Ortam% 10 FBS ve% 1 penisilin-streptomisin ile desteklenmiştir. Bu çalışmada kanser hücrelerinin mezenkimal kök hücrelere oranı 4:1'dir. Hücreleri ekledikten sonra, bulaşıkları hafifçe sallayın.
Hücreleri 37 Santigrat derecede% 5 karbondioksit ve% 95 hava içeren nemlendirilmiş bir atmosferde inkübe edin. Hücre tabakasının ayrılması. % 100 hücre birleşiminde, bulaşıkları 37 Santigrat inkübatörden çıkarın.
Şimdi, HepG2 kanser hücre tabakasını oda sıcaklığında bir saat inkübe ederken, mezenkimal kök hücre ile birlikte kültürlenmiş HepG2'yi 20 Santigrat derecede 30 ila 40 dakika boyunca% 95 havada% 5 karbondioksit içeren nemlendirilmiş bir atmosferde inkübe edin. Hücre tabakasının ayrılması için kuluçka süresi boyunca, hayvan prosedürünü başlatın. Hayvanlar üzerinde yapılan tüm çalışmalar King Saud Üniversitesi etik komitesi tarafından onaylanmıştır.
Cerrahi işlemin gerçekleştirilmesi. Pedal çekme refleksini test ederek anestezi derinliğini kontrol edin. Ameliyat bölgesini iyot ile dezenfekte edin.
Şimdi, iyotlu ikinci bir fırçalama uygulayın. Kesiğin kirlenmesini önlemek için hayvanı sterilize edilmiş bir örtü ile örtün. Sterilize edilmiş bir neşter kullanarak, karaciğeri açığa çıkarmak için cilt ile alttaki kaslar arasında yaklaşık yedi ila on santimetre büyüklüğünde bir kesim yapın.
Neşterin düz arka kenarı ile karın kasını deriden ayırın. Bir neşter kullanarak linea alba'yı dikkatlice bıçaklayın ve kesimi keskin bir makasla uzatın. Sıçan karaciğerinde hücre tabakası nakli.
Levhayı yüzeyinden ayırmak için kültür kabını tezgahın üzerine hafifçe vurun. Yaprak kenarlarını yarım daire şeklinde kazıyarak hücre tabakasını tabağın yüzeyinden ayırın. Şimdi, tüm kültür ortamını tabaktan yavaşça çıkarın.
Levhanın herhangi bir hasar görmeden sağlam olduğundan emin olun, aksi takdirde kullanılamaz. Hücre tabakasını hasat etmek ve aktarmak için steril bir zar hazırlayın. Bu yüzden önce zarı normal tuzlu su ile ıslatın, ardından fazla tuzlu suyu steril bir pamuklu çubukla çıkarın.
Zar ile hücre tabakası arasında herhangi bir hava kabarcığı oluşmasını önleyerek ıslak zarı hücre tabakasının üzerine yerleştirin. Materyali toplamak için zarın ve hücre tabakasının üzerine birkaç damla normal salin ekleyin. Hücre tabakasının zara düzgün şekilde takıldığından emin olmak için zarı birkaç saniye bırakın, ardından toplayın.
Şimdi, karaciğeri nakil için hazırlayın. Karaciğer yüzeyinin kuru olduğundan emin olun. Hücre tabakası ile zarı, farenin karaciğerinin tek bir lobunun üzerine yerleştirin.
Hücre tabakasını zardan ayırmak için birkaç damla sterilize salin ekleyin. Membranı dikkatlice çıkarmadan önce beş dakika bekleyin. Bu videoda hücre tabakası karaciğere bağlı olarak görülebilir.
Son olarak, alttaki kasları ve cilt kesilerini beş naylon dikişle kapatın. Kesi kapatıldıktan sonra ameliyat bölgesini betadin ile dezenfekte edin. Anesteziden başa çıkmaya kadar geçen süre değişkendir, ancak genellikle beş ila 20 dakika arasında bir yerdedir Sonuçlar.
Bu şekil, HepG2 hücre tabakası transplantasyonundan bir ay sonra sıçan karaciğerinde gelişen tümörü göstermektedir. Burada, hücre tabakası fabrikasyon HepG2 kanser hücreleri ve kemik iliği mezenkimal kök hücresinin transplantasyonu sonrasında tümör gelişti. Bu, HepG2 kanser hücrelerinden ve umbilikal kord mezenkimal kök hücresinden üretilen hücre tabakasının transplantasyonundan sonra sıçan karaciğerinde en küçük gelişen tümörü gösterirken, Bu şekil, hücre tabakası transplantasyonundan bir ay sonra sıçan karaciğerinin H ve E boyamasını göstermektedir.
A'nın normal sıçan karaciğer hücrelerini temsil ettiği ve B'nin kanserli sıçan karaciğer hücrelerini gösterdiği yer. Son. Bu videoyu izledikten sonra, hücre tabakası teknolojisini kullanarak çıplak sıçan üzerinde hepatosellüler karsinom modeli geliştirebilmelisiniz. İzlediğiniz için teşekkürler.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Genel Bakış
Bu makale, hücre tabakası teknolojisini kullanarak in vivo bir kanser modeli geliştirmek için bir protokol sunmaktadır. Model, antikanser terapötiklerini etkili bir şekilde değerlendirmek üzere tasarlanmıştır.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Onkoloji
- Kök Hücre Araştırması
- Regeneratif Tıp
Arka Plan
- Hepatosellüler karsinom, yaygın bir karaciğer kanseri türüdür.
- Mezenkimal kök hücrelerin kanser tedavisinde potansiyel terapötik etkileri vardır.
- Hücre tabakası teknolojisi, hücrelerin etkili şekilde transplante edilmesini sağlar.
- Nude sıçanlar, transplante edilen hücrelerin reddini önlemek için kullanılır.
Çalışmanın Amacı
- Mezenkimal kök hücrelerin hepatosellüler karsinom gelişimi üzerindeki etkisini göstermek.
- Kanser modeli geliştirme için hücre tabakası teknolojisini kullanmak.
- Antikanser terapilerini test etmek için güvenilir bir yöntem sağlamak.
Kullanılan Yöntemler
- Nude sıçan modellerinde hücre tabaklarının transplantasyonu.
- Transplantasyon sonrası kanser gelişiminin değerlendirilmesi.
- Transplantasyon prosedürünü göstermek için diyagramların kullanımı.
- Kapsamlı analiz için araştırma kurumları arasında işbirliği.
Ana Sonuçlar
- Nude sıçanlarda hücre tabaklarının başarılı bir şekilde transplante edilmesi.
- Mezenkimal kök hücrelerin tümör gelişimi üzerindeki etkilerinin gözlemlenmesi.
- Güvenilir bir in vivo kanser modelinin kurulması.
- Antikanser terapötiklerinin daha fazla test edilmesi potansiyeli.
Sonuçlar
- Çalışma, kanser modellemesine yeni bir yaklaşım sunmaktadır.
- Hücre tabakası teknolojisi, terapötik uygulamalarda umut vaat etmektedir.
- Gelecek araştırmalar, bu modeli ilaç değerlendirmesi için geliştirebilir.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
Cell sheet technology enables the creation of reproducible in vivo hepatocellular carcinoma (HCC) models, supporting mechanistic de-risking and target validation in oncology pipelines. The integration of mesenchymal stem cells (MSCs) into these models provides a platform to interrogate tumor-stroma interactions and their impact on tumor growth. This approach enhances predictive confidence for preclinical candidate evaluation and informs risk-adjusted portfolio decisions.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Facilitates functional validation of tumorigenic pathways in a physiologically relevant animal model.
- Enables mechanistic de-risking by isolating the effects of MSC subtypes on HCC progression.
- Supports predictive confidence in target selection by modeling tumor-microenvironment interactions.
Screening & Assay Development
- Provides a standardized in vivo platform for evaluating tumor growth modulation by cellular components.
- Delivers reproducible tumor formation timelines, supporting quantitative assessment of intervention effects.
- Enables assay development for measuring tumor size and histopathological changes post-transplantation.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with disease-relevant modeling by recapitulating human HCC features in immunodeficient rats.
- Supports translational biomarker exploration through histological and morphological tumor assessment.
- Informs preclinical go/no-go decisions by quantifying MSC impact on tumor development.
Pipeline & Workflow Integration
This cell sheet-based HCC model fits within the early discovery to preclinical validation continuum, enabling iterative hypothesis testing and candidate de-risking before late-stage investment.
- Discovery Biology: Supports hypothesis-driven interrogation of MSC-tumor interactions and pathway modulation.
- Screening: Provides a reproducible in vivo assay for evaluating tumorigenic potential and intervention effects.
- Analytics: Enables quantitative measurement of tumor size and histopathological endpoints for comparative analysis.
- Translational Research: Bridges discovery and preclinical phases by modeling clinically relevant tumor biology.
- Enterprise Reuse: Offers a modular platform adaptable to different cell types and stromal components for broader oncology applications.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in tumor biology studies.
- Operational Value: Standardizes in vivo modeling and supports reproducibility across research teams.
- Strategic Value: Enables informed go/no-go decisions and capital-efficient advancement of oncology assets.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization by clarifying MSC contributions to tumor progression.
Implementation Considerations
- Requires expertise in cell culture, animal surgery, and histopathological analysis.
- Demands access to temperature-responsive cultureware and immunodeficient animal models.
- Necessitates cross-team standardization of cell sheet preparation and transplantation protocols.
- Adaptation to other tumor types or stromal cell sources may require protocol optimization.
- Model limitations include species-specific responses and scalability for high-throughput screening.
